UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIA MDICAS

ESCUELA DE MEDICINA

MEDICINA TROPICAL

ARTCULO:
UN MTODO NICO EN EL TRATAMIENTO TELEDIRIGIDO A MOTONEURONAS
USANDO PROTOCLULAS MODIFICADAS CON TOXINA COLRICA-B

SUBGRUPO CLERA:
Alcvar Vctor
Romero Shakina
Vlez Israel
TUTORA:
Dra. Soria Segarra Claudia Leonor
GRUPO:
5
SEMESTRE:
6to

FECHA:

Jueves, 15 de diciembre del 2016

UN MTODO NICO EN EL TRATAMIENTO TELEDIRIGIDO A MOTONEURONAS

USANDO PROTOCLULAS MODIFICADAS CON TOXINA COLRICA-B
INTRODUCCIN:
Las interacciones trficas entre las fibras musculares y motoneuronas en la unin
mioneural tienen un rol crtico en determinar la funcin motora a travs del desarrollo,
envejecimiento, heridas y enfermedad.
Es importante la investigacin en mtodos para abordar gentica y farmacolgicamente a
las neuronas para el tratamiento de enfermedades como la ELA o en el estudio de la
fisiopatologa de la denervacin muscular en trastornos como las lesiones de la mdula
espinal, atrofia muscular espinal o el envejecimiento muscular.
El tratamiento no progresa porque falta especificidad, poca penetracin celular e
inestabilidad. Usar las motoneuronas por su unin mioneural permitira sacar provecho del
transporte retrgrado neuronal. Sin embargo, an no se logra transferir las molculas
deseadas (como factores trficos) en el sitio deseado con alta eficacia y un mnimo de
efectos adversos y anormalidades de la funcin neuronal.
MTODO NUEVO:
Se describe un mtodo de entrega nico dirigida a las motoneuronas usando una bicapa
lipdica que encapsula nano partculas de silicn meso poroso (2-50nm dimetro del poro)
llamado protoclula pero que ha sido modificada con la subunidad B de la toxina colrica
que se une a los ganglisidos (GM1) presentes en la membrana de las clulas nerviosas.
Las nano partculas de silicn meso poroso son dentro del sistema de nano partculas para
la distribucin de frmacos a nivel molecular una maravilla, debido a que pueden ser
modificados el tamao de sus poros y los compuestos de la superficie para mejorar la
entrega de la sustancia deseada, comparndola con el sistema de liposomas. Adems de
la posibilidad de disear y establecer la bio funcionalidad y bio compatibilidad de estas
nanopartculas.
Mezclar ambos sistemas ofrece la ventaja de los liposomas de tener una versatilidad de la
sustancia a cargar, liberacin controlada e introducir a la membrana ligando especficos
para una determinada clula o grupo de clulas diana.
Hay un cierto nmero de toxinas naturales que tienen tropismo por el sistema nervioso y
pueden ser usados como ligandos para sealar objetivos (en este caso tejido nervioso). La
toxina del clera producido por la bacteria Vibrio cholerae est conformada por 2
subunidades, la A con actividad adenilato ciclasa y la subunidad B que est formada por
monmeros de 103 aminocidos se une como ligando al ganglisido M1 presente en la
membrana celular de neuronas, con capacidad de transporte axonal retrgrado.
.MATERIALES Y MTODOS:
1. PREPARACIN DE LAS PROTOCLULAS
A. Nano partculas de silicon mesoporoso (MSNP) tras su formacin con la mezcla de
distintos solventes y surfactantes se almacena en solucin de etanol, habiendo
usado en distintas fases una autoclave a 50 y 70C.

B. Encapsulacin del MSNP al liposoma y conjugacin con la subunidad B de la toxina

colrica, se usa mtodos con cloroformo, fosfolpidos, fosfocolina, colesterol y
eliminacin de exceso con centrifugacin, y se agrega la subunidad B con un
mtodo de biotin-neutravidina.
C. Carga de la molcula YO-PRO-1 que fue elegido por que puede ser detectado por
fluorescencia y es impermeable a las membranas. Primero tras la realizacin del
MSNP se agrega por difusin el YO-PRO-1 usando detergentes como el DMSO y
tras eso se realiza el paso B.
D. Es necesario para evaluar la eficacia del trabajo de usar el MET y mtodos de
criogenizacin.
2. PRUEBA DE ESPECIFICIDAD POR MOTONEURONAS Y DE TRANSPORTE
RETRGRADO
A. Se us clulas similares a motoneuronas NSC-34 as como clulas musculares de
ratn L6 para evaluar el tropismo.
B. Posteriormente se realiz la prueba con segmento del diafragma y nervio frnico de
un ratn
3. ANALISIS ESTADSTICO
A. Standard sta-tistical software (JMP 10.0, SAS Institute Inc., Cary, NC).}
HIPTESIS:
Una protoclula modificada cargada con un frmaco o ligando gentico podr ser
especfico para motoneuronas y mostrar transporte axonal retrgrado desde la unin
mioneural.
CONCLUSIONES:
Protoclula modificada con biotin-neutravidina es especfica para motoneuronas y no para
clulas musculares. Adems del transporte retrgrado en las neuronas del frnico. Adems
de que usando una sustancia impermeable como encargo logra atravesar con la
protoclula modificada como vehculo a las neuronas.
Estas protoclulas modificadas muestran una mejor captacin por parte de las
motoneuronas tras 24 horas de tratamiento (60% comparado con 15% respectivamente).
Tambin hay ausencia de citotoxicidad y de proliferacin celular inalterada.
El sistema de protoclulas modificadas es uno viable para mltiples tratamientos para las
enfermedades neuromusculares.
COMPARASIN CON MTODOS EXISTENTES:
Las estrategias actuales para exponer especficamente a las motoneuronas a frmacos o
arreglos genticos fallan al cargar y entregar mltiples sustancias. Las protoclulas
modificadas suma las ventajas de usar liposomas y nano partculas de silicn meso poroso
permitiendo facilitar la carga y entrega de las sustancias y su habilidad de ser dirigidas a
las motoneuronas por su unin mioneural le confiere a este nuevo mtodo mucha ventaja.

ARTCULO:

A novel approach for targeted delivery to motoneurons using cholera

toxin-B modified protocells
From magazine:

Journal of Neuroscience Methods

Volume 273, 1 November 2016, Pages 160174

Maria A. Gonzalez Porrasa,

Paul N. Durfeec, d,

Ashley M. Gregorya,

Gary C. Siecka, b,

C. Jeffrey Brinkerc, d, e,

Carlos B. Mantilla, M.D., Ph.D.a, b, ,

Department of Physiology & Biomedical Engineering, Mayo Clinic, Rochester, MN, United
States
b
Department of Anesthesiology, Mayo Clinic, Rochester, MN, United States
c
Center for Micro-Engineered Materials, Advanced Materials, University of New Mexico,
Albuquerque, NM, United States
d
Department of Chemical and Biological Engineering, University of New Mexico, Albuquerque,
NM, United States
e
Advanced Materials Laboratory, Sandia National Laboratories, Albuquerque, NM, United States
Received 18 July 2016, Revised 12 September 2016, Accepted 13 September 2016, Available online
15 September 2016