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Inmunolgico
H umorales Rela
Enfermedad
de Parmetros
s Celulares y
cionados con la
Periodontal
Dra. Gisella Rojas Gonzlez, MSc *
Dra. Gina Murillo Knudsen, M DSc **
RESUMEN
El presente trabajo tiene como objetivo determinar cuantitativamente, la presencia de los factores inmunolgicos humorales (IgA e
IgG) en saliva, sangre y fluido crevicular, as como los factores inmunolgicos celulares, (linfocitos T y la relacin T4/T8) en la sangre, en pacientes con periodontitis y en pacientes sin enfermedad periodontal.
La escogencia fue aleatoria y se obtuvo una muestra de 39 pacientes del grupo experimental (pacientes con algn grado de enfermedad periodontal), y 20 pacientes del grupo control (pacientes sin problemas periodontales) quienes asistieron a la Clnica de la
Facultad de Odontologa de la UCR. La edad promedio fue de 35 a 44 aos. Los participantes del estudio, firmaron la hoja de consentimiento informado y cumplieron los requisitos de inclusin para poder participar. A cada uno se le realiz un cuestionario de salud
y se hizo una valoracin clnica; de igual manera se obtuvieron las mediciones del surco gingival y se tomaron las muestras de saliva, fluido crevicular y sangre.
Dentro de los resultados obtenidos se encontr que, el volumen del fluido crevicular gingival es mayor en los pacientes con problemas periodontales; los valores de IgA en el suero y en la saliva, son similares para ambos grupos de estudio; no se pudo determinar
cuantitativamente, la cantidad de IgG en el FCG; los valores encontrados de IgG en saliva, son similares para las dos muestras. Los
pacientes del grupo control no mostraron alteraciones en los valores de inmunidad celular; los del grupo experimental presentaron
valores alterados de inmunidad celular, adems de comportarse como un grupo heterogneo. No se pudo determinar si las alteraciones celulares presentadas por los del grupo experimental, estn directamente relacionadas con la enfermedad periodontal o con alguna otra alteracin metablica. De ah que resulta necesario realizar estudios clnicos, anatomopatolgicos y virolgicos que confirmen que la recidiva de la enfermedad periodontal, est asociada con una alteracin inmunolgica celular.
PALABRAS CLAVE
Enfermedad periodontal, fluido crevicular, saliva, IgG, IgA, inmunidad celular e inmunidad humoral.
ABSTRACT
The objective of this work is to be able to determine cuantitatively the presence of several humoral factors (IgA and IgG) in saliva,
blood and gingival crevicular fluid (GCF), as well as the celular inmunological factors (T linfocites and the T4:T8 linfocite ratio) in
blood, in patients with periodontitis and in patients without the disease.
The sample recorded was done random and it was obteined out of 39 patients from an experimental group and 20 participants from a
control group (patients without periodontal disease) who were the ones who atended to the clinic from the School of Dentistry at the
University of Costa Rica. The average age was from 35 to 44 years of age. The participants agreed to sign the informed consent and
they succesfully met the requirements to become participants of the study. A health form was done to each of the patients and a clinical evaluation was performed as well. Furthermore, probing depth measurements was also done, and saliva, gingival crevicular fluid
and blood samples were taken.
In the observed results the following conclusions were observed: the GCF volumen is highly consistent in patients with periodontitis; the values of IgA
in serum and in saliva are similar in both groups studied; the amount of IgG in GCF could not be determined; the values that were found in saliva of
IgG are similar is both groups; the individuals from the control group did not register any changes or alterations of celular inmunity; the experimental
group registered alterations of celular inmunity, morover, they behaved in a heterogenous way. It was not possible to determine if the celular alterations
that were observed in the study are related directly to periodontal disease or related to other metabolic conditions. Therefore, it is necessary to conduct
more clinical research, anatopatological and virologic studies that can stablish that the recurrence of periodontal disease is linked to an inmunological
celular alteration.
KEY WORDS
Periodontal disease, gingival crevicular fluid (GCF), saliva, IgG, IgA, celular inmunity and humoral inmunity.
