1

1)

Quais os nveis de organizao da molcula de DNA previstos pelo modelo de Watson e Crick?
Em 1953, Watson e Crick postularam o modelo tridimensional da estrutura do DNA. O modelo consiste
em duas cadeias de DNA helicoidais enroladas em torno do mesmo eixo para formar uma dupla-hlice
de orientao direita. Os esqueletos hidroflicos de grupos fosfato e desoxirribose alternados esto no
lado de fora da dupla-hlice, orientados para a gua circundante. O anel furanosdico de cada
desoxirribose est na conformao C-29 endo. As bases pirimdicas e pricas das duas fitas esto
empilhadas dentro da dupla-hlice, com suas estruturas hidrofbicas em forma de anel e quase
planares muito perto uma da outra e perpendiculares ao eixo longitudinal. Cada base nucleotdica de
uma fita est pareada no mesmo plano com a base da outra fita. Watson e Crick descobriram que os
pares de bases unidos por ligaes de hidrognio de G com C e de A com T, so aqueles que melhor
se enquadram dentro da estrutura, fornecendo uma base lgica para a regra de Chargaff que, em
qualquer DNA, G ligada a C e A a T.
As fitas de DNA seriam antiparalelas e seguem direo 5,3.

2)

O modelo de Watson e Crick foi baseado em que evidncias?

Que era uma substncia nucleica contendo fsforo;
DNA extrado de vrus por Avery e colegas continha a informao gentica viral;
Hershey e Chase marcaram radioativamente o DNA e infectaram outra bactria;
As quatro bases nucleotdicas do DNA eram encontradas em propores diferentes nos DNAs de
organismos diferentes, quantidades de certas bases estavam relacionadas (A=T, G=C A+G= T+C) e
bases no se modificavam com a idade, alimentao ou ambiente: Chargaff rule;
O padro de difrao por raios X obtido por Franklin e Wilkins para analisar fibras de
DNA.

3)

Qual a composio do DNA e do RNA?

Os cidos Nucleicos so formados por subunidades denominadas nucleotdeos. Tais
subunidades apresentam 3 componentes caractersticos: (1) uma base nitrogenada, (2) uma pentose e
(3) um ou mais fosfatos. Tanto o DNA quanto o RNA contm duas bases pricas principais, adenina (A)
e guanina (G), e duas pirimdicas. No DNA e no RNA, uma das pirimidinas a citosina (C), mas a
segunda pirimidina no a mesma nos dois: a timina (T) no DNA e a uracila (U) no RNA. Embora o
DNA e do RNA paream ter duas diferenas pentoses diferentes e a presena de uracila no RNA e
timina no DNA a pentose que define a identidade do cido nucleico. Se o cido nucleico contm 2desoxi-D-ribose, DNA por definio, embora possa apresentar alguma uracila. Da mesma forma, se o
cido nucleico contm D-ribose RNA, independentemente da sua composio de base.
Esses nucleotdeos so ligados covalentemente entre si atravs de pontes de grupos fosfato, nas
quais o grupo 5-fosfato de uma unidade nucleotdicas ligado ao grupo 3-hidroxila do prximo
nucleotdeo, gerando uma ligao fosfodister. Deste modo, o esqueleto covalente dos cidos
nucleicos consiste em fosfatos e resduos de pentoses alternados, sendo as bases nitrogenadas
consideradas
grupos
laterais
ligados
ao
esqueleto
em
intervalos
regulares.

4)

Como a clula eucaritica resolveu o problema de acomodar longas molculas de DNA em

ncleos com dimetro muito pequeno?
do fenmeno de supertoro do DNA, e com auxlio de algumas protenas, a clula eucaritica
consegue enovelar e assim reduzir o tamanho do DNA dentro de si.Essa compactao comea pela
supertoro do DNA seguida pelo enovelamento do mesmo sobre protenas octamricas denominadas
histonas. Em sequncia, a estrutura empilha-se esse empilhamento possvel por conta das
interaes entre as caudas N-terminais de histonas (H4 principalmente) assim como a atuao da
histona H1 e forma a fita de 30nm. Finalmente, e sem sabermos muito ao certo como, o complexo

2
continua o enovelamento formando alas e loops at chegar na estrutura final do cromossomo.
5)

O que um nucleossomo e qual sua composio?

