Biognesis mitocondrial en msculo

esqueltico inducida por actividad

contrctil
*Autor. Universidad del Estado de Nueva York.
Profesor de Kinesiologa y Ciencia de la Salud, y
Biologa.
(Canad)
**Traductor. Profesor de Educacin Fsica. Magster
en Fisiologa del Ejercicio.
(Chile)

PhD. David A. Hood*

dhood@yorku.ca

MSc. Rodrigo Ramirez Campillo**

ramirezcampillo@hotmail.com

Resumen
La actividad contrctil crnica produce biognesis mitocondrial en el
msculo. Esta adaptacin tiene como resultado un cambio significativo en el
metabolismo de los nucletidos de adenina, que se traduce en un incremento
de la resistencia a la fatiga. La vasta mayora de las protenas mitocondriales
son derivadas desde el genoma nuclear, necesitando de la transcripcin de
genes, la traduccin (translation) del RNAm en protena, el transporte de
estas protenas a un compartimiento mitocondrial mediante la maquinaria de
importacin y el ensamblaje de complejos enzimticos con mltiples
subunidades en la cadena respiratoria o matriz. Las seales involucradas en
iniciar esta va de expresin gentica en respuesta a la actividad contrctil
probablemente se origina en el acelerado ritmo de turnover del ATP o en la
prdida del balance entre la sntesis mitocondrial de ATP y las demandas
celulares de ATP y en los flujos de Ca 2+. Estos rpidos eventos son seguidos
por la activacin de kinasas (enzimas) que responden frente al ejercicio, las
cuales fosforilan (cargan con energa) protenas, como las protenas que
actan como factores de transcripcin, las que a su vez se unen a las
regiones reguladoras superiores del ADN (upstream regulatory regions in
DNA), alterando (incrementando o disminuyendo) as los ritmos de
transcripcin de ciertos genes. La actividad contrctil incrementa los niveles
de ARNm de ciertas protenas codificadas en el ncleo, como el citocromo c
(protena de la cadena transportadora de electrones) y factor A de
transcripcin mitocondrial (Tfam) y tambin incrementa los niveles de ARNm
de factores de transcripcin de las regiones superiores (upstream
transcription factors), como c-jun y factor-1 de respiracin nuclear (NRF-1).
Los cambios en el nivel de RNAm suelen ser ms evidentes durante el
periodo de recuperacin post ejercicio y pueden ocurrir como resultado de los
incrementos de transcripcin inducidos por actividad contrctil o por un
incremento en la estabilidad del RNAm. El Tfam se importa hacia la
mitocondria y controla la expresin del ADN mitocondrial (mtDNA). El mtDNA
contribuye con solo 13 protenas a la cadena respiratoria, pero son protenas
vitales para el transporte de electrones y la sntesis de ATP. La actividad
contrctil incrementa la expresin de Tfam y acelera el proceso de
importacin hacia la mitocondria, dando como resultado un incremento en la
transcripcin y replicacin del mtDNA. El resultado final de esta expresin
coordinada del genoma nuclear y mitocondrial, junto con cambios en la
sntesis de fosfolpidos (proceso poco comprendido), es una expansin del

retculo mitocondrial del msculo. Un mejor entendimiento de 1) la regulacin

de la expresin del mtDNA, 2) activadores superiores (upstream activators)
de NRF-1 y otros factores de transcripcin, 3) la identidad de protenas
estabilizadoras de ARNm, y 4) el potencial de los cambios inducidos por
actividad contrctil en seales apoptoticas (muerte celular programada), es
garantizado.
Palabras
clave: Biognesis
mitocondrial.
Msculo
esqueltico.
Contraccin muscular.
Traduccin del artculo Hood, David A. Invited Rewiev: Contractile activity-induced mitochondrial
biogenesis in skeletal muscle. J Appl Physiol 90: 1137-1157, 2001.

http://www.efdeportes.com/ Revista Digital - Buenos Aires - Ao 12 - N 112 - Septiembre de 2007

Introduccin
Debido al hecho que las mitocondrias son una fuente importante de ATP celular, no
deberamos sorprendernos al aprender que el nmero de estas por clula, as como
tambin su ubicacin intracelular, vara en dependencia del tipo de clula y de acuerdo
a su estado metablico.

Solo hace pocos aos pudo ser demostrado que el tamao mitocondrial, su nmero
y/o volumen puede incrementarse en un determinado tejido (como en el msculo
esqueltico) es respuesta a un estmulo fisiolgico (como el entrenamiento de
endurance). Este descubrimiento es importante para los fisilogos del ejercicio
interesados en el entendimiento de las bases celulares del rendimiento de endurance y
es de importancia prctica para los atletas involucrados en planes de entrenamiento.
Adems, la relevancia clnica tambin debe ser considerada en forma importante,
debido a que el contenido mitocondrial puede ser reducido drsticamente durante
periodos prolongados de desuso muscular, como durante la inmovilizacin de un
miembro o denervacin muscular. El amplio impacto que tienen los cambios en el
contenido mitocondrial de un determinado tejido para otros campos de la biologa
celular no era tan aparente como lo es hoy. Discusiones sobre la funcin mitocondrial,
expresin gentica y sntesis, son hoy tema regular en los laboratorios de biologa
celular. El trmino "biognesis mitocondrial", que implica los procesos celulares
involucrados en la sntesis y degradacin del organelo, es hoy utilizado con mayor
regularidad y aparente relevancia. La mitocondria es ahora reconocida no solo como la
"fbrica energtica de la clula", por lo cual es famosa, sino que adems hoy se le
conoce por su importancia en la patognesis de enfermedades con amplia relevancia
clnica.
Nuestro entendimiento del funcionamiento mitocondrial ha progresado rpidamente
en los ltimos aos debido a varias razones. Primero, debido a los avances de la
biologa molecular, con tcnicas como el ADN recombinante, anlisis cuantitativo de
DNA y ARNm, el uso de modelos animales y de clulas en cultura y la tecnologa de
transferencia de genes, factores que han permitido investigar en profundidad los
eventos celulares y moleculares involucrados con el funcionamiento mitocondrial. Estas
tcnicas se complementan con los avances en la microscopia electrnica, que ha
permitido tener una mayor resolucin de la estructura del organelo y que, al combinarse
con tecnologa de deteccin fluorescente, permite la medicin del movimiento de iones
en varios compartimientos de la clula viva. El resultado de estos avances tecnolgicos
es que ahora podemos apreciar nuevos roles para la mitocondria, ya no solo como el
principal organelo encargado de proveer ATP, sino que adems como un mediador de
eventos apoptoticos que lleva a la muerte celular, como un organelo que posee un
genoma separado y semi autnomo (mtDNA) y como un sitio celular donde tienen lugar
eventos de transduccin de seal, que pueden ayudar a coordinar la expresin gentica
nuclear y mitocondrial.
La biognesis mitocondrial puede ser un evento dramtico, particularmente cuando
es invocada en un msculo esqueltico blanco, poco oxidativo. En respuesta al
ejercicio, la conversin del fenotipo del msculo blanco a uno con una apariencia
visiblemente roja es posible por la sntesis adicional de grupos heme y su incorporacin
a los citocromos mitocondriales, as como tambin se incorporan a la mioglobina. El
gran incremento de contenido mitocondrial puede tener un profundo impacto en el

metabolismo celular durante el estrs del ejercicio. Esta revisin se centra en tpicos
actuales sobre biognesis mitocondrial, con nfasis en el msculo esqueltico y el rol
de la actividad contrctil (como por ejemplo, el ejercicio).

