Aula - Cultura de Tecidos

Cultura de Tecidos Vegetais
Cristyene Gonalves Benicio
23/05/2011
SUMRIO
Introduo
Histrico
Caractersticas
Sistemas de cultura
Aplicaes
Dificuldades
Espcies e tecnologias empregadas
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INTRODUO
Biotecnologia:
o Tcnicas baseadas em organismos vivos
produtos;
o A utilizao de sistemas celulares para
desenvolvimento de processos (CNPq);
o A aplicao dos princpios cientficos
processamento de materiais por agentes
produtos ou servios (FAO,1989).
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para o desenvolvimento de
a obteno de produtos e
e de engenharia para o
biolgicos proporcionando
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INTRODUO
Cultura de Tecidos Vegetais: isolamento de segmento de uma planta
e cultivo in vitro, proporcionar artificialmente condies fsicas e
qumicas para o desenvolvimento das clulas mantendo-se a assepsia.
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INTRODUO
Princpio da Cultura de Tecidos: teoria da totipotncia em que os
seres vivos tem a capacidade de regenerar organismos inteiros,
idnticos matriz doadora, a partir de clulas nicas.
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INTRODUO
Micropropagao: diferentes rotas morfogenticas para obteno de
plantas in vitro, produo de mudas em grande escala por tcnicas de
cultura de tecidos. Este termo, utilizado primeiramente por Hartman e
Kester (1975), passou a ser empregado para definir os processos de
propagao vegetativa na cultura de tecidos vegetais.
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INTRODUO
Morfognese: tecidos comprometidos com determinada funo so
redirecionados para formao de orgo (organognese: direta ou
indireta) ou embrio (embriognese somtica); propagao com
explantes no meristemticos.
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Explante
Organognese indireta
Organognese
direta
Formao de
calos
Vias de
regenerao direta
e indireta
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HISTRICO
1900 - 1939: escolha do explante, formulao do meio de cultura,
assepsia, meios nutritivos, auxinas, determinao do crescimento
ilimitado das clulas, formao de calo
o 1902 - Haberlandt: totipotencialidade das clulas vegetais, cultivo de clulas vegetais;
o 1904 - Hanning: cultivo in vitro de embries imaturos de crucferas;
o 1922 - Knudson: cultivo de embries de orqudeas;
o 1922 - Kotte e Robins: ponta de raiz e pice meristemtico;

o 1924 - Dieterich: ausncia de dormncia em embries cultivados;
o 1925 - Laibach: recuperao de plantas hbridas de cruzamentos incopatveis;
o 1926 - Went: descoberta das auxinas;
o 1934 - White, Kogl et al.: cultivo de pices de raiz de tomate, identificao AIA;
o 1939 - White, Nobercourt, Gautheret: calos de fumo e cenoura.
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HISTRICO
1940 - 1970: estudos bsicos de nutrio e morfognese, pice
meristemtico, clulas em suspenso, protoplastos, regenerao de
plantas
o 1941 - Van Overbeek: adio de leite de coco aos meios de cultura (zeatina);
o 1946 - Ball: regenerao de plantas a partir de pice meristemtico;
o 1948 - Skoog &Tsui: formao de parte area e raiz em calo de fumo;
o 1952 - Morel & Martin: obteno de plantas de dlia livres de vrus;

o 1953 - Muir: obteno de cultura de clulas em suspenso;
o 1954 - Torrey - suspenses celulares;
o 1955 - Miller et al. - descoberta das citocininas, regenerao de parte area/raiz depende
do balano auxina/citocinina;
o 1957 - Skoog & Miller Auxina/Citocinina na morfognese;
o 1958 - Steward et al.: embries somticos de cenoura.
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HISTRICO
1940 - 1970: estudos bsicos de nutrio e morfognese, pice
meristemtico, clulas em suspenso, protoplastos, regenerao de
plantas
o1960 - Cocking: mtodo de isolamento de protoplastos
o 1960 - Morel: eliminao de vrus;
o 1962 - Kanta et al.: tcnicas de polinizao intra-ovariana e polinizao in vitro;
o 1961 - Torrey: instabilidade gentica in vitro;

