PROGRAMA DE PS- GRADUAO EM ZOOTECNIA

Descrio dos mtodos in situ e in vivo de digestibilidade em

ruminantes.

ALEXSANDRA PALUDO

Rio Verde, GO

2011
 INSTITUTO FEDERAL GOIANO CAMPUS RIO VERDE

PROGRAMA DE PS- GRADUAO EM ZOOTECNIA

Descrio dos mtodos in situ e in vivo de digestibilidade em

ruminantes.

ALEXSANDRA PALUDO

Seminrio apresentado ao Instituto Federal

Goiano Campus Rio Verde, como
requisito parcial para a avaliao na
disciplina de Seminrios I.

Orientadora: Prof. Dr. Ktia Cylene Guimares

Rio Verde - GO

Setembro, 2011
 1. INTRODUO

Com o surgimento de novas cultivares de plantas forrageiras assim como de

novas fontes de nutrientes v-se necessrio o a avaliao do potencial dos mesmos para
a utilizao na alimentao animal. A estimativa dos valores de digestibilidade
reconhecidamente um dos primeiros aspectos do valor nutritivo do alimento. Todavia,
experimentos para determinao de digestibilidade, por meio de coleta total de fezes,
so onerosos e de difcil execuo, devido a adaptao dos animais as gaiolas e as
praticas de manejo.
A eficincia dos sistemas de produo de bovinos depende, entre outros, da
oferta adequada de nutrientes aos animais. A qualidade nutricional de um alimento tem
sido definida como o produto do seu consumo voluntrio, da sua digestibilidade e da
eficincia de utilizao dos nutrientes digeridos. A princpio, o parmetro mais
consistente para caracterizar o potencial de um determinado alimento ou dieta em suprir
as exigncias nutricionais de uma determinada categoria animal, em um sistema
especfico de manejo, o desempenho animal obtido com o seu uso. Porm,
experimentos deste tipo so relativamente onerosos e demandam tempo para a obteno
de resultados. Em funo disso, vrias tcnicas alternativas de avaliao dos alimentos
foram desenvolvidas nas ltimas dcadas. Associado a elas, foram desenvolvidos
tambm sistemas mecnicos e mais acurados de avaliao nutricional e de predio da
produo animal, que tm por base anlises detalhadas do alimento e da fisiologia
animal (SILVEIRA & KOZLOSK, 2006).
A estimativa da digestibilidade pelo mtodo convencional, ou seja, in vivo,
a medida que apresenta o maior grau de confiana. Contudo, um processo demorado e
trabalhoso, no permitindo a avaliao simultnea de um grande nmero de alimentos.
Alm do mais, exige um nmero mnimo de animais por alimento avaliado e grande
quantidade de alimento.
Um mtodo mais direto de medir a degradao ruminal dos alimentos
colocando uma pequena quantidade de alimento em uma bolsa porosa no degradvel e
suspend-la e o seu contedo no rmen foi proposto pela primeira vez por Quin et al
(1938). Esta tcnica (variadamente chamada de nylon, dacron, bolsa de polister , in
sacco, ou degradabilidade ruminal in situ) tem sido adotada pela AFRC(1992) como o
mtodo padro caracterstico da degradabilidade ruminal da protena. Esta tcnica foi
escolhida por ser uma comparao com os resultados in vivo (FONTE).
A tcnica in situ permite timas condies de temperatura, pH, tamponamento,
substratos, enzimas e fatores de crescimento; no entanto, apresenta elevada
contaminao do material nas bolsas com micro-partculas da dieta, sendo importante a
avaliao dos efeitos da dieta sobre a degradao dos alimentos e fraes que o
compem (Mertens, 1993).
Portanto o objetivo dessa reviso comparar as tcnicas de avaliao de
alimento in vivo e in situ,assim como a eficincia de ambas.