Lo fundamental sobre la biognesis mitocondrial

muscular
La biognesis mitocondrial puede ser producida por varias condiciones
fisiolgicas
El entrenamiento de endurance, al emplear una apropiada duracin por da, una
frecuencia por semana y una intensidad submxima pro sesin de ejercicio, puede
producir un incremento en el contenido mitocondrial, usualmente en el rango de 50 a
100% dentro de un periodo de 6 semanas. Esto tiene como resultado un incremento en
el rendimiento de endurance, en gran medida independiente de los relativamente
pequeos incrementos en consumo de oxgeno submximo. La biognesis mitocondrial
puede ser inducida por varias formas artificiales de ejercitacin, como la actividad
contrctil crnica producida por electro estimulacin del nervio motor. Este modelo tiene
la ventaja de producir un cambio relativamente mayor en el contenido mitocondrial en
un periodo ms corto de tiempo (1 a 3 semanas). El tratamiento con hormona tiroidea
tambin puede resultar en un incremento de biognesis mitocondrial. Esto representa
un estmulo muy diferente, actuando va receptores nucleares y mitocondriales, que en
definitiva llevar a producir un mayor contenido mitocondrial. La respuesta de los
msculos a la hormona ser especfica dependiendo del tipo de fibra, lo cual se debera
a diferencias en la distribucin de receptores para la hormona. Las vas independientes
de accin sobre la biognesis mitocondrial de la actividad contrctil y de la hormona
tiroidea son evidentes a partir de modelos experimentales practicados en animales
tiroidectomisados y sometidos a actividad contrctil crnica. Sin embargo, ambas
condiciones parecen resultar en una incrementada masa mitocondrial funcional, dando
una mayor capacidad para el consumo de oxgeno por grama de tejido.

El contenido mitocondrial tiene una vida media corta y el fenotipo mitocondrial

puede cambiar
El contenido mitocondrial puede ser medido directamente, utilizando estimaciones
morfomtricas del volumen del organelo en relacin al volumen celular total. Pero ms
comnmente, se estima a partir del cambio en la actividad mxima de un marcador
enzimtico (la actividad se mide bajo condiciones optimas in vitro), como la citrato

sintasa o tambin por medio del cambio del contenido de una sola protena, como el
citocromo c. Esto es vlido bajo la mayora de las condiciones, debido a que los
cambios del volumen mitocondrial determinado mediante estimaciones morfomtricas
van en paralelo junto a los cambios de los valores de velocidad mxima (Vmax) de un
marcador enzimtico. La medicin de la actividad enzimtica o de protenas nicas, ha
sido til para determinar el turnover mitocondrial, asumiendo que le comportamiento de
la protena medida representa el comportamiento del organelo. Este supuesto debe ser
considerado debido a que la composicin mitocondrial de protenas puede variar en
respuesta a ejercicio crnico, particularmente cuando se combina con una variedad de
condiciones como la deficiencia de hierro, inhibicin de la sntesis de protenas o en
enfermedades producidas por fallas en mtDNA.
La medicin de marcadores proteicos representativos como el citocromo c o la
actividad de la citocromo-c oxidasa (COX) ha permitido a los fisilogos del ejercicio
reconocer que, en respuesta a un estmulo constante, se requieren 6 semanas de
entrenamiento de endurance para alcanzar un nuevo y estable contendido mitocondrial.
La cronologa de los cambios depende del tipo de fibra reclutada, as como tambin
depende de la frecuencia, intensidad y duracin de las sesiones de ejercicio. Las
adaptaciones mitocondriales no ocurren en fibras que no son reclutadas durante la
sesin de ejercicio, lo cual concuerda con la idea de que el estimulo para la biognesis
mitocondrial se origina en el msculo contrctil, independiente de influencias
humorales. Una aplicacin de este hecho es que los programas de entrenamiento de
endurance deben ser desarrollados de manera tal que permitan el reclutamiento de
unidades motoras rpidas fatigables que contengan fibras tipo IIb (blancas de rpida
contraccin) si es que se requiere conseguir adaptaciones de biognesis mitocondrial
en ese tipo de fibras. Es interesante sealar que el entrenamiento contra resistencia,
que si bien lleva a un reclutamiento de unidades motoras rpidas fatigables, no lleva a
una adaptacin mitocondrial. Debido a la gran intensidad y baja duracin de la mayora
de los programas de entrenamiento contra resistencias, estos representan un fuerte
estmulo para la sntesis de protenas miofibrilares que llevan a la hipertrofia muscular,
con lo cual el contendido mitocondrial dentro de una clula muscular hipertrofiada se
podra "diluir" (dilucin mitocondrial). Esto incrementa la distancia de difusin del
oxgeno y sustratos y no representa una adaptacin favorable con respecto al
rendimiento de endurance.
El tiempo aproximado de 6 semanas requerido para alcanzar un nuevo estado
estable en el contenido mitocondrial en respuesta al entrenamiento de endurance
claramente no refleja los tempranos eventos moleculares que en definitiva llevarn a
cambios morfolgicos medibles. De hecho, los cambios en el contenido de protenas
mitocondriales podran ser visibles cronolgicamente ms temprano que lo sealado
anteriormente. Las protenas mitocondriales tienen un turn over con una vida media de
1 semana luego de que un nuevo nivel de actividad contrctil muscular es logrado. Esto
quiere decir que un estmulo de ejercicio continuo es requerido para mantener el

contenido mitocondrial en un nivel elevado luego de un periodo de entrenamiento; de lo

contrario se perdera capacidad mitocondrial y rendimiento de endurance. Es
interesante notar que el contenido de fosfolpidos ocurre con una vida media an ms
corta (4 das) sugiriendo que el ensamblaje y/o degradacin del organelo podra ser
iniciado por cambios en la composicin fosfolipdica. En la ausencia de ritmos normales
de sntesis de citocromos e incorporacin a la membrana interna durante deficiencia de
hierro, la actividad contrctil impuesta parece llevar a una sntesis continuada de lpidos
de membrana, provocando un incremento en el volumen mitocondrial, con una
reduccin marcada en el contenido de protenas. Esto indica que la sntesis de
fosfolpidos y protenas no estn necesariamente actuando en paralelo durante la
biognesis mitocondrial inducida por actividad contrctil muscular. Esta informacin
tambin sugiere que la proporcin lpido/protena en la mitocondria debe cambiar en
cierta medida durante la transicin hacia un menor o mayor contenido mitocondrial.
Este cambio parece ser sutil como resultado del entrenamiento o estimulacin crnica y
en la mayora de los casos parece no afectar el ritmo de consumo de oxgeno por
unidad de volumen mitocondrial.

La biognesis mitocondrial lleva a cambios en el metabolismo celular y

rendimiento muscular durante ejercicio de endurance
El incremento marcado en el rendimiento que resulta a partir de la biognesis
mitocondrial es consecuencia de cambios en el metabolismo muscular durante el
ejercicio. Durante contracciones musculares agudas, la concentracin de ADP libre
(ADPf) se incrementa. Este incremento lleva a la reaccin de equilibrio, mediada por
creatina fosfoquinasa (CPK), hacia la formacin de ATP y creatina (Ver Figura 1). El
ADPf tambin es un sustrato y activador alostrico en la va glicoltica y controla la
respiracin mitocondrial activa (estado 3). Debido a que el entrenamiento de endurance
incrementa el contenido mitocondrial del msculo esqueltico sin mayores efectos
sobre CPK o enzimas glicolticas, sera razonable asumir que una mayor fraccin de los
requerimientos de energa para un determinado esfuerzo de trabajo podra ser ahora
derivado del metabolismo aerbico. Esto se debera a una mayor sensibilidad de la
respiracin mitocondrial frente a ADPf, ya que un menor incremento en la concentracin
del metabolito es requerida para alcanzar el mismo nivel de consumo de oxgeno (Ver
Figura 1). Esta reduccin del incremento de ADPf atenuar la glicolsis y la formacin
de cido lctico y permitir un ahorro de fosfocreatina. Adems, un ritmo menor podr
ser observado con respecto a la formacin de AMP. Esto ltimo llevara a una menor
activacin de AMPkinasa (AMPK), un factor que podra ser importante para la
reduccin, inducida por entrenamiento, en la translocacin del GLUT-4 desde el pool
citoslico hacia la membrana plasmtica. Esto, en conjunto con un incremento en la
actividad de enzimas mitocondriales involucradas en la -oxidacin, predispone al
individuo hacia una mayor oxidacin de lpidos durante el ejercicio.

