ACTIVIDAD -GLUCOSIDASA Y MICROBIANA EN UN SUELO DE CLIMA

FRO EN LA REGIN DE AYSN, PATAGONIA CHILENA.

Machuca, A.1*; Crdova, C.2; Almendras, K.1; Luna, G.2; Barrera, J.A.2; Gerding, M.2
1Escuela de Ciencias y Tecnologas, Campus Los ngeles; 2Facultad de Agronoma, Campus Chilln, Universidad de
Concepcin, Regin del Bio Bio, Chile

*Autor de contacto: angmachu@udec.cl, J.A.Coloma 0201, Depto. Ciencias y Tecnologa Vegetal, Universidad de
Concepcin, Los ngeles, Chile.

RESUMEN

Producto del aumento de la temperatura global, suelos de ecosistemas fros como los de la
Patagonia chilena, podran sufrir alteraciones en los procesos de descomposicin del carbono (C).
En este sentido, la actividad enzimtica y microbiana del suelo aparecen como indicadores de
cambios en la dinmica del C en estos ecosistemas. Sin embargo, estudios que involucren estos
indicadores en suelos de la Patagonia chilena son escasos. Por ello, nuestro objetivo fue evaluar
el estado de la actividad enzimtica y microbiana en dos suelos (S1 y S2) de clima fro de la
Patagonia chilena (Regin de Aysn), a travs de la sensibilidad de la enzima -glucosidasa en
dos temperatura de incubacin, 0 y 37C, y de los niveles de la actividad microbiana de
mineralizacin de C a 0 y 25C. Las muestras de suelos fueron recolectadas (0-5 cm profundidad)
en noviembre de 2013, y la actividad de -glucosidasa fue cuantificada usando p-nitrofenil--D-
glucopiransido como sustrato enzimtico y la mineralizacin de carbono por la biomasa
microbiana incubando suelos en un sistema cerrado junto a una trampa de C-CO2. Ambos suelos
presentaron altos contenidos de materia orgnica y bajos valores de pH, siendo los niveles en S2
inferiores a S1. Cuando la temperatura de incubacin de los suelos aument de 0 para 37C, la
actividad cataltica de -glucosidasa aument en casi tres veces, siendo los mayores valores de
actividad detectados en el suelo S1. De la misma forma que para -glucosidasa, la actividad
microbiana (C-CO2) del suelo fue estimulada por el aumento de temperatura.

Palabras clave: carbono del suelo, cambio climtico global, indicadores de calidad de suelo

INTRODUCCIN
La Regin de Aysnse ubica dentro de la denominada Patagonia chilena (43o38S y 49o16S),
cubriendo un rea de aproximadamente 110.000 km2, y parte de esta rea est expuesta
condiciones de clima fro, por lo que los suelos de esta zona podran sufrir fenmenos de
descomposicin de carbono (C) mayores a los usuales, por efecto del aumento de la temperatura
global, similar a lo registrado en el hemisferio norte durante los ltimos 100 aos (IPCC 2007).
La descomposicin de C caracterstica de un suelo es reflejo de la actividad enzimtica y la
actividad metablica de los micoorganismos que habitan en el suelo, cuyo producto final es la
emisin de dixido de carbono (CO2). Debido a su sensibilidad a las alteraciones en los
ecosistemas terrestres, las enzimas y los microorganismos del suelo son considerados como
indicadores del efecto del cambio climtico, principalmente en ecosistemas frgiles y prstinos
como los encontrados en la Patagonia, el rtico y la Antrtica (Wallenstein et al., 2009; Rinnan et
al., 2009; Karaca et al., 2011). Diversos estudios utilizando enzimas del suelo y la actividad
microbiana como indicadores de perturbacin, han sido realizados en la Patagonia argentina
(Carrera y Bertiller, 2010; Prieto et al., 2011), pero estudios de este tipo son escasos en los suelos
fros de la Patagonia chilena, donde podran explicar la dinmica de transformacin del C en el
suelo.
Las enzimas extracelulares proporcionan informacin sobre los procesos bioqumicos que ocurren
en los suelos y constituyen un parmetro biolgico integrador del estado general de la biota del
suelo (Dick, 1994; Alkorta et al., 2003). Son producidas principalmente por microorganismos, pero
tambin pueden ser producidas por plantas y animales (Karaca et al., 2011). Las -glucosidasas
son enzimas hidrolticas que pertenecen al complejo celuloltico, estn ampliamente distribuidas
en la naturaleza y son producidas en forma extracelular, principalmente por hongos y bacterias.
Estn estrechamente relacionadas con el ciclo del C a travs de su accin en la etapa final de la
degradacin de celulosa, polmero que constituye una de las fuentes de C ms abundantes en la
biosfera. Por su parte, el papel de los microorganismos del suelo en la descomposicin de
compuestos carbonados, ha sido ampliamente reconocido en estudios de los procesos de
transformacin de la materia orgnica y el C (Johnston et al. 2009), tanto as, que es casi
imposible encontrar un modelo de simulacin que no incluya a la biomasa microbiana del suelo
como uno de sus principales componentes (Parson et al. 1988). El tamao de la biomasa
microbiana, y su actividad respiratoria especfica son indicadores de la disponibilidad de C y la
velocidad de transformacin, que a su vez puede estar limitada por factores como el tipo de
ecosistema, la temperatura y el contenido de humedad del suelo, el pH, las condiciones de xido-
reduccin, entre otras.
Es por ello que el objetivo de este estudio fue evaluar el estado de la actividad enzimtica y
microbiana en suelos de clima fro de la regin de la Patagonia en Chile, para sentar las bases de
futuros modelos predicitivos de la respuesta de estos suelos al aumento de temperatura ya
pronosticado para estas latitudes. Especficamente se busca a) obtener una aproximacin a la
sensibilidad de la enzima -glucosidasa usando dos temperaturas de incubacin (0 y 37C), y b)
conocer los niveles de la actividad microbiana de mineralizacin de C,de suelos fros de la Regin
de Aysn, a 0C y 25C. Los resultados aqu presentados corresponden a la exploracin inicial de
un estudio mayor cuyo objetivo es evaluar el estado de los suelos fros utilizando como
indicadores la actividad de -glucosidasa, la respiracin del suelo y las comunidades microbianas,
en respuesta al aumento global de temperatura.

