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Informe de Prctica
Fisiologia 1
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Facultad:
Curso:
Profesora:
Saln:
Prctica:
Titulo:
Integrantes:
Ciencias de Salud
Prctica de Morfofisiologia 1
Dr. Villalobos
Laboratorio de Fisiologia 2
N5
Grupos Sanguneos - Reacciones de Incompatibilidad
Carlo Noeding Fischer
Kiara Camacho Caballero
Maria Luisa Alen
Maria Alejandra Rodriguez
Maria Teresa Yactayo
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Dia de Prctica:
Hora de Prctica:
Martes
12:10 a 14:00
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Fecha de Prctica:
Fecha de Entrega:
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16 de septiembre de 2014
23 de septiembre de 2014
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Tabla de Contenido
Objetivo:!
1!
Procedimiento:!
1!
Resultados:!
2!
Anlisis!
3!
Conclusin!
5!
Cuestionario:!
6!
Bibliografia:!
!!
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14
Fisiologia 1
13/09/2014
Objetivo:!
Al finalizar la prctica los estudiantes debern poder determinar el grupo sanguneo y el sistema
Rh. Igualmente debern presenciar la tcnica y comprender la aglutinacin de los hemates
enfrentados a una serie de antisueros conocidos. Por lo tanto este informe tratar de aplicar los
conceptos, leyes, teoras y modelos aprendidos en las clases de teora para comprender la
naturaleza de la Biologa, sus limitaciones y sus complejas interacciones con la medicina. Se
explicarn expresiones cientficas del lenguaje cotidiano segn los conocimientos biolgicos
adquiridos, relacionando la experiencia diaria con la cientfica. Se utilizar con cierta autonoma
destrezas investigativas, tanto documentales como experimentales.
Procedimiento:!
El primer experimento fue acerca de la determinacin del grupo sanguneo. Dicho se realiz
iniciando el proceso desinfectando la yema del dedo anular de la mano no dominante. Luego se
punz con una lanceta la yema del dedo desinfectado (sangre capilar). Por consiguiente se
coloc tres gotas de sangre capilar en una lmina porta-objetos a un centmetro de distancia entre
ellos (una al medio y otra a cada extremo de la lmina). En el siguiente paso se agreg una gota
de anticuerpos (aglutinina) Anti-A a la primera gota de sangre; Anti-B a la segunda gota y Anti-D a
la tercera gota. Para obtener el resultado se mezclaron ambos lquidos con un mondadientes y se
observ si haba aglutinacin, es decir, si exista una reaccin antgeno-anticuerpo. Dichos
resultados se utilizaron para proceder en identificar el Grupo y Factor del paciente.
El segundo experimento trato de reacciones de incompatibilidad. Para iniciar este experimento se
han escogido dos personas de grupos supuestamente incompatibles y obtuvo de cada una de
ellas 6ml de sangre en una jeringa heparinizada para luego colocarles en un tubo de ensayo. En
el siguiente paso se centrifug las muestras a 2000 r.p.m. por cinco minutos. Despus se retir el
plasma de ambas muestras con una pipeta Pasteur (lo mximo posible) y coloc en otro tubo de
ensayo mientras rotulando los tubos de ensayo con Plasma 1 y plasma 2. De cada una de
esas dos muestras se coloc una muestra extradita del empaquetado globular (1 c.c.) en tubos de
ensayo independientes. Luego se aad 2cc de suero fisiolgico obteniendo una solucin de
glbulos rojos. En esas ocasiones se rotularon los tubos con Sangre 1 y Sangre 2.
En el
siguiente paso se colocaron 0,5 cc de la solucin de glbulos rojos de un sujeto con 0,5 cc de
plasma del otro sujeto en otro tubo de ensayo rotulandolos P1-S2 y P2-S1. Al mismo tiempo se
colocaron 0,5 cc de la solucin de glbulos rojos de un sujeto con 0,5 cc de plasma del mismo
sujeto, en otro tubo de ensayo, lo que representar el tubo control rotulado con P1-S1 o P2S2. Luego se centrifugaron los 4 tubos a 1500 rpm durante 3 minutos. Despus se retir con una
jeringa el contenido sanguneo del fondo del tubo y extindalo en laminas portaobjeto diferentes
mientras que se observaron los resultados. Se observ la formacin de grumos as como el grado
de turbidez del plasma. Se clasificando la intensidad de la reaccin.
