Suero Control Positivo:

Suero de conejo el cual ha sido inmunizado contra todos los

antgenos febriles en una suspensin.
MATERIALES REQUERIDOS, NO INCLUIDOS

ANTGENOS FEBRILES
AGENTE DE DIAGNSTICO

Pipetas serolgicas

Placa de Reaccin

Agitador

RECOLECCIN Y PREPARACIN DE LA MUESTRA

Obtenga sangre venosa y separe el suero evitando la
hemlisis.
MTODO DE PRUEBA RPIDA EN PLACA

SIGNIFICADO CLNICO
La infeccin causada por microorganis-mos de diversas especies produce entre otros sntomas una marcada elevacin
de la temperatura, tal es el caso de la fiebre tifoidea causada por Salmonella typhi, S. enteritis , as como las
paratifoideas causadas por S. paratyphi A y B, y el tifo causado por el genero Rickettsias . La infeccin por estos
microorganismos induce a una respuesta inmune de tipo humoral con la produccin de anticuerpos que pueden ser detectados con el antgeno especfico.
Debido a la dificultad existente para el aislamiento de las
Rickettsia sp, el antgeno empleado para la determinacin
de anticuerpos es el de Proteus OX-19, el cual presenta una
reaccin cruzada con bacterias del genero Rickettsia.
La reaccin de Huddleson es un mtodo serolgico que
detecta anticuerpos contra B. abortus, B. melitensis y B. Suis,
agentes causales de la brucelosis; tambin conocida como
fiebre de malta o fiebre ondulante por el cuadro febril caracterstico que se presenta.
FUNDAMENTO
La prueba se basa en una reaccin inmunolgica entre los
anticuerpos sricos y el antgeno correspondiente produciendo una reaccin de aglutinacin macroscpica.
CONTENIDO

Tfico O - Salmonella typhi; Antgeno somtico,

pH: 6.5 1.0

Tfico H - Salmonella typhi; Antgeno flagelar, pH:

6.5 1.0

Paratfico A - pH: 6.5

1.0
Paratfico B - pH: 6.5 1.0
Proteus OX-19 - pH: 6.5 1.0
Brucella abortus - pH: 6.5 1.0

Suero control negativo:

Suero de conejo el cual no ha sido inmunizado contra ningn antgeno, por lo que no muestra ninguna aglutinacin
con los antgenos en suspensin.

Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el

antgeno que se este usando.
NOTA: El reactivo as como los sueros, deben alcanzar la
temperatura ambiente para comenzar la prueba.
1. Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes
cantidades del suero a analizar: 0.08 mL, 0.04 mL, 0.02
mL, 0.01 mL y 0.005 mL (EL SUERO DEBE ESTAR
TOTALMENTE CLARO).
2. Agitar el antgeno a utilizar para tener una suspensin
uniforme.
3. Aadir 30 L de la suspensin de antgeno a cada una
de las diferentes cantidades de suero. Se recomienda
utilizar pipetas automticas (el gotero incluido proporciona
una gota de 30-40 L).
4. Mezclar el antgeno y el suero utilizando un aplicador
diferente para cada una de las cantidades de suero.
5. Girar la placa manualmente o utilizando un agitador
mecnico (120 rpm) durante 2 minutos.
6. Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y
observar la aglutinacin macroscpica.
7. Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo.
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS
El grado de aglutinacin se registra como sigue:

4+

Aglutinacin del 100% de los organismos

3+

Aglutinacin del 75% de los organismos

2+

Aglutinacin del 50% de los organismos

1+

Aglutinacin del 25% de los organismos

Aglutinacin del 0% de los organismos

El titulo del suero ser la inversa de la dilucin ms alta en

donde se observa una aglutinacin del 50% de microorganismos (2+)
Las diluciones del suero en la prueba en placa son aproximadamente equivalentes a las diluciones para prueba en tubo
como se muestra a continuacin.

VOLUMEN DEL SUERO

TITULO

0.08 mL

1 : 20

0.04 mL

1 : 40

0.02 mL

1 : 80

0.01 mL

1 : 160

1. Todos los sueros por probar debern estar totalmente

claros y libres de contaminacin bacteriana.

0.005 mL

1 : 320

2. No caliente el suero antes de probarlo.

9. Registrar el ttulo del suero en el cual la ultima dilucin

de una aglutinacin sea 2+.
PRECAUCIONES

3. Agite bien el antgeno antes de utilizarlo para asegurar

una suspensin uniforme.