El incrementado contenido mitocondrial inducido por entrenamiento de endurance no

solo lleva a una disminucin de la produccin de lactato, sino que tambin incrementa
la eliminacin de este metabolito. Recientemente, una enzima, la lactato
dehidrogenasa, fue localizada en el organelo y el transporte de lactato hacia la
mitocondria puede ocurrir va transportador monocarboxilado mitocondrial (MCT1). Un
incremento en el contenido mitocondrial como resultado de ejercicio crnico podra
incrementar la oxidacin de lactato, resultando en un ritmo de liberacin menor desde el
msculo. Adems, a mayor contenido mitocondrial por gramo de msculo, menor es el
ritmo de respiracin requerido por mitocondrion para cualquier carga de trabajo dada
(Ver Figura 1). Esto podra llevar a una reduccin en el nivel de especies de oxgeno
reactivas (ROS) potencialmente dainas, incluso frente a ritmos constantes de consumo
de oxgeno expresado por gramo de msculo. La combinacin de una disminucin en la
produccin de ROS, junto con un incremento en enzimas mitocondriales protectoras de
ROS, sustentan la idea de que un beneficio adicional de la actividad muscular contrctil
crnica, adems del incremento en la capacidad oxidativa, es una reduccin en el
potencial de las ROS para daar protenas, lpidos o ADN. Al contrario, a menor
contenido mitocondrial, como es evidente en ciertos tejidos como consecuencia del
envejecimiento, mayor es la tendencia de las ROS para inducir dao, sobre todo a nivel
de mtDNA. Esto destaca una razn potencialmente importante para mantener el
contenido mitocondrial muscular con un programa regular de actividad fsica durante el
proceso de envejecimiento.

La biognesis mitocondrial requiere la cooperacin del genoma nuclear y del

mitocondrial
Uno de los aspectos ms fascinantes de la sntesis mitocondrial es que requiere de la
cooperacin de los genomas nuclear y mitocondrial (Ver Figura 2). La mitocondria
contiene su propio mtDNA codificando varios genes. Si bien el mtDNA solo tiene 16.659
nucleotidos (v/s 3 billones de nucleotidos del DNA nuclear), aparecen 13 ARNm que
codifican protenas esenciales de la cadena respiratoria, responsables del transporte de
electrones y sntesis de ATP. Sin embargo, esto representa solo una pequea fraccin

del nmero total de protenas involucradas en la produccin y sntesis de mitocondrias.

Las dems protenas mitocondriales se codifican en el genoma nuclear. Por tanto, la
biognesis mitocondrial requiere la co-expresin del genoma nuclear y del genoma
mitocondrial para asegurar un ensamblaje y expresin apropiada del retculo
mitocondrial. Holoenzimas multisubunidades, como la COX o la NADH dehidrogenasa,
son formadas a partir de la combinacin de protenas codificadas en el genoma nuclear
y de protenas codificadas en el genoma mitocondrial (Ver Figura 2). Debido a que la
COX contiene subunidades codificadas por el genoma nuclear y por el genoma
mitocondrial, esta enzima es un modelo til para estudiar la interaccin de estos dos
genomas. En msculo humano se ha podido observar una mayor coordinacin de estos
dos genomas durante la biognesis mitocondrial en sujetos entrenados v/s sujetos no
entrenados. Se ha demostrado un incremento en el nivel de ARNm codificando para
productos de genes mitocondriales y nucleares a causa de la actividad contrctil crnica
desde 1986. Sin embargo, tambin se han podido observar interrupciones en la
coordinacin durante tratamientos con hormona tiroidea, sugiriendo que la coordinacin
de la expresin gentica (coordinacin que permite una relacin estoiquiomtrica
estricta), no es absolutamente necesaria para la formacin de un organelo funcional.

El retculo mitocondrial existe en distintas regiones celulares, donde posee

diferentes propiedades bioqumicas
Hay dos tipos de mitocondrias:
Mitocondrias subsarcolmicas: ubicadas en proximidad al sarcolema, constituyen el
10-15% del total de volumen mitocondrial celular y contribuyen con ATP principalmente
para el funcionamiento de la membrana. Se adaptan casi siempre en forma ms rpida
a las variaciones en el uso muscular (sea un incremento o disminucin de su uso).
Mitocondrias intermiofibrilares: se localizan entre las miofibrillas y contienen un ritmo
respiratorio y actividad enzimtica superior y suministran ATP a las miofibrillas

contrctiles. Tienen un ritmo superior de importacin de protenas precursoras, pero un

menor nivel del fosfolpido cardiolipin.
Las causas de las diferencias entre los subtipos de mitocondrias no estn claras,
pero podran deberse a diferencias en las demandas de ATP que se dan en cada regin
subcelular.
La presencia de poblaciones mitocondriales heterogneas puede tener un profundo
impacto en los gradientes de difusin de la clula. Se ha hipotetizado que un
incremento preferencial en la poblacin de mitocondrias subsarcolmicas en respuesta
al entrenamiento podra incrementar la habilidad de la clula para tomar y metabolizar
lpidos.

Mecanismos celulares de la biognesis mitocondrial

La contraccin muscular inicia una serie de eventos moleculares, bioqumicos y
fisiolgicos que llevan a la biognesis mitocondrial (Ver Figura 3). En respuesta a
estmulos como la actividad contrctil, varias kinasas o fosfatasas son activadas en la
clula y esto produce mltiples eventos de transduccin de seales. La magnitud de la
seal o seales, hasta cierto punto, se relaciona con la intensidad y duracin del
esfuerzo contrctil. Estas seales inducen cambios (incremento o disminucin) en la
expresin de genes nucleares codificando protenas mitocondriales. Estos genes luego
se transcriben en el ncleo y el ARNm se traduce en los ribosomas (en el citoplasma).
Las protenas destinadas para la mitocondria son escoltadas al compartimiento
mitocondrial mediante la maquinaria de importacin de protenas. Una vez adentro de la
matriz mitocondrial, el factor de transcripcin de la mitocondria es dirigido hacia el
genoma mitocondrial, donde juega un rol clave en la regulacin de la transcripcin y
replicacin del ARNm para la biognesis mitocondrial.

Eventos sealadores iniciales

Al momento de la contraccin muscular ocurren rpidos eventos, que podran formar
parte del proceso de sealizacin inicial que llevara hacia la sntesis de lpidos y
protenas. Estos cambios incluyen 1) cambios en la conformacin de protenas
sensitivas al voltaje, que responden a los potenciales de accin sarcolmicos, 2)
activacin de molculas integrin en la superficie celular (mecanotransductores), 3) flujo
de iones (como el Ca2+) en la clula muscular contrctil, 4) ciclaje de puentes cruzados
y desarrollo de tensin y 5) turnover de ATP y el consiguiente estmulo sobre el
metabolismo. Con respecto a la biognesis mitocondrial, la discusin se restringir a los
eventos para los cuales existe evidencia (sealizacin por calcio y turnover de ATP).

Calcio. Una vez liberado desde el retculo sarcoplasmtico, el calcio permite la

interaccin de la actina con la miosina en las clulas musculares. Tambin est bien
reconocido como un importante segundo mensajero en una variedad de tipos de
clulas, incluyendo al msculo. Un incremento en la concentracin de calcio podra
activar a una serie de kinasas, como por ejemplo la calcio/calmodulina kinasa II, o
protena kinasa C (PKC) y tambin podra activar a fosfatasas, como la calcioneurina,
las cuales en ltima instancia translocan su seal hacia el ncleo para alterar el ritmo
de transcripcin gentica (Ver Figura 2). Debido a las tremendas fluctuaciones en los
niveles de calcio citoslico durante la contraccin y relajacin en msculo esqueltico y
cardiaco, se ha prestado atencin al rol del calcio en mediar las adaptaciones
musculares. Recientemente se ha descubierto que una modificacin artificial de calcio
en los msculos puede alterar en forma reversible la expresin de las isoformas de
miosina hacia un fenotipo lento, acompandose este cambio con un incremento en la
actividad enzimtica mitocondrial. Subsecuente a esto, se ha demostrado que las
diferencias entre tipos de fibras, con respecto a los niveles de calcio alcanzados
durante el reclutamiento normal de unidades motoras, lleva a una activacin
diferenciada de calcioneurina. Una vez activada, la calcioneurina parece jugar un rol
importante en la determinacin fenotpica del tipo de fibras musculares, pero su
participacin en la regulacin de la actividad de genes involucrados en la biognesis
mitocondrial an no se ha investigado. Sin embargo, es claro que otros eventos que
responden al calcio tienen un impacto sobre la actividad mitocondrial y la expresin
gentica. Primero, un incremento de calcio citoslico est ligado con el organelo
mitocondrial e influye directamente sobre la respiracin mitocondrial. Esto ocurrira
mediante la activacin de dehidrogenasas, las cuales requieren del calcio para estar
completamente activas. El cambio del nivel de calcio lleva a un incremento de los
niveles de ATP, tanto en el citosol como en la mitocondria (efecto que persiste a pesar
de la posterior disminucin de los niveles de calcio). Segundo, se han reportado
cambios en algunos eventos de fosforilacin en la membrana mitocondrial interna,
mediados por calcio. Esto ocurrira dentro del rango fisiolgico de concentracin de
calcio y parece estar mediado por la fosforilacin de la sub unidad c de la F 0F1-ATPasa.
Si bien el significado de estos dos hallazgos con respecto a la biognesis mitocondrial
no est establecido, estos podran formar parte de una cascada de eventos de
sealizacin mitocondrial. Tercero, una disminucin en la concentracin de calcio dentro
del medio que rodeaba clulas en cultura result en un cambio paralelo en la actividad
enzimtica mitocondrial. Cuarto, se ha podido observar un incremento mediado por
calcio en la expresin (niveles de RNAm y actividad de transcripcin) de citocromo-c, un
importante componente de la cadena transportadora de electrones. Este incremento de
transcripcin parece estar mediado por activacin de isoformas de PKC sensibles al
calcio y en parte parece removerse el efecto al inhibir la va de la protena kinasa
activada por mitgeno (MAPkinasa). Parece ser que la calcio/calmodulina kinasa II o IV
no media en esta respuesta. Esta informacin implica a la PKC y a la MAP kinasa como
seales en la expresin del citocromo-c muscular. Finalmente, estudios con clulas en

