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Questo modo di morire delle cellule apoptotico non solo frutto di un programma
cellulare ma pu essere indotto da stimoli cellulari. La definizione di apoptosi
quella di morte cellulare programmata. Con atteggiamento romantico hanno chiamato
anche apoptosi come caduta via, come le foglie dagli alberi!!
Un punto di distinzione tra necrosi ed apoptosi che mentre la necrosi riguarda
sempre un tessuto o una parte di tessuto, comunque gruppi di cellule, se mi brucio
una parte dellorganismo brucio un gruppo di cellule tutte insieme, lapoptosi
riguarda singole cellule, cos come il vermetto che doveva mantenere il suo numero
di cellule, cos come in altre situazioni ma avremo una cellula qua ed una cellula l
che va incontro in apoptosi.
Cosa si vede su un preparato istologico?
Prima grandi istologi non se ne erano accorti perch nellambito di un tessuto si vede
una vescicoletta con qualcosa dentro ma non ci facevano caso perch pensavano che
potesse essere dovuta al taglio che semplicemente aveva coinvolto unestroflessione,
un prolungamento di unaltra cellula per cui sotto cera una cellula grande e nella
mia sezione ho una parte di questa cellula, mentre in realt sono corpi apoptotici. Ci
sono delle tecniche istologiche specifiche che ci permettono di individuare queste
cellule che vanno incontro ad apoptosi. Daltra parte uno dei motivi per cui questi
corpi apoptotici non si vedono che vengono immediatamente fagocitati.
Certamente esiste anche una fagocitosi del tessuto necrotico, cio delle cellule andate
incontro a necrosi ma qualcosa di molto grossolano. Bisogna infatti tener presente
che la fagocitosi induce infiammazione: arrivo massiccio di cellule che saranno
fondamentalmente granulociti e neutrofili che sciolgono tutto, ingeriscono tutto e
ripuliscono questa zona andata in necrosi.
Nel caso invece dellapoptosi la cosa parcellizzata: corpo apoptotico per corpo
apoptotico. Le cellule che fagocitano questi corpi apoptotici non sono solo i
macrofagi tissutali anche perch in un tessuto normale di macrofagi tissutali ce ne
sono pochi, invece la novit che le cellule giustapposte sono in grado di fagocitare
questi corpo apoptotici, quindi cellule parenchimali che sono indotte e sono capaci di
fagocitare tali corpi apoptotici, per questo ci si giustifica del fatto che non si erano
mai visti.
Un ultimo punto da sottolineare che come nel caso della necrosi c
linfiammazione che eliminer i detriti, qui invece c la fagocitosi da parte delle
singole cellule ma lapoptosi non induce infiammazione, anche se tante cellule vanno
incontro ad apoptosi non vi sar induzione del fenomeno infiammatorio,non vi sar
arrivo di granulociti, non ci saranno nuovi monociti che vengono attivati.
La meiosi?non lo so!
LUCIDO
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Esempi :
Caernohabditis elegans (nematode di 945 cellule): perde 131 cellule durante la
maturazione (= programma ontogenetico).
Si erano individuati dei geni che favorivano e dei geni che inibivano lapooptosi. Se
noi facciamo iperesprimere un dato gene riconosciamo leffetto di quel gene.
Gene ced-3 e ced-4 ---apoptosi
Gene ced-9 ------sopravvivenza
(Ced= caernohabditis elegans death, quindi geni di morte del caernohabditis elegans)
Risposta immune
Citotossicit di CTL ed NK nei confronti di:
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cellule infettate da virus
cellule allotipiche ( trapianti, graft vs host disease)
cellule tumorali.
Questo tipo di risposta personalizzata cellula per cellula avviene attraverso il
meccaniso fas.
