MICROBIOLOGIA PESQUERA

UNIVERSIDAD NACIONAL
AGRARIA LA MOLINA

CULTIVO Y SIEMBRA DE

MICROORGANISMOS
NUMERO DE LABORATORIO:

Practica N 1

ALUMNO:

Cabrera Espinoza, John

CURSO:

Microbiologa pesquera

PROFESORA:
Ordinola

ING. Nancy Martnez

FECHA DE EJECUCION:
2016

15 de agosto

FECHA DE ENTREGA:
agosto 2016

24 de

INTRODUCCION
En la naturaleza, los microorganismos se encuentran formando poblaciones
mixtas con otros tipos de microorganismos. Los cultivos de estas mezclas se
llaman por ello cultivos mixtos. Sin embargo, el conocimiento de los
microorganismos se consigue mediante el estudio de cepas aisladas, cultivadas
en el laboratorio en cultivos puros (o axnicos). En ocasiones el estudio
molecular conduce a la caracterizacin de los microorganismos, an en
poblaciones mixtas. Sin embargo la identificacin bacteriana y la
caracterizacin completa solo es posible tras el aislamiento de la bacteria y la
obtencin de cultivos puros. Por ello el primer problema al estudiar una
bacteria es su aislamiento del resto de los microorganismos presentes (en una
muestra patolgica, de agua, de suelo, de alimentos, etc.). Una vez que se ha
logrado el aislamiento es posible obtener la bacteria de inters en cultivo puro.
La siembra microbiolgica es un procedimiento tcnico que consiste en colocar
una pequea fraccin o volumen de la muestra, sobre o dentro, de uno o varios
medios de cultivo que contengan los nutrientes necesarios para las especies
que presuntivamente contiene, con la finalidad de que puedan desarrollarse
adecuadamente, para facilitar su estudio y posterior identificacin. El nmero
de clulas microbianas que se encuentran en el volumen o fraccin sembrada
se denomina inculo.
(gerard J. Tortora)

OBJETIVOS
Identificar y aprender los mtodos para cultivar microorganismos y la
importancia de estos para sus aislamientos e identificacin.

REVISION BIBLIOGRAFICA

Un microorganismo se puede sembrar en un medio lquido o en la superficie de

un
medio
slido
de agar.
Los medios
de
cultivo contienen
distintos nutrientes que
van,
desde azcares simples
hasta
sustancias
complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o
purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos
tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las clulas
que se multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos
reproductivos, cada bacteria individual genera por escisin binaria una colonia
macroscpica compuesta por decenas de millones de clulas similares a la
original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio
crecer como cultivo puro de un solo tipo de bacteria. (wikipedia)

Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es

imposible diferenciarlas slo con el uso del microscopio. En este caso, para
identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus caractersticas
bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo especiales. As, algunos
medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayora de las
especies bacterianas, pero no la del tipo que se desea averiguar si est
presente. Otras veces, el medio de cultivo contiene determinados azcares
especiales que slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se
aaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes
del medio es fermentado y se generan catabolismos cidos. Si las bacterias son
capaces de producir fermentacin, generan gases que pueden ser detectados
cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado.(wikipedia)

PROCEDIMIENTOS Y MATERIALES

A Mtodo del trasplante o repique.

a Modo operativo
Anotar el nmero o nombre de la cepa y el nmero de mesa

Esterilizar el aguja o asa de kolle en el mechero

Destapar y flamear la boca del tubo que contiene la
cepa.
Introducir la aguja de kole esterilizada en el
tubo que contiene la cepa y tomar el
inculo. Taponear inmediatamente.
Destapar el tubo que contiene el medio de
cultivo e
introducir el inculo haciendo:
- Una picadura profunda en el agar nutritivo en
posicin vertical
- Estras en el agar nutritivo en posicin inclinada
- Por suspensin en el medio lquido
- Estras y picadura profunda en el agar
semiinclindo.
1. Flamear la boca del tubo y
taponear.
2. Esterilizar la aguja o asa de kolle
3. Incubar en la estufa a 37C por 24 horas.

Materiales
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Tubos con agar nutritivo en posicin vertical

Tubos con agar nutritivo en posicin inclinada
Tubos con agar TSI en posicin semiinclinada
Tubos con caldo nutritivo
Tubos con cultivos puros de m. o. de 18 a 24 horas
Asa y aguja de kolle.