2. MTODOS DE DIGESTIBILIDADE

2.1. Digestibilidade in Situ

A tcnica in situ consiste em determinar o desaparecimento de componentes

da amostra de alimentos acondicionados em sacos de nilon, ou outro material sinttico,
e incubados no rmen por perodos variveis. Esta tcnica inicialmente foi usada por
QUINN et al. (1939) que utilizaram sacos de seda incubados no rmen atravs de uma
fstula. Com o advento das fibras sintticas, os pesquisadores passaram a utilizar este
tipo de material por ser indigestvel nas condies prevalecentes no rmen. A
popularidade desta tcnica esta ligada a sua rpida e fcil execuo requer pequena
quantidade da amostra do alimento e possibilita sua exposio ao contato ntimo com o
ambiente ruminal, apesar de no estar sujeita s experincias da mastigao e ruminao
ou fluxo para o trato digestivo posterior (TEIXEIRA, 1997).
Devido a sua ampla utilizao, pesquisas foram desenvolvidas com o intuito de
se estabelecer padres apropriados e uniformizar a tcnica in situ, visando a obteno
de repetibilidade aceitvel dos resultados, como a porosidade do tecido, tamanho da
partcula, quantidade de amostra, lavagem dos sacos, etc.
A suspenso de alimentos dentro do rmen (por exemplo: tcnica do saco in
situ, tcnica in sacco, tcnica do saco de fibra artificial) permite o contato ntimo do
alimento teste com o meio ruminal. A estimao da concentrao de indicadores
internos em alimentos e fezes por procedimentos in situ parece ser mais exata que em
procedimentos in vitro. Apesar disso, ainda existem divergncias quanto forma de
implementao e conduo desse mtodo (CASALI et al, 2008).
O tempo de incubao ruminal uma das variveis de maior influncia sobre a
representatividade dos resduos indigestveis em procedimentos de incubao in situ.
No existe na literatura consenso sobre o tempo de incubao ruminal que permita
representar melhor a frao indigestvel das amostras; observam-se perodos variveis,
como: 96 (RUIZ et al., 2001), 144 (FREITAS et al., 2002), 192 (ZEOULA et al., 2002),
240 (CLIPES et al., 2006) e 288 horas (HUHTANEN et al., 1994).
Conforme resultados obtidos por MORON et al (2001) quando comparou as
tcnicas de degradabilidade ruminal in situ e a in vitro utilizando nove alimetos (fub de
milho, farelo de soja, farelo de algodo, farelo de trigo, farinha de carne, capim-napier,
capim-gordura, feno de alfafa e feno de coast cross), obteve que para os concentrados a
tcnica in vitro, no foi apropriada, j para os volumosos a tcnica se mostrou mais
adequada.
Vrios aspectos da tcnica in situ sofrem interao naturalmente e podem
influenciar a interpretao dos resultados. A discusso seguinte ir relacionar
parmetros especficos que afetam a digesto in situ de acordo com a Tabela 1.

Tabela 1 Recomendaes para o procedimento da digesto ruminal in situ.

Varivel Recomendao
Porosidade do saco 40 a 60m
Tamanho da partcula Suplementos proticos e energticos, 2
mm
Gros de cereais inteiros, subprodutos
fibrosos, 5 mm
Fenos (> 80% de MS), 5 mm
Silagens (secas ao ar para 60-70% de MS
ou secas ao frio e ento
modas, 5 mm
Descrever o tamanho da partcula
(peneira) se no for modo.
Relao quantidade de amostra 10 a 20 mg/cm2
por rea superficial do saco
Contaminao microbiana Sem considerar o marcador utilizado
(DAPA, RNA, N15, S35, etc)
a correo deve ser utilizada,
principalmente, para forragens de
baixa qualidade.
Dieta Alimentar segundo s exigncias do
animal
 Documentar a composio da rao
Alimentar com propores de forragem:
concentrado de acordo
com s exigncias do animal
Fornecer os ingredientes na dieta basal
que sero testados
Fornecer uma rao total, vontade
Animal/Perodo Utilizar o tipo de animal para o qual as
determinaes sero
utilizadas
Pelo menos duas repeties no tempo
devem ser utilizadas se um
animal utilizado
Inserir os sacos em um mesmo tempo em
relao alimentao
de cada animal e perodo.
Incubao Pr-ruminal Mergulhar os sacos em gua ou soluo
tampo antes da
incubao
Insero dos sacos Inserir em um determinado intervalo de
tempo e retirar todo o
grupo
Lavagem Ps-Ruminal Lavar em gua corrente at a gua ficar
clara
Tempos de Incubao 0 a 6 h: 3 a 6 tempos
6 a 24 h: 3 a 6 tempos
25 h: intervalos de 6 a 12 h
Ingrediente Padro Um saco por cada tempo de incubao,
inseridos com o alimento
teste.
Expresso dos resultados Estimar a disponibilidade ruminal por
Orskov e McDonald (1979).
Fonte: NOCEK (1997)

2.1.1. Principais caractersticas da tcnica

A porosidade apropriada um ajuste entre limitar o influxo de contedo

ruminal, no associado com o alimento teste, e permitir o influxo de populaes
microbianas para degradar o alimento teste enquanto ao mesmo tempo limita a sada de
partculas alimentares no degradadas. Inerente a tcnica a perda solvel e mecnica
de partculas do alimento do saco antes da incubao ruminal. A digestibilidade real
dessa frao no quantificavel pelo mtodo in situ mas freqentemente assumido
estar associada com a frao rapidamente degradvel e prontamente disponvel, o qual
pode ou no ser exata (NOCEK, 1997).
 O tipo de material utilizado na fabricao dos sacos geralmente o nylon,
polister ou dracon (KITESSA et al., 1999). O nylon o tipo de material usado pela
maioria dos pesquisadores (HUNTINGTON & GIVENS, 1995), porm o AAC- SCA
(1990) recomenda o uso de polister para a padronizao da tcnica.
A moagem do alimento reduz o tamanho de partcula e aumenta a superfcie de
rea para a degradao microbiana. No entanto, a moagem excessiva pode resultar na
sada de pequenas partculas pelos poros do saco, tendo como resultado uma
superestimao das taxas de digesto (NOCEK, 1988).
De acordo com WEAKELY et al. (1977) quando verificaram que a degradao
in situ do farelo de soja foi menor quando modo em partcula 2000 m do que com
tamanho de partcula mais fina (520 m). VANZANT et al. (1998) recomendam moer
os alimentos com peneira com crivos de 2 mm para todos os tipos de alimentos.

2.1.2. Modelo de Desaparecimento da Matria Seca

Os resultados obtidos pela tcnica in situ so submetidos a algumas equaes

para adequao dos valores obtidos em experimentos. As curvas de degradao obtidas
(perdas versus tempos de incubao) so ajustadas pela equao proposta por ORSKOV
& McDONALD (1979), a seguir:
P = a + b (1 e ct)
P = Degradabilidade aps um tempo t;
a = frao de rpida degradao, representada pelo intercepto de curva de
degradao no tempo zero;
b = frao potencialmente degradvel;
c = taxa constante de degradao de b;
t = tempo de incubao.
A degradabilidade total de uma amostra dada por a + b, a qual no poder ser
maior que 100. Assim, 100 (a + b) representa a frao que no se degrada no rmen.
Esta tcnica tem sido valorizada devido a tendncia de se utilizarem nas
formulaes de raes os coeficientes a Frao solvel do alimento degradada no
tempo zero, b frao insolvel mas potencialmente degradada e c taxa fracional
de degradao da frao b por unidade de tempo (AFRC, 1993; NRC, 1996,2006).
Atravs desses coeficientes possvel estimar os nutrientes necessrios para
crescimento microbiano, e aqueles requeridos pelo animal, maximizando assim a
eficincia energtica e protica das raes (ANDRADE, 1994).
O valor de a quando positivo, caracteriza rpida perda. Para saber se esta
perda devido a degradao rpida ou apenas perda de material solvel, devemos
colocar bolsas de nilon com amostra de molho em gua, com posterior secagem e
pesagem dos mesmos.
Se a for negativo, significa que h necessidade de um tempo prvio para
ocorrer o incio da degradao, o qual denominamos de lag time. Para forrageiras
tropicais, bastante lignificadas, o lag time situa-se entre cinco e seis horas. Portanto, a
curva poderia ter apenas quatro tempos (0, 6, 12 ou 24 e 96 horas de incubao), sem
perder em preciso.
A degradabilidade efetiva pode ser calculada pela seguinte equao:
DE = a + b c
c+k
DE = degradabilidade efetiva
a = frao degradada rapidamente ou degradada no tempo zero;
b = frao potencialmente degradvel;
c = taxa de digesto da frao b;
k = taxa de passagem da frao b.

