PRCTICA DE LABORATORIO

UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA

GESTIN PRODUCTIVA 1.2
INGENIERA QUMICA

EFECTO DEL pH SOBRE LA AMILASA

OBJETIVOS

Identificar la influencia de los cambios de pH sobre la actividad enzimtica.

FUNDAMENTO TERICO
Para cada enzima existe un ptimo del pH a que crean las condiciones ms favorables
para el mantenimiento de la conformacin funcionalmente activa de la molcula. Los
grupos amino y carboxilo de los restos de aminocidos ionizados a una magnitud de pH
determinada, participan en el mantenimiento de la conformacin de la molcula protenica
necesaria para la formacin de los centros catalticos de enzima y favorecen tambin a su
ligacin con el sustrato. A una magnitud de pH distinta se altera la ionizacin de los
grupos correspondientes, y como resultado se rompen los enlaces que aseguran la
formacin de los centros catalticos, y la enzima se inactiva. A los valores de pH muy altos
o muy bajos las enzimas se desnaturalizan.
REACTIVOS
Cloruro de sodio al 0,3%
Solucin de lugol
Solucin de Almidn al 1% disuelto en una solucin de ClNa 0,3%
PBS (buffer de fosfatos)
cido ctrico 0,1M
Hidrxido de Sodio
Agua destilada (comprar porque es para realizar un enjuague bucal)
Amilasa
MATERIALES Y EQUIPOS
3 Tubos de ensayo
2 Vasos de precipitacin 50ml
2 balones de 100ml
1 probeta de 100ml
1 pH metro
2 Gradilla
1 Pera
1 Bao maria
1 Termmetro
1 Pizeta

PRCTICA DE LABORATORIO
PROCEDIMIENTO
1. Preparar las soluciones amortiguadoras: pH 5, 6,8 y 8, se toma 50 ml de PBS,
y se ajusta el pH correspondiente con cido ctrico al 0,1 M para el buffer de
pH inferior a 7 y el de pH alcalino con Hidrxido de Sodio.
2. Enjuagar la boca con aproximadamente 20 ml de agua destilada.
3. Colocar 3 ml de esta solucin en cada tubo de ensayo, y rotular: 4, 5 y 6.
4. En los tres tubos colocar 3ml de la solucin amortiguadora:
# Tubo
Solucin amortiguadora (pH)
4
5
5
6.8
6
8
5. En cada tubo colocar 5 ml de la solucin de almidn.
6. Colocar los tubos en el bao mara por 10 minutos a 37 C.
Transcurrido este tiempo, en los 3 tubos colocar 1 gota de lugol, y observar los
resultados observados e interpretarlos.
CUESTIONARIO
Estas preguntas deben responderlas antes de realizar la prctica
o
o
o
o

Qu es el pH?
Qu es una sustancia amortiguadora o buffer y la importancia que tiene
en la estabilizacin del pH?
Cmo est formado el Buffer PBS?
Qu es la actividad enzimtica de las enzimas y qu factores influyen
para que no se produzca?

o
BIBLIOGRAFA
BIOQUIMICA. H.R. HORTON et al. DE PRENTICE HALL HISPANOAMERICANA, S.A.
1993.
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