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Biotecnologa

Ingeniera en Biotecnologa

GUA DE EJERCICIOS N 2
BALANCES DE MASA EN BIOPROCESOS

Rubn Bustos C., Ph.D.

Santiago, Mayo 2015

UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE CHILE

Departamento de Ingeniera Qumica

IBT, 1 SEMESTRE 2015

Av. Libertador Bernardo OHiggins 3363

9170022 Estacion Central Santiago Chile
Tel: ++56 2 718 1803 Fax: ++56 2 681 7135 ruben.bustos@usach.cl

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BALANCES DE MASA EN BIOPROCESOS

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1.
Produccin de cido actico a partir de etanol
La bacteria Acetobacter aceti convierte etanol en cido actico, bajo condiciones aerbicas. Se ha propuesto un
proceso de fermentacin contnua para la produccin de vinagre, en el cual se utilizan clulas no viables de A. aceti,
inmobilizadas sobre la superficie de esferas de gelatina. Se desea producir 2 Kg h -1, sin embargo, la concentracin
mxima de de cido actico tolerada por las clulas es de 12%. El aire es suministrado a las clulasa una velocidad de
200 mol h-1.
1.1. Qu cantidad mnima de etanol se requiere para el procesos?
1.2. Qu cantidad mnima se agua debe agregarse para diluir el etanol y evitar as la inhibicin por cido?
1.3. Cul es la composicin de los gases exhaustos del proceso?
2.
Concentracin de clulas utilizando membranas filtrantes
Una batera de membranas de fibra hueca cilndricas se operan bajo condiciones de estado estable para concentrar una
suspensin de bacterias obtenidas de un proceso de fermentacin. Se hace circular el medio de cultivos a travs de la
batera de membranas a una velocidad de 350 Kg min -1 .(ver diagrama). El caldo de fermentacin contiene un 1% de
bacterias, el esto puede ser considerado como agua. Una solucin tampn entra por el espacio anular entre entre los
cilindros de membrana a una velocidad de 80 Kg min -1; debido a que el caldo de fermentacin est bajo presin, el
agua pasa a travs de la membrana hacia la solucin de buffer. Las clulas en el caldo de fermentacin tiene un tamao
demasiado grande como para atravesar la membrana, y salen al otro extremo del tubo como una solucin concentrada.
El objetivo de
esta filtracin en
membrana
es
obtener
un concentrado
Figura 1:
con 6% de biomasa.
2.1. Cul es la velocidad de flujo en el
interior del espacio anular?
2.2. Cul es la velocidad de flujo de la
suspensin celular que sale de la
membrana?.
3.

Figura 2:

Cultivo in vitro de races de

plantas
Las races de algunas plantas producen
sustancias qumicas tiles in-vitro.
Atropa belladona se cultiva en lotes, a
25C, en un reactor propulsado con aire (ver Fig 2). Dado que
las races no se pueden remover durante la operacin del
reactor, se ha propuesto monitorear el crecimiento usando
balances de masa.
Se alimenta 1425 g de medio de cultivo que contienen 3 %
de glucosa y 1,75% de Amonio; Lo dems puede ser
considerado como agua. El aire es alimentado a 1 atm de
presin, y 25C, a una velocidad de 22 cm 3 min-1. Durante un
periodo de cultivo de 10 das, se recolectan 47 litros de O 2 y
15 litros de CO2. Despus de 10 das, 1110 g de lquido se
drenan desde el reactor, y su composicin era de 0,063%
glucosa y 1,7% de amonio. Para las races, la relacin de
peso fresco a peso seco es de 14:1.
3.1. Qu masa de races secas se producen al cabo de 10
das?
3.2. Escriba la ecuacin para la reaccin de crecimiento,
indicando la frmula qumica aproximada de las races,
CHO N
3.3. Cul es el sustrato limitante?
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3.4. Cul es el rendimiento de races a partir de glucosa?