o 1962 - Murashige & Skoog: desenvolvimento de meio de cultura artificial MS;
o 1964 - Guha & Maheshwari: haplides androgenticos de Datura;
o 1966 - Guha & Maheshwari: cultura de anteras;
o 1968 - Takebe et al.: mesfilo foliar fumo;

o 1970 Smith & Murashige: cultura de meristemas.
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HISTRICO
1970 - 1990: manipulao gentica, hbridos somticos, transgnicos

o 1971 Takebe et al.: regenerao de plantas a partir de protoplasto;
o 1973 - Carlson et al.: fuso de protoplastos de fumo;
o 1874 Zaenen et al. e Van Larebeke et al.: transformao de plantas;
o 1977 - Chilton et al.: transformao gentica em fumo;

o 1978 - Melchers et al.: hbrido somtico (batata + tomate);
o 1979 Marton et al.: tcnica de co-cultivo;
o 1982 Pelletier et al.: hibridao citoplasmtica intergenrica (couve + rabanete);
o 1985 Horsch et al.: plantas transgnicas com caractersticas de interesse.
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HISTRICO
1990 hoje: protocolos de cultura de tecidos, com regenerao de
plantas para a maioria das espcies

o Universidades e centros de pesquisa:
Estudos bsicos: fisiologia e bioqumica;
Desenvolvimento
de
protocolos:
organognese,
embriognese
somtica,
transformao gentica;
Manipulao gentica: hibridao somtica e transformao gentica.
o Empresas privadas:
Micropropagao;
Produo de variedades transgnicas.
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HISTRICO NO BRASIL
1950: Dr. Bitancourt: Instituto Biolgico de So Paulo.
1971: Dr. William Sharp, Dra. Linda Caldas, Dr. Otto
Crcomo: ESALQ.
1972: Dra. Lindas Caldas: Universidade de Braslia.
1973: Dr. Walter Handro, Dr. Kurt Hell, Dr. Gilberto
Kerbauy: USP/So Paulo.
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CARACTERSTICAS
Ocorre em micro-escala;
Ambiente otimizado (fsico e nutricional);
Ausncia de microorganismos e insetos;
Quebra no padro normal de desenvolvimento da planta;

O tecido isolado se desenvolve de maneira no usual;
Permite manipulao gentica;

Ocorre "in vitro" = cultivo em frascos de vidro.
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ASSEPSIA
Explante
Meio de Cultura
Manipulao
o instrumentos
o fluxo laminar
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MEIOS NUTRITIVOS
Fornecimento de substncias essenciais para o crescimento dos

tecidos e controlar, em grande parte, o padro de desenvolvimento in
vitro.
Composio:
gua: H e O.
Minerais (17 elementos essenciais):
o Maconutrientes: N, P, K, Ca, Mg e S;
o Micronutrientes: Zn, B, Fe, Cu , Mn ,Mo, Cl e Co.
Compostos orgnicos:
o Carboidratos: C, H e O;
o Fonte de Carbono e energia: sacarose, maltose;
o Vitaminas: tiamina, piridoxina, cido nicotnico, biotina,
cido ascrbico, inositol.
Reguladores de crescimento/fitormnios: Auxinas, Citocininas,
Giberelinas, Etileno e c. Abscsico.
Agente geleificante: gar, agarose, poliacrilamida, slica gel.
pH= 5,0 a 5,7.
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ACLIMATIZAO
Aclimatizao: processos para a passagem da planta que est in

vitro para o ambiente e definido como a adaptao climtica de um
organismo, especialmente uma planta, que transferida para um novo
ambiente, sendo todo esse processo realizado artificialmente.
Problemas: baixa capacidade fotossinttica, desidratao, absoro
de nutrientes e doenas.
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ACLIMATIZAO
Aclimatao: processo no qual as plantas ou outros organismos se

tomam ajustados a um novo clima ou situao, como resultado de um
processo essencialmente natural.
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ACLIMATIZAO
Fatores que afetam:

1) Sade das plantas micropropagadas;
2) Umidade relativa;
3) Baixas quantidades de luminosidade e irradiao;
4) Temperatura prxima da que estava no ambiente;
5) O pH do solo deve ser apropriado;
6) Fertilidade e porosidade para promover drenagem adequada e aerao;
7) rea adequada de enraizamento;
8) Adio de macro e/ou micronutrientes no substrato em que as plntulas
so transplantadas;
9) Assepsia das plntulas com gua morna para retirada total do meio de
cultura.
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ENRAIZAMENTO
Define o resultado final.

