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Guio Apresentao BQ

Trabalho 1
Diap 3

Neste trabalho preparmos solues diludas a partir de uma soluo parte


e em srie e medimos a sua absorvncia num espectrofotmetro de
absoro, fizemos o mesmo para 3 soluoes j preparadas e desconhecidas.

Um espectrofotmetro de absoro um instrumento que mede a


quantidade de luz absorvida por uma determinada molcula em
soluo.

Segundo a lei de Lambert-Beer: A = c possvel determinar a c de


uma substncia, pois a Absortividade Molar ou Coeficiente de
Extino Molar e especifica para cada substncia e para um
comprimento de onda particular e l=1.

Um espectrofotmetro possui uma lmpada incandescente), prismas


que seleccionam o comprimento de onda da luz que dever incidir na
soluo em estudo, uma cuvete e, um detector de radiao, que
permite uma medida relativa da intensidade da luz.

Assim, no espectrofotmetro: I0 a luz que incide na soluo e I a


I0
quantidade de luz que no absorvida pela soluo, e:
A=log
I

Diap 4

Os espectrofotmetros de absoro podem ser classificados de


acordo com a capacidade de seleco do comprimento de onda.

Os espectrofotmetros de visvel (400-800 nm) tm a capacidade de


seleccionar na zona do visvel (utilizam lmpadas de Tungstnio) e
tinas de vidro.

Os espectrofotmetro de UV (200-400 nm) tm a capacidade de


seleccionar na zona do UV (utilizam lmpadas de Deutrio) e tinas
de quartzo.

No laboratrio, para determinar a concentrao de uma amostra por


espectrofotometria, podem ser utilizadas duas aproximaes, como
o caso da parte C:

1. Aplicao directa da Lei de Lambert-Beer utilizando o valor de ;

2. Utilizao de uma curva de calibrao. utilizaremos este mtodo porque


no sabemos o e visto que uma substancia desconhecida.
Diap 5

Comemos ento por preparar as solues diludas a partir de uma soluo


mae de sulfato de cobre na Parte A, sabendo que o volume final era 1mL,
obtivemos a quantidade de sulfato que deveramos adicionar, completando
o restante volume com agua.

Na Parte B preparamos solues com diluies em srie tendo um vol final


de 25 mL, multiplicando por este o factor de diluio e adicionando o
restante volume de gua.

Trabalho A2

Diap 14

Temos aqui uma 2 parte da tabela que mostra quais as absorvncias


medidas dos vrios interferentes e da amostra desconhecida.

So chamados de interferentes pois so substncias que provocam


alterao na quantificao proteica, aumentando ou diminuindo o valor da
absorvncia lido no espectrofotmetro.

Diap 15

Aqui temos a curva de calibrao das absorvncias medidas em funo das


concentraes dos padres que se mostra um pouco longe do ideal, com
pontos a cima e a baixo desta, que indica que houve muito provavelmente
erros na pipetagem das solues preparadas.

Diap 16

Assim, atravs da equao da reta calculmos os valores da concentrao


da amostra e dos vrios interferentes, no entanto e como a reta estava
sujeita a muitos erros cometidos, a conc de SDS deu negativo o que
impossvel.

Diap 17

Assim, no foi possvel concluir com certezas devido aos vrios erros
experimentais na preparao das solues.

Teoricamente. No entanto os interefentes deste mtodo seriam o SDS


e o Triton( dois detergentes muito poderosos).

Possveis causas de erros:


Erros na execuo da tcnica (quantidade de soluo pipetada) ou na
utilizao dos aparelhos de medida.

Incerteza associada ao aparelhos de medida.

M conservao das solues interferentes.

Erros nos clculos efetuados

Trabalho A1
Diap 19

A cromatografia em camada fina (TLC) um mtodo onde as placas


de celulose so cobertas com uma camada de um adsorvente slido,
normalmente slica ou xido de alumnio.

Uma pequena quantidade de amostra a analisar colocada junto


base da placa, atravs da utilizao de um capilar de vidro.

