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Medicina Veterinria ISSN 1809-4678

Bactrias potencialmente patognicas isoladas de beijupir (Rachycentron canadum)


cultivadas em sistema offshore

[Potentially pathogenic bacteria isolated from beijupir (Rachycentron canadum)


offshore system cultured]

Artigo Cientfico/Scientific Article


DL Nascimento , CN Barros1, ADR Silva1, JM Guimares1, VF Pedrosa1 e ES Mendes1(*)
1

1
Departamento de Medicina Veterinria, Laboratrio de Sanidade de Animais Aquticos/UFRPE, Recife, PE, Brasil.
_________________________________________________________________________
Resumo
Objetivou-se isolar, identificar e avaliar o perfil de sensibilidade antimicrobiana de bactrias potencialmente patognicas
do peixe marinho beijupir Rachycentron canadum. Para este estudo foram analisados 74 beijupirs, alevinos e juvenis
aparentemente sadios, cultivados em sistema offshore em Pernambuco/Brasil, dos quais, 71 apresentaram presena de
Vibrio ou Aeromonas . As coletas foram realizadas entre os meses de novembro de 2010 a julho de 2011. As espcies
isoladas de Vbrio foram V. algynolyticus (3,33%), V. cincinnatiensis (3,33%), V. fischeri (13,33%), V. ichthyoenteri
(23,33%), V. mediterranei (26,67%), V. natriegens (6,67%), V. natriegens NCMB 1900 (13,33%) e Vibrio spp.(10%) e as
Aeromonas, A. media (2,70%), A. salmonicida (9,46%), A. salmonicida spp. salmonicida (1,35%), A. salmonicida spp.
achromogenes (1,35%), A. schubertii (27,03%), A. sobria (32,43%), A. veronii spp. veronii (10,81%), A. veronii spp.
sobria (5,40%) e Aeromonas spp (9,46%). Todos os isolados foram sensveis a enrofloxacina, tetraciclina, cloranfenicol,
florfenicol e gentamicina, exceto o Vibrio spp. que demonstrou mltipla resistncia (MAR 0,5). Em relao a exposio
ampicilina, todos os organismos testados foram resistentes, exceto o Vibrio fischeri. Em decorrncia do isolamento de
bactrias patognicas em rgos estreis, em quantidade e variedade elevada, conclui-se que os beijupirs, embora
aparentemente saudveis, esto infectados com bactrias potencialmente patognicas para peixes e humanos, com elevado
nvel de sensibilidade a maioria das drogas testadas.
Palavras-chave: Rachycentron canadum, peixe marinho, Vibrio, Aeromonas, antibiograma.

Abstract
Aiming at the isolation, identification and evaluation of antimicrobial resistance profile of potentially pathogenic bacteria
from marine fish Beijupir Rachycentron canadum, 30 and 74 strains of Vibrio and Aeromonas were isolated from brain,
liver and kidney of 74 beijupira apparently healthy fingerlings and juveniles grown in offshore system in
Pernambuco/Brazil. Sampling was performed between November 2010 and July 2011. The isolated species were Vibrio
algynolyticus , V. cincinnatiensis, V. fischeri, V. ichthyoenteri, V. mediterranei, V. natriegens, V. natriegens NCMB 1900,
Vibrio spp., and Aeromonas media, A. salmonicida , A. salmonicida spp. salmonicida, A. salmonicida spp. achromogenes,
A. schubertii , A. sobria , A. veronii spp. veronii, A. veronii spp. sobria and Aeromonas spp.. All isolates were susceptible
to enrofloxacin ( 5g ) , tetracycline ( 30g ) , chloramphenicol ( 30g ) , florfenicol ( 30g ) and gentamicin ( 30g ),
other Vibrio spp . demonstrated that multiple resistance. On exposure to ampicillin ( 10mg ), Vibrio fischeri was just
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(*)
Autor para correspondncia/Corresponding author:Universidade Federal Rural de Pernambuco, Departamento de
Medicina Veterinria, Laboratrio de Sanidade de Animais Aquticos, Rua Dom Manoel de Medeiros, s/n, Dois Irmos,
CEP: 52171-900, Recife, PE, Brasil. E-mail: esmendes@yahoo.com.br; alexandredrs@yahoo.com
Recebido em: 19 de maro de 2014.
Aceito em: 16 de junho de 2014.
Nascimento et al., Bactrias potencialmente patognicas isoladas de beijupir (Rachycentron canadum)....................13

