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AISLAMIENTO DE CASEINA Y LACTOSA.

Carlos S. Noeth, Francisco L. Lopez, Omar A. Ferreira, Suleima S. Nuez, Karim B. Arreola.

Universidad Tecnologica de Mexico.

Facultad de Odontologia.

Profesoras:
Dra. Erika Berenice Len Espinoza.
Dra. Erika Hernandez Renteria.
Dra. Fanny Rodriguez Cruz
Practica No. 8
Fecha de realizacion: 14/10/2016

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Resumen.

Se realiz aislamiento de Lactosa a partir de Leche entera. Se vertieron 200 mililitros de esta leche
en un vaso de precipitados y se calent a 40 grados centgrados; al llegar a esta temperatura se
agreg cido actico (CH3COOH) hasta llegar a un pH<5. En total se agreg una cantidad de 30
gotas de CH3COOH.
Al agregar el cido actico, reaccion la leche formando una masa blanca en el fondo del
vaso de precipitados con un sobrenadante color amarillento. Se procedi a filtrar con un trozo de
papel para filtrar. Como resultado de la filtracin quedo como residuo una masa blanca formando
requesn y un lquido amarillo plido.
El suero producto de la filtracin se le agreg 2.5 gramos de carbonato de calcio (CaCO3)
agitndose por diez minutos, luego de esto se procedi a calentar por otros diez minutos. Al tener
la solucin caliente se filtr al vaco y se reconcentr hasta aproximadamente 15ml. La solucin
resultante de la filtracin se procedi a guardarla en un recipiente para la siguiente practica.
Una semana despues se concentr la solucin hasta 30 mililitros para eliminar agua, luego de
apartar la solucin del mechero agregamos etanol 175 ml al 95% y 1.5 gr de carbn activo a la solucin
an caliente esto para deshidratar y llevar a la desestabilizacin de las micelas. Luego de batir bien, se
filtra al vaco para extraer los slidos ajenos a la lactosa a traves de un papel filtro. El filtrado
transparente se coloca en un Erlen meyer, una semana despus se encontr precipitado en el fondo y las

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paredes del mismo. El cual fue filtrado al vaco, lavado con etanol acuoso y colocado sobre papel filtro
para dejar que secara y poder pesar los resultados al final.

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Introduccion.

La leche es el alimento nutricional ms completo encontrado en la naturaleza. Todas las clases de

leche, humanas o animales, contienen vitaminas (principalmente tiamina VitB1, riboflavina
VitB2, el cido pantotnico VitB5 y vitaminas A, B12, D), minerales (calcio, potasio, sodio,
fsforo ), protenas (principalmente casena), carbohidratos (lactosa principalmente) y lpidos
(grasas).Leche entera es una emulsin aceite en agua, que contiene su grasa 3.9% dispersada como
glbulos. La emulsin grasa se estabiliza por complejos fosfolpidos y protenas que se fijan por
adsorcin en las superficies de los glbulos. Porque la grasa de leche es tan finamente dispersos,
se digiere ms fcilmente que la grasa de cualquier otra fuente. Los glbulos son ms ligeros que
el agua, asi suben a la superficie de la leche como la crema. Vitaminas A y D son sustancias
solubles en la grasa y por lo tanto se concentran en la crema. Las grasas en la leche son
principalmente los triglicridos,
[1].Hay tres clases de protenas en la leche: casena, lactoalbumina, lactoglobulina. Las tres son
protenas globulares y son unidades compactas, casi esferoidales , son ms fcilmente solubles en
agua ya que son protenas fibrosas. Son "protenas completas", llamadas as porque contienen
todos los aminocidos esenciales para la construccin de tejido y sangre, y pueden sostener la vida
, proporcionar el crecimiento normal, pero pueden contener mayores cantidades de aminocidos
de las protenas del huevo y la carne [1]. La casena, es la principal protena en la leche, es una
fosfoprotena. Los grupos fosfato se unen a los grupos del oxhidrilo de algunas de las cadenas
laterales de aminocidos. La casena existe en la leche como la sal de calcio, caseinato de calcio.
Es realmente una mezcla de al menos tres protenas similares que difieren en peso molecular y la

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cantidad de grupos de fsforo que contienen (, y casenas), que forman una micela o una
unidad solublized. Ni el ni la casena es soluble en la leche y no es soluble por separado o en
combinacin. Si casena se aade a cualquiera de los dos, o a una combinacin de los dos, sin
embargo, el resultado es una complejo de la casena que es soluble debido a la formacin de la
micela. Propone una estructura de micela de casena se muestra a continuacin [2]:

Figura 1: Caseina

Casena Caseinato de calcio tiene un punto isoelctrico de pH 4,6. Por lo tanto, es insoluble en
soluciones de pH inferior a 4,6. El pH de la leche es aproximadamente 6.6; por lo tanto, la casena
tiene carga negativa a este pH y es solubilizada como una sal. Si el cido se agrega a la leche, se
neutralizan las cargas negativas en la superficie exterior de las micelas de casena (por protonacin
de los grupos de fosfato) y los precipitados de protena neutra, con los iones de calcio en solucin:

Caseinato de CA + casena 2H+ + Ca2 +

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Un ejemplo natural de este proceso ocurre cuando la leche se gria. La acidificacin de la leche es
un intrincado proceso iniciado por la accin de los microorganismos en el principal carbohidrato
en la leche, lactosa. Los microorganismos hidrolizan la lactosa en glucosa y galactosa. Una vez
que se ha formado la galactosa, lactobacilos, una cepa de bacterias presentes en la leche,
convertirlo en cido lctico sabor amargo. Puesto que la produccin del cido lctico tambin
reduce el pH de la leche, la leche coagula cuando pica debido a la precipitacin de la casena. se
muestra la estructura del cido lctico [1]

Figura 2. cido lctico

cido lctico Cuando las grasas y las protenas se han quitado de la leche, los hidratos de carbono
permanecen en el suero, ya que son solubles en solucin acuosa. El principal carbohidrato en la
leche es la lactosa.

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Figura 3. Lactosa
Lactosa Lactosa (4 - O-(-D administracion) - D - glucopiranosa) es el nico carbohidrato que los
mamferos sintetizan. Es un disacarido que consiste en una molcula de beta-d-glucosa y una
molcula de beta-d-galactosa en 1, 4' moda y es sintetizada en las glndulas mamarias. En este
proceso, una molcula de glucosa se convierte en galactosa y se une a otro de glucosa [2,3].

Metodologia:

Materiales:
Vasos de precipitados
Varilla de vidrio y espatula
Trompa de vacio
Papel secamanos de laboratorio
Matraz Erlenmeyer

Productos Quimicos:
Leche entera
Acetico glacial

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Carbonato calcico en polvo

Etanol 95%
Etanol acuoso 25%
Carbon activo
Desarrollo de la practica.

1.Aislamiento de la caseina
1. lntroducir 200 ml. de leche entera en un vaso ancho de 600 ml. No se debe dejar la leche en reposo
durante PROTEIN
mucho tiempo antes de utilizaria, ya que laPROTEINA
lactosa puede convertirse lentamente en acido
Iactico, Aaunque se guarde en la nevera.

ACIDO LACTICO
INSOLUBL

2. Calentar la leche hasta aproximadamente los 40 C y anadir gota a gota una disolucion de acido
acetico diluido (1 volumen de acido acetico glacial en 10 volumenes de agua), con un cuentagotas.
3. Agitar continuamente la mezcla con una varilla de vidrio durante todo el proceso de adici6n.
Continuar anadiendo acido acetico diluido hasta que no precipite m6s caseina. Debe evitarse un exceso
de acido porque puede hidrolizarse parte de la lactosa. Agitar la caseina hasta que se orma una gran
masa amorfa.
4. Separar la caseina con ayuda de una varilla o espatula y colocarla en otro vaso.
5. Anadir, inmediatamente, 5 g de carbonato de calcio en polvo al primer vaso (que contiene el liquido
del que se ha separadoa-Lactosa
la caseina).

D-Galactosa

DGlucosa

Dgalactosa+Dglucosa

6. Agitar esta mezcla durante unos minutos y guardarla para utilizarla luego en la siguiente practica.
Debe utilizarse cuanto antes y durante el mismo periodo de trabajo. Esta mezcla contiene lactosa.
7. Filtrar la masa de caseina al vacio durante aproximadamente 15 minutos para separar todo el liquido
que sea posible.

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8. Presionar la caseina con una espatula durante la operacion de filtrado.

9. Colocar el producto entre varias toallas de papel para ayudar a secar la

caseina. Cambiar el

producto por lo menos en tres o cuatro ocasiones. poniendo nuevas toallas de papel, hasta que la
caseina esilt completamente seca. Dejar que la caseina se seque completamente al aire durante uno o dos
dias y finalmente pesarla.
10. La densidad de la leche es de 1,03 g/ml. Calcular el porcentaje de caseina aislada.

2.Aislamiento de la lactosa.
1. Calentar la mezcla que se guardaba del experimento anterior a ebullicion suave durante
aproximadamente 10 minutos. Esto causara la precipitaci6n casi completa de Ias albuminas (proteinas
del suero).
2. Filtrar la mezcla caliente al vacio para separar las albtjminas precipitadas y el carbonato de calcio
que aun quede.
3. Concentrar el filtrado (transparente), en un vaso de boca ancha de 600 ml. con un mechero Bunsen,
hasta aproximadamente 30 ml. Utilizar varias varillas para ayudar a conseguir una ebullici6n homogenea
y evitar las salpicaduras que se producirian al ir aumentando el precipitado. Tambien se puede formar
espuma, si la mezcla entra en ebullicion con demasiada fuerza. Esto puede controlarse soplando
suavemente sobre la superficie de la disolucion de lactosa.
4. Anadir 175 ml de etanol del 95% (lejos de cualquier Ilama) y 1 6 2 g de carbon activo a la disoluci6n
caliente.
5. Despues de haberlo mezclado todo bien, filtrar la solucion caliente al vacio. El filtrado debe ser
transparente. El filtrado puede enturbiarse debido a la cristalizacion rapida de la lactosa, despues de la
filtracion al vacio. Si la turbidez aumenta con relativa rapidez al dejarla en reposo, debe evitarse otra
filtracion, pues se perderia producto.