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Resultados:!
Los resultados que se han obtenido en el primer experimento con respeto a la determinacin del
grupo sanguneo corresponde al siguiente cuadro. Cada columna representa las observaciones
hechas en las distintas laminas despus de haber mezclado la sangre de los pacientes con los
antgenos. Se observ una reaccin positiva, es decir aglutinacin o una reaccin negativa, es
decir, una ausencia de aglutinacin.
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Casilla A
(Sangre + anti-A)
!!
Casilla B
Grupo sanguineo / Rh
(Sangre + anti-B)
A-
A+
AB -
AB +
B-
B+
0-
0+
La siguiente tabla muestra las observaciones hechas durante el segundo experimento con
respeto a las reacciones de incompatibilidad sangunea. Una reaccin positiva indica la
observacin de la aglutinacin sangunea, mientras una reaccin negativa significa que no se
observ una aglutinacin de la sangre del paciente.
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Glbulos Rojos
Plasma sujeto 1 !
Grupo A
Plasma sujeto 2 !
Grupo B
Sujeto 1: !
Grupo A
negativo
positivo
Sujeto 2 !
Grupo B
positivo
negativo
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Anlisis!
La determinacin del grupo sanguneo del primer experimento es una prctica habitual e
imprescindible para la transfusin de componente hemticos. La razn est en que el sistema
inmune de algunos individuos rechaza los hemates de otros. Esta reaccin inmunolgica est
mediada por anticuerpos y es fcilmente visualizable in vitro mediante reacciones de aglutinacin.
Se conocen ms de 20 grupos de antgenos eritrocitarios codificados en otros tantos loci gnicos,
para los cuales existen mltiples variantes allicas. El resultado son ms de 200 antgenos
eritrocitarios identificables. Estos antgenos varan en su inmunogenicidad. Los ms importantes
a efectos transfusionales son los antgenos del sistema H / ABO y los del sistema Rhesus (Rh),
los cuales hemos investigado durante esta prctica.1
!
Grupo
sanguineo
AB
Glbulos rojos
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En la membrana !
En el plasma
!
!
Antgeno
A
Anti-B
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Antgeno
B
Anti-A
Antgenos A y
B
No anticuerpos
No
antgenos
Anti-A y
Anti-B
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RECEPTOR
D
O
N
A
N
T
E
grupo
A
grupo
B
grupo
AB
grupo
O
grupo A
SI
NO
SI
NO
grupo B
NO
SI
SI
NO
grupo
AB
NO
NO
SI
NO
grupo O
SI
SI
SI
SI
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!El primer y segundo experimento tienen relacin a la prctica mdica. Antes de una transfusin se
analizan los eritrocitos del receptor para ABO y aparte de eso tambin para el receptor D
mediante antisueros anti-A, anti-B y anti-D; similar al proceso en la prctica. Simultneamente se
analiza el suero para detectar anticuerpos contra antgeno eritrocitarios (isoaglutininas), mediante
hemates A y B previamente tipados. Las reacciones positivas dan lugar a la aglutinacin de los
hemates, lo cual corresponde a las observaciones hechas durante el primer experimento. Para
asignar un grupo sanguneo, ambas pruebas deben dar un resultado coincidente. Los resultados
discrepantes deben analizarse cuidadosamente para determinar el grupo sanguneo del paciente.
Un test adicional es la prueba cruzada, que examina la compatibilidad entre suero del receptor
con los hemates del/los donantes. Esa parte corresponde al procedimiento del segundo
experimento en cual hemos mezclado la sangre de dos paciente supuestamente incompatibles.