sensitive. Due to the isolation of pathogenic bacteria in sterile organs in quantity and high variety, it is concluded that
beijupiras, although apparently healthy, are infected with potentially pathogenic bacteria to fish and humans, with high
level of sensitivity to most drugs tested.
Key-words : Rachycentron canadum, marine fish, Vibrio, Aeromonas, antibiogram.
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Introduo podem ser isoladas de rim, fgado, crebro,


O Rachycentron canadum (Linnaeus, corao, bao e intestino (Austin e Austin,
1766), mundialmente conhecido como cobia 2007).
e, no Brasil, comumente como beijupir ou comum a utilizao de
cao de escama, uma espcie com antimicrobianos para o combate s doenas
destaque mundial devido a sua elevada taxa bacterianas, mas na aquicultura poucos
de crescimento, baixa taxa de converso produtos so registrados para uso no Brasil
alimentar (Benetti et al., 2008), facilidade de (Tavechio et al., 2009). permitido o uso do
desovar em cativeiro, tolerncia a variaes florfenicol para o tratamento da septicemia
de salinidade (Faulk e Holt, 2006), hemorrgica bacteriana, causada por bactria
adaptabilidade ao confinamento, aceitao de do gnero Aeromonas spp. em tilpias; de
dietas extrusadas e por possuir uma carne de estreptococose, doena causada por
tima qualidade (Craig et al., 2006). O Streptococccus agalactiae e para o tratamento
nordeste brasileiro apresenta condies da doena da boca vermelha, causada por
ambientais favorveis produo destes Yersini ruckerii em espcies de Truta Arco-
peixes marinhos cultivados em gaiolas ris, alm da oxitetraciclina, com indicao de
(Bezerra et al., 2011). uso em peixes e crustceos (Buller, 2004).
Ainda que o beijupir apresente Drogas veterinrias causam significante
excelentes caractersticas para o cultivo, impacto ambiental na piscicultura devido aos
todos os peixes so susceptveis s infeces resduos descartados, efeito txico nos
bacterianas, sendo um dos fatores limitantes tecidos (brnquias, tegumento e fgado) e
ao desenvolvimento desta atividade. As acumulao de resduos na musculatura,
bactrias causam um impacto econmico exibindo risco potencial ao consumidor. O
significante na aquicultura, visto que estes uso abusivo de antimicrobianos aumenta a
agentes ocorrerem naturalmente no ambiente possibilidade de proliferao de bactrias
aqutico (Janda e Abbott, 2010). Dentre os resistentes.
diversos gneros bacterianos, o Aeromonas e Para se estabelecer a epidemiologia e
Vibrio so micro-organismos onipresentes em mtodos de controle e profilaxia, faz-se
ambientes marinhos (Igbinosa e Germano, necessrio a correta caracterizao e
2008; Janda e Abbott, 2010) e comumente diagnstico das enfermidades que acometem
encontrados na gua de cultivo de peixes o animal e de seus agentes etiolgicos (Costa,
(Roberts et al., 2009), sendo consideradas 2003). De acordo com Figueiredo e Leal
oportunistas por promoverem infeces (2008), os aspectos sanitrios da produo e a
secundrias nos imunodeprimidos (Buller, falta de estrutura para o diagnstico das
2004). principais enfermidades infecciosas so
Lin et al. (2006) e Su et al. (2012) alguns entraves para o aumento da produo e
relataram que as bactrias so patgenas de da produtividade aqucola. Assim sendo,
grande importncia no cultivo do beijupir e objetivou-se isolar, identificar e avaliar o
normalmente esto presentes em surtos com perfil de sensibilidade antimicrobiana de
mortalidade elevada. Nestas oportunidades, bactrias dos gneros Aeromonas e Vibrio
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isoladas de beijupir, relacionando o perodo identificao de bactrias dos gneros Vibrio