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gli diremo di fare molto movimento in maniera tale che si crei nel tessuto cardiaco
unischemia, che induce un abbassamento del ph che il migliore stimolo per una
proliferazione capillare da una parte, ma dallaltra gli dir no, stai fermo perch se
il tuo cuore si trova nelle aree di relativa ischemia in condizioni di miglioramento e
peggiori( non si capisce bene la registrazione in questo punto!!)so che molto delle tue
cellule andranno incontro ad apoptosi. Dunque una relativa ischemia fa perdere
tessuto ed infatti noi sappiamo che nel paziente con scompenso cronico si ha un
progressivo assottigliamento del cuore. Vedrete che i pazienti con cardiomiopatie
ipertrofiche hanno un cuore ingrossato ma anche il paziente con cuore ingrossato alla
lunga, ha perdita cellulare e quindi perdita di tessuto. Questo vuol dire progredire
verso la morte, verso lo scompenso terminale per perdita cellulare, per apoptosi.
Daltra parte noi sappiamo anche che lipossia ed in particolare lipoglicemia indurr
la produzione di fattori di crescita, in particolare VEGF che infiammer e determiner
replicazioni di endotelio che former i capillari sanguigni. Certamente sar inadatto
che il paziente cardiopatico compia degli sforzi intensi, pi adatto che compia
unattivit fisica regolare che in qualche modo stimoli questi vasi sanguigni, perde
qualche cellula ma magari nel frattempo ci sar una migliore irrorazione di quelle che
rimangono e comunque anche una rigenerazione che sappiamo possibile anche nel
cuore.
Tessuti segregati. Voi sapete che ci sono dei tessuti che sono estranei al sistema
immunitari. Perch sono segregati? Perch il nostro sistema immunitario non
controlla questi tessuti? Perch come arriva un linfocita si attacca, trova il fas ligande
e attraverso questo recettore fas, che un recettore di morte, va incontro ad apoptosi.
Per cui hanno lantidoto come il sistema immunitario.
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efferocitosi ricordafero, cio portare la bara alla cellula che poi dovr eliminare
definitivamente questi corpi apoptotici. Qui si mostra come, per esempio, il TGF
beta1, prodotto dai macrofagi, blocca questa possibilit di fagocitosi dei corpi
apoptotici. Si sono individuate delle patologie in cui questi corpo apoptotici restano
nel tessuto.
Radiazioni, tossine, radicali liberi quindi per ossidazioni cellulari in genere, ossido
nitrico e tutte quelle cose che causano danno perossidativo nei confronti della cellula,
che arrivano a produrre un danno al DNA. Il danneggiamento del Dna ha dei
meccanismi che lo riconosce,tipo lATM che poi attiver la p53 e sar la p53 che
indurr lapoptosi, cos come si era intuito nel disegno sulla senescenza.
Intrinsical embriogenic segnal. Qui parla di vera e propria morte programmata, sono
dei geni che ad un certo punto si attivano ed inducono lattivazione dei meccanismi di
apoptosi.
Dallesterno troviamo, come fattore esogeno, min17:30un allontanamento di
fattori di crescita oppure ormoni. Unitamente al fatto che calino i fattori di crescita,
oppure che calino gli ormoni sar uno stimolo sufficiente per indurre quella cellula ad
andare incontro ad apoptosi ed agiranno attraverso il meccanismo mitocondriale.
Reception legand interaction, cio fas legand: il fas sarebbe il recettore ed il fas
legand sarebbe il contro-recettore. Allo stesso identico modo agisce il TNF. Anche il
recettore per il TNF di fatto un fas, si pu comportare come fas. Il tumor necrosis
factors adesso lo riconosciamo come un fattore infiammatori ma inizialmente era
stato descritto come un fattore di necrosi tumorale, cio aggiunta di TNF in una
coltura di cellule tumorali si vedeve che questa coltura moriva. In effetti un
onduttore di apooptosi. Daltra parte vedremo che si comporta anche come
uninterleuchina, ha il nome sbagliato, altrimenti si chiamerebbe interleuchina 1 e
mezzo perch uguale allinterleuchina 1 come effetti. Quando determina attivazione
cellulare in senso infiammatorio e quando invece necrosi? Dipende dallo
costimolazione: in presenza di un costiamolo di un tipo indurr apoptosi, in presenza
di un altro costiamolo indurr infiammazione. Poi anche le cellule citotossiche, i
linfociti T citotossici, agiscono attraverso due meccanismi: attraverso il fase ed
attraverso un meccanismo perforinico che determina lintroduzione del granzime B
che a sua volta attiva lapoptosi.