2.2. Digestibilidade in vivo

O mtodo padro para medir a digestibilidade envolve um ensaio com animais

recebendo a dieta a ser avaliada por um determinado tempo, perodo no qual medido o
consumo de alimento e a produo fecal (KITESSA et al., 1999). Nesta tcnica no h
exigncia de animais fistulados no rmen e o resultado a expresso mais real dos
processos digestivos dos animais. No entanto, a acurcia dos resultados restrito ao
nvel de consumo, tipo de animal e do alimento utilizado no ensaio. Por exemplo, o
aumento do nvel de consumo pelos animais provocaria aumento na taxa de passagem
do alimento pelo trato digestivo, com isso, o tempo que o alimento estaria sujeito
degradao diminuiria, afetando a digestibilidade.
A determinao da digestibilidade por intermdio do mtodo tradicional de
coleta total de fezes requer controle rigoroso da ingesto e excreo, o que o torna
trabalhoso e oneroso. Isto levou idealizao de outros mtodos nomeados de mtodos
indiretos dos indicadores ou dos marcadores (SILVA, 1990), os quais apresentam certas
vantagens sobre o da coleta total de fezes, a exemplo da simplicidade e convenincia de
utilizao, e podem proporcionar uma srie de informaes, incluindo-se a quantidade
ingerida de alimentos ou nutrientes especficos, a taxa de passagem da digesta por todo
o trato digestivo e a digestibilidade de todo alimento ou nutrientes especficos.
Constituintes naturais da dieta que apresentam baixa digestibilidade tm sido
utilizados como indicadores. Os indicadores internos apresentam a vantagem de j
estarem presentes no alimento e, de modo geral, permanecerem uniformemente
distribudos na digesta durante o processo de digesto e excreo (PIAGGIO et al.,
1991).
Segundo Lana, 2005, a tcnica in vivo consiste na medio do consumo e da
produo fecal total diretamente em gaiolas de metabolismo- mtodo convencional, ou
estimando-se a produo fecal pelo uso de indicadores. Existem indicadores externos,
que adicionados aos alimentos, como xido crmico e internos, contidos no alimento,
como a fibra em detergente cido ou indigestveis. Uma vez que esses indicadores no
so digeridos e/ou absorvidos, a quantidade excretada diariamente deve ser a mesma
consumida. Sabendo-se, ento, a quantidade do indicador consumida diariamente e a
concentrao dos mesmos nas fezes, obtem-se as estimativas da produo fecal. Com
base no consumo e nas anlises qumicas das dietas consumidas e da produo fecal e
anlise qumica das fezes, obtem-se a digestibilidade dos alimentos e nutrientes,
conforme as frmulas apresentadas a seguir:

Dig MS= 100-{(CoInA/CoInFe)*100}

Dig Nutriente= 100 {(CoInAl/CoInFe)*(CoNuFe/CoNuAl)*100}
Em que:
CoInAl = Concentrao de Indicador no Alimento;
CoInFe = Concentrao do Indicador nas Fezes;
CoNuFe = Concentrao de Nutrientes nas Fezes;
CoNuAl = Concentrao de Nutrientes nos Alimento.