de cultivo e o rgo analisado. e Aeromonas, por serem os rgos alvos de
bactrias que comumente causam
Material e mtodos enfermidades em peixes. O mtodo indireto
caracterizado pela inoculao da amostra em
Todos os procedimentos realizados
caldo nutritivo, antes de serem plaqueados
na pesquisa seguiram os protocolos
para isolamento, no intuito de pr-
discriminados no projeto aprovado pela
enriquecimento (Meirelles, 2010).
Comisso de tica e Uso Animal.
A inoculao indireta para o
Foram realizadas coletas de
isolamento de bactrias do gnero Vibrio foi
beijupirs, alevinos e juvenis, que se
executada em tubos contendo gua
apresentaram aparentemente saudveis no
Peptonada Alcalina (APA), os quais foram
exame clnico, cultivado em sistema offshore,
incubados em estufa a 35-37C durante 24
entre os meses de novembro de 2010 e julho
horas. Em seguida, alquotas dos tubos que
de 2011. As duas primeiras coletas foram de
demonstraram desenvolvimento foram
alevinos na fase de berrio em laboratrio
estriadas em gar Tiossulfato Citrato Sais de
privado (Ipojuca, PE, Brasil) e as
Bile Sacarose (TCBS) e incubadas em estufa
subsequentes, de animais criados em gaiolas
a 35-37C por 24 horas. As colnias
no sistema de cultivo offshore, localizadas a
caractersticas foram estocadas em Tryptone
cinco quilmetros da costa (Recife, PE,
Soy Agar (TSA) suplementado com 2% de
Brasil). Foram realizadas quatro coletas no
NaCl para posterior identificao da espcie
perodo de estio (novembro/2010 a fevereiro/
(Buller, 2004).
2011), de 39 peixes e quatro no perodo
O isolamento de bactrias do gnero
chuvoso (maro a julho de 2011), com 35
Aeromonas foi realizado em caldo de
peixes, totalizando 74 animais. Os animais
enriquecimento APA, incubado em estufa a
eram alimentados com rao comercial de
28C durante 24 horas. Em seguida, alquotas
produo nacional com formulao especfica
dos tubos que demonstraram
para beijupir, fornecidas duas vezes ao dia.
desenvolvimento foram estriadas em gar
Os valores mdios dos parmetros de cultivo
amido com 20 g/mL de ampicilina e
foram temperatura de 28C, salinidade de
incubadas em estufa a 28C por 24 horas. As
36.2, oxignio de 6.8 mg/L e transparncia de
colnias com caractersticas do gnero foram
9.9 metros.
estocadas em Tryptone Soy Agar (Mores,
Aps o exame clnico ainda nos
1994; Buller, 2004).
tanques rede, os peixes foram transportados
A identificao das espcies foi
vivos com aerao constante e assim
realizada a partir do estudo do perfil
permaneceram at o incio das anlises. Os
bioqumico, pelo mtodo convencional,
animais foram anestesiados com benzocana
seguindo a orientao de Holt et al. (1994),
(10mg/L), pesados, medidos e em seguida
Buller (2004) e Mores (1994), com
eutanasiados pelo mtodo de seco medular
confirmao pelo sistema API 20E
(Neifer e Stamper, 2009). Realizou-se a
(Biomerieux).
necropsia, coletando-se fragmentos de rim,
Todos os isolados foram submetidos
fgado e encfalo para exame bacteriolgico e
ao teste de sensibilidade a ampicilina (10g),
posterior identificao das espcies e seu
cloranfenicol (30g), enrofloxacina (5g),
perfil antimicrobiano.
florfenicol (30g), gentamicina (10g) e
As anlises bacteriolgicas de rim,
tetraciclina (30), pelo mtodo de difuso em
fgado e crebro foram realizadas pelo
disco em Agar Mller-Hinton, conforme
mtodo indireto, para isolamento e
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metodologia preconizada pelo National estio e chuvoso (Tabela 1). Das bactrias do
Committee for Clinical Laboratory Standards gnero Vibrio, foram identificadas as espcies
(NCCLS, 2003). V. algynolyticus (3,33%), V. cincinnatiensis
Os dimetros dos halos foram (3,33%), V. fischeri (13,33%), V.
mensurados com paqumetro e comparados ichthyoenteri (23,33%), V. mediterranei
tabela padro para o teste de sensibilidade a (26,67%), V. natriegens (6,67%), V.
antibiticos, sendo classificadas como natriegens NCMB 1900 (13,33%) e trs
sensvel, intermedirio ou resistente (Mazza (10%) sem identificao da espcie (Vibrio
et al., 2001). spp.). Foram identificados vbrios
Pela relao do nmero de potencialmente patognicos,
antibiticos que o isolado demonstrou semelhantemente a Lopez et al. (2002) que
resistncia e o nmero de antibiticos aos isolaram Vibrio alginolyticus, V. vulnificus e
qual o isolado foi exposto, foi estimado o V. parahaemolyticus de beijupirs enfermos e
ndice de mltipla resistncia antimicrobiana com alterao comportamental, enquanto
(MAR). Foi caracterizada a resistncia pesquisavam parasitos nestes peixes de
mltipla quando o ndice MAR foi superior a cultivo e de Liu et al. (2004), que isolaram V.
0.2 (Krumperman, 1983). harvey em beijupirs cultivados que
Para verificar a influncia do perodo apresentavam gastrenterite e ascite.
de coleta e dos rgos analisados foi utilizado De acordo com Buller (2004), dos
o teste de Fisher, com nvel de significncia vbrios identificados, o Vibrio natriegens, V.
de 0.05 (Mendes et al., 2006). fischeri e o V. mediterranei so considerados
micro-organismos ambientais e o V.
cincinnatiensis patognico para humanos,
Resultados e Discusso
com relatos de isolamento em casos de
Os 20 alevinos examinados
meningites. O V. ichthyoenteri pode causar
apresentaram presena de Vibrio (trs
enterite bacteriana em peixes e o V.
isolados) e Aeromonas (10 isolados) e dos 54
alginolyticus um agente zoontico,
juvenis, foram obtidos 41 isolados de
responsvel por vibrioses em animais
Aeromonas e 17 de Vibrio. A presena dos
aquticos e otite e infeces de ferimentos em
micro-organismos em maior proporo nos
humanos.
juvenis pode ser devido ao maior perodo de
Dos 74 isolados de Aeromonas foram
cultivo, enquanto que nos alevinos, a menor
identificadas as espcies A. media (2,70%), A.
proporo pode ser explicada pelo maior
salmonicida (9,46%), A. salmonicida spp.
cuidado nesta fase, principalmente com a
salmonicida (1,35%), A. salmonicida spp.
alimentao fornecida, em qualidade e
Achromogenes (1,35%), A. schubertii
quantidade.
(27,03%), A. sobria (32,43%), A. veronii spp.
Um total de 30 espcies de Vibrio
veronii (10,81%), A. veronii spp. sobria
foram isoladas em 20 animais e 74
(5,40%) e sete (9,46%) sem identificao da
Aeromonas em 51 animais, de crebros,
espcie (Aeromonas spp.) (Tabela 2).
fgados e rins dos beijupirs, no perodo de

