Importancia del Antgeno D

Sujetos Rh Negativo productores de Anti-D:

80% de los receptores de grandes volmenes de sangre

D positivo
20% de los transfundidos con plaquetas provenientes de
dadores D positivo
10% de las pacientes que han tenido hijos D positivo y
ABO compatibles
Variaciones Cuantitativas del
Antgeno D
Antgenos D Dbil
El trmino Du es amplio e impreciso
Los G.R. eran aglutinados por un anti-D
pero no por otro
Inclua Ags. D dbil y D parcial
No existe un anticuerpo Anti-Du
La identificacin de Du depende de los
reactivos y los mtodos empleados
Variaciones Cualitativas del
Antgeno D
Corresponden a Fenotipos D
Parcial, con o sin variaciones
cuantitativas asociadas

Antgenos D Parcial
Antgenos D Parcial Dbil
Eritrocito Ag. constituido
con por Epitopes
Antgenos
Anticuerpos dirigidos
hacia sus correspondientes
Epitopes
Eritrocito Ag. constituido
con por Epitopes
Antgenos
Anticuerpos dirigidos
hacia sus correspondientes
Epitopes
Eritrocito Ag. constituido
con por Epitopes
Antgenos
Anticuerpos dirigidos
hacia sus correspondientes
Epitopes
Eritrocito Ag. constituido
con por Epitopes
Antgenos
Anticuerpos dirigidos
hacia sus correspondientes
Epitopes
Eritrocito Ag. constituido
con por Epitopes
Antgenos
Anticuerpos dirigidos
hacia sus correspondientes
Epitopes
Differences between normal D, D-weak and partial-D phenotypes

Antgeno D Normal
Differences between normal D, D-weak and partial-D phenotypes

Antgeno D Normal
Epitope: Normal
Cantidad de Ag: Normal

Epitope Antgeno
Differences between normal D, D-weak and partial-D phenotypes

Antgeno D Normal
Epitope: Normal
Cantidad de Ag: Normal

Epitope Antgeno
Differences between normal D, D-weak and partial-D phenotypes

Antgeno D Normal D Dbil

Epitope: Normal Normal
Cantidad de Ag: Normal Reducido

Epitope Antgeno
Differences between normal D, D-weak and partial-D phenotypes

Antgeno D Normal D Dbil Variante D

Epitope: Normal Normal Mutados
Cantidad de Ag: Normal Reducida Normal o Reducida

Epitope Antgeno
 Fenotipos D Parcial originados
comnmente por genes hbridos

Exones de Gen D Exones de Gen D Ausencia de epitopes

asociados con una
expresin normal de
Exones de Gen CE antgeno D

D Parcial como
Exones de Gen CE Exones de Gen CE resultado de la
insercin de un exn
D dentro de un gen
Exn de Gen D CE
Vistazo de Variantes D
 Tipos de D Parcial de la Categora DVI

Gen RHD

DVIcE ccDVI.Ee = Tipo I Raro 600 Ag/GR Caucsicos

Gen RHD

DVICe BARC = Tipo II CcDVI.ee Ms frecuente 2400 Ag/GR

Caucsicos y Japoneses

Gen RHD

DVICe BARC = Tipo III CcDVIee Muy raro 12000 Ag/GR Caucsicos
 Serologa para Ag. D
El estado D puede ser determinado
empleando sueros Policlonales o
Monoclonales. Ambos, no arrojan
exactamente las mismas divisiones.
El uso de Monoclonales permiti apreciar la
diversidad y complejidad de los epitopes D.
 Anticuerpos
Anticuerpos Policlonales Policlonales

G.R. Transfundidos con

Ag. extrao (p.ej. D)

Las clulas
Ag. extrao plasmticas
D producen Anticuerpos
Epitopes diferentes con
anticuerpos Paratopes
heterogneos diferentes
 Anticuerpos Monoclonales
Anticuerpos Anticuerpos
Policlonales Monoclonales

Produce una
variedad de
anticuerpos

Ag. extrao
D
Anticuerpos Produccin
Epitopes diferentes Seleccin de con de siempre el
Paratopes mismo clon
un anticuerpo
diferentes (mismo paratope)
especfico
 Tipos de Reactivos Anti-D

