MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS DEFINIDOS
Koser Citrato Medio
Es un medio para detectar aquellos microorganismos que utilizan el citrato como nica
fuente de carbono y las sales de amonio como nica fuente de nitrgeno.
Frmula (en gramos por litro)
Fosfato monopotsico
Sulfato de magnesio
Fosfato de sodio y amonio
Citrato de sodio
pH final: 6.7 0.2

Instrucciones
1.0
0.2
1.5
3.0

Suspender 5,7 g del polvo por litro de agua

destilada. Disolver las sales y distribuir en tubos en
porciones de 5 ml. Esterilizar en autoclave a 118121C durante 15 minutos.

Resultados
Microorganismos
Enterobacter aerogenes
Enterobacter cloacae
E. coli ATCC 25922

Crecimiento
Bueno
Bueno
Inhibido

Caractersticas del medio

Medio preparado: incoloro transparente sin precipitaciones.
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/kosercitratomedio.htm
TSI Agar
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes
adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos
de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la
produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones
Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de
color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del
indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de
sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro
proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.
Frmula (en gramos por litro)
Extracto de carne
Pluripeptona
Cloruro de sodio
Lactosa
Sacarosa
Glucosa
Sulfato de hierro y amonio
Tiosulfato de sodio
Rojo de fenol
Agar
pH final: 7.3 0.2

Resultados

Instrucciones
3.0
20.0
5.0
10.0
10.0
1.0
0.2
0.2
0.025
13.0

Suspender 62,5 g del polvo por litro de

agua destilada. Mezclar bien y calentar
con agitacin frecuente, hervir 1 o 2
minutos hasta disolucin total. Llenar
hasta la tercera parte de los tubos de
ensayo. Esterilizar a 121C por 15
minutos. Enfriar en pico de flauta
profundo.

1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente

fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta
glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido
sulfhdrico.
Microorganismo

Pico/Fondo

Produccin de gas

E. coli ATCC 25922

K. pneumoniae ATCC
700603
P. mirabilis ATCC 43071
S. typhimurium ATCC 14028
S. enteritidis ATCC 13076
S. flexneri ATCC 12022
P. aeruginosa ATCC 27853

A/A
A/A

+
+

Produccin decido
sulfhdrico
-

K/A
K/A
K/A
K/A
K/K

+
+
-

+
+
+
-

A: cido
K: alcalino
Caractersticas del medio
Medio preparado: rojo
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/tsiagar.htm
MEDIOS COMPLEJOS
Tripteina Soya Agar
La triptena y la peptona de soya aportan nutrientes ricos en pptidos, aminocidos
libres, bases pricas y pirimdicas, minerales y vitaminas. La peptona de soya aporta
tambin carbohidratos que estimulan el crecimiento de muchos microorganismos. El
cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
Adicionado con 5-10 % sangre , se logra un medio enriquecido y adecuado para
observar reacciones de hemlisis.
Cuando se prepara como agar chocolate, es til para el cultivo de Neisseria spp.,
Haemophilus influenzae y microorganismos exigentes similares. Incubado en forma
anaerobia, permite el crecimiento de Clostridium spp. y anaerobios NO esporulados. Es
un medio adecuado para cultivar y mantener cepas de Aeromonas, y aumentando el
porcentaje de cloruro de sodio, para mantener cepas de algunos Vibrios (excepto V.
cholerae).
Frmula (en gramos por litro)
Triptena
Peptona de soya
Cloruro de sodio
Agar
pH final: 7.3 0.2

15.0
5.0
5.0
15.0

Instrucciones
Disolver 40 g de polvo deshidratado por litro de agua destilada. Mezclar y dejar reposar