donde se indujo experimentalmente una deplecin del mtDNA ha servido para sustentar
la conclusin de que algunos eventos musculares, mediados por calcio, son
propagados como resultado directo de un imbalance en la demanda y suministro de
energa. En la deplecin de mtDNA, la sntesis de ATP est reducida debido a un
defecto en la cadena respiratoria, que resulta de un inadecuado nivel de productos
genticos mitocondriales. Esto lleva a un incremento de la concentracin de calcio
citoslico, presumiblemente debido a que un proceso dependiente de energa, que se
encarga de la exportacin e importacin de calcio, no est funcionando
adecuadamente. Con esto se ha observado un incremento de protenas relacionadas
con la liberacin de calcio y la respuesta a este (calcioneurina, receptor-1 de rianodina,
NFATc), as como tambin se ha visto un incremento en la expresin de genes
nucleares que codifican protenas mitocondriales, como la subunidad Vb de COX. La
interpretacin de estos datos es que un imbalance entre la demanda de ATP celular y el
suministro de ATP mitocondrial, que lleva a una alteracin de la homeostasis del calcio,
puede gatillar la induccin de vas de transduccin de seales, que llevaran a la
fosforilacin o defosforilacin de factores de transcripcin o estabilizacin. Por lo que
esto podra ser un indicativo de los eventos de seales que tienen lugar durante la
actividad contrctil. Sin embargo, un incremento en la concentracin de calcio no
podra, por si solo, llevar a un aumento general de la biognesis mitocondrial. Por
ejemplo, si bien varias protenas mitocondriales (malato dehidrogenasa (MDH), la
subunidad- de la F0F1-ATPasa) se incrementan junto con citocromo-c, otras no lo
hacen. Por ejemplo, el ARNm codificando para las subunidades IV, Vb y VIc de la COX
no se modifica, y los que codifican para la glutamato dehidrogenasa y subunidades II y
III de la COX disminuyen. Por lo tanto, el calcio solo forma parte de una amplia serie de
seales positivas y negativas que median cambios en la sntesis de componentes
mitocondriales.
Turnover de ATP. Durante al menos 25 aos se ha hipotetizado que un disturbio en
el metabolismo energtico, que lleva a una deplecin de ATP, a una alteracin en el
contenido energtico de la clula o a un cambio en el potencial de fosforilacin, podra
iniciar una respuesta compensatoria, que en definitiva llevara a un incremento del
contenido mitocondrial. Sin embargo, un entrenamiento de moderada intensidad puede
llevar a la biognesis mitocondrial en la ausencia de cambios marcados en el nivel de
ATP celular. Por tanto, si bien una deplecin de ATP puede llevar a un incremento del
contenido mitocondrial, basta con el incremento del ritmo de ATP turnover (incremento
del ritmo de sntesis y degradacin de ATP) para inducir biognesis mitocondrial.
Evidencia experimental sustenta estas ideas. Primero, la deplecin de ATP y PC
(mediante la droga cido -guanidinoproprionico) lleva a un incremento en la actividad
enzimtica mitocondrial y a un incremento muscular del RNAm del citocromo c.
Segundo, como resultado de un acelerado turnover de ATP, el ejercicio incrementa el
nivel de AMP y disminuye el nivel de fosfocreatina en el msculo, resultando en la
activacin de la 2-AMPK (Ver Figura 1). Esta activacin puede ser estimulada

mediante la administracin de cierta droga. Luego de 4 semanas de tratamiento se ha

podido observar el incremento de ciertas enzimas mitocondriales (citrato sintasa,
succinato dehidrogenasa, citocromo c), pero no de todas (carnitina palmitoiltransfersa
(CPT), hidroxi-acil-CoA dehidrogenasa). Esto sugiere que la AMPK est involucrada
parcialmente en sealar la adaptacin mitocondrial frente a la actividad contrctil.
Tercero, recientes estudios sustentan la hiptesis del desacoplamiento mitocondrial. El
desacoplamiento se refiere a la disipacin de la gradiente electroqumica a travs de la
membrana mitocondrial interna, lo cual disminuye l potencial para la produccin de ATP
al entorpecer la actividad de la F 0F1-ATPasa. Subsecuente a esto, el transporte de
electrones y el consumo de oxgeno es acelerado debido a que el control que ejerce el
ADP se pierde y la utilizacin de ATP excede a la sntesis. En este respecto, la
condicin es anloga al ejercicio intenso. El desacoplamiento puede ser logrado con
drogas in vitro, o por la sobre expresin de protenas desacoplantes (UCP). Luego de 6
horas post desacoplamiento se observ una induccin del factor de transcripcin NRF-1
(factor-1 de respiracin nuclear). El NRF-1 ha sido ampliamente involucrado en la
activacin transcripcional de mltiples genes involucrados en la biognesis mitocondrial.
Subsecuente a la induccin de NRF-1 y la activacin de genes especficos, se ha
podido observar un incremento de la sintasa de cido -aminolevulnico (ALAs), la
enzima que limita ritmo-limitante en la sntesis de heme. Como parte de todos los
citocromos mitocondriales, el heme es un componente vital en la cadena respiratoria.
Por tanto, parece que un incremento en la respiracin mitocondrial, o un dficit entre la
demanda celular de ATP y el suministro mitocondrial de este, provee un estmulo para
una induccin de una variedad de genes involucrados en la biognesis del organelo
mitocondrial.
En resumen, existe evidencia que sugiere que la seal del calcio y los disturbios del
turnover de ATP (actuando interactiva y complementariamente) pueden llevar a la
biognesis mitocondrial.

Eventos de fosforilacin
El ejercicio puede activar a varias kinasas responsables de fosforilar factores de
transcripcin. Esta activacin es independiente de factores humorales. La actividad
contrctil aerbica puede activar a kinasas como: PKC, kinasa regulada por seal
extracelular (ERK)-1 y ERK2 MAP kinasas, p38kinasa, kinasa S6 ribosmica p90,
kinasa con terminal NH2 c-Jun, AMPK, kinasa factor de respuesta srica independiente
de calcio, Raf-1, kinasa 2 activada por MAP kinasa (MAPKAP kinasa-2) y kinasa 1
activada por mitogeno y estrs (MSK1). Estos resultados han sido demostrados en
modelos de actividad contrctil de humanos y roedores. La informacin indica que el
ejercicio tiene un potencial vasto para alterar las vas de sealizacin por kinasas y la

posterior fosforilacin de factores de transcripcin o, alternativamente, los factores de

estabilizacin del ARNm.