Para ello, hemates lavados del donante se mezclan con suero del receptor, se incuban, se
centrifuga y se examina para hemlisis y aglutinacin.2 En nuestro caso hemos observado la
hemolisis de los dos pacientes debido a la reaccin antgenos (de los eritrocitos) y anticuerpos
(los cuales se encontraban en el plasma). Debido a que el primer paciente del grupo sanguneo A
contena anticuerpos contra el grupo B en su plasma, al mezclar dicha con los eritrocitos del
paciente del grupo sanguneo B se poda observar la aglutinacin de las mismas. Lo mismo
ocurri al mezclar los eritrocitos del paciente del grupo sanguneo B con el plasma del paciente
del grupo sanguneo A.
Conclusin!
La extraccin, el anlisis y determinacin del grupo sanguneo de cada individuo mediante la
utilizacin de reactivos Anti-(A,B,D) fue exitosa dando resultados claros y concretos. Se pudo
apreciar claramente el efecto de la exposicin de aglutingenos a aglutininas antagnicas para
poder entender la fisiologa detrs del rechazo inmunologico a transfusiones sanguneas entre
grupos antagonistas. Adicionalmente se podra mejorar el examen mediante la exploracin de la
presencia de otros antgenos menos comunes. Concluyendo dicho vemos que la variedad de
grupos sanguneos dificulta muchas veces la donacin de rganos, por
la probabilidad de
producir aglutinacin o hemolisis inmediata o tarda de los hemates con las tpicas reacciones
transfusionales que con frecuencia causan la muerte.
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Cuestionario:!
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a su vez con el sistema de inmunidad innata siendo el primero dependiente de las seales del
segundo.4 As mismo existen dos tipos de inmunidad activa adquirida, la humoral donde los
linfocitos B del cuerpo producen anticuerpos circulantes capaces de atacar al micro-organismo
invasor, y la mediada por clulas, donde los linfocitos T activados se habilitarn en los ganglios
linfticos y destruirn el microorganismo extrao.
Ambos tipos de inmunidad adquirida sern activados por antgenos que generarn anticuerpos
esto se debe a que la inmunidad adquirida no aparece hasta despus de que un microorganismo
o toxina extraa haya invadido el cuerpo, de esta manera el cuerpo reconocer la toxina extraa
de cada microorganismo y empezar a actuar. A continuacin, los linfocitos B y T, que derivan de
las clulas precursoras hematopoyticas pluripotenciales del embrin, sern los responsables de
propiciar los dos tipos de inmunidad, celular y humoral.
En el caso de los linfocitos B en la inmunidad humoral, estos son producidos en el hgado durante
la vida fetal y en la mdula sea durante el resto de la vida fetal y el nacimiento. Estos linfocitos B
secretarn activamente anticuerpos que son protenas grandes capaces de combinarse con los
antgenos y destruirlos, adems al tener una gran diversidad podrn llegar a
formar miles de
a quien
se ha inmunizado
activamente frente al antgeno. Esta se adquiere de forma natural durante la gestacin humana
mediante la transferencia transplacentaria de inmonoglobulina G materna. La Inmonoglobulina A y
la Inmonoglobulina M no son transportadas a travs de la placenta y el recin nacido tiene slo
pequeas cantidades de estos isotipos en su circulacin. Despus del nacimiento, el recin
nacido contina recibiendo Inmonoglobulina A pasiva a travs del calostro y la leche materna, que
ofrece proteccin local en el intestino, con slo cantidades minutos de alcanzar la circulacin.5
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En imagen anterior se puede apreciar la estructura de un anticuerpo caracterstico de la IgG, el
cual est compuesto de dos cadenas polipeptdicas pesadas y dos cadenas polipeptdicas ligeras.