5 minutos. Calentar suavemente agitando y hervir durante 1 o 2 minutos hasta su

disolucin. Distribuir y esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 118-121C.
Preparacin de la placa de Agar Sangre: aadir en forma asptica un 5% de sangre
estril desfibrinada a temperatura ambiente, el agar debe estar a 45C.
Preparacin de Agar Chocolate: despus de aadir la sangre y agitando frecuentemente
se mantiene el medio de cultivo a 80C por 10 minutos hasta que adquiera un color
pardo chocolatado.
Resultados
Microorganismos
E. coli ATCC 25922
S. aureus ATCC 25923
S. pyogenes ATCC 19615
S. pneumoniae ATCC 6305
S. pneumoniae ATCC 49619

Crecimiento
Abundante
Abundante
Abundante
Abundante
Abundante

Hemlisis
-Beta
Beta
Alfa
Alfa

Caractersticas del medio

Medio preparado: mbar.
Medio preparado con 5% de sangre: rojo cereza.
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/tripteinasoyagar.htm
Papa Glucosado Agar
Tanto la glucosa presente como la infusin de papa favorecen el desarrollo exuberante
de hongos y levaduras, mientras que el desarrollo bacteriano es inhibido con el agregado
de cido tartrico luego de la esterilizacin hasta alcanzar un pH: 3.5 0.2. Una vez
agregado el cido no se puede recalentar ya que el agar se hidroliza.
Frmula (en gramos por litro)
Infusin de papa
4.0
Glucosa
20.0

Agar

15.0

Instrucciones
Disolver 39 g de polvo en un litro de agua
destilada. Dejar reposar 5 minutos.
Calentar hasta ebullicin con agitacin
continua. Esterilizar a 121C durante 15
minutos. Si se desea ajustar el pH a 3.5
agregar aproximadamente 14 ml de una
solucin estril de cido tartrico al 10 %,
cuando el agar se encuentra entre 45-50
C.

pH final: 5.6 0.2

Resultados
Microorganismos
Aspergillus niger
Candida albicans
Sacharomyces cerevisiae

Crecimiento
Bueno
Bueno
Bueno

Caractersticas del medio

Medio preparado: mbar claro ligeramente opalescente.
Bibliografia
MEDIOS SELECTIVOS:
Mac Conkey Agar.
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares

y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la
flora Gram positiva.
Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce
un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la
precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.
Frmula (en gramos por litro)
Peptona
Pluripeptona
Lactosa
Mezcla de sales biliares
Cloruro de sodio
Agar
Rojo neutro
Cristal violeta
pH final: 7.1 0.2

Instrucciones
17.0
3.0
10.0
1.5
5.0
13.5
0.03
0.001

Suspender 50 g del polvo por litro de agua

destilada. Reposar 5 minutos y mezclar
hasta uniformar. Calentar suavemente y
hervir 1 a 2 minutos hasta disolver.
Esterilizar en autoclave a 121C durante
15 minutos.

Resultados
Microorganismos
Escherichia coli ATCC 25922
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Shigella flexneri ATCC 12022
Proteus mirabilis ATCC 43071
Enterococcus faecalis ATCC 29212

Colonias
Rojas con halo turbio
Rosadas mucosas
Incoloras, transparentes
Incoloras, transparentes
Incoloras, transparentes
Diminutas, incoloras, opacas

Caractersticas del medio

Medio preparado: rojo prpura
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/maconkeyagar.htm
Desoxicolato Citrato Agar (D.C.A.)
Agar selectivo para el aislamiento de Salmonella spp. y Shigella spp. en medicamentos,
alimentos, ambiente y muestras clnicas, asi como de otras enterobacterias y coliformes.
Composicin(Frmula por litro)
Extracto de carne 10,0 g
Peptona de carne 5,0 g
Lactosa 10,0 g
Citrato Sdico 20,0 g
Tiosulfato sdico 5,0 g
Citrato Frrico 1,0 g
Desoxicolato Sdico 5,0 g
Rojo neutro 0,02 g
Agar-Agar 13,5 g
pH final: 7,0 0,2
Preparacin
Disolver 69,5 gramos en 1 litro de agua bidestilada. Agitar calentando hasta ebullicin.
No Autoclavar! No sobrecalentar! El color final del medio es rosa plido, traslcido,
con un fino precipitado de desoxicolato. No refundir!
Resultados
Colonias rosas-rojas, con o sin centro negro: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella.
Colonias incoloras, con o sin centro negro: Salmonella, Proteus.
Colonias incoloras sin centro negro: Shigella, Pseudomonas. Identificar las colonias
mediante galeras adecuadas (KBH260).