Transcripcin de genes nucleares

En general la transcripcin es regulada por protenas llamadas factores de
transcripcin, que regulan la expresin de ciertos genes. Varios de estos factores de
transcripcin han sido involucrados en la biognesis mitocondrial (NRF-1, NRF-2,
receptores- y activados por peroxisoma proliferador (PPAR- y PPAR- ), Egr-1
(zif286), c-Jun, c-Fos y Sp1. La actividad contrctil induce incrementos en los niveles de
varios de estos, consistente con el hecho de los cambios fibrilares fenotpicos inducidos
por el ejercicio. Los genes nucleares que codifican protenas mitocondriales poseen
elementos que responden a estos factores de trascripcin, que al unirse inducen la
activacin de la trascripcin. Al parecer no es absolutamente necesaria una
coordinacin del incremento de las protenas codificadas en el ncleo para el
incremento de la funcin fisiolgica mitocondrial, aunque esto induce un cambio
fenotpico del organelo mitocondrial. Esto sugiere que el ejercicio puede inducir la
activacin diferenciada de unos y otros factores de transcripcin, que si bien pueden no
actuar en forma coordinada, esto no afecta al incremento de funcionalidad mitocondrial.

Estabilidad del ARNm

Los niveles celulares de ARNm son un producto del ritmo de produccin
(transcripcin gentica) y del ritmo de degradacin (estabilidad del ARNm). La
estabilidad del ARNm est usualmente mediada por factores proteicos que permiten
estabilizar o desestabilizar el ARNm. Estos se expresan de una manera especfica en
cada tejido, llevando a una amplia variacin de la estabilidad del ARNm entre los
diversos tipos de tejido. En general, la estabilidad de la transcripcin nuclear que
codifica protenas mitocondriales parece ser menos estable en el hgado y ms estable
en el msculo esqueltico. Por ejemplo, el ARNm de ALAs posee una vida media muy
corta en el hgado (22 minutos) pero tiene una vida media de 14 horas en el msculo
esqueltico. Por tanto la estabilizacin del ARNm tendra su mayor impacto sobre la
biognesis mitocondrial heptica, ya que un modesto incremento de la estabilidad del
ARNm en este tejido tendra un gran impacto sobre el nivel de ARNm. Con respecto a
esto, la estabilizacin del ARNm ha mostrado jugar un rol importante en la expresin de
la subunidad beta de la F1-ATPasa heptica durante etapas neonatales. Los cambios en
la estabilidad del ARNm y su efecto sobre la biognesis mitocondrial durante el
desarrollo celular muscular no se conoce.

En clulas en cultura, la vida media del ARNm que transcribe para protenas
mitocondriales tiene un rango de 10 a 28 horas. Es interesante sealar que una
inhibicin de la sntesis de protenas mitocondriales llev a un incremento de la
estabilidad del ARNm nuclear, que en promedio fue del 700%. No se observ un
incremento en la estabilidad del ARNm mitocondrial. Esto sugerira que una reduccin
en la sntesis de protenas mitocondriales, lo cual interrumpe el ensamblaje de la
cadena respiratoria, podra llevar a un incremento en la actividad de las protenas que
unen ARN y protegen a estos de la degradacin, llevando a un incremento del nivel de
ARNm. Esto tambin se puede observar en clulas con problemas respiratorios
inducidos experimentalmente por deplecin de mtDNA, en donde se puede observar un
incremento del ARNm de mltiples genes nucleares con productos localizados en la
mitocondria.
Pacientes con mutaciones del mtDNA exhiben un gran incremento compensatorio en
los niveles de ARNm derivado del genoma nuclear. El factor comn en estas diversas
condiciones es, probablemente, el reducido estado energtico de la clula o
posiblemente un incremento en ROS, el cual es producido cuando la cadena
transportadora de electrones es inhibida. La informacin sugiere que una modificacin
desventajosa en la estructura de la cadena transportadora, llevando a una reducida
funcin (disminucin del suministro de ATP) con respecto a la normal, representa una
seal para el incremento de los productos codificados en el genoma nuclear. Este
incremento, usualmente medido mediante niveles de ARNm, podra ser en gran parte el
producto de un incremento de la estabilidad del ARNm. Esta informacin llevara a
sustentar la idea de que una seal derivada del metabolismo, relacionada con el
turnover de ATP est involucrada en mediar la biognesis mitocondrial. Es tambin
importante destacar que las protenas unidoras de ARN que confieren estabilidad o
inestabilidad permanecen incgnitas en la mayora de los tejidos y menos aun se
conoce sobre la estabilidad del ARNm del msculo esqueltico o el rol de la actividad
contrctil en la modificacin de este proceso.

Ejemplo de un gen nuclear codificando

protena mitocondrial: Citocromo c

una

El citocromo c ha sido usado por muchos aos como indicador representativo del
contenido mitocondrial muscular. Su expresin es influenciada por variaciones del
desuso muscular, as como tambin por la intensidad y duracin del ejercicio. El estado
tiroideo regula su concentracin. Para entender mejor la regulacin de la expresin del
citocromo c, resultante de la actividad contrctil, se emple estimulacin elctrica en
miocitos cardiacos neonatales. A los 15-180 minutos post estimulacin se observ un
incremento en el ARNm de c-Fos y c-Jun y entre 1-12 horas post estimulacin se
observ un incremento del ARNm de NRF-1. Estos cambios precedieron al incremento

de ARNm de citocromo c observado 48 horas post estimulacin. Activacin

transcripcional del citocromo c pudo ser observada a las 12 horas post estimulacin.
Esta activacin se redujo cuando se mutaron los sitios de unin para NRF-1 y para los
elementos respondedores a AMPc (CRE). Otros indicadores de transcripcin tambin
vieron disminuida su respuesta cuando se mut el sitio de unin para Sp1. Esta
informacin confirma la importancia de c-Jun, NRF-1 y Sp1 en la activacin
transcripcional del citocromo c, al menos en las clulas cardacas (Ver Figura 3). Al
utilizar clulas musculares de cultivo se pudo observar que post actividad contrctil
estimulada, se increment la transcripcin de citocromo c y que esto es acompaado de
un incremento en el nivel proteico de Sp1 y de un incremento en su unin al DNA luego
de 4 das. La expresin del citocromo c se ha visto incrementar mediante una mayor
estabilidad de su ARNm y que este sera el evento inicial involucrado en su mayor
expresin. Ciertos modelos experimentales corroboran esto ltimo, indicando que el
incremento de ARNm observado post periodo de estimulacin elctrica se debera
inicialmente (2-4 das post estimulacin) a un incremento en la estabilidad del ARNm y
que luego seguira una fase de mayor activacin transcripcional (da 5 post
estimulacin). Este incremento inicial de estabilidad se pudo observar cuando una
protena desestabilizante (no identificada) se una menos al ARNm del citocromo c,
luego de un periodo de 9-13 das de estimulacin elctrica crnica. Esto sugiere que la
actividad contrctil lleva a inducir un factor inhibitorio responsable de disminuir la
interaccin entre una protena desestabilizante y el ARNm del citocromo c, permitiendo
as su incremento. Esta informacin enfatiza la importancia de reconocer la estabilidad
del ARNm como un importante contribuidor de los cambios en la expresin gentica que
resulta de la actividad contrctil muscular.