So unidades estruturais compostas pelo DNA da cromatina associado muito firmemente a protenas
denominadas histonas (H1, H2a, H2b, H3 e H4). Cada tipo de histona est sujeito a modificaes
enzimticas por metilao, acetilao, ADP-ribosilao, fosforilao, glicosilao, sumoilao ou
ubiquitinao. Essas modificaes afetam a carga eltrica lquida, a forma e outras propriedades das
histonas, bem como as propriedades estruturais e funcionais da cromatina, participando na regulao
da
transcrio.

6)

Por que o DNA se liga a histonas?

O DNA, sendo um cido, possui carga resultante negativa, por tanto se ligam via interao eletrosttica
com as histonas, protenas de carter bsico, a fim de garantir a organizao do material gentico.

7)

Quais os nveis de compactao da cromatina?

O material gentico tem diversos nveis de compactao. O mais brando a dupla hlice livre. O
nucleossomo a expresso mais livre da cromatina - o primeiro enovelamento da fita de DNA ao redor
de um octmero de histonas, essas estruturas se unem de maneira coesa formando as chamadas
fibras de cromatina, que se enrolam subsequentemente at um estado de supertoro, formando a
organizao final que compe o cromossomo.

8)

Modificaes nas histonas so importantes para que uma regio do genoma possa
transcrever? Por qu?
Um dos fatores mais determinantes na identificao das regies transcricionalmente ativas do DNA o
nvel de condensao da cromatina. Regies em que a cromatina est mais condensada so
chamadas de heterocromatina e no so passveis de transcrio. Regies que possuem cromatina
mais livre so eucromatina e so transcricionalmente ativas.
A principal diferena na estrutura da eucromatina e da heterocromatina est nas histonas, protenas
responsveis pela organizao da cromatina, que aparecem em diferentes formas e concentraes em
cada caso, portanto, evidente que participam ativamente da seleo das regies do genoma a serem
transcritas.
Por exemplo, a histona H1 serve para grampear o nucleossomo e impedir que a cromatina se
solte, regies de eucromatina tm menor concentrao de histona H1.
Acetilao e metilao de histonas so responsveis pelo remodelamento da cromatina, evidenciando
que alteraes covalentes tambm afetam a atividade transcricional.

9)

O que so as HDAC e as HAT e qual sua importncia?

HAT (histona acetiltransferase) e HDAC (histona deacetilase) so enzimas que acetilam e desacetilam
resduos de lisina em histonas, respectivamente. De maneira simples, a acetilao das histonas reduz
a afinidade do DNA pelo nucleossomo, deixando a cromatina mais livre e passvel de transcrio.

10) O que a replicao do DNA e como este mecanismo se processa?

O modelo estrutural do DNA proposto por Watson e Crick explica a duplicao dos genes: as duas
cadeias do DNA se separam e cada uma delas orienta a sntese de uma metade complementar. O

3
experimento dos pesquisadores Meselson e Stahl confirmou que a duplicao do DNA
semiconservativa, isto , 50% da fita antiga se conserva ntegro na produo de cada uma das duas
novas molculas. O mecanismo da replicao do DNA ocorre em basicamente 3 etapas: 1)
Desenrolamento: as enzimas helicase e topoisomerase atuam nessa etapa, onde a helicase
responsvel por romper as ligaes do tipo pontes de hidrognio existentes entre as bases
hidrogenadas, abrindo a dupla-fita e a topoisomerase ir regular a toro que ser promovida na duplafita, em funo desta abertura; 2) Sntese contnua e 3) Sntese descontnua: A enzima DNA polimerase
ir atuar em ambas as etapas adicionando os nucleotdeos s fitas simples, seguindo a
complementariedade de bases nitrogenadas, formando duas novas molculas de DNA. No entanto,
esta enzima funciona apenas em um sentido especfico, o sentido 5-3. Sendo as duas fitas do DNA
inversamente ligadas, devido sua polaridade inversa, em uma das fitas simples, a DNA polimerase ir
realizar a sntese contnua, no sentido da abertura da fita e, em outra, realizar a sntese descontnua,
pois ocorrer no sentido inverso da abertura da fita. No segundo caso, ocorrer a colocao de uma
estrutura chamada primer, pela enzima DNA primase. O primer um conjunto de ribonucleotdeos,
complementares fita molde de DNA, que ser o sinal que a DNA polimerase precisa para se ligar a
fita simples e iniciar a sntese da uma nova fita, que ser continuao do primer. No fragmento
descontnuo que ocorre at que uma DNA primase venha a se ligar, protenas SSB se ligam na fita
simples, a fim de impedir seu reanelamento. E, aps a sntese de vrios fragmentos de molculas de
DNA seguidos pelo primer, a enzima DNA ligase atua ligando estes fragmentos e produzindo uma
dupla-fita contnua.