Quali sono i meccanismi dellapoptosi? Si chiamano caspasi.
Conosciamo due gruppi di caspasi:
caspasi induttrici
caspasi esecutrici.
Se noi adesso pi modernamente, volessimo sincerarci della presenza o meno
dellapoptosi in un preparato istologico, poich la caspasi pi importante la caspasi
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3, il fatto di trovare unattivazione della caspasi 3 che una caspasi esecutrice ci dice
che quella cellula sta andando in apoptosi, per cui noi dobbiamo fare una banalissima
immunoistochimica con anticorpi anti-caspasi3 attiva e individuiamo tutte le cellule
che stanno andando incontro ad apoptosi.
Per quanto riguarda il meccanismo la caspasi 3 attiva delle endonucleasi, cio degli
enzimi che rompono il DNA e caratteristicamente li rompono in frammenti di 200
paia di basi. Se io ho questo meccanismo che rompe il DNA in 200 paia di basi, se
questo meccanismo procede avr dei frammenti che sono di 200 paia di basi ma altri
che non sono ancora stati completamente digeriti per cui, invece di essere frammenti
di 200 paia di basi, sono frammenti di 400 paia di basi, di 800 paia di basi, sempre a
scalare. Se io faccio unelettroforesi di questo DNA, di queste cellule che sono andate
incontro ad apoptosi, mi si former una cosiddetta scala cromatinica, per cui avr una
serie di frammenti, regolarmente uno la met dellaltro, dividibili per 200. se invece,
in quel tessuto che sto analizzando fosse intervenuta una necrosi che rompe il DNA
in maniera indifferente, con altri tipi di endonucleasi, avr ununica macchia con tutti
i pesi molecolari possibili. La scala cromatinica un modo per mettermi in evidenza
lapoptosi nel tessuto.
Peraltro se io ho che in queste cellule agisce unendonucleasi che mi rompe il nucleo
posso fare la TUNEL che una prova per far vedere lapoptosi. (Il prof non ricorda la
traduzione di tunel.)
La tunel mette in evidenza dei frammenti di cromosomi, una reazione particolare
che riesce ad evidenziare le rotture cromosomiche ed allora posso usare questa
tecnica per dire se c apoptosi. una tecnica istologica che mi rileva questa
frammentazione del materiale nucleare. Avr una cellula vicina con il suo nucleo
intatto che viene negativa, invece la cellula apooptotica, notate bene che gi
avvenuta la endonucleasi per cui la cellula gi in una fase irreversibile ed
apoptotica, una cellula tunel positiva.
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Si vede il mitocondrio con la membrana mitondriale. Novit : il citocromo c che
normalmente sta nei mitocondri, quando c uno stimolo apoptotico viene rilasciato
dai mitocondri.
Molto importante il bcl2 che avevamo definito prima un meccanismo
antiapoptotico, il prodotto del gene bcl2 blocca la fuoriuscita di citocromo dai
mitocondri, per cui non si pu attivare la caspasi 9. se questo bcl2 iperespresso, dal
momento che da questo meccanismo dipendeva anche il danno mitocondriale, quello
su cui agiva la p53, lui vanifica tutto il lavoro della p53 e quindi rappresenta un
meccanismo protumorale, proneoplastico e ci sono dei tumori che dipendono da
questo polimorfismo, da questalterazione genica da bcl2 che praticamente blocca
lapoptosi. Allora la cellula che ha tutti i mitocondri rotti, alterati ma ha questo bcl2
attivato una cellula che continua a sopravvivere fino a moltiplicarsi.
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