http://www.medioscultivo.com/desoxicolato-citrato-agar-d-c/
MEDIOS DIFERENCIALES:
C.L.D.E. Medio.
En el medio de cultivo, la peptona, el extracto de carne y la triptena aportan los
nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. La lactosa es el hidrato de
carbono fermentable, la L-cistina es el agente reductor, el azul de bromotimol es el
indicador de pH y el agar es el agente solidificante.
La diferenciacin de los microorganismos se basa en la utilizacin que stos puedan
hacer de la lactosa; las cepas que la fermentan, acidifican el medio que vira del verde al
amarillo, mientras que los que no lo hacen, dan colonias incoloras que viran el medio al
color azul. La restriccin de electrolitos en el medio impide el desarrollo invasor de
especies de Proteus, por tal motivo, es un medio ideal para el recuento de colonias.
Frmula (en gramos por litro)
Peptona
Extracto de carne
L-cistina
Triptena
Azul de bromotimol
Lactosa
Agar
pH final: 7.3 0.2

4.0
3.0
0.128
4.0
0.02
10.0
15.0

Instrucciones
Suspender 36,2 g del polvo por litro de
agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y
calentar suavemente agitando por
rotacin. Hervir 1 o 2 minutos hasta su
disolucin total. Distribuir y esterilizar en
autoclave durante 15 minutos a 118121C.

Resultados
Microorganismos
Escherichia coli ATCC 25922
Escherichia coli ATCC 35218
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
P. aeruginosa ATCC 27853
P. mirabilis ATCC 43071
S. aureus ATCC 25923
E. faecalis ATCC 29212

Color de las colonias

Amarillas
Amarillas
Amarillas
Azul-verdoso
Azul-verdoso
Amarillas
Amarillas

Caractersticas del medio

Medio preparado: verde.
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/cldemedio.htm
Salmonella Shigella Agar.
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. Es diferencial debido a la fermentacin
de la lactosa, y a la formacin de cido sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican
el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obtenindose colonias rosadas o
rojas sobre un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y otros microorganismos no
fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias
transparentes. La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro
negro debido a la formacin de sulfuro de hierro.
Frmula (en gramos por litro)
Pluripeptona
Extracto de carne

5.0
5.0

Instrucciones
Suspender 60 g del polvo por litro de agua
destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta

Lactosa

10.0

Mezcla de sales biliares

8.5

Citrato de sodio

8.5

Tiosulfato de sodio

8.5

Citrato frrico

1.0

Agar

13.5

Verde brillante

0.00033

Rojo neutro

0.025

homogeneizar. Calentar a ebullicin durante 2

o 3 minutos. NO ESTERILIZAR EN
AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y distribuir
unos 20 ml por placa. Secar la superficie del
medio unos minutos en la estufa.

pH final: 7.0 0.2

Resultados
Microorganismos
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Shigella flexneri
Shigella sonnei
Proteus mirabilis ATCC 43071
Escherichia coli ATCC 25922
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
Enterococcus faecalis ATCC 29212

Colonias
Transparentes, centro negro
Incoloras
Incoloras
Transparentes, centro negro
Rosadas a rojas
Rosadas cremosas y mucosas
Incoloras, de muy escaso crecimiento

Caractersticas del medio

Medio preparado: rojo naranja.
http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/salmoshigagar.htm
(Allaert Vandevenne & Escola Ribes, 2002)
Allaert Vandevenne, C. & Escola Ribes, M. (2002). Metodos de analisis microbiologicos de
alimentos (1st ed., pp. 155-168). Madrid: Ediciones Diaz de Santos.