Formao de razes adventcias nas partes
areas.
Etapas: induo, iniciao e alongamento
das razes.
Pode ser realizado in vitro ou no ambiente
externo.
O uso de auxinas favorece a induo e a
iniciao radicular e inibe o alongamento.
Concentraes elevadas de auxina pode
levar formao de calos.

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SISTEMAS DE CULTURAS
Com crescimento organizado (organizao espacial precisa, coordenao

temporal, padres estruturais e funcionais definidos):
o Cultura de Plantas Intactas: sementes;
o Cultura de Embrio: isolamento do embrio zigtico;

o Cultura de Orgos: meristema, raiz, gemas.
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o Cultura de Meristema: domo meristemtico apical sem os primrdios foliares;
o Cultura de pices Caulinares: brotaes apicais maiores.
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Com
crescimento
organizado
(organizao
espacial
precisa,
coordenao
temporal,
padres
estruturais e funcionais definidos):

o Cultura
de
Segmentos
Nodais:
gemas laterais isoladas;

o Cultura
de
Razes
Isoladas:
conexes com os eixos caulinares;

o Cultura de Haplides: cultivo de
antera ou gro de plen.
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o Microenxertia: pice caulinar sob porta enxerto.
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Com crescimento no organizado:

o Cultura de Calos: massa de clulas de crescimento no organizado;
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o Cultura de Clulas em Suspenso: mistura de clulas isoladas e/ou pequenos
agregados de clulas, incubado sob agitao.
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o Cultura de Protoplastos: isolamento e cultivo de clulas sem parede celular;
o Cultura de Anteras e Plen: cultura de anteras completas contendo
micrsporos imaturos, com o objetivo de formar embries somticos
diretamente sobre o plen, ou algumas vezes por organognese passando pela
fase de calo.
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APLICACES
Pesquisa Bsica: fisiologia e bioqumica vegetal.

Limpeza Clonal: vrus sistmicos em espcies de propagao vegetativa.
Resgate de Embrio: cruzamento sexual de parentais distantes.
Embriognese Somtica: sementes sintticas.
Avaliao Rpida de Suscetibilidade.
Induo de Florescimento Precoce.
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APLICACES
Conservao de Germoplasma in vitro: criopreservao.

Manipulao Gentica: hibridao somtica, transformao gentica.
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APLICACES
Biorreatores:
seleo
de
linhagens,
produo
de
metablitos
secundrios.
Melhoramento Gentico: variao somaclonal, polinizao in vitro,
plantas haplides.
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DIFICULDADES
Declnio de vigor: baixa taxa de desenvolvimento, produo de
substncias fenlicas ou a outros fatores como vitrescncia, habituao ou

maturidade dos explante.
Necroses: morte de uma parte de um organismo vivo.
Oxidao:
reao do oxignio com ons metlicos (+) dos outros
compostos do meio de cultivo.

Hiperhidricidade: estado fisiolgico que a planta apresenta elevado teor
de gua no interior das clulas e tecidos com aspecto translcido.
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ESPCIES E TECNOLOGIAS EMPREGADAS
Dendezeiro: primeiro projeto no qual plntulas originadas a partir de

embriognese somtica foram cultivadas a campo, (Unilever, Malsia,
1975).
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Conferas: primeiro projeto no qual tecnologias de poliembriognese

somtica desenvolvidas e patenteadas pela Universidade da CalifrniaDavis foram transferidas para empresas de reflorestamento (Weyerhaeuser,
Washington, USA), para a clonificao de gentipos superiores resultantes
de programas convencionais de melhoramento gentico.
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Eucaliptos: organognese, embriognese somtica (USA, Europa).