11) Qual o papel da DNA polimerase de replicao?

DNA-polimerases so enzimas que sintetizam a dupla-fita da molcula de DNA, no sentido especfico
5-3. Em primeiro lugar, todas as DNA-polimerases precisam de um molde. A reao de polimerizao
guiada por uma fita-molde de DNA, de acordo com as regras de pareamento de bases previstas por
Watson e Crick: onde uma guanina est presente em um molde, um desoxinucleotdeo citosina
adicionado nova fita, e assim por diante. Em segundo lugar, as polimerases precisam de um primer
(iniciador). Um iniciador um segmento de fita (complementar ao molde) com um grupo hidroxila livre,
ao qual um nucleotdeo pode ser adicionado; a extremidade livre do iniciador chamada de terminal
do iniciador. Um stio ativo de DNA-polimerase tem duas partes. O nucleotdeo que chega
inicialmente posicionado no stio de insero. Uma vez que a ligao fosfodister formada, a
polimerase desliza para frente no DNA e um novo par de bases posicionado no stio de psinsero. Aps a adio de um nucleotdeo em uma fita de DNA em crescimento, uma DNApolimerase pode tanto se dissociar como se mover ao longo do molde e adicionar outro nucleotdeo.
12) O que so as topoisomerases?
Topoisomerases so enzimas que auxiliam na replicao do DNA quando o DNA aberto pela helicase
no processo de replicao pode ocorrer uma tenso na molcula de DNA causando um helicoisao
positiva que pode danificar a molcula .A topoisomerase atua no contrabalanceamento da helicoisao
aliviando a tenso na molcula. -w
13) Em bactrias existe uma origem de replicao. Como a organizao desta regio e como ela
permite a abertura das forquilhas de replicao?
A origem da replicao ocorre em regio conhecida como oriC que possui sequncias ricas em At e
uma regio distanciada com stios que permitem a ligao de enzima dnaA.