Depois colocada na vertical, sobre uma pequena poro de um


eluente (amnia) numa cmara saturada este ascende pelo
absorvente por capilaridade at atingir uma linha previamente
marcada (linha da frente) arrastando as amostras consigo.

a placa removida, o solvente evaporado e os componentes


separados so visualizados, sendo analisados sob luz UV (a placa
contm um compostos que fluoresce com a radiao UV (toda a placa
encontrar-se- fluorescente, excepo dos locais onde os
componentes se encontram).

Para a preparao da placa cromatogrfica em camada fina preciso


ter em conta:

Fase Estacionria - Celulose

Separao de compostos hidroflicos

Fase Mvel - Isopropanol: Amnia 5% (8:2)

Baixo ponto de ebulio secagem

Pouco reactivo

Revelador - Soluo alcolica de Ninidrina

A sua reatividade permite a sua visualizao utilizando como


agente revelador a ninidrina, reagindo com as aminas
primrias e aminas livres.

Observao luz UV
Diap 20

Aqui observamos ento os nossos resultados, onde observamos as manchas


obtidas para os 3 difrentes padres e para as amostras C, D e de Plasma.

E onde exemplificamos como se faz o calculo do rf, mostrando um exemplo


para a 1 mancha da amostra D

Diap 21

Temos agora aqui uma tabela resumo de todos os resultados obtidos do


calculo dos rfs das varias manchas bem como a sua cor aparente

Trabalho A4
Diap 27

Temos aqui uma curva de calibrao com os marcadores de massas


moleculares cuja equao vamos utilizar para conseguir saber qual a massa
molecular das proteinas em estudo

Diap 28

Assim, para cada protena substitumos na equao o valor da distancia


percorrida para cada uma, obtendo assim o valor da massa molecular.

Diap 29

Na margem esquerda, observa-se verticalmente o nosso marcador,


que o fabricante diz que tem 11 bandas o que confirmamos.

No 1 poo so observadas vrias manchas intensas, das quais se


destaca uma que inferior marca do marcador que marca 10kDa,
pelo que se conclui que a substncia aqui presente tem um menor
valor do que este tabelado.

Ao centro so observadas manchas mais intensas que indicam que


est presente o mix e possibilidade de contaminao para os poos
vizinhos.

possvel observar depois uma mancha superior, que indica a


presena de Albumina Bovina.

Nos ltimos poos verifica-se a presena de lisozima com presena de


manchas muito tnues.

Trabalho A3
Diap 31
A cromatografia de excluso molecular (SEC) separa os protenas de
acordo com a sua dimenso, permite a determinao do peso
molecular e anlise quantitativa de solues.

Fase estacionria: Resina (BioGel P60 (limite de excluso 60 kDa)

Fase mvel: Tampo de eluio (Tris-HCl 50 mM, 200 mM NaCl, pH


7,5)

A- aplicada a amostra no topo da coluna (soluo com molculas


de vrios tamanhos)

B- As molculas vo passando pela fase estacionria de acordo com o


seu peso molecular: as de maiores dimenses so eludas
rapidamente enquanto que as de menores dimenses passam
atravs da coluna a um ritmo mais lento sendo as ltimas a eluir.

As partculas superior a 60kda no vao conseguir entrar nos buracos


da placa de resina e passam a volta, enquanto que as mais pequenas
gastam tempo a entrar e a sair por difuso.

Coluna de gel filtrante (fase estacionria) que contm partculas


inertes, formando poros de diferentes dimenses.

Diap 32

Neste rabalho medimos a absorvancia de 25 microtubos cada um com 3


gotas de eludo (resina, tampo e amostra), e observmos que nestes
microtubos se encontravam as nossas fracoes de interesse.

Trabalho B1
Em cada uma das reaes enzimticas, numa fase inicial, verifica-se
que h medida que o tempo avana a absorvncia vai aumentando,
uma vez que h cada vez mais NADH formado.

Contudo, ao longo do tempo, a enzima no consegue ter a mesma


produtividade e a velocidade diminui, uma vez que a quantidade de
substrato comea a diminui e o pH e a temperatura acabam,
tambm, por sofrer alteraes.

Efeito da variao da concentrao do substrato sobre a atividade


enzimtica

Analisando o grfico V em funo de [Etanol], conclui-se que h uma


inibio pelo substrato, ou seja, concentraes muito elevadas do
mesmo levam a uma inibio da enzima.