UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA

REA DE LA SALUD HUMANA

CARRERA DE LABORATORIO CLNICO.
BACTERIOLOGA
TIPOS DE HEMOCULTIVOS
TRABAJO AUTNOMO N.- 5
Docente: Dra. Elsa Ramrez
Alumnos:

Jonathan Aucapia
Jhordy Crdova
Gina Jaramillo
Jessica Torres
Cristina Vian
Ciclo: 5
Paralelo: 2
Fecha: 13/12/2016

LOJA- ECUADOR
2016

HEMOCULTIVOS
Se llama hemocultivo al cultivo de microorganismos presentes en la sangre, a travs
del el cual se detectan infecciones transmisibles por el torrente sanguneo.
Indicaciones
Pacientes con fiebre > 38 C. o cuya temperatura sea inferior a 36 C.
Pacientes con leucocitosis o leucopenia
Pacientes con trombopenia o alteraciones de la coagulacin de causa desconocida
Pacientes con infeccin focal de causas no claras
Pacientes con deterioro uni o multiorgnico, shock o inestabilidad hemodinmica
Procedimiento

Informacin previa:
Debe requerirse informacin acerca del diagnstico presuntivo, curva trmica y
antibioticoterapia recibida. En este ltimo caso interesa conocer la hora de
administracin del antibitico ya que conviene obtener las muestras cuando el nivel de
antibitico circulante sea mnimo, es decir antes de la administracin de la nueva dosis
del mismo.

Preparacin de la piel:

El desinfectante de eleccin es tintura de iodo al 2% o solucin de iodo-povidona al

10%. Cuando existe hipersensibilidad al iodo conviene emplear alcohol 70. Una vez
determinado el sitio de puncin, desinfectar la piel de la zona elegida y el tapn de
goma del frasco de Hemocultivo. En todos los casos el desinfectante debe actuar
durante 1 minuto. No efectuar una nueva palpacin luego de desinfectada la piel a
menos que el dedo haya sido similarmente descontaminado o se utilicen guantes
estriles.
Extraccin:
La muestra puede obtenerse por puncin arterial o venosa empleando jeringa y aguja
estriles. Si no da resultado la primera puncin, el nuevo intento debe efectuarse con
una aguja nueva. A los efectos de descartar contaminaciones, las muestras sucesivas de
un hemocultivo seriado tienen que obtenerse de distintas zonas de puncin. Luego de
efectuada la extraccin de sangre, es conveniente remover la tintura de iodo con alcohol
para evitar fenmenos txicos locales.
El nmero indicado de extracciones para poder documentar una bacteriemia es de 2 a
3 venopunciones, siempre en lugares distintos. Esto se hace as para poder contrastar, y
comprobar si hay contaminacin o bacteriemia verdadera. Por eso, al laboratorio de
microbiologa suelen llegar cuatro frascos de hemocultivo de un mismo paciente: 2
aerobios y 2 anaerobios. Mediante este procedimiento, logran detectarse el 95% de las
bacteriemias. (Remedios Castao, 2012)
Volumen de sangre:
Segn ensayos sobre medios con polianetol sulfonato de sodio (PSS), las diluciones
de sangre en el medio recomendadas, fluctan entre 1: 5 a 1:10. En el caso de lactantes
o nios pequeos, pueden ser necesarias diluciones mayores. Por lo tanto, y respetando
la concentracin de PSS presente en el medio, los volmenes aconsejados son los
siguientes:
Hemocultivo Neonatal (contiene 10 ml de medio de cultivo): inocular 0,5-1 ml de
sangre del paciente.
Hemocultivo Peditrico (contiene 20 ml de medio de cultivo): inocular 1-2 ml de
sangre del paciente.

Hemocultivo Adulto (contiene 50 ml de medio de cultivo): inocular 5 ml de sangre

del paciente.
Inoculacin de los frascos:
Una vez retirada la parte central de la tapa metlica del frasco de Hemocultivo y
efectuada la desinfeccin del tapn de goma, inyectar la sangre cuidando especialmente
no introducir aire. Mezclar de inmediato por inversin para permitir la accin
anticoagulante.
Importante:
- Nunca una sola muestra puede servir para descartar una bacteriemia.
- Tampoco son tiles numerosos especmenes. Se considera que tres son suficientes
en la mayora de los casos.
- La extraccin debe hacerse tan pronto como sea posible, al aparecer el cuadro
febril.
- Es aconsejable efectuar la recoleccin de la muestra, media a una hora antes del
pico febril, cuando ste pudo ser detectado, y siempre previamente a la terapia
antibitica.
Para toma de muestras a travs de catteres centrales.
Utilizar la va proximal en el catter.
Suspender las infusiones en el momento de obtener la muestra de sangre, si las
condiciones clnicas del paciente lo permiten.
Extraer una muestra de sangre 3 a 5 mL en el paciente peditrico y 15 30 mL, en
el paciente adulto. Evite la contaminacin de la muestra obtenida y deseche. Inocule
la muestra en el frasco #3 (tapa azul), las dos muestras restantes provienen de dos
muestras perifricas (20 mL de un brazo distribuidas 10 mL en el frasco #1 (frasco
tapa amarilla) y los 10 mL restantes en el otro frasco tapa azul (frasco #2).
Aspirar lentamente para evitar la hemlisis de la muestra y/o el colapso del catter
o del vaso. La presencia de burbujas en la sangre durante la aspiracin indica que se
est aplicando demasiada presin.