METODOLOGA
Muestreo de suelos.
El sitio de muestreo se ubic entre los sectores de Murta y Puerto Ro Tranquilo en la Regin de
Aysn (S1:46233S, 724421W; S2:461039,2S, 724417,4W) y correspondi a un suelo
de bosque del tipo Andino-patagnico, cuya especie dominante es el Nothofagus. La ubicacin fue
obtenida a travs de un modelo cartogrfico que defini cuencas termales a travs del uso de
imgenes NOAA (National Oceanographic Atmospheric Administration) y MODIS (Moderate
Resolution Imaging Spectroradiometer), que fue cruzado con sectores de sombra. En noviembre
del 2013 se muestre la superficie del suelo (0-5 cm) y las muestras fueron transportadas a baja
temperatura al laboratorio, donde fueron almacenadas a 4C hasta su anlisis. Debido a la
dificultad de acceso al sitio de muestreo seleccionado (sobre 12% de pendiente), slo se pudo
obtener dos repeticiones de campo. Las muestras de suelos fueron tamizadas a 2 mm y su
humedad fue ajustada al 60% de capacidad de poros llenos con agua usando la densidad
aparente y real de los suelos. Luego las muestras fueron divididas para cuantificar su actividad
enzimtica y microbiana de mineralizacin de carbono.
Actividad de -Glucosidasa
La actividad fue determinada usando como sustrato p-nitrofenil--D-glucopiransido (pNFG),
midiendo la liberacin de p-nitrofenol (pNF) luego de la ruptura del enlace -glucosdico por la
enzima (Eivazi y Tabatabai 1988; Garca-Izquierdo et al. 2003). Para ello, 1g de suelo seco y
tamizado fue incubado durante 1 h con pNFG 25mM en tampn MUB pH 6. El pNF liberado fue
extrado con Tris-NaOH 0,1 M pH 12 y despus de filtrar se midi la absorbancia a 400 nm en un
espectrofotmetro. Estos ensayos fueron conducidos en triplicado y en condiciones de baja
temperatura (0C) y temperatura estndar (37C). La actividad de la enzima fue expresada en
moles de pNF liberados por g de suelo y por h (mol.g-1.h1-). Los resultados fueron sometidos a
un anlisis de varianza (factorial ANOVA) y las diferencias entre actividades fueron evaluadas
usando la prueba de Tukey (software STATISTICA ver. 6.0 para Windows 7). Las diferencias entre
tratamientos fueron consideradas significativas cuando P < 0,005.
Mineralizacin de carbono por la biomasa microbiana
La produccin de C-CO2 ser medida por incubacin en un sistema cerrado (Alef y Nannipieri
1995). Las incubaciones se realizaron en triplicado usando 15 g de suelo que se introdujeron en
un contenedor de vidrio dentro de un frasco tipo Mason jarde 1 L, junto a una solucin alcalina (10
mL NaOH 0,5M) que reacciona con el C-CO2 desprendido por la respiracin microbiana. El
sistema se sell hermticamente y las muestras fueron incubadas a 0C y a 25C. Al final del
periodo de incubacin la trampa alcalina fue removida y se adicion BaCl2 antes de su titulacin
con HCl (0,1N). La trampa alcalina fue reemplazada para obtener parciales de respiracin a los
tiempos t= 1, 7, 14, 21, y 42 das).
RESULTADOS Y DISCUSIN
Los dos sitios de estudio (S1 y S2, Cuadro 1) presentaron altos contenidos de materia orgnica y
bajo pH, lo que esta en el rango de suelos derivados de cenizas volcnicas y bosque. El suelo S2
contiene niveles de materia orgnica y pH mas bajos que S1, pero ambos muestran una alta
disponibilidad de nutrientes. Solo el pH del S2 podra presentar alguna restriccin a la actividad
biolgica.