Importe de protenas mitocondriales

No se puede negar la importancia del genoma mitocondrial con respecto a su
contribucin de protenas para la cadena respiratoria mitocondrial, pero tambin es
cierto que la mayor parte de las protenas mitocondriales son derivadas del ADN
nuclear. Por tanto, un mecanismo debe existir para llevar a estas protenas hacia
compartimientos mitocondriales especficos, luego de haber sido sintetizadas en el
citosol. La mayora de las protenas son fabricadas como "precursoras" con una seal
de secuencia, generalmente localizada en el terminal NH 2 o como una secuencia
interna (Ver Figura 4). Si bien las vas para el importe de protenas hacia la membrana
mitocondrial externa, membrana interna, matriz mitocondrial o espacio intermembrana
difieren de algn modo entre s, la va ms estudiada es aquella que lleva el importe
hacia la matriz. En este caso la seal de secuencia, con terminal nitrogenado cargado
positivamente, interacta con una chaperona molecular citoslica que desdobla la
protena precursora y la dirige hacia el complejo receptor de importe de la membrana
externa (complejo Tom). Entre las chaperonas citoslicas estn la protena de choque

de calor 70-kDa (HSP70) y el factor de estimulacin de importe mitocondrial (MSF). Las

protenas precursoras pueden ser dirigidas hacia uno de dos subcomplejos que
presenta la maquinaria Tom. Uno de estos, compuesto por los receptores Tom20 y
Tom22, es la ruta preferencial para las protenas precursoras chaperoneadas por la
HSP70. Por otro lado, las protenas precursoras que interactan con MSF son, en gran
parte, dirigidas hacia el heterodmero Tom70 - Tom37. Luego las protenas precursoras
son transferidas desde los receptores Tom hacia Tom40 y las pequeas protenas
Tom5, Tom6 y Tom7, forman un canal acuoso a travs del cual la protena precursora
puede pasar. La protena precursora es luego llevada hacia la traslocasa de la
membrana interna (Tim), otro complejo proteico que permite el movimiento de la
protena precursora hacia la matriz o hacia la membrana interna. Las protenas
involucradas en la translocacin de la protena precursora hacia la matriz son la Tim17,
Tim23 y Tim44. Las protenas Tim17 y Tim23 actan como protenas integrales de
membrana, atravesando la membrana mitocondrial interna y, de esta manera,
presentando dominios en la matriz y en el espacio intermembrana. En una manera
similar al complejo receptor Tom, Tim17 y Tim23 se unen con la protena precursora,
previniendo cualquier doblamiento de esta, que de ocurrir impedira el paso de esta a la
matriz. Adems, Tim17 y Tim23 forman un poro acuoso a travs del cual la protena
precursora puede viajar. Por otro lado, Tim44 es una protena perifrica de la membrana
asegurada en la cara interna de la membrana mitocondrial interna. La protena Tim44
sirve de anclaje para la chaperona de la matriz HSP70 (mtHSP70), la cual acta de tal
manera que jala a la protena precursora hacia la matriz (Ver Figura 4). Adems de
estas protenas, el fosfolpido cardiolipin, de la membrana mitocondrial interna, es
imperativo para la translocacin de la protena precursora, pues se encargara de
posicionar a esta de la manera correcta para la interaccin con el complejo Tim44mtHSP70. La importancia de este fosfolpido ha sido demostrada por estudios en donde
la funcin de la cardiolipina ha sido bloqueada mediante la droga Adriamycin, lo cual
tuvo como consecuencia una reduccin en el importe de protenas destinadas para la
matriz.

Otros dos elementos son requeridos para el correcto importe de protenas

precursoras hacia la matriz. Estos son 1) la presencia de un potencial a travs de la
membrana interna (
, negativo al interior) para ayudar a jalar la presecuencia
cargada positivamente hacia la matriz y 2) la disponibilidad de ATP tanto en el citosol
como en la matriz. Agentes desacoplantes que disipan
reducen el importe de
protenas, mientras que la deplecin de ATP previene el desdoblamiento (el
desdoblamiento es requerido en el citosol para que la protena precursora pueda ser
dirigida hacia la maquinaria de importe) de la protena precursora en el citosol y/o la
accin de la mtHSP70 en la matriz. Por tanto, reducciones en los niveles de ATP celular
como los producidos por la actividad contrctil severa, o defectos en la produccin de

ATP como la encontrada en clulas con mutaciones del mtADN, podran afectar el ritmo
de importe hacia la mitocondria.
Luego de su llegada a la matriz, la secuencia seal con terminal nitrogenado es
procesada por una protena mitocondrial, la peptidasa procesadoras mitocondrial
(MPP), formando una protena madura. Luego es redoblada hacia su conformacin
activa por un sistema de chaperoninas mitocondriales: protena de choque de calor 60kDa (HSP6) y chaperonina 10-kDa (Cpn10).
La mayora del trabajo realizado que define los componentes de la maquinaria de
importe mitocondrial, as como sus funciones fisiolgicas, no se ha realizado con
clulas de mamferos, aunque actualmente el trabajo con este tipo de clulas est en
progreso. Por ejemplo, la cintica de las protenas precursoras de matriz que son
importadas hacia fracciones de las mitocondrias sub sarcolmicas e intermiofibrilares, la
dependencia de esta cintica en el ATP y en la cardiolipina y su relacin con la
respiracin mitocondrial, se han podido estudiar recientemente. Las mitocondrias
intermiofibrilares importan protenas precursoras ms vidamente que las mitocondrias
sub sarcolmicas y existe una relacin directa entre la capacidad para la respiracin
mitocondrial (y por tanto para la produccin de ATP) y el ritmo de importe proteico.
Tambin se ha observado que un nmero determinado de componentes proteicos de la
maquinaria de importe son inducidos en respuesta a la actividad contrctil crnica.
Entre ests encontramos: chaperonas MSF, HSP70 citoslica, mtHSP70, HSP60,
Cpn10, as como tambin al receptor de importe Tom20. Coincidentemente con estos
incrementos se puede observar un incremento, inducido por actividad contrctil, en el
ritmo de importe hacia la matriz pero no hacia la membrana externa. Este efecto
diferenciado sobre el importe de protenas precursoras hacia diferentes
compartimientos mitocondriales provee un ejemplo de cmo la actividad contrctil
puede llevar a una alteracin en la estoiquiometra proteica mitocondrial. El ritmo
acelerado de importe proteico hacia la matriz mitocondrial puede ser reproducido en
mitocondria cardiaca obtenida de animales tratados con hormona tiroidea. Por tanto, el
efecto no solamente se observa frente a un incremento de actividad contrctil.
Para definir en forma ms simple el rol de algunos componentes determinados de la
va de importe, en lo que respecta a la determinacin de la cintica de transporte, se
han empleado clulas en cultura para medir el importe. Se midi el importe de MDH
hacia la mitocondria. Se observ un incremento de importe durante la biognesis
mitocondrial (coincidente con la diferenciacin muscular). La hormona tiroidea aceler
el ritmo de importe e increment la expresin de Tom20. Se ha observado que, paralelo
a un incremento de la expresin de Tom20, ocurre un incremento en el ritmo de importe,
lo cual es magnitud dependiente (a mayor expresin, mayor importe). Por el contrario,
una reduccin en la expresin de Tom20 llev a una reduccin en el importe de MDH.
Estos datos sugieren que el importe de protenas destinadas a la matriz es controlado,
al menos en parte, por la expresin de To20.

La va de importe de protenas representa un ejemplo del trfico intracelular, que es

importante para la biognesis del organelo, y que podra, bajo ciertas circunstancias,
determinar el incremento del contenido mitocondrial como resultado de ejercicio
crnico. Si este fuera el caso, se debera poder demostrar que es inducible y que opera
a un ritmo tal que limita la va de importe general bajo cierta condicin (ejercicio
crnico). Si el ritmo de importe fuese lo suficientemente lento como para limitar la
biognesis mitocondrial, entonces un pool de protenas precursoras en el citosol celular
podra ser medido. En la ausencia de tal pool, se asumira que las protenas
precursoras sintetizadas son rpidamente importadas hacia la mitocondria y por tanto la
cintica de la maquinaria de importacin no limitara la sntesis global del organelo. Esto
deber ser testeado en un sistema celular rigurosamente controlado (controlar
variables), en donde los destinos de las protenas precursoras (como por ejemplo su
degradacin citoslica) pueda ser bloqueado. Es posible que el importe de protenas
pueda limitar bajo ciertas condiciones de actividad contrctil crnica si es que, por
ejemplo, la transcripcin y/o translacin se aceleraran a tal nivel que provocaran una
saturacin en la abundancia de protenas precursoras para la maquinaria de importe
mitocondrial. A pesar de esto ltimo, la actividad contrctil, y el consiguiente incremento
en la actividad de importe mitocondrial, permitira incrementar la sensibilidad
mitocondrial al ingreso de protenas precursoras, frente a una determinada
concentracin citoslica de estas. Esto representa una ventaja en situaciones donde los
factores degradadores citoslicos de protenas precursoras sea elevado, pues el
incremento de importe provocara un menor tiempo de interaccin entre protenas
precursoras y factores de degradacin, lo que favorecera el incremento de masa
mitocondrial.
Progreso en el rea del importe proteico ser posible a medida que se realicen
experimentos con homlogos mamferos del modelo de la maquinaria de importe
mitocondrial. Recientemente, la primera enfermedad que se debera nicamente a una
mutacin en un componente proteico de la maquinaria de importe ha sido identificada.
Una mutacin en la protena distonia sordera (DPP) resulta en un desorden
neurodegenerativo, caracterizado por distonia muscular, sordera sensoneural y
ceguera. La DPP es una protena mitocondrial que se asemeja a la Tim8p, una protena
del espacio intermembrana involucrada en el proceso de importe. Adems, mutaciones
en el receptor de importe Tom70 llevaran a desrdenes en el mtADN, pues la Tom70 es
clave para el mantenimiento del mtADN. La reciente clonacin de Tom22, as como la
de miembros de la maquinaria Tim, ser de ayuda para dilucidar los roles funcionales
de componentes individuales de la maquinaria de importe con respecto al proceso de
importe y la relevancia del importe en las enfermedades con base mitocondrial y en la
biognesis del organelo.