Nmero y tiempo de hemocultivos: Tres botellas de hemocultivos en un periodo de

24 horas es el indicado. Los hemocultivos sern extrados de acuerdo con las polticas
de la Institucin, siguiendo la recomendacin de no exceder los 30 minutos entre las
tomas
Incubacin
Se incuba a 35-37 C. Como regla general incubar los frascos durante 7 das;
incubaciones prolongadas por ms de 7 das, son necesarias para grmenes difciles de
detectar, como Actinobacillus, Cardiobacterium, Eikenella, Haemophilus, Neisseria spp.
Tambin en endocarditis causada por levaduras o cuando el paciente ha recibido terapia
antibitica.
Importante: si los frascos inoculados no pueden llevarse a la estufa de incubacin de
inmediato, tienen que conservarse a temperatura ambiente hasta el momento de remitir
al laboratorio. En ningn caso se deben colocar en heladera.
Interpretacin de los resultados
Al menos una vez al da observar los frascos de los Hemocultivos inoculados con la
muestra del paciente. La notable transparencia de los Hemocultivos permite visualizar a
travs del frasco la turbidez, el cambio de color, la hemlisis o burbujas de gas. Estos
datos permiten sospechar la existencia de un desarrollo microbiano incipiente. Para que
estas caractersticas puedan ser observadas fcilmente debe evitarse la agitacin del
frasco cuando se retira de la estufa
Coloraciones y subcultivos:
Ante sospecha o evidencia de desarrollo microbiano en alguno de los frascos, se debe
realizar la coloracin de Gram y subcultivos. Cuando no existieran evidencias de
desarrollo, este procedimiento debe efectuarse de igual forma a diferentes tiempos y
previo al descarte de los hemocultivos. La tcnica operatoria es la siguiente:
- Desinfectar el tapn de goma del frasco.
- Extraer aproximadamente 0,25 ml de medio con jeringa y aguja estriles. Cuando se
introduce la aguja debe sujetarse fuertemente el mbolo de la jeringa por si existiera

presin de gas debida a productos de fermentacin. Invertir el frasco y retirar la

muestra.
- Transferir la muestra a un tubo estril intermedio o subcultivar directamente en
Sangre Agar, Chocolate Agar
- Depositar una gota de la muestra en un portaobjetos y efectar la coloracin de
Gram. Actualmente se considera ms til la coloracin con naranja de acridina, para el
examen rpido por microscopa de fluorescencia de extendidos de sangre o de
hemocultivos, para facilitar su diferenciacin respecto de la tincin de base del
material proteico de la muestra. Permite la deteccin temprana de cantidades tan
pequeas como 102 microorganismos por ml de caldo.
Los subcultivos deben incubarse preferentemente en atmsfera con tensin de CO2
aumentada (5-10%) y en anaerobiosis (jarras anaerbicas).
Un hemocultivo es positivo en los siguientes casos:
- Cuando el mismo germen se asla en dos o ms muestras.
- Cuando se lo encuentra en una sola muestra pero simultneamente se lo recupera en
otro material extrado al paciente (por ejemplo orina, L.C.R.).
- Cuando se lo recupera de una o ms muestras y el ttulo de anticuerpos frente a la cepa
aislada es significativo o asciende durante la evolucin del proceso.
- En aquellos casos en que el microorganismo sea recuperado de una sola muestra y el
germen hallado no corresponde a la flora habitual de piel, siempre que el hallazgo est
relacionado con el cuadro clnico. Por ejemplo: Escherichia coli, Klebsiella spp.
Salmonella spp., Brucella spp., etc.
- Se considera como posible contaminacin el hallazgo de un germen habitual de la
flora cutnea en una sola de las muestras obtenidas, siendo el ttulo de anticuerpos no
significativo. Pero es necesario tener en cuenta el estado del paciente.
Importante: el hallazgo de un microorganismo en muestras de hemocultivos, an en
aquellos casos que se presume contaminacin debe ser motivo de evaluacin por el
equipo de profesionales para definir la situacin.

