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DETERMINAO QUALITATIVA DOS AMINOCIDOS

As protenas so substncias orgnicas de alto peso molecular formadas por um grande nmero de
aminocidos ligados entre si por ligaes peptdicas. As clulas de todos os organismos vivos contm uma
variedade de protenas com funes diferentes. As membranas que circundam as clulas contm protenas, as
reaes metablicas que se do no interior das clulas so catalisadas por enzimas que so protenas. A
reproduo das clulas e a transmisso das caractersticas hereditrias dependem das protenas. Certos
hormnios so protenas, e os anticorpos que defendem o corpo so protenas. Quando as protenas so
hidrolisadas, elas so convertidas numa mistura de aminocidos. So conhecidos cerca de 20 aminocidos
obtidos a partir de protenas. O propsito das experincias descritas a determinao qualitativa de aminocidos
bem como a pesquisa da ligao peptdica. A molcula protica to complexa que s vezes difcil interpretar
o seu comportamento qumico. As protenas de um modo geral refletiro as propriedades qumicas de seus
aminocidos. Muitas reaes coloridas das protenas dependem da presena de um determinado aminocido.

1 - REAO DO BIURETO
As protenas e seus produtos de hidrlise que contenham mais de duas ligaes peptdicas so reagentes
positivos para a Reao do Biureto.
O Biureto formado da decomposio da uria a uma temperatura de 180C.

As solues alcalinas com biureto apresentam uma colorao violeta na presena de sulfato de cobre
(CuSO4). Isso ocorre pela formao de um complexo entre o on Cu+2 e os tomos de nitrognio da molcula do
biureto.
R

R
H

N
Cu

O
H

N
2+

O
N

O
H

H
O

As ligaes presentes na molcula do biureto so semelhantes s ligaes peptdicas que unem os


aminocidos na formao dos peptdeos e protenas.

Aminocidos e Protenas 1

REAGENTE DE BIURETO
Dissolva 1,5g de sulfato de cobre (CuSO 4.5H2O) e 6,0g de tartarato de sdio e potssio
(KNaC4H4O6.4H2O) em 500 mL de gua destilada. Adicione, sob agitao constante, 300 mL de soluo de
hidrxido de sdio (NaOH) 10%. Complete o volume para 1L com gua destilada e guarde o reagente em frasco
mbar. Conserve por tempo indefinido.

TCNICA
1) Material:
a. Solues e reagentes:
i. Reagente de biureto;
ii. Soluo de ovoalbumina 2%;
iii. Soluo de gelatina 1%;
iv. gua destilada.
b. Vidraria:
i. 3 tubos de ensaio;
ii. 4 pipetas de 5 mL.
2) Procedimento:
a. Numere os tubos de ensaio;
b. Prepare os tubos com as seguintes solues:
i. Tubo 1 com 2 mL de soluo de ovoalbumina 2%;
ii. Tubo 2 com 2 mL de gua destilada;
iii. Tubo 3 com 2 mL de soluo de gelatina 1%;
c. Adicione 1 mL de reagente de biureto em cada tubo;
d. Agite os tubos;
e. Observe e anote os resultados.

2 - REAO DE NINHIDRINA
Aminocidos que possuem um grupo amino livre aquecidos em soluo com excesso de ninhidrina
formam um composto chamado Prpura de Rhemann. Essa reao pode ser utilizada para a deteco de
peptdeos e protenas que apresentam essas caractersticas, aminas primrias e amnia. Nas condies
apropriadas, a intensidade da cor violeta produzida relacionada concentrao das espcies presentes. A
prolina, que um iminocido, forma um composto amarelo.

Aminocidos e Protenas 2

TCNICA
1) Material:
a. Solues e reagentes:
i. Soluo aquosa de ninhidrina [C6H4COCO.C(OH)2] 0,1%;
ii. Soluo de ovoalbumina 2%.
b. Vidraria:
i. 1 tubo de ensaio;
ii. 2 pipetas de 5 mL.
2) Procedimento:
a. Preparar o tubo com as seguintes solues:
i. 1 mL de soluo de ovoalbumina 2%;
b. Adicione 10 gotas da soluo de ninhidrina 1 %;
c. Agite o tubo;
d. Aquea em banho maria durante 2 minutos;
e. Observe e anote os resultados.

