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LABORATORIO DE BIOQUIMICA
1. RESUMEN
2. INTRODUCCIN
ACCION DE LA AMILASA. Comparacin de la -amilasa de la saliva y del cido
clorhdrico sobre la reaccin de la hidrlisis del almidn.
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3. PRINCIPIOS TERICOS
ENZIMAS:
ACCION DE LA AMILASA. Comparacin de la -amilasa de la saliva y del cido
clorhdrico sobre la reaccin de la hidrlisis del almidn.
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CLASES DE ENZIMAS:
Es necesario contar con una clasificacin para sistematizar las diferentes
enzimas que catalizan los miles de reacciones que ocurren en el organismo.
A todas las enzimas se les asignan un numero de clasificaciones enzimtica
(EC, enzyme classification) de cuatro dgitos. El primer digito indica una de
las seis principales clases de enzimas de la tabla. Los dos dgitos siguientes
sealan subclases y subsubclases de sustrato.
Clase 1: Oxidorreductasas
Cataliza la transferencia de equivalentes de reduccin de un
sistema redox a otro.
Clase 2: Transferasas
Cataliza la transferencia de grupos funcionales de un sustrato a
otro.
Clase 3: Hidrolasas
Catalizan la transferencia de grupo, pero la molcula aceptora es
exclusivamente una molcula de agua.
Clase 4: Liasas
Denominadas tambin Sintasas. Estn relacionadas con la
adicin o extraccin de H2O, NH3 o CO2
Clase 5: Isomerasa
Catalizan las reacciones de isomerizacin recolocando los tomos
de una molcula, por lo que no afectan a la composicin del
sustrato.
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Clase 6: Ligasas
Tambin
llamadas
Sintetasas,
utilizan ATP
para
catalizar
Peroxidasa:
Esta es una protena grande que consiste de cientos de aminocidos y que
presenta como grupo prosttico un grupo Hem, cuyo tomo central de hierro
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clorhdrico sobre la reaccin de la hidrlisis del almidn.
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Se encuentra en los
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AMILASA
Accin digestiva:
Est determinada por la AMILASA SALIVAL o TIALINA, sta es una amilasa
que tiene como sustratos:
-
almidn
dextrgeno
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glucgeno.
Sobre el almidn acta produciendo en la etapa final maltosa, pasando por una
etapa intermedia de dextrinas.
AMILASA
ALMIDN
AMILODEXTRINA (azul)
ERITRODEXTRINA (rojo)
MALTOSA
La AMILASA tiene activadores e inhibidores:
Activadores:
Cloruro
Yoduro
Bromuro
Nitratos
aa (el mejor es la asparagina)
la
funcin
de
digerir
el
glucgeno y
el almidn para
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amilasas
son
enzimas
dependientes
de
cloruro,
completamente
-Amilasa:
(Nombres alternativos: 1,4--D-glucano-maltohidrolasa; amilasa sacarognica)
Otra forma de amilasa, la -amilasa es tambin sintetizada por bacterias,
hongos y plantas. Acta desde el extremo no reductor de la cadena,
catalizando la hidrlisis del segundo enlace -1,4, rompiendo dos unidades de
glucosa (maltosa) a la vez. Durante el proceso de maduracin de la fruta la amilasa rompe el almidn en azcar dando lugar al sabor dulce de la fruta. La
amilasa presente en el grano de cereal es la responsable de la produccin
de malta. Muchos microorganismos tambin producen amilasa para degradar el
almidn extracelular. Los tejidos animales no contienen -amilasa, aunque
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clorhdrico sobre la reaccin de la hidrlisis del almidn.
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glucoamilasa;
-glucosidasa
lisosmica;
1,4--D-glucano
glucohidrolasa)
Adems de romper el ltimo enlace (1-4) glicosdico en el extremo no reductor
de la cadena de amilosa y amilopectina, liberando glucosa, la -amilasa puede
romper los enlaces glicosdicos (1-6). A diferencia de las otras amilasas esta
forma es ms eficaz en medios cidos y su pH ptimo es de 3. Tambin
colabora en el momento de la excitacin.
Usos:
Las enzimas amilasas son empleadas en la fabricacin de pan para romper
azcares complejos como el almidn (presente en la harina) en azcares
simples. La levadura puede entonces alimentarse de esos azcares simples y
convertirlos en productos de fermentacin alcohlica. Este proceso da sabor al
pan y hace elevar la masa. Las clulas de la levadura contienen amilasas pero
necesitan tiempo para fabricar la suficiente cantidad para romper el almidn.
Este es el motivo de la necesidad de largos tiempos de fermentacin
(especialmente para determinadas masas). Las tcnicas modernas de
elaboracin de masas incluyen la presencia de amilasas para facilitar y acelerar
estos procesos.
Algunas amilasas bacterianas se emplean como detergentes para disolver
almidones en determinados procesos industriales.
En la maduracin de frutas la amilasa es sintetizada en la maduracin,
degradando el almidn de las frutas en azcar, y volvindolas ms dulces.
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4. DETALLE EXPERIMENTAL
4.1. Materiales y reactivos
REACTIVOS
Amilasa (Saliva).
cido Clorhdrico 10%.
Almidn.
MATERIALES
Tubos de ensayo.
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Gradillas.
Pipetas.
Baguetas.
Termmetro
4.2 PROCEDIMIENTO
En tres tubos de ensayo se coloc:
Tubo N 1 : 1 mL
Agua.
A todos los tubos se le aadio 1mL de solucin de almidn (la cual se prepar
con anterioridad diluyendo el almidn starch en agua destilada y calentando
para ayudar a la disolucin) una vez agregada la solucin de almidn se agita
cada uno de los tubos con una bagueta, posterior a esto se coloca los tubos en
bao de agua durante 15 minutos de la siguiente manera:
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Una vez pasado este tiempo se dejan enfriar los tubos, una vez fros los tubos
se aadi 2 gotas de solucin de yodo, observndose un cambio de coloracin
en la muestra. Tal como sigue:
MUESTRA
COLORACION
Tubo N 1
Azul
Tubo N 2
Amarilla
Tubo N 3
Amarilla
MUESTRA
Tubo N 1
PRECIPITADO
Negativo
Tubo N 2
Positivo
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Tubo N 3
Positivo
Sustrato de la
Producto de
Catalizador
Reaccin
la Reaccin
Sustrato
Producto
Agua
almidn
almidn
-----------
-------------
Saliva
almidn
maltosa
R. Fehling
Oxido de Cu
Ac. Clorhdrico
almidn
maltosa
R. Fehling
Oxido de Cu
Revelacin
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En esta imagen podemos apreciar como el tubo N 1 el cual contena agua dio
positivo al indicador de yodo, esto se debe, a que a diferencia de los otros dos
casos, tubo N 2 y tubo N 3, con el agua no se produce la hidrlisis del
almidn, por tanto, el almidn queda intacto dando la coloracin azul del
complejo caracterstico con yodo. En el caso de la amilasa salival y el acido
clorhdrico estos si cambian la coloracin al agregar el yodo, estos toman una
coloracin amarilla la que puede indicar la presencia de acrodextrinas.
Al realizar la prueba con el reactivo de Fehling observamos que esta sera
innecesaria para el tubo N1 (agua) debido a q no existen productos de
hidrlisis y por tanto ausencia de azucares reductores; en los dos casos
siguientes vemos que se produce la formacin de un precipitado rojo de oxido
cuproso debido a la presencia de la maltosa (azcar reductor). Observemos la
siguiente imagen:
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Tubo N 2
Tubo N 3
observar la formacin
6. CONCLUSIONES
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7. BIBLIOGRAFIA
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