MTODO DE TITULACIN EN TUBO:

Mezcle bien la suspensin de antgeno mediante agitacin
suave; prepare una dilucin 1:20 del antgeno a utilizar en
solucin salina.
1. Colocar 7 tubos de 13 x 100 mm en una gradilla para
cada antgeno a probar, marcndolos del 1 al 6 y el tubo
7 como control.
2. Aadir al tubo 1, 0.9 mL de solucin salina y 0.5 mL a
los 6 tubos restantes.
3. Aadir 0.1 mL del suero a probar al tubo nmero 1, mezcle
bien y transfiera 0.5 mL al tubo nmero 2.
4. Contine esta operacin hasta el tubo nmero 6, eliminar
0.5 mL de esta dilucin. El tubo 7 (Control negativo) tendr
nicamente solucin salina.
5. Aadir 0.5 mL del antgeno diluido 1:20 a cada uno de
los 7 tubos.
6. Agitar bien la gradilla para mezclar el antgeno y el suero
e incubar en bao de agua. El tiempo y temperatura
recomendado es el siguiente.
Antgeno

Temperatura

Tiempo de
incubacin

Tfico O

48-50C

18-24 Horas

Tfico H

37C

2 Horas

S. paratyphi A y B

48-50C

2 Horas

Brucella abortus

37C

48 Horas

Proteus OX-19

37C

18-24 Horas

7. Despus de la incubacin, saque la gradilla que contiene

los tubos del bao y observe la aglutinacin. La utilizacin
de una fuente de luz directa contra un fondo negro dar
mejores condiciones para la lectura.
8. Registrar los resultados como sigue :
4+

3+

2+

1+

Negativo

Todos los organismos 100% aparecen

sedimentados en el fondo del tubo y el
sobrenadante es totalmente claro.

4. El antgeno se debe mantener en refrigeracin a 2-8C

cuando no se utilice.
5. No congelar.
Se recomienda la utilizacin de sueros control Positivo y
Negativo probados en paralelo con la muestra de suero para
asegurar al analista que el antgeno bacteriano en uso es
capaz de reaccionar con su anticuerpo homlogo y mostrar
cmo sern los resultados esperados en muestras de suero
positivas y negativas.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
1. Algunos sueros normales pueden dar un titulo de 1:20 a
1:40 y hasta 1:80 pero esto puede ser debido a vacunaciones o alguna infeccin anterior. No siempre se presenta
produccin de aglutininas en infecciones bacterianas.
2. Se pueden producir reacciones cruzadas de aglutininas
debido a vacunaciones para ciertas enfermedades. La
vacuna tfica puede producir aglutininas contra antgenos
Proteus.
3. En la reaccin de Huddleson, ttulos de 1:80 pueden
consi-derarse ya de significado clnico.
Nota: El diagnstico exacto de la enfermedad depende del
acercamiento entre el laboratorio clnico y el mdico, ya que
la elevacin del ttulo en la muestra de suero con
sintomatologa reciente y la muestra de suero en fase
convaleciente indicar la exactitud del diagnstico.
BIBLIOGRAFA
1. Spink, W.W. : Amer, J. Clin, Path., 22 :201, 1952.
2. Dyer, R.E. : J.A.M.A., 124 : 1165, 1944.
3. Welch, H. & stuart, C.A. : J. Lab. Clin. Med., 21 :411, 1936
4. Felix, A. : Brit. MD. J., 11 :597, 1942.
Rev.: 22/02/02
IN-384

Aproximadamente el 75% de los organismos

se encuentran sedimentados y el
sobrenadante es ligeramente turbio.

Fabricado en Mxico por:

Aproximadamente el 50% de los organismos

se encuentran sedimentados y el
sobrenadante es moderadamente turbio.

Estudios Clasa No. 9

Aproximadamente el 25% de los organismos

se encuentran sedimentados y el
sobrenadante es turbio.
No se observa aglutinacin y la suspensin
es turbia.

LABORATORIOS MICSA

Col. Jardines Tecma

Mxico, D.F.

para:
Laboratorios Licon S.A.
Viveros del Roco No. 33
Col. Viveros de la Loma
C.P. 54080 Tlalnepantla, Edo. de Mxico
Tel.: (55) 5362-0299
Fax: (55) 5362-1792