*
**
Introduccin
La enfermedad periodontal se caracteriza por ser infecciosa,
ocasionada por una compleja asociacin de especies bacterianas que interactuan con los tejidos y las clulas del husped,
as causan la liberacin de citoquinas proinflamatorias, interleucinas y mediadores inflamatorios, algunos de los cuales
provocan la destruccin del soporte periodontal, incluyendo el
hueso alveolar, el ligamento periodontal y el cemento alrededor del diente. (Socransky, 2002)
Esquemas infecciosos actuales sugieren que los agentes etiolgicos que originan la enfermedad, producen una supresin
del sistema inmunolgico de defensa, y permiten que los patgenos bacterianos se multipliquen, se liberen interleucinas
proinflamatorias, citocinas y se d la iniciacin de eventos
citotxicos o inmunopatolgicos que generan, subsecuentemente, la destruccin del tejido periodontal. (Slots, 2000)
El anlisis de los anticuerpos generales y locales, se ha convertido en una parte integral de la investigacin en el rea
periodontal a nivel mundial. Estos estudios son importantes
porque facilitan el diagnstico, pronstico y tratamiento de la
enfermedad periodontal. La respuesta de un paciente hacia la
enfermedad periodontal, se compone de una serie compleja de
eventos que abarcan la activacin de la respuesta inflamatoria
aguda y los sistemas inmunolgicos humorales y celulares;
esta se encuentra tanto en los tejidos locales como en la circulacin perifrica. En los tejidos periodontales la infiltracin
de linfocitos polimorfonucleares (PMN), de linfocitos T, de
linfocitos B y de macrfagos es caracterstica de la lesin
periodontal (Lamster, 1990). La activacin de las clulas
infiltrantes del paciente, a su vez, puede reflejarse en el lquido crevicular gingival por la aparicin de mediadores derivados de esas clulas.
En la sangre perifrica entre los cambios ms importantes, se
puede citar el desarrollo de un ttulo inmunolgico hacia los
agentes patgenos periodontales (Mealey, 1991).
La deteccin de un ttulo elevado de anticuerpos sricos, proporciona una indicacin de la respuesta humoral hacia las bacterias involucradas en el inicio y en la propagacin de la
enfermedad periodontal.
Los resultados de estudios histopatolgicos indican que, las
lesiones producidas producen por la periodontitis, estn compuestas principalmente, por linfocitos B y clulas plasmticas.
En el pasado, las evaluaciones del papel de linfocitos B en la
periodontitis fueron limitadas por la falta de marcadores especficos para clulas B, y la incapacidad para determinar exactamente, si las lesiones estudiadas a travs de material de
biopsia estaban experimentando una progresin activa de la
enfermedad. (Brostoff, 1991). Esto ha quedado demostrado
4
tros. La cuantificacin de IgA en suero, se hizo por inmunodifusin radial simple con KALLESTAD ENDOPLATE. Las
curvas de referencia se prepararon con los sueros dispuestos
para el efecto de la misma casa comercial. Se utilizaron 5
microlitros, tanto del suero de referencia como de cada una de
las muestras, para colocar en los respectivos pocillos. La difusin se llev a punto final, para ello se incubaron las placas en
cmara hmeda a 25 C por 48 horas. Las curvas de referencia se construyeron en papel milimetrado lineal, bucando la
lnea de mayor ajuste. La determinacin de IgA en saliva, se
prepar igual que la cuantificacin de esta en el suero, pero en
la mayora de las muestras, la concentracin de inmunoglobulina fue inferior a la concentracin del suero de referencia de
menor concentracin, por lo que se procedi a cuantificarla en
las placas. Los volmenes requeridos, tanto de suero de referencia como de muestra, fueron de 20 microlitros. Al igual
que en el procedimiento anterior, se llev a difusin final incubando en las condiciones ya sealadas, y la construccin de las
curvas se llev a cabo del modo ya descrito.
Determinacin de linfocitos T y subpoblaciones: a los pacientes participantes se les tom una muestra de sangre en un tubo
de ensayo estril con anticoagulante (EDTA); se procedi a
provocar lisis de los glbulos rojos, aadindo a la mezcla,
una solucin ltica de la compaa Cutre, que contuviera bsicamente, clulas mononucleares. Se agregaron 25 microlitros
de los Abm dirigidos contra los marcadores de superficie CD3,
CD4 y CD8, y se agreg anticuerpo anti-Ig de ratn marcado
con fluorescena; y las lecturas se hicieron a travs de un citmetro de flujo.
Resultados
El diagnstico periodontal se dio para gingivitis y periodontitis, y la intensidad de la lesin se clasific como leve, moderada y severa. En este estudio, el 10% tuvo una gingivitis leve,
el 41% una periodontitis leve, el 46% una periodontitis moderada y el 2,56% una periodontitis severa. (Fig. No. 1)
Figura 1.
Profundidad de la medicin de las piezas indicadoras usadas en el estudio
Anlisis estadstico
El anlisis estadstico se realiz utilizando la prueba de hiptesis y la prueba de anlisis de variancia. Se emple el programa SPSS/PC+ para el manejo de datos por computadora.
El primer anlisis relacion la cantidad de volumen de fluido
crevicular entre el grupo control y el grupo experimental.