Policlonal c/ Alta Concentracin

Proteica
Policlonal c/ Modificacin Qumica
Monoclonal
Mezcla Policlonal/Monoclonal
Mezcla Monoclonal/Monoclonal
 PRESENTACIONES COMERCIALES DE
SUEROS HEMOTIPIFICADORES
Sistema RH
Policlonal Monoclonal Mezclas
Humano Humano (Blends)
Polic Monoc
Anti-D IgG IgM
Monoc-Monoc
Anti-C
Anti-E IgG
IgG Qca. Modif
Anti-c IgM Salino Monoclonal
IgM
Anti-e
Anti-CDE
Anti-Cw IgG IgM Sal. -
 Criterios y Alcances del Uso
Reactivos que detectan DVI y D dbil

Ideales para la clasificacin de:

donantes
recin nacidos
de madre Rh Negativo

Es importante tipificar todas las

presentaciones de Ag. D que puedan causar
inmunizacin en sujetos Rh Negativo
 Criterios y Alcances del Uso
Reactivos que NO detectan DVI y D dbil

Ideal para la tipificacin de pacientes:

receptores transfusionales

obsttricas

Esta es la poltica transfusional segura, ya

que sern transfundidos con sangre Rh
Negativo aunque pertenezcan a una
clasificacin de D muy dbil.
 Anti-D Monoclonales
segn procedencia comercial
Lneas celulares Marcas Lneas celulares Marcas
IgM IgG Comerciales (*) IgM IgG Comerciales (*)
BS226 Biotest LDG169 DiaMed
BS221 Biotest LDG59 DiaMed
BS232 Biotest LDG70 DiaMed
H4111B7 Biotest LDG76 DiaMed
BAC-9 CNTS LDG77 DiaMed
P3x 61 Diagast, Grifols LDMI DiaMed
HM 10 Diagast MS-26 DiaMed, Immucor, Lorne
P3x 21223 B10 Diagast, Grifols LHM50/3 (LDM1) DiaMed
P3x 212 11F1 Diagast LHM59/19 DiaMed
HM16 Diagast LHM 59/20 (LDM3) DiaMed
P3x 290 Diagast, Grifols ESD1 DiaMed
P3x 35 Diagast, Grifols ESD-1M DiaMed
P3x 241 Diagast HUMAN Gamma, Immucor, Ortho
P3x 249 Diagast GAMA401 Gamma
P3x 290 Diagast NELP-3 Gamma, Immucor
TH-28 DiaMed, Immucor F8D8 Gamma
175-2 DiaMed, Immucor Na TH 28-3 C 11 Jacques Boy
MS-201 DiaMed, Immucor, Lorne LORI Jacques Boy
Rs-1126 DiaMed, Lorne MAD2 Ortho
 Diferentes proveedores
ANTES =
Sin alternativa en la capacidad de eleccin

Los diferentes productores de Clones

AHORA ofrecen una variada gama o rango
de especificidades hacia distintos epitopes
 Diferentes proveedores
ANTES =
Sin alternativa en la capacidad de eleccin

Los diferentes productores de Clones

AHORA ofrecen una variada gama o rango
de especificidades hacia distintos epitopes
Caracterizacin del tipo de D
Parcial mediante Test en Gel
 Principle of gel technique
Tcnica en Gel

Aglutinacin

Tarjeta de Gel para

determinacin de grupos
sanguneos

Microtubo
Caracterizacin del tipo de D
Parcial mediante Test en Gel
FORMAS DE ESTUDIAR LOS GRUPOS
SANGUNEOS

AGLUTINACIN RIA
HEMLISIS ELISA
INHIBICIN ABSORCIN Y
PRECIPITACIN ELUCIN
AGLUTINACIN y HEMLISIS.
PRIMERA ETAPA
Est influenciada por las siguientes variables:
Temperatura: IgM reaccionan a 4C, IgG a37C
Afinidad entre Ag y Ac
PH optimo :6.5 y 7.6
Concentracin relativa del Ag y Ac.puede ocurrir disminucin
de la aglutinacin cuando hay exceso de Ac(prozona) o exceso de
Ag (postzona)
Fuerza inica del medio : al disminuir ,disminuye la nube de
cationes que rodea lo GR favoreciendo la unin Ag- Ac
Medios de potenciacin: *Soluciones de baja fuerza inica
:LISS: reduce la neutralizacin de cargas opuestas aumentando
la velocidad de reaccin y tambien la cantidad de Ac unido al
hemate.

