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Sfruttamento del citoscheletro di

actina

EPEC sfrutta il citoscheletro di actina per


costruire un piedistallo

Schemi di vita intracellulare

Listeria e Shigella lisano il vacuolo e si muovono nel citosol utilizzando lactina.

Immagini dal videomicroscopio

Listeria

Listeria (vede) actina (rossa)

Immagini dal microscopio elettronico


TEM di code di actina
indotte da Listeria
monocytogenes,
Rickettsia conorii e
Shigella. In R. conorii
i filamenti di actina
sono lunghi e
arrangiati in parallelo.
In L. monocytogenes,
i filamenti sono corti
e altamente incrociati
tra loro.

Listeria monocytogenes

La proteina ActA di Listeria recluta il complesso ARP2/3 e Ena/VASP che


sono responsabili per la generazione e lelongazione di filamenti di actina.

Listeria monocytogenes

Modalit di azione di ActA

a | Due domini di ActA sono richiesti per la mobilit. Il dominio ammino terminale attiva la
nucleazione dei filamenti di actina attraverso il reclutamento di Arp2/3. Il dominio centrale
ricco di prolina lega VASP, VASP lega la profilina aumentando lallungamento. b |, la
proteina capping si lega alle estremit barbed dei filamenti di actina per prevenire
lallungamento dei filamenti pi vecchi mentre l alfa-actinina lega tra loro i filamenti per
stabilizzare la struttura della coda e ADF/cofilin disassembla i filamenti vecchi.
VASP, vasodilator-stimulated phosphoprotein

Movimento nella cellula

Movimento e invasione di cellule vicine

Meccanismi di polimerizzazione di
actina intracellulare

Shigella flexneri

Shigella flexneri

VirG conosciuto anche come IcsA

Motilit di Burkholderia pseudomallei

Motilit di B. pseudomallei in J774 cellule macrophage-like (a), abolita da mutanti del


gene bimA (b) e restored con lespressione di bimA (c). I batteri sono rossi, l actina
verde. BimA in blu localizzato sulla superficie batterica (giallo) al polo dove inizia la
polimerizzazione dellactina (d).

Polimerizzazione dellactina

Stevens et al. Nature Reviews Microbiology 4, 91101 (February 2006) | doi:10.1038/nrmicro1320

Modalit di polarizzazione di ActA e IcsA

A. IcsA (cerchi verdi) si accumula ad uno dei poli e poi si sposta lateralmente. Una
proteasi (IcsP:triangoli rossi) taglia e inattiva IcsA (cerchi bianchi e neri)
uniformemente. Tra accumulo e taglio proteolico si arriva ad una polarit e alla
polimerizzazione dellactina.
B. ActA assente dal setto di divisione e quindi esclusa dal nuovo polo.

TEM di vescicole associate con code (comete) di actina (endosomi). Tubuli, corpi
multivescicolari. I mitocondri non sono associati con le comete. Bars, 500 nm.

Induzione della fagocitosi

SipA coinvolto nella polimerizzazione dellactina tramite plastina. SipC


indispensabile per linvasione come IpaC e serve per la polimerizzazione
dellactina. SopE si leva alle forme GDP-legate di Cdc42 e Rac promuovendo
lo scambio nucleotiddico. SpTP stimola attivit GTPasica di proteine Rho.

Le proteine Rho come bersaglio di


microrganismi patogeni
Le proteine Rho vengono modificate da
numerose tossine batteriche che ne
causano la disattivazione o lattivazione
costitutiva
In questo modo le tossine alterano la
trasduzione del segnale e
lorganizzazione del citoscheletro di
actina

Clostridial glucosylating toxins (CGTs), C3 esoenzimi, YopT (Y enterocolitica) una protease che tagli la cisteina C-terminale
prenilata, P. aeruginosa ExoS eExoT, Salmonella SptP, CNF (cytotoxic necrotizing factors) da E. coli e Y. pseudotuberculosis sono
deamidasi, tossina demonecrotica (DNT) da Bordetella spp. Salmonella SopE e SopE2Altri domini = legame e traslocazione