El antgeno est unido a dos zonas diferentes en las porciones variables de las cadenas.1
Los linfocitos B son preprocesados en el hgado durante la mitad de la vida fetal y en la mdula
sea al final de la vida fetal. Estos son responsables de formar anticuerpos al poseer la capacidad
de combinarse con la sustancia antignica lo cual proporciona inmunidad humoral. Los linfocitos
B se encuentran en una gran diversidad, gracias a ello forman millones de tipos de anticuerpos
con diferentes reactividades especficas. En la superficie de la membrana plasmtica de estas
clulas se encuentran aproximadamente 100,000 molculas de anticuerpo que reaccionarn con
un solo tipo de antgeno el cual se va a unir de inmediato al anticuerpo en caso sea el adecuado.
De esta manera provoca un proceso de activacin donde los macrfagos cumplen una funcin
importante.1
Junto a los linfocitos presentes en el tejido linftico, se encuentran macrfagos los cuales
fagocitan y digieren la mayora de los microorganismos invasores. As, los productos antignicos
son liberados al citosol del macrfago y pasan a los linfocitos por contacto clula- clula. Este
proceso activa clones linfocitacios especficos los cuales gracias a la Interleucina 1 secretada por
los macrfagos, crecen y se reproducen de una manera ms rpida. 1
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ltimo, estn las Inmunoglobulinas D, una clase que predomina en la superficie de los linfocitos B
en su etapa de maduracin cuya funcin puede estar relacionada con la activacin de estas
clulas. 7
Una aplicacin de la prctica realizada en clase es el estudio de los anticuerpos y la posibilidad
de clasificar la sangre humana en grupos (A, B, O); la compatibilidad y la incompatibilidad entre
ellos. Por ejemplo, la incompatibilidad de un grupo sanguneo entre la madre y el feto puede llegar
a desarrollar anticuerpos maternos, los cuales van a atravesar la membrana placentaria y se van
a adherir a los hemates del feto produciendo as su destruccin. Este es un tpico caso de una
incompatibilidad ABO o Rhesus.8
3. Que son los antgenos y Superantgenos
Para el sistema inmune los antgenos son las seales particulares del agente patgeno al que
puede identificar. El reconocimiento de este puede desencadenar una respuesta inmunitaria o
no. Cuando lo realiza, el antgeno lo denomina inmungeno. Pero los receptores de linfocitos
leen solo una porcin del antgeno la cual se denomina epitope. Esto quiere decir que un
antgeno puede ser ledo por dos tipos de receptores que detecten diferentes epitopes.9 Los
antgenos poseen dos propiedades: la Inmunogenicidad, la cual es la capacidad de inducir la
formacin de anticuerpos y la Especificidad, que es la reaccin del antgeno solamente con el
anticuerpo cuya produccin han inducido.12
La interaccin de los linfocitos con el antgeno tiene lugar a travs de la unin de receptores
especializados de la superficie celular, especficos para el antgeno, que funcionan como
unidades de reconocimiento. En el caso de las clulas B, su situacin es sencilla debido a que la
inmunoglobulina unida a la membrana acta como receptor para el antgeno. En cambio en las
clulas T utilizan receptores para el antgeno diferenciados que tambin se expresan en la
membrana citoplasmtica, pero los receptores de la clula T (TCR) difieren de los receptores de
la clula B (BCR) de una manera radical; los TCR no pueden reconocer el antgeno libre como
puede hacerlo la inmunoglobulina. La mayor parte de las clulas T pueden reconocer al antgeno
solo cuando se presenta dentro de la hendidura de unin al pptido de una molcula del CMH.
Pero a pesar de esto se presenta una ventaja muy importante de las clulas T con respecto de
las clulas B es que pueden reconocer los antgenos que en gran medida estn confinados dentro
de las clulas y por consiguiente resultan inaccesibles a las inmunoglobulinas.10
Adems se puede definir al antgeno como cualquier sustancia capaz de unirse al BCR o al TCR.