Cuadro 1: Anlisis qumico de dos suelos (S1 y S2) de ecosistemas fros de Aysn.
Suelo S1 Suelo S2
pH en agua 5,66 5,06
Materia Orgnica (%) 23,95 18,30
Nitratos (N-NO3) (mg/kg) 172,4 147,0
Fsforo Olsen (mg/kg) 30,0 17,0
K disponible (mg/kg) 317,5 260,6

Las mayores actividades de la enzima -glucosidasa fueron detectadas en el suelo del sitio S1
(Fig. 1). Los niveles de actividad detectados a 0C deben ser similares a los encontrados in situ, y
a pesar de ser bajos resultan comparables a los descritos para una serie de suelos agrcolas y
forestales de clima templado, medidos a 37C (condicin estndar) (Trasar-Cepeda et al. 2008).
El aumento en la temperatura de 0C para 37C provoc un aumento de casi tres veces en la
velocidad de catlisis, semejante en ambos suelos. Un aumento en la actividad de -glucosidasa
estimula la actividad biolgica del suelo debido a la liberacin de glucosa, fuente de energa
primaria para los microorganismos, a partir de celobiosa y de oligosacridos pequeos (Knight y
Dick 2004; Sotres et al. 2005).
En general, la respuesta de la respiracin microbiana del suelo S1 muestra dos peaks de
actividad registrados a los 7 y 42 das, respectivamente (Fig.2). Ello reflejara la utilizacin
metablica de sustratos carbonados por la biomasa microbiana, donde la temperatura gatillara
una mayor activacin de los microorganismos. Posteriormente el agotamiento de C en el suelo
determinara la muerte de la poblacin microbiana (21 das), que durante el periodo entre 21 y 42
das servira de sustrato para aquellos microorganismos sobrevivientes. Para el suelo S2 estos
anlisis se encuentran en desarrollo.

1.00
0.90 37
0.80 C
a
moles pNF g h

0.70
0.60
0.50
0.40 b
0.30 c
0.20 d
0.10
0.00
S1 S2
Fig.1Actividad de la enzima -glucosidasa de dos suelos (S1 y S2) de un ecosistema fro de
Aysn, a dos temperaturas de incubacin.

Tomando los valores de respiracin reportados para suelos de bosque nativo en otros lugares de
la regin (3 das de incubacin en condiciones estndar, Dube et al. 2010) este suelo estara bajo
en el rango informado, lo que demostrara que la actividad microbiana se ve disminuida por las
bajas temperaturas del sitio en estudio.
 Carbono mineralizado a temperatura de incubacin de 0 y 25C

1400

Respiracin microbiana
1200

(ug C/g suelo)

1000
800 T-0C
600 T-25C
400
200
0
0 7 14 21 28 35 42 49
Das de incubacin

Fig.2 Respuesta promedio de la actividad microbiana al aumento de temperatura, medida en un

suelo de ecosistema fro en Aysn (S1). Al primer da de incubacin la respiracin bajo las dos
temperaturas registr el mismo valor.

CONCLUSIONES
La actividad de -glucosidasa fue mayor en el suelo S1 y fue estimulada por un factor de tres
veces al aumentar la temperatura de incubacin. La respiracin microbiana en el suelo S1 es baja
debido a las bajas temperaturas de la zona, y al aumentar la temperatura se produjo una
activacin en los microorganismos. Los resultados de este estudio han permitido establecer los
niveles basales de actividad enzimtica y microbiana para estudiar posteriormente curvas de
respuesta a diferentes temperaturas.

AGRADECIMIENTOS
Proyectos VRID 213.123.013-1AP (UdeC) y Fondecyt-Regular 1140441 (Conicyt-Chile).

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