4.
Requerimiento de oxgeno para crecimiento en glicerol
A partir de glicerol y amonio como fuente de nitrgeno, es posible producir Klebsiella aergenes. La biomasa as
obtenida contiene 8% de cenizas. Por cada gramo de glicerol se obtienen 0,40g de biomasa, y no se producen cantidad
significativas de ningn otro metabolito. Cul es el requerimiento (masa) de oxgeno para este cultivo?
5.
Rendimiento de producto en cultivo anaerbico
La digestin anaerbica de cidos voltiles mediante bacterias metangenas se puede representar segn la ecuain:
CH3COOH
+ NH3
Biomasa
+ CO2
+ H2O
+ CH4
cido actico

Metanogena

La composicin aprximada de la bacteria metangena qeuda representada en la ecuacin CH1,4O0,40N0,20. Por

cada Kg de cido actico consumido se producen 0,67 Kg de CO 2. Compare el rendimiento de metano bajo las
condiciones del problema con el mximo rendimiento posible para la reaccin.
6.
Estequiometra de la produccin de single cell protein
(a) Las bacterias del gnero Cellulomonas se pueden producir a partir de glucosa, bajo condiciones anaerbicas, y se
utilizan como single cell protein para alimentacin humana y animal. Todo el carbono presente en el sustrato se
convierte en biomasa, utilizando amonio como fuente de nitrgeno. La frmula molecular para la biomasa es:

CH1,56O0,54N0,16; las clulas tambin contienen 5% de cenizas. Compare el rendimiento de biomasa a partir de
sustrato, en trminos molares y de masa, bajo las condiciones del problema, con el mximo rendimiento posible para la
reaccin.
(b) Otro sistema para la produccin de single cell protein es Methylophilus methylotrophus. Este organismo se produce
bajo condiciones aerbicas, a partir de metanol y amonio como fuente de nitrgeno. La frmula molecular para la
biomasa es: CH1,68O0,36N0,22; y las clulas contienen 6% de cenizas.
6.1. Compare el mximo rendimiento posible de biomasa para la reaccin con lo encontrado en el caso anterior (a).
cul es la principal razn de la diferencia?
6.2. Si el rendimiento real de biomasa a partir de metanol es 42% del mximo termodinmico, cunto ser la demanda
de oxgeno?
7.
Produccin de etanol en levaduras y bacterias
La levadura S. Cerevisiae y la bacteria Zymomonas mobilis producen etanol a partir de glucosa, bajo condiciones
anaerbias y sin un aceptor de electrnes externo. El rendimiento de biomasa a partir de glucosa es de 0,11 g g -1 en
levaduras, y 0,05 g g-1 en Z. mobilis. En ambos casos la fuente de nitrgeno es amonio. La composicin celular de
ambos organismos se representa en la frmula: CH1,8O0,5N0,2.
7.1. Cul es el rendimiento de etanol a partir de glucosa en ambos casos?
7.2. Compare los rendimientos calculados en 7.1., con el mximo rendimiento termodinmico posible para la reaccin.
8.
Demanda de oxgeno para la produccin de protenas recombinantes
La produccin de protena recombinante en una cepa de E. coli modificada es proporcional al crecimiento celular. Se
utiliza amonio como fuente de nitrgeno para el crecimiento aerbico con glucosa como sustrato. La protena
recombinante tiene la frmula qumica: CH1,55O0,31N0,25. El rendimiento de biomasa a partir de glucosa es de 0,48
g g-1. El rendimiento de protena recombinante a partir de mismo sustrato es de 20% el correspondiente a las clulas.
8.1. Cunto amonio se requiere?
8.2. Cul es la demanda de oxgeno para el proceso?
8.3. Si el rendimiento de biomasa se mantiene en 0,48 g g -1 Qu tan diferentes sern los requerimientos de oxgeno y
amonio para la cepa silvestre de E. coli que es incapaz de sintetizar la protena recombinante?