Control de Calidad
- Claridad del medio preparado: Transparente.
- pH Final: 7.3 0.2.
- Coagulacin: Negativa.
- Desempeo microbiolgico: crecimiento de inculos 10-100 UFC/frasco.
La obtencin de 2-3 hemocultivos en 24 horas, no slo aumenta la probabilidad de
recuperar las bacterias a partir de la sangre sino que tambin permite diferenciar una
bacteriemia verdadera de una contaminacin. (INR, 2015)
TIPOS DE HEMOCULTIVOS
Existen dos mtodos de procesamiento de los hemocultivos:
Manuales

Convencional

Bifsico

Lisis-filtracin

Lisis-centrifugacin

Manomtrico

Automatizados

Radiomtricos y no radiomtricos

Sistemas automticos de monitorizacin continua

Mtodos manuales
a

Convencional
Es un mtodo simple que consiste en la observacin macroscpica de signos de

crecimiento en una pareja de frascos que contienen medios de cultivo y en los que se ha
inoculado sangre del paciente. Los medios de cultivo ms utilizados son: Caldo triptosa

soja, Columbia, Infusin cerebro corazn, Brucella, Tioglicolato, Caldo de peptona

suplementado.
Los frascos de hemocultivo cuentan con un anticoagulante. El que ms se utiliza es
el SPS (polianetol sulfonato sdico) en una concentracin que va desde el 0,006 al
0,050%. Este anticoagulante se aade para reducir la capacidad bactericidas de la
sangre, y favorecer el crecimiento de los microorganismos. El medio de cultivo se
inyecta al vaco en una atmsfera de CO2.
Despus de esta inoculacin, a uno de los
frascos se le inyecta una aguja que permite el paso
al interior de oxgeno atmosfrico, creando as un
medio aerobio. El otro frasco no se ventila, para
permitir

un

potencial

xido-reduccin

lo

suficientemente bajo como para permitir el

crecimiento de bacterias anaerobias.
Se incuban a 35-37 C. que es una temperatura muy
cercana a la del cuerpo humano, y que demuestra un mayor
aislamiento de microorganismos en un perodo breve de
tiempo. La mayora de los microorganismos que producen
bacteriemia se aslan en los hemocultivos tras un tiempo de
18 a 72 horas siguientes a su incubacin. Ms del 95% de los microorganismos se aslan
durante la primera semana, lo que motiva que se mantenga la incubacin durante 7 das.
Los frascos han de ser observados a diario, para ver si hay signos de crecimiento
bacteriano. Estos signos pueden ser: Enturbamiento del medio, Hemlisis, Gas,
Formacin de colonias en el fondo del frasco.
b

Bifsico
El medio bifsico est compuesto por una base slida y otra lquida. Si se inclina el

frasco, el medio lquido cubre al slido, realizando con ello un subcultivo, tantas veces
como sea necesario sin necesidad de abrir la botella. Este mtodo result eficaz para el
aislamiento de la Brucella spp.

Una vez que los frascos llegan al laboratorio con la sangre inoculada, los tapones se
sustituyen por cilindros de rosca que contienen distintas superficies con distintos tipos
de agar. Lo que se hace es invertir el frasco para que la sangre impregne el agar, tarea
que se debe hacer a diario.
Este mtodo es ms rpido y mejor para la deteccin de bacterias y hongos si se
compara con el mtodo convencional. No obstante, no es adecuado para el cultivo de
anaerobios, ya que hay que abrir la botella para adaptar el cilindro. Por eso, se
complementa con otro frasco para el cultivo de anaerobios.

Lisis-filtracin
Mediante este procedimiento, se filtra la sangre para retener las bacterias, una vez

que se ha producido la lisis (rotura de la

membrana celular) de las clulas sanguneas.
Los que se siembra en los medios de cultivo
es el filtro que se ha utilizado. A pesar de ser
una tcnica conocida desde hace muchos
aos, an no ha sido introducida al mercado.
Ello es debido a que requiere tanto tiempo,
que no se hace aconsejable para un trabajo
rutinario.
d

Lisis-centrifugacin

En la lisis-centrifugacin, la sangre inoculada se mezcla en el

interior de un tubo que contiene saponina como agente lisante,
polipropilenglicol como agente antiespumante, SPS y EDTA
como anticoagulantes y un lquido fluoroqumico inerte, para
producir la lisis de las clulas sanguneas.
Despus, los microorganismos se separan de los componentes
sanguneos mediante centrifugacin, a 3.000 R.P.M. durante 30
min. Una vez hecho esto, se desecha el sobrenadante y se
siembra el sedimento en los medios de cultivo. Uno de los
sistemas de lisis-centrifugacin es el Isolator. A travs de l, se recupera mayor cantidad
de microorganismos y con mayor rapidez que con los procedimientos convencionales.
Est comprobado que es un sistema eficaz para la deteccin de levaduras. Sin
embargo, tiene varios inconvenientes: Es un sistema caro, laborioso, las muestras se han
de procesar individualmente, Hay que esperar 30 minutos tras su extraccin para que
sean procesadas, Conlleva un alto riesgo de contaminacin de la muestra.

Referencias
INR. (Junio de 2015). Manual de toma y transporte de muestras
microbiolgicas. Obtenido de
http://iso9001.inr.gob.mx/Descargas/iso/doc/MOP-SIB-09.pdf
Remedios Castao, D. O. (Octubre de 2012). Hemocultivos. Obtenido de
https://analisisclinicosblog.files.wordpress.com/2012/10/hemocultivos.
pdf