Hijacking of Rho GTPase by bacterial pathogens. (a) Protein toxins that directly modify Rho proteins. C3 ADP-ribosyltransferase
modifies Rho at Asn41, an amino acid located in switch 1 domain. Although ADP-ribosylated Rho can still bind to the effectors, it has
a greater affinity for Rho-GDI than the nonmodified form. It therefore remains associated to Rho-GDI and it is not recruited to the
membrane, thereby losing its activity. CdA, CdB and LT from C. sordellii glucosylate Rho GTPases at Thr35/Thr37 in switch 1
domain, thus impairing the interaction of Rho GTPases with the effector molecules. CNF1, CNF2 and DNT deamidate the Rho
GTPases at Gln63/Gln61 that are located in switch 2 domain. This modification inhibits the intrinsic and GAP-stimulated GTP
hydrolyzing activity of Rho proteins, turning on constitutively the GTPases. (b) Type-III-secreted toxins mimicking host cell regulatory
proteins that signal Rho GTPases. Certain invasive bacteria such as Salmonella, Yersinia or Shigella activate the Rho GTPases to
trigger their own phagocytosis in nonprofessional phagocytes or to inhibit macrophage phagocytosis. Their strategy consists in the
introduction of an effector molecule directly into the cytosol of the host cells by a type-III-secretion mechanism. SopE from
Salmonella typhimurium is an exchange factor for Cdc42 and Rac. YopE from Yersinia, SptP from Salmonella and ExoS from P.
aeruginosa play a role as GAP proteins. In contrast to the other type-III-secreted toxins, YopT cleaves directly Rho-GTP on its
carboxy-terminus removing the geranylgeranyl post-translational modification and thereby inducing Rho detachment from the cell
membrane

Glucosylation of Rho at Thr37 (or Rac and Cdc42 at Thr35) by toxins such as the clostridial glucosylating toxins (CGTs) inhibits
the interaction of activated Rho protein with its effectors (probably the most important effect), blocks activation by GEFs and
prevents extraction of Rho from membranes (not shown; GTP hydrolysis is also blocked). ADP-ribosylation of RhoA at Asn41 by
C3 exoenzymes inhibits activation by GEFs, causes release of RhoA from membranes and stabilizes the RhoGDI (guanine
nucleotide dissociation inhibitor) complex. The Yersinia enterocolitica toxin YopT has been shown to be a protease that cleaves
RhoA at the C-terminal Cys residue, causing release of Rho proteins from membranes.YopE from Yersinia spp., the
Pseudomonas aeruginosa exoenzymes ExoS and ExoT and Salmonella SptP are GAP proteins, which inactivate Rho proteins by
facilitating the hydrolysis of bound GTP. Salmonella SopE and SopE2 function as GEFs, facilitate GDP/GTP exchange and
activate Rho GTPases. Cytotoxic necrotizing factors (CNFs) from Escherichia coli and Yersinia pseudotuberculosis and
dermonecrotizing toxin (DNT) from Bordetella spp. activate Rho proteins by deamidation and transglutamination, respectively, of
Gln63 of RhoA (Gln61 of Rac and Cdc42). Pi, inorganic phosphate.

Toxins A and B bind to, and are endocytosed by, intestinal epithelial cells. It is thought that only the enzyme domain enters the
cytosol from acidic endosomal compartments. In the cytosol, the toxins glucosylate Rho GTPases, which inhibits Rho protein
functions and Rho signalling pathways. The tight junctions, and therefore the barrier function, of the epithelium are disturbed,
which results in diarrhoea. Epithelial cells produce inflammatory factors, including interleukin-8 (IL8) and macrophage
inflammatory protein 2 (MIP2). Toxins that reach subepithelially located monocytes and macrophages might stimulate release of
cytokines. Similarly, toxins A and B induce activation of intestinal neuronal cells to release corticotropin-releasing hormone (CRH)
and substance P, which also activates macrophages and monocytes. Neutrophil invasion occurs, which induces a dramatic
inflammatory response.