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9.
Efecto de crecimiento sobre la demanda de oxgeno
La ecuacin qumica para la reaccin de conversin de etanol en cido actico es la siguiente:
CH3CH2OH
+ O2
CH3COOH
+ H2O
Etanol

cido actico

El cido actico se produce a partir de etanol durante el crecimiento de Acetobacter aceti, la cual tiene la composicin

CH1,8O0,5N0,2. El rendimiento de biomasa a partir de sustrato es de 0,14 g g -1. El rendimiento de producto a partir
de sustrato es de 0,92 g g-1. Amonio es utilizado como fuente de nitrgeno. En qu forma el crecimiento afecta la
demanda de oxgeno para la produccin de cido actico?
10. Considere un cultivo de bacterias con la frmula emprica de la biomasa siguiente:
CH1.7O0.46N0.18 (MWB = 23,6 g / mol)
(MWB = Molecular Weight of biomase = Peso molecular de la Biomasa)
Creciendo aerbicamente en glucosa (C6H12O6).
Usted decide medir los coeficientes de rendimiento para la glucosa y el oxgeno y encuentra que:
YX/S = 85 g de biomasa / mol de glucosa
YX/O = 39 g de biomasa / mol O2.
2

Este organismo no secreta cantidades apreciables de producto en estas condiciones.

a. Muestran que los valores medidos de YX/S y YX/O son estequiomtricamente coherentes entre s, haciendo
todos los supuestos que sean necesarios, y explicitndolos en su respuesta.
2

b. Un cultivo discontinuo de este organismo contiene inicialmente 0,01 g de inculo de biomasa y 20 mmol de
glucosa. El cultivo se incub durante la noche, y las mediciones de densidad ptica posteriores sugieren que
las clulas ya no estn creciendo. La biomasa total en el medio de cultivo se calcula que es 1,0 g. Estimar la
cantidad final de glucosa en el medio (mmol), y especular sobre la causa de la meseta en la cantidad de
biomasa.
11. Considere una fermentacin anaerbica utilizando levadura, con la frmula emprica de biomasa siguiente:
CH1.7O0.45N0.15 (MWB = 23,0 g DCW/mol) (DCW = Dry cell weight = Peso seco de la Biomasa)
Las fuentes de carbono y nitrgeno son sales de glucosa (C 6H12O6) y de amonio, respectivamente. Los productos
posibles son la biomasa y etanol (C2H6O), junto con el dixido de carbono y agua.
a. Cul es el mximo coeficiente de rendimiento posible de la biomasa (g DCW/mol de glucosa), y bajo qu
condiciones y/o supuestos se logra obtener?
b. Cul es el mximo coeficiente de rendimiento posible de etanol (moles EtOH/mol de glucosa), y bajo qu
condiciones y/o supuestos se logra obtener?
12. Considere un cultivo en lote de bacterias con la frmula emprica de biomasa
CH1.6O0.55N0.20 (MWB = 25,2 g / mol).
El biorreactor es un recipiente cerrado, rgido en el que el medio lquido contiene 10 mmol de glucosa (C 6H12O6) y se
aade un exceso de sulfato de amonio. El espacio de cabeza (el espacio vaco que queda entre la parte superior del
lquido y la tapa superior del biorreactor) contena inicialmente aire humidificado. Despus de algn tiempo, durante el
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cual se logr un crecimiento neto de 0,3 g de peso celular seco, se analiz el gas del espacio de cabeza. Despus de
cuantifica apropiadamente la concentracin de O2 en el lquido en equilibrio con el espacio de cabeza, se encontr que
se consumi un total de 15 mmol O2.
Este organismo no secreta cantidades apreciables de producto bajo estas condiciones.
a. Estimar el coeficiente de rendimiento de sustrato, YX/S (g DCW / glucosa moles) y la cantidad final de
glucosa en el medio (mmol).
b. Estimar la cantidad de CO2 producido (mmol).
13. Un cultivo bacteriano se lleva a cabo utilizando piruvato (C 3H4O3) como sustrato de crecimiento. La fuente de
nitrgeno se compone de sales de amonio. La frmula emprica de la biomasa es CH 1.8O0.5N0.17 biomasa (MWB = 24,2
g DCW / mol).
a. Basndose en esta informacin solamente, estimar el rendimiento terico mximo de biomasa por mol de
piruvato (g DCW / mol).
Este mismo cultivo que ya se ha descrito anteriormente se lleva a cabo en condiciones aerbicas, y no hay
productos secretados detectables. Basado en las mediciones de las concentraciones de CO 2 en el espacio de
cabeza y el que se disuelve en el medio, se determina que se liberan 45 mmol CO 2 por para cada g DCW de
biomasa producido.
b. Estimar el rendimiento de biomasa real por mol de piruvato (g DCW / mol).
c. Explicar la diferencia entre las respuestas en las partes a y b.
14. Aerobacter aergenes se cultiva aerbicamente, con glucosa (C6H12O6) o piruvato (C3H4O3) como sustratos de
crecimiento. La siguiente informacin fue tomada de Bailey & Ollis:
Frmula emprica biomasa: CH1.78N0.24O0.33 (MWB = 22,5 g / mol); grado de reduccin de la biomasa = 4.4