Expresin del mtADN

El mtADN contribuye con protenas que son esenciales para la funcin de la cadena
respiratoria mitocondrial. Mutaciones o deterioros en el mtADN puede resultar en
productos genticos defectuosos o simplemente puede resultar en su ausencia, lo cual
repercute negativamente sobre la respiracin mitocondrial y sobre las enfermedades
mitocondriales, de las cuales un gran nmero ha podido ser documentado. Estas
enfermedades son especficas de cada tipo de tejido, localizndose en rganos con una
alta demanda energtica, como en el cerebro, corazn y msculo. Como se esperara,
el resultado de una anormalidad del mtADN en el msculo esqueltico resulta en la
intolerancia al ejercicio, fatiga y una exagerada produccin de cido lctico.
El mtADN se puede replicar en forma independiente del ADN nuclear y se encuentra
presente en nmero elevado de copias (10 3 - 104 copias) virtualmente en todas las
clulas del cuerpo. La replicacin del mtADN requiere de la presencia de la polimerasa(Pol- ), de una protena unidora de una sola tira (SSB). Esta ltima facilita la
actividad de la Pol- y de la Tfam, lo cual inicia la transcripcin, que permitir la
replicacin del ADN. Tambin se requiere de una endonucleasa procesadora de ARN
mitocondrial (RNasaMRP), la cual procesa al ARNm para que luego se de lugar a la
replicacin.
Usando el modelo de la estimulacin crnica para inducir biognesis mitocondrial, se
ha podido demostrar que las variaciones en el nivel de transcripcin mitocondrial se
correlaciona muy bien con las variaciones en el mtADN. Esta correlacin tambin se
pudo observar al comparar msculos de sujetos entrenados y no entrenados, y cuando
se estudi a sujetos que tenan disminuido su mtADN. Esta informacin sugiere que la
replicacin del mtADN en mltiples copias (o cambios en su conformacin especfica)
regula el nivel de expresin gentica mitocondrial en clulas musculares esquelticas.
Aunque estudios realizados en otros tipos de tejido, y tambin en msculo, no
concuerdan con esto. Una variedad de condiciones parecen existir en las cuales el
nmero de copias del mtADN no iguala al cambio en el nivel de ARNm o al cambio en la
capacidad oxidativa. Se podra argumentar que, debido a que la replicacin y la
transcripcin parecen estar controladas por la accin de la Tfam y debido a que la
replicacin se sustenta en la formacin de ARN, la transcripcin podra ser el proceso
ms importante de los dos. Queda por resolverse si es que el control va nmero de
copias de mtADN es especfico de la biognesis mitocondrial inducida por la actividad
contrctil o si es que las diferencias de resultados podran ser explicadas por
variaciones en los acercamientos experimentales o por los instrumentos de medicin
empleados. De cualquier manera, un incremento del nmero de copias del mtADN
observado como consecuencia de actividad contrctil crnica se acompaa por un
aumento del SSB, del RNasaMRP y del Tfam, pero no se observa un incremento en
Pol- . Esta informacin sugiere que Pol- es suficientemente abundante y no limitara
la transcripcin del mtADN.

Tfam ha sido extensamente estudiada como el factor de transcripcin ms importante

en los mamferos. El nivel de Tfam se correlaciona bien con la abundancia de mtADN y
con su prdida, tanto en pacientes con miopatias mitocondriales o producidas por
interrupcin experimenta del gen Yfam, lo cual resulta en una deplecin parcial o total
del mtADN. Animales homocigotos con su Tfam noqueada (knock-out) mueren antes del
da 10 del periodo embrionario y se caracterizan por presentar mitocondrias anormales
y una funcin empeorada en fosforilacin oxidativa. Al parecer el Tfam es clave para la
produccin de mtADN y mtARN. Animales con anormalidades en Tfam presentan
caractersticas como las encontradas en el sndrome Kerns-Sayre (enfermedad
mitocondrial), donde es evidente una cardiomiopata dilatada, una funcin cardaca
anormal y una morfologa mitocondrial anormal. Esta informacin sugiere que Tfam es
importante para la funcin cardaca normal, probablemente porque le corazn posee el
mayor monto de mitocondrias en comparacin a cualquier otro tejido. Adems, la
informacin demuestra la importancia del desarrollo de modelos experimentales con
animales para incrementar nuestro conocimiento sobre la funcin especfica de ciertas
protenas y su rol en las enfermedades con base mitocondrial.
En el msculo esqueltico, la expresin y actividad de Tfam es modificada por la
actividad contrctil. Durante estimulacin crnica (3h/da, durante 1-7 das) se observ
un incremento del ARNm de Tfam al cuarto da. Al quinto da se observ un incremento
en el importe hacia la mitocondria. Al sptimo da se observ un incremento en el
contenido proteico del Tfam mitocondrial y una mayor unin con el ADN. Este ltimo
hallazgo se dio en paralelo con un incremento en el ARNm del COX III y de la actividad
enzimtica COX. Esta informacin sugiere que la expresin de Tfam se correlaciona
bien con las alteraciones de la activacin transcripcional mitocondrial y con la capacidad
oxidativa. Por tanto, los eventos celulares que limitan la expresin de Tfam podran
tambin restringir la biognesis mitocondrial. Debido a que el incremento de ARNm de
Tfam fue el primer evento que se pudo notar, es probable que la transcripcin del gen
Tfam juegue un rol importante. Sin embargo, debido al lento ritmo de importe de Tfam
hacia la mitocondria, comparado con el ritmo de importe de otras protenas hacia la
matriz, tambin parece razonable pensar que un incremento en el ritmo de importe,
coincidente con una mayor expresin de Tfam inducida por actividad contrctil,
complemente la facilitacin del incremento del ritmo global de replicacin y transcripcin
del mtADN.
Un segundo factor de transcripcin es ahora reconocido como un importante agente
regulador del mtADN. Adems de Tfam, una protena 43-KDa, conocida como p43, se
ha visto recientemente que interacta con hormona tiroidea T 3, as como tambin con el
mtADN. Este es un hallazgo importante, pues ayuda a explicar la accin directa de la
T3 sobre la transcripcin mitocondrial en experimentos in vivo en donde se utiliz
mitocondrias aisladas. La p43 ha demostrado inducir diferenciacin muscular al
incrementar la actividad enzimtica mitocondrial y, como resultado, la expresin de la
miogenina (factor regulador miognico). Si la biognesis mitocondrial, en respuesta a

actividad contrctil, en verdad fuese independiente de influencias hormonales (T 3),

entonces p43 no debera jugar un rol importante en la adaptacin observada y, por
tanto, el nico factor de transcripcin de importancia, conocido hasta ahora, sera Tfam.
Sera interesante poder determinar si p43 posee algn tipo de influencia independiente
de ligando (independiente de T3) o si ejerce un efecto aditivo con Tfam en la
determinacin de la expresin de mtADN en clulas musculares.