No implicando que la generacin de esta unin de una respuesta inmune, pero tiene el potencial
de producirla. Existen algunos casos de los cuales los antgenos no pueden desencadenar una
respuesta inmunitaria por s sola, realizndolo mediante una sustancia que acta como
transportadora (carrier), convirtindose en inmungeno.9
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Los antgenos son reconocidos por dos clases de molculas: Los anticuerpos que estn presentes
como protenas unidas a la membrana sobre la superficie de las clulas B; La otra clase son los
receptores de clulas T que se encuentran sobre la superficie de estas clulas. Los anticuerpos
reconocen los antgenos que se hallan en la superficie de los patgenos. Los receptores de la
clula T reconocen pptidos o glucolpidos en el contexto de molculas del complejo mayor de
histocompatibilidad (CMH) en la superficie de las clulas del husped. Por lo tanto, se puede
considerar que los anticuerpos buscan directamente el material extrao.10
Finalmente los antgenos se aplican a toda sustancia que estimula la produccin de anticuerpo.
No obstante tambin se refiere a las sustancias qumicas, en general proteicas de elevado peso
molecular, as tambin como algunos polisacridos, que son capaces de activar positiva o
negativamente al sistema inmune en cualquiera de sus respuestas, por interactuar con los
lugares de combinacin de los receptores de las clulas T o B. La activacin positiva conducir a
una respuesta mediada por la produccin de anticuerpos (inmunoglobulinas) y/o clulas
especficas. La activacin negativa conduce a la falta de respuesta o tolerancia inmunolgica.12
Los superantgenos (SAgs) son molculas bifuncionales. Son protenas bacterianas. A travs de
un conjunto de interacciones con diversas clulas del sistema inmunitario, los superantgenos
nos estimulan en forma no especfica la proliferacin de las clulas inmunolgicas denominadas
linfocitos T.14 Los superantgenos que interactan con al menos dos receptores expresados sobre
diferentes clulas. Siendo capaces de reaccionar con distintas molculas del CMH clase II y con
el TCR de
linfocitos T luego de unirse a un pequeo segmento (VB) del TCR. Esto quiere decir que los
superantgenos no estimulan una respuesta dirigida exclusivamente contra sus determinantes
antignicos. Estos interaccionan con los segmentos VB del TCR de un gran nmero de linfocitos,
independientemente de la especificad de sus sitios de reconocimientos. Una vez que los SAgs
estimulan los linfocitos T, stos se multiplican y liberan al exterior una gran cantidad de
mediadores que, a su vez, estimulan otras clulas como los macrfagos y los linfocitos B.11
En respuesta a los superantgenos los linfocitos T son estimulados para que liberen cantidades
muy grandes de productos qumicos denominados citosinas. Estas citosinas son pequeas
hormonas proteicas producidas por diversas clulas corporales, en especial los linfocitos T, que
regulan las respuestas inmunitarias y son medio para la comunicacin entre clulas.14
Los superantgenos son capaces de interactuar con 5-20 de cada 100 clulas T. La accin final
del superantgenos se traduce en la produccin y liberacin por parte de los linfocitos T de
niveles excesivamente altos de Il-2, que actan de manera local, pero cuando existen grandes
cantidades, puede llegar al torrente circulatorio produciendo as una activacin masiva del
sistema inmune.14
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Las SAgs ms conocidos son las exotoxinas de los estafilococos que eran las responsables de las
intoxicaciones alimenticias y el shock exotxico. Luego se ha descubierto que estas exotoxinas
se pueden unir al segmento VB del TCR y actan como SAgs o los endgenos que si se reproducen
en la lnea germinal, como los retrovirus.11
!