Sustrate

YX/S
--------------------------------------------g/g
g/mol
g/g-C

YX/O2
------------------------g/g
g/mol

Glucosa
Piruvato

0.40
0.20

1.11
0.48

72.7
17.9

1.01
0.49

35.5
15.4

a. Comparar los rendimientos de biomasa reales a partir de glucosa y piruvato con sus respectivos
rendimientos mximos tericos. Qu sustrato de crecimiento es ms eficiente con respecto a la biosntesis de
biomasa?
b. D dos breves explicaciones de por qu la respuesta a la pregunta a, tiene sentido (o, trate de adivinar que
sustrato es ms eficiente y justifique su respuesta).
c. Teniendo en cuenta el caso de crecimiento en glucosa, evalue si acaso se podran esperar grandes cantidad
de productos secretados.
16. Considere un cultivo bacteriano aerbico, creciendo en lotes, con los siguientes parmetros:
Frmula emprica biomasa: CH2O0.5N0.2 (MWB = 24,8 g DCW / mol)
Volumen de medio de cultivo en el reactor: 100 L
Cantidad de inculo bacteriano inicial: 0,01 g DCW / L.

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Tasa de flujo volumtrico de los gases de burbujeo: 40 L / min.

Composicin de los gases de burbujeo: 20 mol% de O2 (8,6 mM), 0,5% en moles de CO2
MO (equilibrio de fase constante): 40
Fuente de carbono: glucosa (C6H12O6; PM = 180 g / mol)
La concentracin de glucosa inicial: 20 g / L
Las bacterias no secretan ningn otro productos detectable a parte del CO2 y agua.

(El gas del espacio de cabeza por encima de la cultura se

le permite escapar hacia el medio ambiente a la misma tasa volmetrica o caudal de los gases que se burbujea)

Al tiempo de 10 horas despus posteriores al tiempo de la fase de latencia, las clulas se siguan creciendo de manera
exponencial, y se tomaron los siguientes datos:

mol% de O2 en el espacio de cabeza: 4,9%

mol% de CO2 en el espacio cabeza: 16,8%
Concentracin de la biomasa: 5,0 g DCW / L

a. Estimar la tasa de crecimiento especfico mxima, max.

b. Estimar la concentracin de glucosa que queda en el medio cuando anteriormente se tomaron los datos.
17. Este problema se trata con el anlisis de bacterias de cido butrico de fermentacin, como se considera en ms
detalle por Papoutsakis (Biotechnol Bioeng, 26: 174-187;1984). Se supone que estas bacterias consumen glucosa y
sales anaerbicamente a la forma que contiene nitrgeno: la biomasa, expresada como una frmula emprica reducida
CHpOnNq, butirato de (C4H8O2), acetato de (C2H4O2), CO2, H2 y H2O. Otros productos que o bien no se acumulan o se
producen en cantidades insignificantes.
La va metablica, considerando slo las especies que contienen carbono, se puede simplificar y se escribe como sigue:
C6H12O6 6 CHpOnNq
C6H12O6 2 AcCoA + 2 CO2
AcCoA C2H4O2
AcCoA + C2H4O2 C4H8O2
El anlisis adicional se basa en las siguientes observaciones:
1) La biomasa es generalmente 46,2% de carbono en peso.
2) El grado de reduccin de la biomasa es generalmente igual a 4,29.
3) El coeficiente de rendimiento de la biomasa es 40,0 g de glucosa DCW / mol.
4) La relacin molar de H2 / CO2 producido se encuentra que es 1,20.
a. Determinar el peso molecular emprica de la biomasa, MWB (g DCW / mol).
b. Calcule los grados de reduccin para todas las especies distintas de la biomasa.
c. Estimar los coeficientes de rendimiento de acetato y butirato (mol / mol de glucosa) en estas condiciones.

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