Sntesis de Protenas Mitocondriales

Adems de poseer un genoma separado, la mitocondria tambin posee su propia
maquinaria de traduccin. Desafortunadamente, poco se conoce sobre la regulacin
fisiolgica de la sntesis de protenas mitocondriales en msculo esqueltico y cardaco,
excepto por algunos pocos estudios efectuados. En mediciones in vitro, se observ que
las mitocondrias intermiofibrilares presentan un ritmo de sntesis de protenas
mitocondriales superior al de las mitocondrias subsarcolmicas, lo cual concuerda con
el hecho de que las primeras poseen una mayor capacidad oxidativa. La actividad
contrctil aguda (5 minutos de estimulacin, a 10 Hz) redujo el ritmo de sntesis proteica
en las mitocondrias subsarcolmicas, pero a los 55 minutos post estimulacin (periodo
de recuperacin) el ritmo de sntesis volvi a nivel reposo. La degradacin proteica no
se vio afectada por la estimulacin, pero se redujo post estimulacin (periodo de
recuperacin). Esta informacin sugiere que el ritmo de la sntesis y degradacin de
protenas intramitocondriales puede ser influido por actividad contrctil de una manera
tiempo-dependiente. Para lograr una respuesta adaptativa muscular frente a
estimulacin contrctil crnica se requiere de un sistema de traduccin mitocondrial
intacto. Evidencia de esto nace en experimentos con animales, en donde se emple
cloramfenicol, un inhibir de la sntesis de protenas mitocondriales, durante estimulacin
contrctil crnica. Se observ una reducida respuesta adaptativa en la actividad COX,
pero la citrato sintasa no se vio afectada. Seguramente esto se debe a que la COX
presenta tres subunidades esenciales derivadas del mtADN, que requiere de traduccin
en el organelo, mientras que la citrato sintasa es completamente derivada desde le
genoma nuclear. Dado este requerimiento de sntesis proteica para una adaptacin
muscular normal al ejercicio, pareciera ser obvio que la sntesis proteica responde al
ejercicio crnico. Sorprendentemente, se pudo observar una reduccin en la sntesis
proteica (da 14 post estimulacin, 3h/da) de mitocondrias intermiofibrilares en msculo
tibial anterior de rata, mientras que la degradacin proteica no se vio afectada. Esta
informacin sustenta la posibilidad de que cualquier cambio en el turnover de protenas
que ocurriese como resultado del ejercicio, sucedera en los primeros momentos desde
el inicio del proceso de adaptacin, despus de lo cual este proceso de sntesis proteica
parecera no limitar la biognesis mitocondrial en respuesta a la actividad contrctil.

Recuperacin
Se ha sospechado desde hace tiempo que la respuesta adaptativa, frente a la
actividad contrctil de tipo crnica, se manifiesta predominantemente durante la fase de
recuperacin, post periodo de ejercicio. Con respecto a la biognesis mitocondrial, se
ha observado que ALAs, la enzima que limita el rimo del metabolismo hem, se
incrementa varias horas luego de terminar la sesin de ejercicio. Esta es una
observacin importante, ya que esta enzima est involucrada en la determinacin del
contenido funcional de los citocromos mitocondriales encontrados en la cadena
respiratoria. Resultados similares se encontraron en clulas cardacas post ejercicio.
Luego de estimulacin aguda (1 sesin de 3 horas) o crnica (7 das, 3 horas/da), se
midieron las actividades de ALAs y COX, junto con los niveles de ARNm de ALAs,
durante 18-48 horas de recuperacin post ejercicio. Se observ que ALAs se
increment en el periodo de recuperacin, pero solo si la estimulacin era de tipo
crnica. El peak de incremento en actividad ALAs se observ 18 horas despus del
inicio del periodo de recuperacin y este incremento de actividad fue acompaado por
un incremento del nivel de ARNm. La actividad COX tambin se increment
progresivamente durante el periodo de recuperacin en fibras musculares blancas con
baja capacidad de oxidacin. Varios estudios han demostrado incrementos de la
respuesta adaptativa frente a varias formas de actividad contrctil, incrementos que son
evidentes durante la fase de recuperacin. Entre los incrementos se encuentra un
incremento de la sntesis y degradacin de protenas musculares, incremento de la
actividad de la kinasa S6 70-kDa, cambios de AMPc (cambio dependiente del tipo de
fibra), incremento de ARNm GLUT-4, glicogenia, c-Fos, c-Jun, NRF-1, HSP70
citoslica, B-cristallin, mioglobina y citrato sintasa, entre otras. Un incremento de la
transcripcin gentica parece ir de la mano con los incrementos recin sealados en
enzimas metablicas o protenas. La informacin sugiere que las adaptaciones finales,
frente a varios tipos de actividad contrctil, son el resultado de una acumulacin de
respuestas adaptativas que se originan con la primera sesin de ejercicio, pero que no
se manifiestan hasta dentro de cierto tiempo, durante el periodo de recuperacin post
ejercicio, cuando el msculo permanece en reposo. Adems, sugiere que el periodo de
recuperacin es un componente importante de la fase adaptativa de los genes,
necesaria para la proliferacin mitocondrial en el msculo.

Conclusiones y futuras direcciones

La actividad contrctil inicia una serie de eventos fisiolgicos y bioqumicos que
llevan a la biognesis mitocondrial. En la figura 5 se pueden observar estos eventos. La
figura es una ilustracin que pretende destacar, brevemente, el trabajo realizado
recientemente, describiendo, en forma aproximada, el curso temporal de los cambios

involucrados en la biognesis mitocondrial. Adems, la figura pretende servir como

modelo de trabajo para ir expandindose a medida que nuestro conocimiento gana en
detalle. Ntese que las alteraciones del fenotipo muscular resultantes llevan a una
adaptacin metablica, que reduce la seal estresora impuesta por una ronda de
ejercicio agudo de la misma intensidad y duracin, actuando en forma de
retroalimentacin negativa. Por lo tanto, la seal que antes induca biognesis
mitocondrial, ahora presumiblemente tenga un efecto (magnitud) menor, luego de que la
adaptacin a tenido lugar.

El inters en la funcin mitocondrial, biognesis y expresin gentica en el msculo y

en clulas no musculares, nunca haba sido tan elevado. Esto se debe a que la
mitocondria provee un modelo de adaptacin excelente para el estudio de la biognesis
de organelos en clulas de mamfero. Tambin se debera a que actualmente se sabe
que la mitocondria esta implicada en una amplia variedad de enfermedades. Algunas
avenidas de futura investigacin, que sern probablemente bien recompensadas,
incluyen las siguientes:
1. Entender la relacin entre capacidad para fosforilacin oxidativa, la
formacin de ROS, sus efectos sobre las mutaciones de mtADN y sus
consecuencias. Este tipo de trabajo tendra implicancias para el
mejoramiento del entendimiento sobre el decaimiento de la capacidad

oxidativa en msculos envejecidos. Tambin permitira profundizar en los

efectos del ejercicio fsico regular y su potencial para mantener la
capacidad oxidativa muscular por sobre el nivel umbral que tiene cada
msculo en forma especfica, umbral bajo el cual se observan daos en
mtADN y la funcin del rgano disminuye (miopatia mitocondrial).
2. Evaluar el rol de la actividad contrctil en la modificacin del proceso de
apoptosis. Ahora se ha establecido que la mitocondria posee un rol
importante en gatillar algunas formas de muerte celular programada
(apoptosis) en respuesta al estrs. Un cierto numero de protenas pro
apoptoticas (Bax, citocromo c, factor de induccin de apoptosis) y anti
apoptoticas (Bcl-2) reciden en el organelo. Vale la pena investigar la
funcin y expresin de estas protenas en clulas musculares. Uno de los
retos mas fascinantes para aquellos interesados en la biognesis
mitocondrial ser determinar los roles positivos y negativos que juega el
ejercicio fsico regular en la modificacin de la opoptosis.
3. Estudiar la interaccin de importantes participantes (Tfam, PGC-1, AMPK,
NRF-1) involucrados en la biognesis mitocondrial, durante un transcurso
de tiempo cuidadosamente planeado, en donde se aplique actividad
contrctil, seguido por un periodo de recuperacin, poniendo especial
atencin en las etapas iniciales de la biognesis del organelo. Adems, se
requiere expandir de nuestro conocimiento con respecto a los efectos de
la actividad contrctil sobre la transcripcin, la estabilidad del ARNm o la
modificacin de las protenas post traduccin, aparte del citocromo c.

Visitar de la direccin electrnica:

(http://www.efdeportes.com/efd112/biogenesis-mitocondrial-en-musculo-esqueletico.htm
24/02/2016. 7:30 pm)

Por: Rubn Reverol