4
A dnaA se liga nessas zonas e permite que outras enzimas (dnaB , dnaC) helicase catalisem a
abertura do DNA que ento estabilizado por protena ligadora de fita simples (SSB) , existe a partir
disso uma helicoisao positiva que tensiona a molcula aliviada pela atuao de topoisomerase .
O RNA polimerase tua depois disso incluindo o RNA inicial para replicao . com isso o DNA
polimerase III catalisa a formao de milhares de pares de bases e DNA polimerase I atua como
preenchedora
e
reparo
(
tambm
elimina
o
RNA
primer
)
Ento forquilha contnua e descontnua formada , todavia nos fragmentos descontnuos observase que a DNA polimerase apenas capaz de sintetizar uma quantidade bem menor de bases at sua
remoo ( comparado com a fita contnua ) criando assim os fragmentos de Okasaki , esses
fragmentos so ento completados pela DNA polimerase I e unidos pela enzima Ligase .-w
14) A DNA polimerase de eucariotos uma enzima multimrica com vrias atividades enzimticas.
Cite algumas destas atividades e que importncia isso tem no processo de replicao?
A replicao cromossomica envolve trs unidades de polimerases: a DNA-polimerase , que funciona
apenas na sntese de iniciadores curtos para os fragmentos de Okazaki, que faz a fita suplementar a
fita parental da direo 5-3; esses iniciadores so estendidos pela DNA-polimerase , que tambm
tem atividade de reviso de exonuclease 3-5, pode executar a sntese da fita-lder. H ainda a DNApolimerase , que substitui a DNA-polimerase em algumas situaes, como no reparo do DNA,
podendo funcionar na forquilha de replicao.
15) Como a replicao bi-direcional e o DNA tem duas fitas anti-paralelas, existe uma fita que
ser copiada diretamente enquanto a outra copiada em retardo. Explique como isto acontece.
Sntese da fita lder: h a interao da primase (DnaG), que cria um primer curto de RNA na origem da
replicao, em direo oposta a que a helicase DnaB est se movendo. Com efeito, a helicase DnaB
se move ao longo da fita que se torna a fita retardada na sntese do DNA; entretanto, o primeiro
iniciador formado na primeira interao DnaG-DnaB funciona como iniciador da sntese da fita lder de
DNA na direo oposta. Desoxirribonucleotdeos so adicionados a esse iniciador por um complexo
DNA-polimerase III ligado helicase DnaB presa fita de DNA oposta. A sntese da fita lder prossegue
ento continuamente, acompanhando o desenrolamento do DNA na forquilha de replicao.
Sntese da fita retardada: a helicase DnaB e a primase DnaG formam o primossomo, que sintetiza um
iniciador. Uma nova braadeira b deslizante , ento, posicionada no iniciador pelo complexo
carregador de braadeiras da DNA-polimerase III. Quando a sntese de um fragmento de Okazaki se
completa, a replicao para e as subunidades centrais de DNA-polimerase III se dissociam de sua
braadeira b deslizante (e do fragmento completo de Okazaki) e se associam nova braadeira. Isso
inicia a sntese de um novo fragmento de Okazaki.
16) O que so as SSB?
SSBs so protenas de ligao a DNA de fita Simples. Elas impedem que as fitas de DNA se
reassociem aps a passagem de uma helicase. Sua interao com o DNA de fita simples tambm
impede a formao de estruturas secundrias imprevistas e o protege de nucleases.
17) O que transcrio?
A transcrio consiste na sntese de RNA. Nela, a enzima RNA polimerase realiza a polimerizao do
RNA a partir de um molde de DNA. Esse processo ocorre em 3 etapas principais: iniciao,
alongamento e trmino.

5
A sntese de RNA comea em regies do DNA chamada de promotoras, sequncias especficas
reconhecidas pela RNA polimerase, conhecida nos eucariotos como TATA box, onde ocorre a abertura
da fita dupla de DNA na iniciao.
Na fase de alongamento, o RNA recm sintetizado pareia-se temporariamente com a fita molde de
DNA, formando um hbrido curto RNA-DNA, permanecendo ligados at encontrar o sinal de trmino da
transcrio.
O final da transcrio determinado pelo encontro com um sinal de trmino, sequncias que indicam
o local para a finalizao da sntese de DNA.
18) Quais as etapas da transcrio?
Transcrio a sntese de RNA usando DNA como molde e consiste em 3 etapas:
1. Iniciao, etapa de abertura da dupla fita de DNA (desenovelamento), que feito rompendo-se as
ligaes entre as bases das duas fitas.
A sntese do RNA comea em regies do DNA chamadas de regies promotoras, que so sequncias
especficas reconhecidas pela RNA polimerase, e direcionam a transcrio de genes. A sequncia tatabox a
mais conhecida entre as responsveis por promover o incio da transcrio.
2. Alongamento:
Uma nova fita de RNA sintetizada pela RNA polimerase no sentido 5-3 (a leitura da fita molde sendo feita
no sentido 3-5), formando brevemente uma fita hbrida DNA/RNA
3. Trmino:
Fim da transcrio, determinado pelo surgimento dos cdons de parada ou de terminao, finalizando a
sntese dessa molcula. Volta da dupla fita de DNA e seu reenovelamento;
19) Em bactrias a transcrio e a traduo ocorrem simultaneamente. Por que?
Nos seres eucariticos a transcrio ocorre no ncleo e, s aps o deslocamento do rna para o
citoplasma ocorre a traduo desse RNA. Ocorre ento uma separao espacial que acarreta numa
separao temporal.
Em seres procariticos como bactrias no h uma separao espacial entre ncleo e citoplasma e,
portanto, ambas ocorrem no mesmo espao e no mesmo tempo.
Isso prejudica a capacidade de regulao da expresso gnica, o que explica a necessidade dessa
separao em seres mais complexos.
20) Como a organizao de um promotor eucaritico?
Promotores so sequncias de DNA especficas importantes para o incio da transcrio, estas
sequncias situam-se antes do ponto de incio da transcrio. Em eucariotos a regio promotora pode
ser dividida em duas partes, a regio proximal dsspromotor e a regio distal promoter.
A distal promoter est mais distante do incio da transcrio e a regio que contm menor
influncia em comparao proximal promoter, porm so importantes para que ocorra uma correta e
eficiente transcrio de um gene.
A proximal promoter a regio mais prxima do incio da transcrio e ela contm elementos
reguladores para a acoplagem do complexo de transcrio.
Em eucariotos, a TATA box um dos principais promotores, um heptanucleotdeo rico em
timinas e adeninas e est localizao a 25 nucleotdeos antes do incio da transcrio. A TATA box
adequa-se como uma regio proximal promoter. H tambm outras regies como a CAAT box ( 5