Microestacas (Brasil): aumento de 135% na produtividade de polpa a partir
de clones selecionados em comparao a populao base.
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Pyrus, Malus, Prunus: Limpeza viral e micropropagao (cultura de

meristemas e de segmentos nodais) para a propagao massal de portaenxertos e para o estabelecimento de variedades-copa matrizes sadias.
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Videira: embriognese somtica e organognese para a propagao

massal de porta-enxertos e variedades-copa isentas de molstias.
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Bananeira: regenerao em larga escala de mudas isentas de pragas

molstias como Mal do Panam e Sigatoka-negra. Atualmente a maior parte
dos bananais so instalados com mudas micropropagadas produzidas em
Biofbricas.
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Moranguinho, abacaxizeiro, alho, cebola, batatinha, mandioca: Obteno

de plantas matrizes isentas de viroses, pela aplicao da tcnica de cultura
de meristemas e subsequente micropropagao massal.
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Citros, mamoeiro e mangueira: Melhoramento e plantas isentas de

molstias.
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Brassica sp: resgate de embries resultantes de cruzamentos

incompatveis, ativao de embriognese somtica e encapsulamento para
a obteno de sementes sintticas.
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Cacau e caf: embriognese somtica para a propagao massal de

variedades melhoradas e resistentes a molstias (EUA e Costa Rica).
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OBRIGADA
cristyene@gmail.com
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Cristyene Gonalves Benicio

o 1922 - Kotte e Robins: ponta de raiz e pice meristemtico;

o 1952 - Morel & Martin: obteno de plantas de dlia livres de vrus;

o 1961 - Torrey: instabilidade gentica in vitro;

o 1968 - Takebe et al.: mesfilo foliar fumo;

1970 - 1990: manipulao gentica, hbridos somticos, transgnicos

o 1977 - Chilton et al.: transformao gentica em fumo;

o 1985 Horsch et al.: plantas transgnicas com caractersticas de interesse.

1990 hoje: protocolos de cultura de tecidos, com regenerao de

plantas para a maioria das espcies

Quebra no padro normal de desenvolvimento da planta;

Permite manipulao gentica;

Fornecimento de substncias essenciais para o crescimento dos

Aclimatizao: processos para a passagem da planta que est in

Aclimatao: processo no qual as plantas ou outros organismos se

Fatores que afetam:

Define o resultado final.

levar formao de calos.

Com crescimento organizado (organizao espacial precisa, coordenao

o Cultura de Embrio: isolamento do embrio zigtico;

Com crescimento organizado (organizao espacial precisa, coordenao

o Cultura de pices Caulinares: brotaes apicais maiores.

estruturais e funcionais definidos):

gemas laterais isoladas;

conexes com os eixos caulinares;

antera ou gro de plen.

Com crescimento organizado (organizao espacial precisa, coordenao

Com crescimento no organizado:

Com crescimento no organizado:

Com crescimento no organizado:

Pesquisa Bsica: fisiologia e bioqumica vegetal.

Conservao de Germoplasma in vitro: criopreservao.

Declnio de vigor: baixa taxa de desenvolvimento, produo de

substncias fenlicas ou a outros fatores como vitrescncia, habituao ou

reao do oxignio com ons metlicos (+) dos outros

compostos do meio de cultivo.

ESPCIES E TECNOLOGIAS EMPREGADAS

Dendezeiro: primeiro projeto no qual plntulas originadas a partir de

ESPCIES E TECNOLOGIAS EMPREGADAS

Conferas: primeiro projeto no qual tecnologias de poliembriognese

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Eucaliptos: organognese, embriognese somtica (USA, Europa).

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Pyrus, Malus, Prunus: Limpeza viral e micropropagao (cultura de

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Bananeira: regenerao em larga escala de mudas isentas de pragas

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Moranguinho, abacaxizeiro, alho, cebola, batatinha, mandioca: Obteno

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