Tiempo de incubacin: Las diferentes reacciones Ag-Ac

alcanzan el equilibrio en tiempos diferentes.
SEGUNDA ETAPA
Potencial Z

Densidad del Ag

Clase de Ig involucrada

Para potenciar las reacciones de aglutinacin se

emplean diversos mtodos: centrifugacin controlada,
adicin de medios macromoleculares, de Enzimas
proteolticas y el uso del test de Coombs permite
detectar la sesibilizacin de los GR por IgG que
generalmente no producen aglutinacin
ETAPAS DE LA AGLUTINACIN

La aglutinacin se produce en dos

etapas:

La primera es la unin Ag-Ac

La segunda la formacin de puentes
intercelulares que producen el
fenmeno visible de la aglutinacin.
Potencial Z
Enzimas proteolticas que eliminan las
cargas (-) de la superfcie celular

Papana
Bromelina Eliminan el Acido Slico
Tripsina
Otras sustancias: Albmina bovina
Dextrn
 GR con menos cargas negativas en su superficie, lo que
permite que se aproximen lo suficiente para que se establezcan
los puentes de unin por molculas de IgG.
 Solucin salina de baja fuerza inica
:LISS

Permite aumentar hasta 1000 veces la afinidad entre

Ag y Ac.
Aumenta la sensibilidad de la prueba de Coombs.
Permite detectar Ac en baja concentracin y de baja
afinidad
Permite reducir el Tiempo de incubacin de la Coombs
de 30 a 10 Por esta razn el TCI en LlSS es la
prueba de eleccin para la deteccin e
identificacin de Ac de tipo IgG
Se la utiliza : Prueba de compatibilidad
pretransfusional y deteccin de Ac irregulares en
donantes y receptores, deteccin de Ac irregulares
en embarazadas y tipificacin de Ag eritrocitarios.
PRUEBA ANTIGLOBULINICA ( Coombs)

Detecta Acs de tipo IgG o fracciones del

C`adheridos a los GR.
Existen dos tcnicas:
a) Directa: Detecta Acs adheridos a los GR in
vivo.
b) Indirecta: Determina Acs existentes en el
suero o plasma del paciente, previa incubacin
del suero con GR apropiados.
 DIRECTA: TCD
Diagnostico de AH y EHRN.
Investigacin de reacciones dudosas
en una transfusin.
Investigacin de enfermedades autoinmunes.
INDIRECTA: TCI
Screening de sueros de donantes y pacientes para
Acs.
Pruebas de compatibilidad previas a la
transfusin.
Identificacin y titulacin de Acs encontrados en
sueros.
 LAVADO INADECUADO DE ERITROCITOS

MALA INTERPRETACIN DE PRUEBAS

DBILMENTE (+)

PRDIDA DE ACTIVIDAD DE LOS REACTIVOS

CENTRIFUGACIN INADECUADA.
 FALSOS POSITIVOS

TUBOS DE VIDRIO MAL LAVADOS

SOBRECENTRIFUGACIN

QUE LOS ERITOCITOS AGLUTINEN ANTES

DEL AGREGADO DEL SUERO DE COOMBS
 DETECCIN DE ACS IRREGULARES

MUESTRA SUERO FRESCO

REACTIVO PANEL SELECTOR
TECNICA LECTURA EN MEDIO SALINO Y TCI

TITULACIN

SUERO PACIENTE
MUESTRA

HEMATIES QUE EXPRESEN EL AG CORRESPONDIENTE AL AC

A TITULAR EN SUSP ENTRE 35 %
REACTIVO S F

VER CUADRO
TECNICA
TUBO 1 2 3 4 5 6 7 8 9
SF - 10 L 10 L 10 L 10 L 10 L 10 L 10 L 10 L
100 L 100 L
100 L 100 L
DEL TUBO 2 SE TOMA 100 L Y SE LO PASA A LOS DEMAS EN FORMA
SUEROS 100 L 100 L SUCECIVA
100 L 100 L RESERVAR 100 L DEL TUBO 10