6
GGCCAATCT 3) e a GC box ( 5 GGGCGG 3) que esto localizados entre 40 e 100 nucleotdeos
antes do stio de incio da transcrio e adequam-se aos distal promoters.
21) O que so ativadores e silenciadores?
Ativadores ou repressores so protenas que regulam a taxa de expresso gnica nas clulas.
Os ativadores ligam-se aos stios de DNA chamados enhancers e aumentam a taxa de expresso.
Os enhancers so sequncias de DNA que aumentam a afinidade da maquinaria de transcrio
(complexo de transcrio). Os enchancers podem estar acima, abaixo ou dentro do gene ou bem longe
e
em
qualquer
uma
das
fitas.
Os silenciadores tambm so stos de DNA, porm atuam inibindo o processo de trasncrio.
Protenas repressoras ligam-se aos silenciadores para interferir na transcrio, atuando como um
impedimento fsico.
22) O que so fatores de transcrio?
Fatores de transcrio so protenas responsveis por se ligar a sequencias especficas de DNA
(promotores) que caracterizam o local de incio da transcrio, permitindo que as RNA polimerases
possam identificar essa regio e iniciar sua atividade.
23) Qual o papel da TBP?
A TATA Binding Protein (TBT) um fator de transcrio que tem como papel reconhecer o TATA Box,
um dos principais promotores eucariticos, permitindo que a transcrio se inicie
24) O que splicing e como ele acontece?
O Splicing o processo no qual intrns so retirados do RNA primrio para que os xons
sejam arranjados e deem origem ao RNA maduro que ser traduzido no citoplasma. O processo ocorre
com a clivagem dos terminais de intron-xons fazendo um lao com o intrns e aproximando os xons.
Depois ocorre a ligao entre xons e a eliminao dos introns.
25) Que modificaes os mRNAs tem em suas pontas 3 e 5 e que importncia isto tem?
Capeamento da extremidade 5 e poliadenilao da extremidade 3. O Cap 5 importante para que
ocorra a exportao do mRNA maduro do ncleo para o citosol atravs do poros nucleares. A cauda
Poli-A aumenta a sobrevida do mRNA no citosol porque impede que sejam degradados por enzimas do
RNA com atividade exonuclease 3 para 5.
26) A formao de uma estrutura em grampo no final dos mRNAs importante para a parada da
transcrio e colocao da cauda poli A. Por que esta formao ocorre?
A estrutura em grampo realizada em procariotos: ela um tipo de terminao independente do fator
proteico rho. Uma parte da regio transcrita complementar a outra, o que permite a formao da
estrutura em grampo na fita transcrita. Alm disso, ainda h uma sequncia que reconhece trs
resduos de A na fita molde, gerando trs resduos U na extremidade 3' do grampo, a polimerase
reconhece o stio e para. A estrutura pode interromper pares de bases A=U no hbrido RNA-DNA, e
tambm pode interromper interaes entre RNA e RNA-polimerase, levando a dissociao e parada da
transcrio.