B Cultivo por aislamiento

B.1 Aislamiento por agotamiento de superficie con aguja de
kolle.
a Modo operativo
1. Esterilizar el asa de kolle en el mechero
2. Tomar el inculo
3. Abrir la placa con agar y trazar sobre la superficie 4
lneas paralelas sin daar el agar.
4. Esterilizar el aguja o asa de kolle y enfriar
5. Luego, sin tomar el inculo, trazar otras 4 rayas
partiendo de los extremos de las 4 primeras estras

6. Esterilizar el asa de kolle y realizar la operacin

anterior.
7. Se realiza una sola estra hacia el centro.
8. Cerrar la placa e icubarla mantenindola siempre
invertida, a 37C de 18 a 24 horas.

b Materiales

1. Placas con agar XLD (Agar xilosa lisina desoxicolato)

2. Cultivo impuro
3. Asa de kolle

B.2. Aislamiento por dilucin

B.2.1. Por agotamiento en superficie.
a Modo operativo
1. Tomar 3 placas con el PCA, sealarlas con diluciones 10 -1,
10-2, 10-3.
2. Con una pipeta estril de 1 ml, tomar 0.1 ml de la dilucin
10-3 y colocarla en la placa correspondiente; con la misma
pipeta, tomar 0.1 ml de la dilucin 10-2 y colocarla en su
respectiva placa; finalmente, tomar 0.1 ml de la dilucin
10-1 y colocarla en su respectiva placa.

3. Con la esptula esterilizada, extender el inculo por toda la

superficie, empezando por la ms diluida
4. Incubar las placas a 37C por 24 horas
b Materiales
1. Placas con PCA
2. Tubos conteniendo diluciones hechas a partir de muestra
de pescado
3. Pipetas serolgicas estriles de 1 ml
4. Esptulas drigalski

B.2.2. Por derrame o vertido en placa.

a) Modo operativo
1. Tomar 3 placas con el PCA, sealarlas con diluciones 10 -1,
10-2, 10-3.
2. Con una pipeta estril de 1 ml, tomar 0.1 ml de la dilucin
10-3 y dejar caer dentro de toda la placa estril. Hacer lo
mismo con las otras diluciones.
3. Colocar aproximadamente 15 ml de medio PCA a 45C
dentro de las placas sobre el inculo, mezclar bien
mediante movimientos suaves.

4. Esperar que solidifique el medio

5. Incubar las placas a 37C por 24 horas
6. Las placas se incuban invertidas.
b) Materiales
1. Medio PCA
2. Tubos conteniendo diluciones hechas a partir de muestra
de pescado
3. Placas Petri estriles
4. Pipetas serolgicas estriles de 1 ml

DIAGRAMA DE FLUJO PARA SIEMBRA DE MICROORGANISMOS POR METODOS

DE ESTRIAS Y POR EL METODO DE EXTENSION EN CAJA DE PETRI

RESULTADOS
Mtodo del trasplante o repique.
1. En el tubo donde se sembr por picadura profunda se observ
un desarrollo limitado de ESCHERICHIA COLI a la lnea de
inoculacin y pronunciado.
2. En el tubo donde se sembr la por picadura profunda tambin
se observ escheriche coli un desarrollo limitado a la lnea de
inoculacin un hilo.

3. En el tubo donde se sembr la por estras en el agar inclinado

se observ un desarrollo moderado de escheriche coli , con un
borde de liso, una consistencia viscosa y una pigmentacin
blanquecina.

Cultivo por aislamiento

Se observ el desarrollo de microorganismo en la superficie del

medio; tales microorganismos estaban distribuidos en las zonas por
donde se haba pasado con el asa de Kolle.

Aislamiento por dilucin

Por agotamiento en superficie o extensin
Hubo desarrollo de microbios en las tres placas con diferentes diluciones,
Se observ que los microorganismos no haban desarrollado en las
mismas cantidades en las tres placas, ya que hubo mayor poblacin en
la placa con dilucin 10 -1, menor desarrollo en la placa con dilucin 10 -3,
y una cantidad intermedia de microorganismos entre las dos placas
anteriores en la placa con dilucin 10-2.

RECOMENDACIONES:

Tener ms practica en las operaciones de el esterilizado en la mecha, ya

que esto genera que microorganismos extraos contaminen el cultivo
Esterilizar la asa de kolle de una forma correcta

Realizar una repeticin para determinar con exactitud con realmente no

crece ninguna bacteria en el aislamiento por agotamiento de superficie
con aguja de kolle.

Asegurarse de que la siembra se realice correctamente, sin derramar la

gota adherida a la aguja de kolle.

BIBLIOGRAFA:

Microbiologa. Leccin 28: siembra de microorganismos. Universidad Nacional

Abierta y a Distancia. Colombia
Biologia de la microorfanismos Michael T.Madigan , John Martinko, Jack ParkerEditorial Person
Intro.a la microbiologa gerard J. Tortora Editorial Panamericana