4. Qu son los grupos sanguneos. Cuantos grupos sanguneos existen
Las distintas propiedades antignicas en las membranas eritocitarias constituyen la base para la
diferenciacin de los grupos sanguneos. Resumiendo. Un grupo sanguneo es una clasificacin
de la sangre en base a las caractersticas de la membrana de los glbulos rojos o hemates y del
suero de la sangre. Las dos clasificaciones ms importantes para describir los grupos sanguneos
son los antgenos (el sistema ABO) y el factor Rh.15
El sistema ABO fue descubierto por Karl Landsteiner en 1901, convirtindolo en el primer grupo
sanguneo conocido; su nombre proviene de los tres tipos de grupos que se identifican: los de
antgeno A, de antgeno B, y O".15 Los grupos sanguneos se transmiten genticamente de forma
mendeliana. A y B son equipotentes y dominantes sobre O. Rh+ que tiene presencia de
aglutingeno es dominante sobre Rh que no posee aglutingeno.17 Los aglutingenos son
oligosarcaridos que contienen N-acetil-D-glucosamina, L-fructuosa y D-galactosamina y forman
parte de las glicoprotenas de la membrana.17 Estos aglutingenos reaccionan con
inmunoglobulinas especificas provocando la aglutinacin de los eritrocitos y posteriormente su
lisis.17 Los antgenos eritrocitarios se han clasificado en sistemas, colecciones y grupos. En la
actualidad se han descrito 26 sistemas de grupos sanguneos. El sistema ABO encabeza la
designacin numrica propuesta internacionalmente para la identificacin de estoy sistemas de
grupos sanguneos.18
Los azcares que confieren la especificad antgena ABO se denominan inmunodominantes. Los
anticuerpos del sistema ABO son de gran importancia clnica; ya que existen desde el momento
de dar una respuesta inmunolgica. Los anticuerpos se producen contra los antgeno ABO de los
cuales carece el individuo; son vlidos los producidos a partir de los cuatro a seis meses de edad,
ya que antes de ese tiempo, los anticuerpos circulantes en los bebes provienen de la madre
puesto que les han sido transferidos de la madre a travs de la placenta.18
La informacin gentica que tiene cada individuo condiciona la sntesis de enzimas que
transfieren a la cadena de carbohidratos el azcar que le confiere la determinante antignica
especfica (inmunodominante). Las diferencias entre las enzimas para el grupo A y B son
sencillas; los individuos de grupo O sintetizan una protena sin actividad enzimtica que, por
tanto, no es capaz de agregar ningn azcar a la sustancia.18
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Existen 4 grupos sanguneos: El grupo sanguneo tipo A con aglutininas anti A que son contra el
aglutingeno A en el plasma sanguneo, el grupo B con aglutingenos B en los eritrocitos y
aglutininas anti A en el plasma sanguneo, el grupo AB que posee dos aglutingenos los cuales
son Ay B que se encuentran en las membranas plasmticas de los glbulos rojos, pero carece de
aglutininas plasmtica y por ltimo el grupo O que carece de aglutingenos en la superficie de sus
eritrocitos, en el plasma contiene dos tipos de aglutininas los anti A y los anti B.1
Una caracterstica del grupo A y B en conjunto es que tienen similitudes
estructurales con
algunos hidratos de carbono de la superficie celular de las bacterias comunes. Durante las
infecciones causadas por estas bacterias las personas que carecen de antgeno A, del antgeno B
o de ambos; por consiguiente no los toleran producen anticuerpos contra ellos.16
En el caso de las transfusiones de sangre si una persona del grupo O recibe una transfusin de
sangre del grupo A O B los anticuerpos se unen los eritrocitos transfundidos y causan la fijacin
del complemento y la eliminacin rpida de los eritrocitos de la circulacin. Adems de frustar el
propsito de la transfusin de sangre del grupo A o B estas reacciones hemolticas pueden causar
fiebre, escalofros, shock, insuficiencia renal e incluso la muerte.16
Para prevenir la hemolisis los pacientes que necesitan una transfusin solo reciben sangre del
tipo ABO compatible. La mayora de personas posee uno de los cuatro grupos sanguneos O, A, B
y AB, lo Que determina que logra la compatibilidad para este sistema de antgenos sea mucho
ms simple. Se han definido alrededor de otros 20 sistemas polimorfos de antgenos de grupo
sanguneo, pero salvo los antgenos del grupo Rhesus(Rh), que tambin deben ser compatibles,
pero su compatibilidad es menos importante para la transfusin que el sistema ABO.16
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Bibliografia:!
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