3 - PRECIPITAO COM SAIS DE METAIS


Os ctions de metais como Hg2+, Pb2+, Cu2+, Fe2+, Cd2+ e Zn2+ formam precipitados insolveis de
protenas pela formao de sais insolveis de metal com as protenas negativamente carregadas, forma em que se
encontram em meio alcalino. Essa precipitao mais intensa quando o pH est acima do ponto isoeltrico (pI)
porque nessa circunstncia, a carga total sobre a protena negativa, o que favorece a interao com os ctions
metlicos. Pode ocorrer a ressolubilizao se o pH for corrigido.

Aminocidos e Protenas 3

O
R

O
2 R

NH3
+ HgCl2

2NaOH

NH3

Hg

+ 2NaCl + 2H2O

O
R

NH3
Protena

Sal Insolvel do metal

Cloreto de Mercrio

Cloreto de sdio

O
O

O
2 R

NH3

H3C

Pb
H3C

Acetato de Chumbo

(II)

Pb

2NaOH

Protena

NH3

(II)

+ 2CH3COONa + 2H2O

NH3
Sal Insolvel do metal

Acetato de sdio

TCNICA
1) Material:
a. Solues e reagentes:
i. Soluo de cloreto de mercrio (HgCl2) 5%;
ii. Soluo de acetato de chumbo [(CH3COO)2Pb.3H2O] 10%;
iii. Soluo de ovoalbumina 2%.
b. Vidraria:
i. 2 tubos de ensaio;
ii. 3 pipetas de 5 mL.
2) Procedimento:
a. Numere os tubos de ensaio;
b. Prepare os tubos com as seguintes solues:
i. 2 mL de soluo de ovoalbumina 2%;
c. Adicione ao primeiro tubo 7 gotas de HgCl2 5%;
d. Adicione ao segundo tubo 5 gotas de (CH3COO)2Pb.3H2O 10%;
e. Agite levemente;
f. Observe e anote os resultados.

4 - PRECIPITAO PELOS CIDOS FORTES


Estes cidos desnaturam as protenas transformando-as em metaprotenas insolveis. Essa precipitao
mais intensa quando o pH est abaixo do ponto isoeltrico (pI). Isso porque, abaixo do pI, a carga lquida sobre
a protena positiva, favorecendo a interao com os nions provenientes dos cidos fortes. Pode ocorrer a
ressolubilizao se o pH for corrigido.
Aminocidos e Protenas 4

PR OT E N A + H NO 3 M E TAP R OTE N A
TCNICA
1) Material:
a. Solues e reagentes:
i. Soluo de cido ntrico concentrado (HNO3);
ii. Soluo de ovoalbumina 2%;
iii. gua destilada.
b. Vidraria:
i. 1 tubo de ensaio;
ii. 3 pipetas de 5 mL.
2) Procedimento:
a. Prepare o tubo com a seguinte soluo:
i. 1 mL de soluo de ovoalbumina 2%;
b. Adicione 3 mL de gua destilada;
c. Incline o tubo e acrescente lentamente pelas paredes 0,5 mL de cido ntrico concentrado
(HNO3), sem agitar;
d. Observe e anote os resultados.

5 - REAO XANTOPROTEICA
O benzeno reage lentamente com o cido ntrico (HNO 3) concentrado formando o nitrobenzeno. Essa
reao pode ser acelerada por aquecimento tornando a colorao da reao amarela. Essa reao tambm ocorre
com aminocidos que possuam em suas cadeias laterais anis benznicos, que ocorre com a tirosina e o
triptofano, e em condies de nitrao mais fortes, ocorre tambm para a fenilalanina. Se a reao for mantida
em meio bsico, a colorao ser vermelho alaranjada.