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6. Pasar la disolucion a un matraz Erlenmeyer y dejarla reposar durante la noche o hasta que se inicie el
siguiente periodo de trabajo. En algunos casos, se requieren varios dias para que la cristalizacion haya
finalizado. La lactosa cristaliza en la pared y en el fondo del matraz.
7. Desalojar los cristales y filtrarlos al vacio.
8. Lavar el producto con unos pocos mililitros de etanol acuoso frio al 25 %. La lactosa cristaliza con
una molecula de agua, C12H22011.H20. 9. Pesar el producto cuando este completamente seco. La
densidad de la leche es de 1,03 g/ml. Con este valor, calcular el porcentaje de lactosa en la leche.

Resultados.

La densidad de la leche es de 1.03g/ml. con este valor se calculo el porcentaje de la casena y la lactose
de la leche.

Caseina.

% cas = 1.3g de casena * 100ml de leche /206gr =0-72% casena.

Su precipitacion fue completada formando una masa amorfa de color blanco ,amarillento luego de
retirarla del suero de la leche. El secado se dio complete despues de una semana y su peso fue de 7.6
gramos.

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Lactosa.
%Lac= 7.6 gr de lactosa * 100 ml /206 gr= 3.68%

Anlisis de resultados.

Como primer paso durante el procedimiento se calent la leche entera, con el fin de que se precipitara la
casena contenida en la leche. La casena es una protena conjugada de la leche del tipo fosfoprotena se
encuentra en forma de sal clcica (caseinato clcico) que se separa de la leche por acidificacin, el
siguiente paso fue aadir cido actico al 10% 11 ml a 40C con el fin de que la leche alcanzara un pH
de 4,6 (su punto isoelctrico: PH en que una sustancia tiene carga neta de cero) si no se llega a este PH
la precipitacin nunca ocurrir. Al llegar al punto isoelctrico se disuelve el fosfato de calcio (los grupos
fosfato se protonan), comienza la precipitacin de la casena y pasa lo que sucede con la
desnaturalizacin de las protenas en este caso la protena de la leche; casena pierde su estructuras de
orden superior (ya sea secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipptidica reducida a
un polmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional fija.
Al instante comienzan a formarse grumos en la superficie (la leche se cort) reaccin que indica
la precipitacin de la casena. Toda la sustancia solida se retira y del filtrado de la leche entera se obtiene
el suero lquido, el cual present un color amarillo mientras que el residuo fue un slido blanco que
finalmente formo una masa amorfa. Luego de una semana su peso fue de 7.6gr. El siguiente paso fue

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agregar carbonato de calcio al suero para decolorar la solucin y a la vez neutralizar el cido. Al
calentar, el carbonato de calcio comienza a precipitarse en el fondo del beacker con un color blanco,
precipitando adems casi por completo las albuminas o protenas del suero permitiendo retirarlas para
proceder al aislamiento de la lactosa. Se concentr la solucin hasta 30 mililitros para eliminar agua,
luego de apartar la solucin del mechero agregamos etanol 175 ml al 95% y 1.5 gr de carbn activo a la
solucin an caliente esto para deshidratar y llevar a la desestabilizacin de las micelas. Luego de batir
bien, se filtra al vaco para extraer los slidos ajenos a la lactosa a traves de un papel filtro. El filtrado
transparente se coloca en un Erlen meyer, una semana despus se encontr precipitado en el fondo y las
paredes del mismo. El cual fue filtrado al vaco, lavado con etanol acuoso y colocado sobre papel filtro
para dejar que secara. Con el producto ya seco se procede a pesarlo obteniendo finalmente 3.68 gr de
lactosa.

Cuestionario:
1.- Mencionar cual es la importancia biologica que tiene la caseina.
2.- Describir la importancia fisiologica de la lactosa
3.- Describir la patologia de la intolerancia a la lactosa

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Bibliografia:
1. Universidad de McMaster, Chem2o6 Lab Manual, 2008,
http://www.Chemistry.McMaster.CA/ ~ chem2o6/labmanual/
2. Experimentos sintticos de Minard, B., Chem35, la Universidad de PennState, 2006
http://Courses.Chem.PSU.edu/chem35/HTML/Experiments/Exp112.pdf
3. Universidad de Yeditepe, Departamento de ingeniera qumica, Manual de laboratorio de Qumica
bioorgnica, Estambul, 2006