100 L 100 L
GR 100 L 100 L 100 L 100 L 100 L 100 L 100 L 100 L 100 L
DILUCION 1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256
EL TTULO ES LA INVERSA DE LA MAYOR
DILUCIN DE SUERO QUE PRODUCE
AGLUTINACIN VISIBLE
E H F N
 Conjunto de manifestaciones patolgicas causadas por
aloimunizacin materna a Ag celulares presentes en el
feto heredados del padre que producen una respuesta
inmune (Ac) en la madre

Causas de inmunizacin
Embarazo (parto 0,25 ml hasta 25 ml - 3er
trimestre?)
Transfusin
Inyecciones de sangre (intramuscular) Puede
afectar 1er emb
Transplantes
Drogadiccin
CLASIFICACIN
Segn la especificidad del Ac
EHFN: por acs contra ags del sistema RH ( ms severa )
Madres RH ( neg) sensibilizadas con anti-D

EHFN: por acs contra ags del sistema ABO ( menos

severa )
Madres de grupo 0

EHFN : por acs contra ags de otros sistemas

ENFERMEDED HEMOLTICA DEL
RECIN NACIDO (EHRN)
* Ictericia
Signos * Anemia
* Esplenomegalia
* Hepatomegalia

Causas + comn ( Incompatibilidad sangunea

materno-fetal)
 ESTUDIOS EN LA MUJER EMBARAZADA

Acs irregulares : ttulo e identificacin 16 / 18 sem

Si es ( - ) repetir 28 / 32 sem
Si es ( + ) repetir 20 / 22 sem c/ 15 dias si aumenta

Estudios de LA ( mujeres con ttulo > 16 + historia

obstetrica

* Genotipificacin R H D fetal

* Feto Ultrasonido -----EC ( hgado- bazo )

_ Muestra sangre fetal ( 18 sem )
PRUEBAS DE CONFIRMACIN

*A la madre : Tipificacin ABO Y RH ( VARIANTES

DU )
Panel selector ( aloanticuerpos
maternos )

* En el nio : Tipificacin A B O y R H
PCD
H b , Hto cordn , BRR I de cordn
Reticulocitos
Determinacin prenatal del genotipo RHD

Protocolo de estudio

Estudios inmunohematolgicos en sangre materna:

RhD y Anticuerpos Irregulares.

Extraccin de ADN de sangre perifrica materna y

lquido amnitico. 4.TRANSFUSION.ppt

Genotipificacin RHD en ADN fetal.

Determinacin del origen fetal del ADN obtenido

del lquido amnitico.

Determinacin de la cigosidad RHD paterna.

E H F N ----A B O

Caso ms frecuente Madre O Y feto A

Frecuentemente sin significado clnico

Se puede presentar en el primer embarazo

 ESTUDIOS A REALIZAR

Prenatal (embarazadas):
Podra investigarse en embarazada de grupo O y esposo A/B los Ac
anti-A/B de clase IgG (2-ME) pero solamente 1 de 3000
incompatibilidades ABO potenciales necesita exanguinotransfusin.
Imposibilidad e inutilidad de un despitaje prenatal

Posnatal
Recin nacido:
Grupo ABO y RhD
TCD, TCD potenciado
Medios macromoleculares
Elucin e identificacin del Ac
Madre
Estudio de Ac anti-A y/o anti-B de origen inmune y titulacin.
ESTUDIOS A REALIZAR
PRENATAL : ( embarazada )
madre O esposo A / B
Determinar ttulo de Ig G

_ POS NATAL : recien nacido

grupo A B O y R H
P C D ( +, - dbil )
HALLAZGOS HEMATOLGICOS EN EL RECIEN
NACIDO

* Aumento de reticulocitos . 10- 30 %

evidencia de proceso hemoltico compensado

* Eritroblastos en sangre perifrica 8---15 %

* Microesferocitos 80 %