A digestibilidade real maior ou igual a digestibilidade aparente, com

exceo da celulose,em que a digestibilidade aparente igual a digestibilidade real, pois
no existe perda endgena de celulose. Na conduo de alguns ensaios de
digestibilidade, utiliza-se animais machos, pois facilita a coleta de fezes e urina
separadamente e,para reduzir os custos com experimentao utiliza-se ovinos como
modelo animal representado os ruminantes e ratos representando os monogstricos. So
necessrios pelo menos trs animais por tratamento, podendo-se fazer repeties no
tempo, a exemplo do delineamento de quadrado latino, sendo desejvel um mnimo de
10 graus de liberdade no resduo ou 20 unidades experimentais (LANA, 2005).
O alimento deve ser padronizado, evitando-se alterao no consumo e na
digestibilidade, pelo uso de alimento armazenado (feno, silagem), uma vez que a
composio do alimento verde muda durante o ensaio. O perodo de ensaio em um
delineamento inteiramente casualizado deve ser de aproximadamente 30 das em
ruminantes, com um perodo de sete dias de adaptao a gaiola e mudana progressiva
de alimentao: um perodo de adaptao a rao de mais ou menos 15 dias em
ruminantes para correr mudana na populao ruminal e permitir a determinao do
consumo voluntrio e iniciar o fornecimento de xido crmico; e um perodo de coletas
de 5 a 7 dias, para obter-se amostras dirias de alimentos, sobras e fezes e,
posteriormente, amostra composta por animal.
O nvel de ingesto de 90-95% do consumo voluntrio pode ser utilizado para
no haver sobras, como tambm, diminuir o nmero e amostras a serem utilizadas. O
consumo pode ser expresso em Kg/dia, percentagem do peso vivo em funo do peso
metablico (g MS/kg0,75). O calculo do coeficiente de digestibilidade (CD) dado pela
frmula CD =[(ingerido- excretado)/(ingerido)]*100 (LANA, 2005).

2.2.1. Indicadores de digestibilidade

A determinao da excreo fecal pelo mtodo dos indicadores baseia-se no

emprego de uma substncia de referncia (indicador), a qual, sendo ingerida na dieta,
deve ser recuperada totalmente nas fezes (COELHO DA SILVA et al., 1968). Entre os
indicadores existentes, o xido crmico tem sido o mais amplamente empregado na
determinao da excreo fecal (PRIGGE et al., 1981; ASTIGARRAGA, 1997). A
recuperao de fraes indigestveis do alimento a base para os indicadores internos,
que so utilizados em estudos nos quais so necessrias estimativas de digestibilidade
(VAN SOEST, 1994).
 O xido crmico o indicador externo mais comumente usado na estimativa da
digestibilidade, principalmente por seu baixo custo e pela facilidade de anlise.
Entretanto, recuperao diferente de 100%, variao entre animais na recuperao fecal
e variao na concentrao nas fezes no decorrer do dia so alguns dos problemas
relacionados a esse indicador (TITGEMEYER, 1997).
Vrios indicadores internos tm sido testados para estimar a digestibilidade:
cinza insolvel em cido, cinza insolvel em detergente cido, lignina em detergente
cido indigestvel, FDNi e FDAi. A variabilidade nos resultados das estimativas de
digestibilidade obtidas com o uso de indicadores internos pode ser decorrente da
metodologia de anlise (DETMANN et al., 2001). Lippke et al.(1986) apontaram para
falta de padronizao no mtodo de determinao.
Fraes que tm demonstrado potencial como indicador so as fibras
indigestveis em detergente neutro (FDNi) e em detergente cido (FDAi), obtidas aps
144 horas de incubao ruminal. Desse modo, o uso de indicadores constitui um recurso
para estimar a digestibilidade dos alimentos quando a coleta total impraticvel, sendo
necessrios estudos para determinao e correo das limitaes inerentes a cada
indicador. O estudo da variao diria na excreo de indicadores permite determinar
quantos dias so necessrios para determinar a digesibilidade, o que pode possibilitar
redues no tempo e nos recursos necessrios para a realizao de ensaios de
digestibilidade.

3. Consideraes Finais

O uso de ambas as tcnicas so eficientes na avaliao dos alimentos utilizados na

nutrio de ruminantes, tanto de forrageiras quanto de concentrados. Assim podem ser
utilizadas como ferramentas na avaliao de novos hbridos lanados no mercado e
novas formulaes de concentrados utilizados na suplementao de ruminantes.
A nica diferena se apresenta na dificuldade de execuo, sendo a tcnica in vivo
mais onerosa e limitada nas instituies, por falta de mo-de-obra qualificada e
instalaes adequadas.
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