Tabela 1 - Vibrio e Aeromonas isoladas de beijupirs cultivados, de acordo com


o perodo de coleta
N de animais
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Coleta Vibrio Aeromonas Total Perodo


1 3 6 10 Estio
2 - 4 10 Estio
3 2 6 9 Estio
4 8 10 10 Estio
5 - 4 10 Chuvoso
6 - 7 10 Chuvoso
7 4 10 10 Chuvoso
8 3 4 5 Chuvoso
Total 20 51 74

Tabela 2 Porcentagem de isolamento de Vibrio e


Aeromonas de acordo com o perodo de coleta
Vibrio Aeromonas
Perodo Estio Chuvoso Estio Chuvoso
Presena 33,33% 17,14% 66,67% 71,43%
Ausncia 66,67% 82,86% 33,33% 28,57%
Valor P 0,182 1,34E-04

Pesquisadores j isolaram diversas No houve diferena estatstica


espcies de Aeromonas, como Suhet et al. (P0,05) entre os perodos de coleta (estio/
(2011) que identificaram A. veronii, A. chuvoso) em relao ao isolamento dos
schubertii, A. sobria e A. salmonicida micro-organismos pesquisados. Barretto
isoladas da superfcie corporal e rim de (2012) tambm no constatou diferena
tilpas. A. veronii foi uma das mais isoladas estatstica entre os perodos de coleta, ao
nas amostras de rim, enquanto A. schubertii analisar tilpias cultivadas em tanques-rede
s foi isolada da superfcie corporal. no estado de Pernambuco. Provavelmente, a
Bactrias do gnero Aeromonas tambm temperatura mais elevada no perodo de estio,
foram isoladas de amostras de gua de favoreceu a proliferao dos micro-
piscicultura em diversos empreendimentos do organismos em estudo.
estado do Maranho por Silva et al. (2010), Quando comparado o nmero de
tendo isolado A. hydrophila, A. caviae e A. isolados de Vibrio e Aeromonas por rgo
veronii spp. sobria. analisado, foi verificada diferena
A A. media considerada ambiental, significativa (P<0,05) na positividade, cujos
enquanto a A. veronii e A. schubertii so resultados so apresentados na Tabela 3 e as
organismos patognicos aos humanos. A A. frequncias de isolamento por rgo
sobria, espcie isolada de maior frequncia e analisado apresentadas na Tabela 4. Pode-se
a A. salmonicida, podem causar a doena observar que o crebro se apresentou menos
conhecida como furunculose, caracterizada infectado por Vibrio e Aeromonas do que o
por leses na derme, alm de provocarem rim e o fgado, provavelmente, pela funo
outras enfermidades em peixes (Buller, exercida por cada rgo, sendo os ltimos,
2004). filtradores de sangue, o que faz com que
sejam mais vulnerveis, alm de serem
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rgos de eleio de diversos micro- achado extremamente importante, visto que


organismos (Meirelles, 2010 e Barreto, causa problemas de ordem neurolgica,
2012). comprometendo as funes vitais (Suhet et
Ainda que a frequncia de isolamento al., 2011).
no crebro no tenha sido elevada, este

Tabela 3 Vibrio e Aeromonas isolados de beijupirs


cultivados, segundo o rgo analisado

GNERO RGO

Crebro Fgado Rim


a b
Vibrio 2 * 14 14b
Aeromonas 8a 34b 32b
* Letras iguais no diferem estatisticamente (P0,05) pelo teste de
Fisher.

Tabela 4 Frequncia de isolamento de Vibrio e Aeromonas de acordo com o


rgo analisado

Presena Vibrio Aeromonas


nos
Frequncia Freq.relativa Frequncia Freq.relativa
rgos
Fgado 14 0,48 32 0,44
Rim 13 0,45 32 0,44
Cerebro 2 0,07 8 0,11
Valor P 0,999 1,34E-07
*O valor P de associao entre Vibro/Aeromonas e Estio/Chuvoso e
Vibro/Aeromonas e Fgado/Rim/Crebro

O rim foi o rgo mais infectado por total de 51 peixes. Diferentemente, todas as
Aeromonas, tendo sido isolado de 32 de um 75 Aeromonas isoladas por Hirsch et al.
(2006), foram provenientes da gua de identificadas A. trota, trs A. jandaei e dois A.
abastecimento de 214 tanques e da superfcie sobria .
corprea de tilpias cultivadas, sem A espcie mais isolada foi a A.
isolamento do parnquima renal, sendo sobria, diferentemente dos resultados obtidos
por Ribeiro (2011), em que a A. veronii spp.

