Processos Bioqumicos II

Esterilizao
o procedimento para destruir todos os -os viveis presentes em um material
inanimado. Alguns termos relacionados so citados abaixo:
Desinfeco - Trata-se da remoo dos -os patognicos apenas
Assepsia - Procedimento de esterilizao para introduzir objetos em um ambiente
j esterilizado.
Anti-sepsia - a remoo de -os de tecidos vivos.
A esterilizao utilizada no preparo do processo fermentativo, para remover -os
contaminantes do meio de cultura e de materiais utilizados no processo. Em muitos
casos, principalmente nos produtos farmacuticos, os produtos finais devem ser isentos
de -os, entrando uma etapa de esterilizao. A esterilizao pode ser promovida por
agentes fsicos e qumicos.

Agentes fsicos
Calor
O calor uma forma tradicional e barata de remover -os. O problema que certos
-os (principalmente dos gneros Bacillus e Clostridium) podem se converter a formas
resistentes a sua ao (esporos).
Os esporos so formas em que a parede celular se espessa, a cromatina se
condensa e surge grande quantidade de protenas com pontes de sulfeto resistentes ao
calor, alm do sal de clcio do cido 2,6 di picolinico (1), que confere resistncia trmica
ao -o.

O calor utilizado para a remoo de -os pode ser seco ou mido.

Calor seco
Aquece os -os provocando um processo acelerado de oxidao e desnaturao
de biomolculas, levando a morte do microrganismo.
O grande problema do calor seco a sua pequena penetrao nos materiais,
necessitando de tempo prolongado e temperaturas elevadas por um tempo prolongado.
Alm disso, alguns materiais no suportam o calor por um tempo prolongado, como os
meios de cultura. A flambagem na chama muito utilizada em manipulao de -os
Calor mido
A penetrao do calor mido muito maior que a do calor seco, tornando-o muito
mais eficiente, pois a desnaturao das biomolculas acelerada pela gua. Sua
eficincia aumenta mais ainda quando aliado a presso.
Em escala laboratorial utilizado um equipamento denominado autoclave, que alia
o aquecimento e a presso. Em equipamentos industriais utilizado o vapor d'gua
produzido por caldeiras. Algumas empresas vendem ampolas com -os resistentes ao
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calor. Essas ampolas so colocadas junto ao material a ser esterilizado e aps o

procedimento seu contedo semeado para verificar se o procedimento foi bem
sucedido.
Tabela: Resumo do uso de calor em esterilizao
Modalidade

Temperatura (C) Equipamento Tempo

Calor seco

160-180

Estufa

2h

Calor seco

> 1000

Chama

> 1 min.

60

Aquecimento

1h

Calor mido

Calor mido

100

Caldeira

Calor mido

120

Autoclave

Observaes
Elimina todas as formas
Muito
usado
manipulao

em

S
elimina
formas
vegetativas
de
no
termfilos

Chamado vapor fluente.

15 min. Elimina a maioria dos
esporos
20min
Elimina todas as formas
2atm

Radiaes
O uso de radiaes danifica principalmente o DNA, no atingindo outras
biomolculas de forma to intensa. As radiaes utilizadas so dividas em Ultravioletas
(U.V.), ionizantes e microondas.
U.V. - entre 250 e 280 nm a luz ultravioleta especialmente agressiva ao DNA. Por esse
motivo lmpadas que produzem luz nessa faixa de comprimento de onda so teis em
esterilizao. Como o poder de penetrao dessa radiao pequeno, vrios materiais
no podem ser esterilizados desta forma (efeito sombra). Lmpadas UV so utilizadas
para diminuir a carga microbiana de ambientes tais como centros cirrgicos e laboratrios.
Radiaes ionizantes - Tem penetrao e capacidade de esterilizar muito maior que o
U.V. Sua operacionalizao mais difcil, pois os equipamentos so mais complexos e os
riscos para operadores maiores.
Microondas - Oxida rapidamente todo o material orgnico presente. bastante utilizada
quando se precisa de material apirognico.

Filtrao
Podem ser utilizados para remover -os de gases e lquidos.
Filtrao de gases - Utiliza-se um material microfibroso, que retm as partculas de
poeira suspensas no ar. Essas partculas contem os -os em sua superfcie. A reteno
ocorre por efeito do obstculo e por eletrosttica.
Filtrao de lquidos - Membranas com porosidade adequada retm partculas com
menos de 0,22 m incluindo a maioria dos -os . Antigamente utilizavam-se discos de
amianto e celulose. Atualmente o PVDF tem sido muito utilizado. Para remover vrus a

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membrana preparada utilizando-se um polmero especial, que alm do efeito obstculo

tem efeito eletrosttico.