Hubo una diferencia considerable entre ambas medias. Sin
embargo, no coincidi con el valor muy cercano al 100% de
confianza estadstica de que ambos grupos son diferentes. El
valor de significancia fue de 0.000%.
El segundo anlisis relacion la concentracin de IgA en el
suero, entre los dos grupos. El valor de las medias es razonablemente cercano entre uno y otro grupo. El valor de significancia es de 48%. Los conjuntos estudiados se comportaron
estadsticamente iguales.
El anlisis de la concentracin de IgA en saliva, determin
valores de medias muy cercanas; sin embargo se tiene 96.4%
de confianza estadstica, al asegurar que ambos grupos son
diferentes.
La concentracin de IgG en el suero obtuvo medias diferentes.
Se estableci 92% de confianza estadstica de que los dos grupos son diferentes.
Al analizarse la concentracin de linfocitos CD4 entre ellos se
encontr que las medias son casi iguales, y que las poblaciones se comportan estadsticamente iguales.
Al analizar linfocitos CD8 y CD3 en ambos grupos, se estableci que hay confianza mayor del 90% de que ambos grupos
son diferentes. Lo mismo se obtuvo al relacionar linfocitos
Discusin
Se analizaron en este trabajo, las condiciones inmunolgicas
de los pacientes periodontalmente enfermos y la de los pacientes sanos como control.
El volumen del FCG se obtuvo al relacionar la lectura del
Periotron 6000 con la curva de calibracin previamente realizada. Se observ que las mayores lecturas correspondieron a
pacientes con periodontitis. Se confirm estadsticamente,
ran estar relacionadas con las distintas alteraciones de la respuesta inmune celular. Estas alteraciones no se encontraron en
el grupo control.
Con los resultados obtenidos, no se puede definir si la causa de
la enfermedad periodontal es un agente infeccioso, el cual
induce a una disfuncin inmunolgica celular, o por el contrario, alguna deficiencia inmunolgica permite el desarrollo de
los microorganismos oportunistas intracelulares, cuya patognesis est relacionada con la disminucin de la poblacin de
linfocitos T citotxicos (CD8) o inversin en la razn
CD4/CD8.
La recidiva de la enfermedad periodontal asociada con los
hallazgos inmunolgicos descritos en el presente trabajo, estimula el seguimiento en los estudios a nivel bsico virolgico,
inmunolgico y anatomopatolgico, as como la propuesta de
estudios clnicos prospectivos con drogas inmunomoduladoras, que podran modificar las disfunciones inmunolgicas
encontradas.
Conclusiones
El volumen de FCG en el paciente periodontal, es mayor que
el encontrado en un paciente sano.
La mayor cantidad de pacientes con problemas periodontales,
tiene edades comprendidas entre los 35 a 44 aos.
Los resultados encontrados en IgA en suero, IgA en saliva e
IgG en el suero sealaron que los valores obtenidos son inmunolgicamente similares tanto para el grupo experimental
como para el grupo control. El parmetro inmunolgico que
debe ser evaluado, no es la respuesta inmune humoral.
No se pudo determinar la concentracin de IgG en FCG, debido a que es menor a 5 mg/ml .
Los resultados de los parmetros celulares, demostradon que
los pacientes con enfermedad periodontal no constituyen un
grupo homogneo.
1/3 del grupo de pacientes present una relacin
CD4/CD8 normal, pero con un recuento total de CD8 inferior
a 350/mm.
1/3 del grupo de pacientes present una relacin CD4/CD8
menor a 1.
1/3 de pacientes present cantidades de CD4 muy superiores
al grupo control.
No se puede definir en esta investigacin, cules otras expresiones clnicas pueden presentar los pacientes, adems de la
periodontitis, que pudieran estar relacionadas con las distintas
alteraciones de la respuesta inmune celular.
Ninguno de los individuos sanos desde el punto de vista periodontal, present alteraciones en la respuesta inmune celular.
En este estudio, no se puede definir si la causa de la enfermedad periodontal es un agente infeccioso que podra inducir una
disfuncin inmunolgica celular, o, por el contrario, alguna
deficiencia inmunolgica en los pacientes que permita el
Editorial
Bibliografa
Mealey, B. and Ebersole, J. Development of a rapidly cuantitative assay for determining elevated antibody levels to periiodontopathic organisms. Journal of Periodontology, 1991.
Reinhardt, R. and others. IgG subclasses in gingival crevicular fluid from active versus stable periodontal sites. Journal of
Periodontology, 1990.
Rojas, W. Inmunologa.
1976.
3era. Edicin.
Editorial Colina,