7
J a cauda poli A uma estrutura presente na terminao 3' de eucariotos que serve como stio de
ligao para uma ou mais protenas especficas, alm de dificultar a degradao do mRNA. A Pol II vai
sintetizar RNA alm do segmento transcrito, contendo uma sequncia de sinalizao de clivagem, a
(5')AAUAAA, ligada a um complexo enzimtico que contm uma endonuclease. O RNA ento clivado
num ponto entre 10-30 nucleotdeos 3' abaixo da sequncia, gerando uma hidroxila 3' livre, que
receber resduos A atravs de uma polimerase poliadenilada.
27) Como os aminocidos so codificados e qual a seqncia e o aminocido essencial para o
incio da sntese protica?
Os aminocidos so codificados a partir de uma sequncia de trs nucleotdeos, os cdons. A traduo
ocorre de maneira tal que esses triplates so lidos de maneira sucessiva e sem sobreposio. Cada cdon
possui um aminoacetil-tRNA com um anticdon, complementar a ele, que possui um aminocido em sua
extremidade 3. A iniciao da leitura se d quando o complexo com a subunidade menor do ribossomo chega
ao cdon AUG, na direo 5 para 3, que codifica o aminocido metionina.
28) Quais so os tipo de RNA que esto diretamente ligados a sntese proteica?
mRNA, tRNA e rRNA
29) Quais so as caractersticas de um RNA transportador (tRNA)?
Os tRNAs so molculas de RNA com estrutura secundria bem caracterstica, que lhes conferem formato de
trevo. Dentre as vrias estruturas que se formam ao longo da molcula de tRNA, duas so de particular
importncia: o anti-cdon, cuja regio complementa-se ao cdon do mRNA no processo de traduo, e a
haste aceptora, onde h o acoplamento de um aminocido especfico mediado pela ao de aminoacil-tRNAsintetases. Em mdia, para cada 10 ribonucleotdeos em srie, um quimicamente alterado, levando
ocorrncia de diihidro-uracilas, N,N-dimetil-guaninas, 4-tiouridina, inosina, dentre outros ribonucleotdeos no
cannicos, os quais conferem propriedades especficas para o tRNA. Para citar um exemplo, a inosina facilita
consideravelmente a interao entre cdon e anticdon.
30) Quais so as etapas da traduo e o que essencial para que elas ocorram?
Ativao dos aminocidos t-RNA aminoacil sintetase que realiza a ativao do grupo carboxila de cada
aminocido para facilitar a formao de ligao polipeptdica e a ligao do aminocido a um t-RNA
adaptador.
Iniciao Cdon de iniciao (AUG) e fatores de iniciao
Alongamento Fatores de alongamento
Terminao Cdons de terminao e fatores de liberao
Enovelamento e Processamentos Ps-traducionais Enzimas para remoo de resduos iniciais e
sequncias sinalizadoras, modificao dos resduos terminais e ligao dos grupos fosfato, metila, carboxila,
carboidrato ou prosttico.
31) O que contribui para o aumento da eficincia da sntese proteica?

8
Os polissomos permitem a traduo rpida de uma mensagem nica. Uma fita de m-RNA traduzida
simultaneamente por muitos ribossomos cuidadosamente espaados, permitindo o uso altamente eficiente do
m-RNA.
32) Porque bactrias tm pouca regulao gnica quando comparado a clulas eucariticas?
H muitas caractersticas comuns entre a regulao gnica de bactrias e clulas eucariticas,
porm, como eucariontes possuem genomas maiores e uma gama mais extensa de propriedades, se
faz necessrio um processo de regulao mais complexo que o apresentado em bactrias
33) Quais os nveis de regulao da expresso gnica em eucariotos?
A expresso gnica em eucariotos regulada em dois nveis distintos. O primeiro nvel o temporal,
ocorrendo quando determinado gene ou protena s expresso em um tempo determinado; podendo
citar como exemplo protenas que s so expressas no embrio. J o segundo nvel o espacial,
ocorrendo quando a expresso de determinado gene ou protena diretamente dependente do tipo
celular, como, por exemplo, protenas que s so expressas em clulas nervosas.
34) Qual o papel dos fatores de transcrio na regulao da expresso?

Os fatores de transcrio : Enhancers , promotores e silenciadores tem como funo permitir que a
expresso gnica seja controlada finamente a medida que a necessidade da clula demandar
Promotores : se ligam em uma determinada enzima que se une a uma regio gnica ( e.g. TATA )
permitindo que a RNA polimerase se ancore e comece a transcrio
Silenciadores e Enhancers : so regies do DNA ( podendo serem milhares de pares de bases
distantes da regio de transcrio propriamente dita ) que auxiliam as regies promotoras com
enzimas que , assim como na regio TATA , se ligam aos pares de bases e atuam facilitando a
transcrio (enhancers) ou dificultando a mesma (silenciadores).