Agentes Qumicos
So molculas que podem inativar os -os por vrios mecanismos diferentes. Sua
ao depende da espcie e da concentrao. Quando utilizados, seus resduos devem
ser removidos de forma cuidadosa, para no prejudicar o crescimento do microorganismo
de interesse. Alguns podem aparecer em formulaes de produtos finais, como
conservantes contra a ao dos -os . Os principais so mostrados abaixo:
Aldedos - Reagem com biomolculas, provocando desnaturao. Os mais utilizados so
o formaldedo (1), que um gs a temperatura ambiente. Por esse motivo utilizada uma
soluo saturada de (1) em gua denominada de formalina. (1) tambm pode ser utilizado
na forma de trmero (2), que slido e lentamente libera (1). Outro aldedo muito utilizado
o glutaraldedo (3). So muito utilizados na esterilizao de superfcies.

Oxidantes - Oxidam as biomolculas presentes nos -os , inativando-os. So tambm

utilizados para esterilizar superfcies, sendo menos irritantes que os aldedos. Obviamente
no podem ser utilizados em materiais suscetveis a oxidao. Alguns exemplos so o
oznio (1), o perxido de hidrognio (2), hipoclorito de sdio (3) e o cido peractico (4).
O iodo tambm tem ao oxidante. Algumas molculas orgnicas como a halozona (5) se
decompem liberando lentamente cido hipocloroso.

Fenis - Rompem as clulas dos -os . Vrios podem ser utilizados como conservantes.
Exemplos so o fenol (1), m-cresol (2), hexil resorcinol (3). Outros compostos aromticos
tambm podem ser utilizados como anti-spticos, como o cido benzico (4). Compostos
que contm radicais cidos e fenis so o cido saliclico (5), e os steres do cido para-

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hidrxi-benzico, o nipazol (6) e o nipagin (7). Fenis clorados como o triclosam (8)
tambm so utilizados.

Mercuriais - O mercrio inativa enzimas dos -os que contm cistena em seus stios
ativos, por formar complexos estveis com o enxofre. Como tambm txico para
mamferos, seu uso hoje est restrito a casos especficos. Os exemplos so o timerosal
(1) e o timerfonato (2).

lcalis - As biomolculas so muito sensveis a variaes de pH. Solues com pH

alcalino podem ser utilizadas. Devem ser observados os cuidados quanto corroso e
resduos da soluo que podem interferir com o crescimento do -o de interesse.
Tensoativos - Os tensoativos tem a capacidade de desestruturar a membrana dos -os,
levando-os a perda de material do citoplasma e inativao. Os sabes so bons agentes
de assepsia porque aliam essas substncias ao pH alcalino. O cloreto de cetil piridinio
um exemplo de tensoativo germicida.

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Alcois - Os alcois desnaturam as biomolculas, alm de provocar problemas de

controle osmtico nas clulas dos -os. O etanol a 70 GL muito utilizado para esse fim.
O isopropanol tambm pode ser utilizado. O lcool benzlico tem a ao germicida muito
lenta, sendo usado apenas como conservante.
xido de etileno - O xido de etileno um gs que alquila as biomolculas. Tem grande
poder de penetrao e muito utilizado em materiais que no podem ser aquecidos ou
tratados com outros agentes qumicos.

Corantes - Os corantes ligam-se a protenas, desnaturando a estrutura do -o, levando a

sua morte. Abaixo mostrada a violeta de genciana.

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Noes de BPF para ambiente limpo

Alimentos - http://www.anvisa.gov.br/legis/portarias/326_97.htm
Farmacutico - http://www.anvisa.gov.br/legis/resoI/13401rdc.htm
Instalaes

Presso de ar estril positiva, para evitar que partculas do meio externo entrem no
ambiente.
Material mnimo essencial para o trabalho. Quanto mais material, mais risco de
contaminao.
Portas de correr para suspender menos partculas.
Ante-salas para evitar um contato direto com o ambiente externo.
Paredes com cantos e quinas arredondas facilitando a limpeza e pintadas com
tintas especificas, que diminuem a possibilidade de crescimento de m-os.
Recursos Humanos

Treinamento permanente
Higiene pessoal perfeita e acompanhamento medico.
Roupas e EPls descartveis
Institucional

Trabalhar com fornecedores certificados.

Pirognio
Em produtos farmacuticos, em muitos casos, apenas a esterilizao pode no ser
suficiente. Resduos das clulas mortas dos -os, principalmente os glicolipdeos
associados parede celular (LPS) podem induzir reaes adversas, tais como febre
anafilaxia. Para remover o pirognio so utilizados o calor mido por tempo prolongado,
microondas, e doses elevadas de U.V. que oxidam todo material orgnico.

Controle de Esterilizao
Teste de esterilidade

material inoculado em meio de crescimento, ou no caso de objetos, o objeto

primeiro "lavado", a soluo filtrada em filtro 0,22 m e depois o material retido
inoculado em meio de crescimento.
Teste de pirognio
Existem duas possibilidades:

Inocular o produto em coelhos e acompanhar a variao de temperatura. Esta

caindo em desuso.
Kits para a determinao do LPS. Podem se basear no formao de gel ou no
desenvolvimento de cor.
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