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Cultivo de Microrganismos
Na natureza os microrganismos existem como cultura mistas
Meios de Cultura
NUTRIENTES
Classificao quanto a concentrao mnima
Micronutrientes
Mo2+, Zn2+, Cu2+, Mn2+,
Fe2+, Ca2+, Na2+, vitaminas
e hormnios de
crescimento
Custos relevantes
C, N e O
NUTRIENTES
Carbono
Nitrognio
Hidrognio
Oxignio
Enxofre
Fsforo
10-4 10-3
Potssio
10-4 10-3
Magnsio
10-4 10-3
10-2
10-3
10-4
Preparo do Meio
Slido em placa
Tubo (1)
horizontal e (2)
inclinado
http://www.youtube.com/watch?v=
0heifCiMbfY
MEIOS DE CULTURA
Composio dos Meios de Cultura
Meios sintticos
Composio qumica exata
qualitativa
e quantitativamente
conhecida
Meios complexos
Meios contendo um ou mais
produtos cuja composio
qumica no
perfeitamente definida
NUTRIENTES
Fontes de Carbono e Nitrognio para meios industriais
Carbono
Forma
Nitrognio
Glicose
Glicose pura
Cevada
Monoidratada
Carboidratos hidrolisados
1,5-2,0
Lactose
Melao de
beterraba
1,5-2,0
Polissacardeos
Cevada, farinha de
amendoim, farinha de
aveia, farinha de soja
Farinha de
amendoim,
de soja
8,0
Sacarose
Melao de beterraba,
melao de cana, acar
bruto, acar refinado
Farinha de
aveia, de
centeio
1,5-2,0
gua de
macerao
de milho
%N
Fase de
Laboratrio
Fase
Industrial
Ar/Esterilizao
Preparo do meio
de cultura/
Esterilizao
Fermentao
Controle
Processos de
Separao,
Purificao e
Tratamento
Resduos
Produtos
Sub-produtos
Substratos
(Si)
Clula
Produtos
(Pi)
Clulas
Substratos
Clulas
Crescimento Celular
Liberao de Produtos e Metablitos
Consumo de Substrato
Modo de Operao
Tipos de
processos
fermentativos
descontnuos
contnuos
Fase de
Laboratrio
Fase
Industrial
Ar/Esterilizao
Preparo do meio
de cultura/
Esterilizao
Fermentao
Controle
Processos de
Separao,
Purificao e
Tratamento
Resduos
Produtos
Sub-produtos
Substratos
(Si)
Clula
Produtos
(Pi)
Clulas
Substratos
Clulas
PREPARO DO INCULO
Inculo: suspenso celular com concentrao
adequada para garantir a fermentao de um
dado volume de mosto, em condies
econmicas
Volume do inculo:
til do fermentador
Incubao
Cultura
pura
Volume de
meio = V1
Incubao
Volume de
meio = V2> V1
Volume de
meio = V3> V2
Fase de Laboratrio
Fase Industrial
Dornas
Incubao
Volume de
meio = V4> V3
Volume de
meio = V5> V4
A taxa de crescimento
varia de acordo com a
fase do crescimento
Curvas de X, S e P em funo de t
S
Concentrao
dS
dt
dX
dt
X
dP
dt
Tempo
S
Concentrao
dS
dt
Consumo de substrato:
S = (1/X)(dS/dt)
dX
dt
X
dP
dt
t
Crescimento celular:
X = (1/X)(dX/dt)
Formao de produto:
P = (1/X)(dP/dt)
Tempo
E
=0
= MAX
=0
F
< MAX
< MAX
< MAX
Tempo de cultivo
A: fase de latncia ou lag
B: fase de acelerao
C: fase log ou exponencial
D: fase de desacelerao
E: fase estacionria
F: fase de declnio ou morte celular
- taxa especfica de
crescimento celular:
= (1/X) dX/dt
Crescimento diuxico:
alteraes metablicas.