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sobria foi a mais frequente, ao pesquisar a agentes e a ampicilina mais uma vez
presena de Vibrio e Aeromonas em tilpias, apresentou maior porcentagem de resistncia.
aparentemente saudveis, cultivadas em Em relao a sensibilidade ao
sistema de aproveitamento e reuso de gua. florfenicol e enrofloxacina, observado no
Neste mesmo estudo, no foram encontrados presente estudo, corroboram com os
os vibrios nas amostras, porm as aeromonas resultados obtidos por Barretto (2012), que
estavam presentes em 100% dos animais afirmou ser esse resultado decorrente do uso
analisados, tendo sido isolados do pool de desses frmacos exclusivamente na
vsceras de tilpias: Aeromonas caviae, A. veterinria e o florfenicol ser um composto
veronii spp. sobria, A. hydrophila, A. media, com o uso aprovado na aquicultura
A. jandaei, A. trota, A. sobria, A. recentemente.
eucrenophila e Aeromonas spp. Das espcies de Vibrio isoladas, o
Todas as bactrias do gnero Vibrio spp. demonstrou resistncia ao
Aeromonas identificadas demonstraram cloranfenicol, florfenicol, gentamicina e
sensibilidade a todos os antimicrobianos ampicilina, o que caracterizou mltipla
testados, exceto para ampicilina, em que resistncia (MAR 0,5). As demais espcies
alguns isolados foram resistentes. A maioria foram sensveis a todos os antimicrobianos
das Aeromonas spp. resistente penicilina, testados, exceto a penicilina, ao qual apenas o
ampicilina e carbenicilinas, segundo Trabulsi Vibrio fischeri foi sensvel. Os vbrios
e Alterthum (2004). De acordo com Piddock isolados por Lopez et al. (2002), a partir de
(2006), a bomba de efluxo um dos beijupirs doentes, cultivados em sistema
mecanismos de resistncia das bactrias aos offshore, foram sensveis enrofloxacina,
antimicrobianos em que algumas protenas da demonstrando que a resistncia/sensibilidade
membrana plasmtica agem bombeando as varivel de acordo com a frequncia de uso
drogas do meio intracelular para o meio da droga, consequente da enfermidade
extracelular antes que elas exeram sua instalada nos peixes, que por sua vez tem a
funo. H tambm a possibilidade de incidncia varivel conforme a regio de
transferncias de genes de resistncia de uma cultivo.
bactria para outra (Verschuere et al., 2000). Dos 75 isolados de Aeromonas
No ambiente aqutico essa transferncia de obtidos na pesquisa de Hirsch et al. (2006),
genes facilitada devido aos elementos 32 (42,66%) demonstraram mltipla
mveis chamados plasmdeos (Smith et al., resistncia antimicrobiana aos frmacos
2008). testados eritromicina, tetraciclina, c.
Scoaris et al. (2008) em anlise de nalidxico, gentamicina, nitrofurantona,
gua, observaram que 78,26% das aeromonas canamicina, norfloxacina, cloranfenicol e
isoladas apresentaram mltipla resistncia a sulfonamidas, mesmo aquelas substncias no
trs ou mais antibiticos testados, tendo a usadas na piscicultura.
ampicilina 91% de resistncia. Enquanto que A maioria das drogas testadas tiveram
Mejdi et al. (2010), isolaram Aeromonas spp. ao frente aos patgenos, porm as
e Vibrio spp. de gua do mar e mexilhes e porcentagens de isolados resistentes fato
determinaram a sensibilidade frente a 12 preocupante, j que o inadequado uso de
antimicrobianos. A maioria dos isolados antibiticos tem elevado potencial para
mostrou-se resistente a pelo menos dois desenvolver linhagens bacterianas resistentes,
destruir a microbiota ambiental, alm da
preocupao acerca da sade pblica, j que o final. O uso na aquicultura pode levar a
antibitico residual pode persistir no produto contaminao direta das guas superficiais,
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onde os resduos podem acumular-se nos Veterinria Universidade Federal Rural de


sedimentos, com potencial de alterar Pernambuco, Recife.
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