O
+

+ HNO3

NH3

HO

-H2O

NH3

HO

T ir o s in a ( T y r )

Nitroderivado
vermelho
NaOH
alaranjado

N it r o d e r iv a d o
a m a r e lo

O
-

NH

NH3

T r ip t o f a n o ( T r p )

+ HNO3

-H2O

NH

NH3

NaOH

Nitroderivado
vermelho
alaranjado intenso

O
N it r o d e r iv a d o
a m a r e lo in t e n s o

Aminocidos e Protenas 5

TCNICA
1) Material:
a. Solues e reagentes:
i. Soluo de cido ntrico concentrado (HNO3);
ii. Soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 2N;
iii. Soluo de ovoalbumina 2%.
b. Vidraria:
i. 1 tubo de ensaio;
ii. 3 pipetas de 5 mL.
2) Procedimento:
a. Prepare o tubo com a seguinte soluo:
i. 1 mL de soluo de ovoalbumina 2%;
b. Acrescente 10 gotas de cido ntrico concentrado (HNO3);
c. Aquea o tubo em banho maria;
d. Adicione 4 mL de soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 2N;
e. Observe e anote os resultados.

6 - REAO DE MILLON
O grupamento hidroxifenil da tirosina sofre uma nitrao pelo cido ntrico presente na soluo. Aps a
nitrao, esse produto reage com os ons mercrio na soluo, formando o fenolato de mercrio que forma uma
soluo ou precipitado vermelho, resultados positivos. Como a tirosina o nico aminocido a apresentar um
grupo fenlico, esse teste se torna especfico para verificao da presena ou ausncia desse aminocido. A
reao no deve ser feita em meio alcalino forte devido precipitao do mercrio sob a forma de xido.

O
2

HO

O
-

NH3

O +Hg++

HNO3

Hg

H C
2 3

NH3

T ir o s in a ( T y r )

F e n o la t o d e m e r c r io

A la n in a ( A la )

REATIVO DE MILLON
Adicione 40 mL de cido ntrico (HNO3) concentrado frio em 20 g de mercrio (Hg0), dissolvendo por
aquecimento. Dilua com gua destilada 2 vezes em volume. Deixe decantar por 24 horas e use o sobrenadante. O
reativo de Millon pode ser armazenado por longos perodos em geladeira.

TCNICA
1) Material:
a. Solues e reagentes:
i. Soluo do reagente de Millon;
ii. Soluo de gelatina 1%;
iii. Soluo de ovoalbumina 2%.
b. Vidraria:
Aminocidos e Protenas 6

i. 2 tubos de ensaio;
ii. 3 pipetas de 5 mL.
2) Procedimento:
a. Numere os tubos de ensaio;
b. Prepare os tubos com as seguintes solues:
i. 1 mL de soluo de ovoalbumina 2%;
ii. 1 mL de soluo de gelatina 1%;
c. Adicione aos dois tubos 5 gotas do reativo de Millon;
d. Agite levemente;
e. Observe e anote os resultados;
f. Aquea em banho maria o tubo com a soluo de ovoalbumina com reativo de Millon;
g. Observe e anote os resultados.

7 REAO DO GRUPO SULFIDRILA


Dos aminocidos que apresentam enxofre em sua constituio apenas a cistena e a cistina so capazes
de liber-lo quente e no meio alcalino. O enxofre liberado forma sulfeto de sdio que reage com o acetato de
chumbo, formando o sulfeto de chumbo precipita na cor preta ou castanha. O enxofre da metionina no
liberado em meio bsico.

O
-

HS

2NaOH

NH3

NH3

Sulfeto de sdio

C is te n a (C y s)

Na2S + H2O + HO

S e rin a (S e r )

O
H3C
O

Na2S +

(II)

Pb
O

PbS

+ 2
H3C

O Na

H3C
O
Sulfeto de sdio

Acetato de Chumbo

Sulfeto de chumbo

Acetato de sdio

TCNICA
Aminocidos e Protenas 7

1) Material:
a. Solues e reagentes:
i. Chumao de cabelo;
ii. Soluo de acetato de chumbo [(CH3COO)2Pb] 5%;
iii. Soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 50%.
b. Vidraria:
i. 1 tubo de ensaio;
ii. 2 pipetas de 5 mL.
2) Procedimento:
a. Coloque o chumao de cabelo no tubo de ensaio;
b. Adicione 5 gotas da soluo de acetato de chumbo [(CH3COO)2Pb] 5%;
c. Acrescente 2 mL da soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 50%;
d. Ferva durante 5 minutos;
e. Observe e anote os resultados.

Aminocidos e Protenas 8