utilizao
da fonte C2
utilizao
da fonte C1
tempo
Crescimento exponencial :
dX/dt = X
X: concentrao celular
t: tempo de cultivo
= max
td = (ln 2)/max
Metablitos Primrios
Metablitos Secundrios:
Produtos gerados
na fase de crescimento
exponencial
No associados ao crescimento;
Muitos metablitos apresentam
maior produo na fase
estacionria
ln X
tempo
aumentar
dN/dt = -k N
Forma integrada:
N = Ns e-kt
onde: N: concentrao de clulas viveis
Ns: concentrao de clulas viveis no final da
fase estacionria
k: constante da taxa de morte
YX/S = - X/S
YP/X = P/X
YP/S = - P/S
Os coeficientes de
rendimento aparentes no
so constantes verdadeiras
Substrato
Biomassa
Produto extracelular
Clula
Energia para crescimento
Energia manuteno
ST =
X
=
TERICO
X
=
( + )
OBSERVADO
X : Variao de Biomassa
material de interesse
(manuteno)
EXERCCIO:
Rendimento Terico (Y) X Aparente (Y)
A reao para a produo aerbica do cido actico a partir
do etanol :
C2H5OH + O2 CH3CO2H + H2O
(etanol)
(cido actico)
A bactria Acetobacter aceti adicionada em um meio
vigorosamente aerado contendo etanol a uma concentrao
inicial de 10 g/l. Aps algum tempo, a concentrao de etanol 2
g/l e a concentrao de cido actico produzido 7,5 g/l.
Compare o rendimento aparente com o terico.
Explique a razo das diferenas ou semelhanas dos valores
encontrados.
qP = (1/X)(dP/dt) = Yp/x
X
ou
P
tempo
ou
P
qP = X +
Exemplo:
cido ctrico
tempo
qP = = constante
X
ou
P
tempo
DETERMINAO DA CONCENTRAO
DE CLULAS
MTODOS
Diretos: determinao da populao total e/ou do
nmero de clulas viveis (sujeitos a interferentes)
Indiretos : baseados na medida de consumo de
substrato e/ou na formao de produtos
MTODOS DIRETOS
Mtodo do Hemocitmetro
A suspenso celular, colocada em uma cmara de volume conhecido,
observada no microscpio ptico.
profundidade: 0,1 mm
1 mm X 1 mm X 0,1 mm = 0,1 L
MTODOS DIRETOS
Mtodo de Plaqueamento
Placas de Petri com meio de cultura gelificado so usadas para a
contagem de clulas viveis (capazes de se reproduzir)
MTODOS DIRETOS
Medida da Massa Seca
Aplicvel a meios de cultura sem outras partculas suspensas.
Centrifugao
Determinao
rpida:
volume empacotado
Filtrao
Secagem
80oC, 24 h
Massa
seca
celular
MTODOS INDIRETOS
Mtodos Indiretos:
Baseados na medida de consumo de
substrato e/ou na formao de
produtos
Monitoramento de componentes intracelulares:
DNA, protenas, RNA, ATP, NADH E outros
Quantificao de substratos:
Oxignio, fontes de carbono, fontes de nitrognio
Quantificao de produtos:
Etanol e cido ltico (processos anaerbios);
CO2 (processos aerbicos);
H+ (queda no pH resultante do uso de amnio)
Monitoramento da viscosidade:
Aumento: Crescimento de miclios
Formao de polissacardeo extracelular
Reduo: substrato = polmero biodegradvel
Bibliografia recomendada
o DORAN, P. M. - Bioprocess Engineering Principles, 2a edio,
Editora Academic Press Ltd., London, 1997. cap. 11
o SHULER, M. L.; KARGI, F. - Bioprocess Engineering Basic
Concepts, Editora Prentice- Hall International Inc., Englewood Cliffs,
1992. 2a. Edio cap. 6