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TCNICAS GENERATES DE AISLAMIENTO Y CULTIVO DE

MICROORGANISMOS

En Microbiologa, todas las manipulaciones deben ser llevadas a cabo de modo que
se impida cualquier tipo de contaminacin en el rea de trabajo.
Se aconseja que la siembra de todas las muestras a los medios de cultivos se
realice bajo una cabina de flujo de aire laminar o en un gabinete de seguridad
biolgica, con los protectores de plstico o vidrio para el cuello y la cara, las
muestras procesadas se las debe considerar como potencialmente infecciosas y
manipularlos adecuadamente.
Tambin se deben utilizar guantes de goma o latex biolgicos
La mesada de trabajo debe estar equipada con todos los materiales necesarios para
efectuar las siembras, tambin se debe contar con todos los medios de cultivos
necesarios para realizar las siembras.
-Las asas deben esterilizarse antes de utilizarlas y enfriarse sobre el agar o el
material de vidrio (en zonas estriles) antes de tomar la muestra de
microorganismos, con objeto de no destruirlos por calor.
-Despus de utilizarlas, las asas se vuelven a esterilizar en todo su permetro
-Las bocas de los tubos y matraces de vidrio se flamean ligeramente una vez
destapadas, antes y despus de la inoculacin.
-Durante la inoculacin, los tapones se mantienen en la mano sujetndolos por la
parte que no entra en contacto con tubos y matraces.
-Los tubos abiertos deben mantenerse en posicin inclinada hacia el frente para que
el riesgo de contaminacin sea mnimo.
-Las tapas de las placas Petri no deben colocarse nunca sobre la mesa de trabajo
boca arriba trabajando con bacterias.

Los pasos de un proceso de aislamiento de una especie microbiana se


pueden resumir en los siguientes:
-Siembra en placa de la muestra de partida.
-Tomar una colonia de la placa una vez incubada y sembrar una segunda placa, en
la que todas las colonias que crezcan deben ser idnticas.
-A partir de la segunda placa se puede resuspender una de las colonias en medio
lquido, consiguindose ya un cultivo puro.
-Para la conservacin de los cultivos puros de un microorganismo existen diversos
mtodos, el ms simple es la resiembra en tubos inclinados que se mantienen,
normalmente refrigerados, durante 3-6 meses.

El equipo necesario para la inoculacin es muy simple. Consta de un alambre, con


una punta en ojal, recta o en gancho, y el otro extremo insertado en un mango
cilndrico (el conjunto es llamado asa u ansa).
La inoculacin primaria puede hacerse con un asa, hisopo u otro material sobre la
superficie del medio agarizado en la placa de petri o sobre caldos de cultivos.

SIEMBRA

Objetivos
- Familiarizarse con el manejo de microorganismos y con las tcnicas de aislamiento
en placa de Petri.
- Obtener colonias separadas, utilizando uno o ms mtodos.
- Estudiar la morfologa de cada colonia.
Material
Asa de siembra, Tubo con cultivo, placas de Petri con medio de cultivo slido y
cultivo de microorganismo.
Toma de muestras:

1.-Tcnica de siembra para aislamiento:

1.1.-ESTRA MLTIPLE:

Con un asa de siembra, previamente esterilizada, se toma una muestra del cultivo
de microorganismos y se extiende sobre un rea pequea de la superficie de la
placa con agar nutritivo, en forma de estras muy juntas, pero sin hacer presin
para no daar el agar.
Se flamea el asa, se enfra y despus de rozar la siembra realizada previamente, se
extiende de nuevo por otra zona de la placa haciendo nuevas estras. Este proceso
se repite sucesivamente, flameando
y enfriando el asa al comienzo de las sucesivas siembras en estra. Se lleva la placa
a incubar, a la temperatura adecuada, siempre en
posicin invertida.
Mediante esta tcnica se obtienen colonias aisladas a partir de una muestra que
contenga un elevado nmero de grmenes.

ejemplo de resultado con estra mltiple

ejemplo de estra mltiple crecida


1.2-TCNICA DE LOS CUATRO CUADRANTES:

Se divide la placa en cuatro cuadrantes.


Se toma el inculo y se siembra consecutivamente en 1-2-3-4.Incubar.
En el cuarto cuadrante, al menos, obtendramos colonias aisladas.
1.3.- SIEMBRA POR AGOTAMIENTO (O EN SUPERFICIE)

Se realiza una descarga y se realiza estra por toda la placa.

2.-SIEMBRA PARA RECUENTO:

2.1.--Tcnica de Barry

En una placa de Petri vaca se deposita un


pequeo volumen conocido de muestra y a
continuacin se aade el medio de cultivo
(agar nutritivo) fundido y atemperado
aproximadamente a 45C. Se mezclan
ambos por rotacin suave de la placa. De
esta forma los microorganismos se
distribuirn de forma homognea en el
medio de cultivo, permitiendo el desarrollo
de colonias separadas por todo el agar.

2.2.-de inoculo a dilucin conocida y


con asa de Dygraski (Barry
modificada):

Depositar sobre la superficie de una placa con agar nutritivo una gota
0,1 ml de una determinada dilucin del cultivo de microorganismos problema y extenderlo
con ayuda del cayado, previamente
esterilizado, en todas las direcciones hasta que est completamente seco. Incubar
la placa, en posicin invertida, a la temperatura deseada
(durante 24, 48 72 horas) segn el tipo de microorganismo.
La posicin invertida evitar que el agua de condensacin se deposite sobre la
superficie del medio, dificultando la obtencin de colonias
aisladas.
Es una tcnica usada para el aislamiento de colonias, que permite igualmente el
recuento de bacterias viables en la muestra, si conocemos exactamente la dilucin.
Diferencia entre aislar y extender

Lectura de placas: