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Las clulas Grampositivas debido a sus gruesa paredes e peptidoglicano y la poca cantidad
de lpidos no son permeables al alcohol acetona (decolorante) puesto que este deshidrata la
pared celular y cierra los poros, alterando y afectando el pequeo espacio entre las
molculas. El complejo cristal violeta-yodo queda atrapado dentro de la pared celular
tiendo a las bacterias Grampositivas de color azul (7). Las bacterias Gramnegativas tienen
espacios en la estructura de su pared celular y el alcohol acetona es un solvente de lpidos
que acta sobre la membrana exterior de la pared celular afectando la membrana
citoplasmtica donde se unen las molculas que componen el peptidoglicano. De igual
manera, la delgada capa de peptidoglicano no es capaz de retener el complejo cristal
violeta-yodo lo cual obliga a las clulas Gram negativas a decolorarse, necesitando
entonces la adicin de la safranina o la fuscina como colorante de contraste para colorearse
de rosado (8).
TINCIN DE GRAM COMO HERRAMIENTA DIAGNOSTICA
La tincin de Gram es de gran utilidad para realizar el examen directo de muestras clnicas,
porque permite determinar la calidad de ellas, la respuesta inflamatoria, la naturaleza y
cantidad de microorganismos presentes y el germen predominante en una infeccin mixta o
con muestras contaminadas con biota normal. Adicionalmente, se puede correlacionar el
resultado del examen directo con el resultado de los cultivos y de esta manera, disponer de
un adecuado control de calidad. Este examen tiene valor diagnostico y es de informe
inmediato en muestras de liquido cefalorraqudeo y lquidos corporales, esputo, sangre,
orina, abscesos, y secreciones (uretral, cervical y vaginal). No tiene valor diagnostico en
muestras farngeas y nasofarngeas ya que la biota observada hace parte de la flora normal
de estos sitios anatmicos. Es de uso limitado en muestras de materia fecal (el diagnostico
presuntivo de infecciones por Campylobacter sp.)(9).
El diagnstico rpido de microorganismos presentes en fluidos corporales estriles, como el
lquido cefalorraqudeo, lquido pleural, peritoneal o articular, es de gran importancia para
el diagnstico de infecciones que, en estas localizaciones, son generalmente graves y
secuelantes. La tincin de Gram constituye una herramienta de gran utilidad en el
diagnstico etiolgico; sin embargo, la sensibilidad de esta tcnica es variable segn el tipo
de muestra y la carga bacteriana presente en ella. La concentracin de la muestra, como un
paso previo a su tincin mejora el rendimiento, por lo que es recomendable su uso de rutina
(10)
.
Chapin y colaboradores han demostrado que la centrifugacin (CT) y la citocentrifugacin
(CC) de los fluidos corporales estriles permite reducir la cantidad de muestra necesaria y
obtener preparaciones uniformemente concentradas en un rea de 6 mm de dimetro,
aumentando el rendimiento de la tcnica y la sensibilidad en la observacin bacteriana y
celular (11). Daz y col. demostraron que la sensibilidad para centrifugacin v
VAGINOSIS BACTERIANA
La vaginosis bacteriana (VB) es un desorden del ecosistema vaginal caracterizado por un
cambio en la flora vaginal (Lactobacilos) por microorganismos anaerobios que incluyen G.
vaginalis, Mobiluncus sp, Prevotella, Bacteroides sp, Peptostreptococcus sp, entre otros,
siendo la G. vaginalis el morfotipo ms comnmente implicado en este sndrome (13). En la
vaginosis bacteriana, el cultivo tiene una baja sensibilidad y especificidad, ya que esta
patologa no se encuentra en el 50% de las mujeres de las cuales se aisl G. vaginalis (14,1,15).
Adems, algunas bacterias como el Mobiluncus son de lento crecimiento y tardan hasta 10
das de incubacin a 35 C para obtener colonias puntiformes de menos de 1 mm de
dimetro (16).
