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PREPARACIN Y TINCIN DEL FROTIS SANGUNEOS

PROPSITO: Obtencin de un frotis sanguneo coloreado para el


reconocimiento de los elementos celulares de la sangre.
MUESTRA REQUERIDA: Sangre capilar o venosa recin extrada sin
anticoagulante o sangre con anticoagulante EDTA.
MATERIAL Y REACTIVOS:
- Portaobjeto de vidrio con extremo esmerilado.
- Alcohol etlico al 70%.
- Torunda de algodn.
- Marcador de vidrio.
- Bandeja o soporte para la coloracin.
- Aceite de inmersin.
- Reloj marcador.
- Perilla de hule.
- Papel toalla.
- Guantes descartables.
- Solucin de Wright.
- Buffer pH 6.8.
PROCEDIMIENTO:
- Antes de utilizar los portaobjetos de vidrio, limpiarlos con alcohol y aclarar
con agua.
-Identificar la
lmina
adecuadamente
portaobjeto (parte esmerilada).

en

el

extremo

del

- Colocar en el portaobjeto una pequea gota de sangre de 2 mm de dimetro


a una distancia de 2 a 3 mm del extremo del portaobjeto y hacer rpidamente
el extendido. (Anexo 6)
- Para evitar la coagulacin; se puede utilizar sangre con EDTA. (Siempre
conviene realizar cuando menos dos frotis).
- Poner la lmina extensora a un ngulo de 45 del portaobjeto y moverla hacia
atrs para que haga contacto con la gota, que debe extenderse rpidamente.
- El extendido debe tener unos 30 mm. de largo. (Anexo 6).
- Dejar secar a temperatura ambiente.

- Colocar la preparacin de sangre, completamente seca, sobre un soporte. (no


necesita fijacin previa pues el metanol
del
Wright
fija la
preparacin).
- Cubrir todo el frotis con coloracin de Wright y dejarlo en reposo 3 minutos (o
el tiempo necesario segn la maduracin del colorante).
- Agregar una cantidad igual de buffer (pH 6.8) evitando derramar el Wright,
mezclar con una perilla de hule con suavidad para asegurar una mezcla
uniforme, aparecer una pelcula verde metlico, dejarlo en reposo por 5
minutos o el tiempo necesario segn la maduracin del Wright. - Lavar la
lmina con agua de chorro hasta quitar el exceso de la mezcla.
- Limpiar la parte posterior del portaobjeto con una torunda de algodn
impregnada con alcohol, para eliminar todos los restos de colorante.
- Dejar secar la preparacin al aire colocando la lmina en posicin vertical en
una rejilla para portaobjeto.
FUENTES DE ERROR: - Falta de mezclado de la sangre previo a la elaboracin
del frotis - Irregularidades
en
la
superficie
del
frotis y
espacios
en
blanco. - Que el frotis se extienda hasta el borde de la
lmina. - Extendidos gruesos o muy delgados. - Tiempos de coloracin
inadecuados. - Mal lavado de la lmina. - Buffer con pH muy cido o alcalino. Falta de
filtracin
del
colorante
del
Wright. - Uso de
portaobjetos con polvo, grasa o huellas dactilares.