35) Qual a funo do remodelamento da cromatina na regulao da expresso gnica?

O remodelamento de cromatina possui o principal objetivo de ativao ou represso gnica , podendo

ocorrer por ligao de enzimas ou por modificao da estrutura do octeto de histonas j ligado ao
DNA .
Um remodelamento capaz de desprender o DNA na histona permite uma maior transcrio por
determinado tempo (e.g. acetilao ,ligao de Tritorax)
Um remodelamento capaz de prender mais o DNA na histona incapacita gradualmente a transcrio
(e.g. ligao de histonas HP1 ou de complexo Policomb)

36) O que so enzimas de restrio?

37) Que vetores podem ser utilizados para clonagem gnica?
A caracterstica do DNA que foi mais utilizada para a identificao de genes foi a complementariedade
de bases, na qual a partir da determinao de uma sequncia de bases nitrogenadas presentes em

9
uma das fitas do DNA, se tornaria possvel determinar a sequncia de bases presentes na fita
complementar.
38) Que caracterstica do DNA foi mais utilizada para a identificao de genes?
39) O que a PCR (polymerase chain reaction) e porque esta tcnica revolucionou a clonagem?
PCR uma tcnica utilizada para analisar fragmentos de DNA atravs de diversas replicaes desta
parte do material gentico, com a utilizao de primers especficos que identificam certa sequncia de
bases e, com isso, sinalizam para o DNA polimerase para que esta faa a replicao da fita.
Essa tcnica revolucionou a clonagem pois a partir dela foi possvel analisar de maneira mais rpida
amostras que antes demoravam para ser amplificadas. Atravs dessa tcnica, essa amplificao
passou a ser feita mais rapidamente, sendo possvel a criao de cpias da sequncia alvo a ser
analisada.
40) Na sua opinio qual a vantagem da tecnologia de arrays?
O princpio da tcnica de microarranjo consiste na hibridizao entre uma sonda (cDNA ou
oligonucleotdeo) e uma molcula-alvo marcada com fluorforo, usualmente um cDNA. As sondas
contm sequncias complementares s molculas-alvo correspondendo a uma parte especfica de um
gene e so fixadas em uma superfcie slida atravs de agulhas robotizadas, fotolitografia ou por
impresso a jato. O RNA mensageiro extrado das amostras a serem analisadas so utilizados como
moldes para a formao do cDNA. Este cDNA ento marcado com fluorforo para posterior
hibridizao. Uma das aplicaes da tcnica de microarranjo mais utilizada a comparao entre duas
amostras distintas (por exemplo, uma amostra de doena e uma amostra saudvel); nesta condio,
molculas de DNA provenientes das duas amostras so marcadas com CY3 (verde) e CY5 (vermelho),
e hibridizadas s sondas no microarranjo. Apenas as molculas que hibridizarem com avidez s
sondas sero lidas como um sinal de fluorescncia por um scanner, e as molculas que no se ligarem
s sondas sero retiradas aps sucessivas lavagens, permitindo somente a identificao de molculas
complementares s sondas. Posteriormente a leitura no scanner de fluorescncia feita a digitalizao
das imagens e anlise estatstica.
Utilizando a tcnica convencional de microarranjo faz-se a anlise de milhares de genes ao mesmo
tempo, sendo, portanto muito empregada para fazer mapeamento do DNA. Mapeamento diversos
genes, podendo ser usada para monitorar o efeito de certos tratamentos nos genes ou at em doenas
genticas. A partir do uso da tcnica de microarranjo pode ser feita uma anlise dos perfis
transcricionais nos organismos, analisando os genes que so expressos diferencialmente. A partir de
um conhecimento prvio dos xons de interesse, pode-se utilizar a tcnica de microarranjo para o
estudo de splicing alternativo nos organismos por sondas marcadas nas regies dos xons.
41) Quais so as vantagens de se usar genmica e transcriptomica na descoberta de novas
molculas?