Varios estudios han demostrado que la tincin de Gram tiene una muy buena correlacin
con el diagnostico de vaginosis bacteriana (17,18, 19). Nugent y col, idearon un mtodo de
cuantificacin para mejorar la correlacin del Gram con la vaginosis bacteriana. Cada
morfotipo bacteriano encontrado en la coloracin (Bacilos grampositivos: Lactobacillus sp.,
cocobacilos Gram variables: G. vaginalis + Bacteroides sp. y bacilos curvos
Gramnegativos: Mobiluncus) es cuantificado de 1+ a 4+. Una vez establecida la cantidad
de bacterias se les asigna un puntaje: Si la suma de los puntajes es 7 o ms, es compatible
con vaginosis bacteriana; 4 a 6 es denominado intermedio y 0 a 3, normal (20). Una notable
ventaja del Gram vaginal, es que ha demostrando muy buena correlacin con el diagnstico
clnico, siendo, adems, rpido y de bajo costo. Adems, permite observar alteraciones de la
flora vaginal sin que existan evidencias clnicas de vaginosis bacteriana, razn por la cual
ha sido considerado por diversos autores como una tcnica objetiva, con un nivel elevado
de reproducibilidad en las distintas poblaciones estudiadas (21, 22).
A pesar de que el sistema de puntuacin de Nugent tiene buena validez, excelente
capacidad diagnstica y altamente reproducible para el diagnstico de vaginosis bacteriana
(23, 24, 25)
algunos autores afirman que a pesar que los parmetros de Nugent tienen muy
buena sensibilidad y especificidad, deben ir mancomunados a los criterios de Amsel y col.
establecidos como estndar para indicar la presencia de la enfermedad (26); esto permite
mejorar el diagnostico clnico de este sndrome (27, 28).
ENFERMEDADES DE TRANSMISIN SEXUAL
En el diagnstico precoz de la gonorrea y su tratamiento, la evaluacin microscpica
representa un elemento importante, ya que es rpido, econmico y sencillo. La sensibilidad
de la tincin de Gram para detectar N. gonorrrhoeae es prxima al 100% en los casos
sintomticos de uretritis, aunque solo del 50% al 70% en pacientes asintomticos. La
sensibilidad en ambos grupos se acerca al 100%, es decir, que los resultados falsos
positivos son excepcionales (29). El diagnstico presuntivo de infeccin por Neisseria
gonorrhoeae en hombres sintomticos, se realiza a partir de frotis de exudados uretrales
coloreados por Gram, al observarse los tpicos diplococos Gram negativos dentro de
leucocitos polimorfonucleares, representando una herramienta clave para el diagnstico de
la uretritis gonoccica en hombres, dada su alta sensibilidad y especificidad (30). Empero, la
interpretacin de frotis coloreados por Gram de muestras endocervicales y rectales se
considera difcil, debido a la presencia de bacterias que interfieren con la observacin del
gonococo o semejan diplococos, como sucede con los cocobacilos Gram negativos
Moraxela osloensis, Moraxela phenylpyruvica, Kingella denitrificans y Acinetobacter spp.
Por lo tanto, no es recomendable, por la baja sensibilidad y especificidad (31).
INFECCIONES DEL TRACTO URINARIO
Las infecciones del tracto urinario (ITU) se hallan entre las enfermedades infecciosas ms
frecuentes. Denotan una amplia variedad de entidades patolgicas, en las cuales el comn
denominador es la presencia de un nmero significativamente grande de microorganismos
en cualquier porcin del aparato urinario. Se han diseado numerosos mtodos para
determinar bacteriuria significativa adems del urocultivo: microscpicos, qumicos,
bioqumicos, enzimticos, etc., pero un nmero mnimo logra ofrecer un costo adecuado y
sencillez en la realizacin del anlisis (32).
La coloracin de Gram se ha empleado como prueba de tamizacin en el diagnstico de la
infeccin del tracto urinario (ITU). La tcnica utilizada en la mayora de los laboratorios y