UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGA
CAHUASQUI JIMENA
NOVENO ALIMENTOS

28-mar-11

CONTROL DE CEPAS
La conservacin de microorganismos permite disponer de cepas inmediatamente
para su uso, stos microorganismos deben ser considerados confiables cuando sean
solicitados para cualquier trabajo de investigacin, por este motivo se deben
manejar tcnicas adecuadas para su preservacin a ms de tener un control de
calidad sobre ellos.
La mayora de los procedimientos en Microbiologa, dependen de que los
microorganismos viables en el cultivo sean capaces de mantener sus caractersticas
morfolgicas, fisiolgicas y que sean tpicas y reproducibles.
Generalmente se utilizan cepas de referencia como las ATCC y si son cepas
domsticas, es necesario tener un historial del organismo que incluye nombre, rea
de aislamiento, reacciones bioqumicas y patrn de sensibilidad a los antibiticos,
forma de almacenaje, fecha de ltimo transplante, etc
En todo caso, las cepas de referencia deben tener requisitos especficos:

Caractersticas tpicas.

Caractersticas estables.

Reproducibilidad

Cultivos de referencia
Este cultivo se refiere a cepas de referencia, cepas de reserva y cepas de trabajo.

Son clulas microbianas capaces de crecer.

Se debe tratar de un cultivo puro.
Genticamente estables.

Cepas de reserva; Las cepas de reserva son una serie de alcuotas de cultivos
idnticos obtenidas en el laboratorio por subcultivo de la cepa de referencia.

Para la correcta conservacin de las cepas se deben cumplir tres objetivos

fundamentales que, en primer lugar que el cultivo a conservar est puro, en
segundo que se logre una supervivencia de al menos el 70-80% de las clulas, o sea
que sean viables y en tercero que sean genticamente estables.

RECONSTITUCION
Las cepas almacenadas se reconstituyen y siembran usando el medio de cultivo y
condiciones de incubacin de acuerdo al microorganismo.
En paralelo se realiza un control de calidad de pureza y viabilidad, no se debe
olvidar que los crioviales que han sido descongelados no se deben volver a
congelar nuevamente.

Control de calidad pureza y viabilidad

Se realiza a diferentes niveles del proceso para asegurarse que las cepas conservan
su viabilidad y caracteres bioqumicos. La frecuencia de realizacin de este
control para las cepas almacenadas en el laboratorio la establecer en cada caso.

Registro De Control De Calidad

1. Fecha del control.
2. Identificacin de la cepa. Gnero y especie del microorganismo. TIPO y N de
coleccin.
3. Tipo de cepa (Cepa de referencia, reserva o trabajo).
Pruebas a realizar (depende del microorganismo):

Coloracin de Gram
Caractersticas de las colonias en medios selectivos
Pruebas bioqumicas y serolgicas.

Pureza
Se determina aislando colonias en medios nutricios selectivos y procediendo
despus a su cultivo. Repitiendo esto varias veces puede asegurarse que el
microorganismo est en cultivo puro.

Viabilidad
Se evala mediante la enumeracin o cuenta indirecta de las colonias que aparecen
sobre el medio, despus de sembrar una serie de diluciones sucesivas de la
suspensin original e incubndolas, durante el tiempo necesario.
El porcentaje de viabilidad, se determina mediante la relacin del nmero de
bacterias viables determinadas al tiempo del muestreo, con respecto a aquellas
determinadas al inicio del perodo de conservacin.

Identificacin

Es la determinacin de las caractersticas fenotpicas y/o genotpicas y la

comparacin de estas caractersticas con los diferentes taxones de la clasificacin
considerada. Las caractersticas a determinar y su nmero depende principalmente
del tipo de bacteria y del fin que se sigue en la identificacin.

TCNICAS DE DESARROLLO
PUREZA

La cepa congelada se reactiva en un medio de baja selectividad, se incuba a

37C durante 24 horas.
Se realiza siembras por tcnica de vertido con diferentes diluciones en
medios de baja selectividad (TSA, PCA) y AS.
Se elige aquellos grados de dilucin con los cuales sea posible aislar colonias
independientes.
La toma y siembra de la colonia aislada desde la placa original se lleva a
cabo con ayuda de un asa.
Se utiliza la tcnica de estriado en medios no selectivos (agar nutritivo, TSA,
PCA).
Con colonias bien aisladas se realiza una tincin gram para comprobar su
purificacin.

VIABILIDAD

Cuando esta la cepa pura se procede a congelar en crioviales, previo a esto

se cuantifica los microorganismos.
Se realiza un inculo de la cepa en BHI durante 24 horas, se siembra por
vertido con diferentes diluciones (10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6), se
incuba las cajas 24 horas a 37C.
Se realiza un contaje de las cajas que tengan colonias en un rango de 30
300, y se multiplica por el factor de dilucin, este es el valor de referencia.
Realizar el mismo procedimiento de las cepas cada mes para comprobar la
viabilidad.

Viabilidad =

nmero de colonias al tiempo de muestreo

x 100
Nmero de colonias al inicio de la conservacin

IDENTIFICACION

Se parte de un cultivo puro

Examen microscpico de clulas vivas y de frotis teido por coloracin Gram.

Se determina as la forma y el Gram del microorganismo en estudio. Tambin
es importante determinar la agrupacin y la presencia de esporas y otras
caractersticas morfolgicas de inters.

Determinar las caractersticas nutricionales (en general se desprenden de

los mtodos empleados en el aislamiento y cultivo anteriores);
fotoauttrofos, fotohetertrofos, quimioauttrofos, quimiohetertrofos.

Realizacin de pruebas primarias:

Gram.,

morfologa,

catalasa, oxidasa,

OF,

fermentacin de glucosa,

esporas,

crecimiento en aerobiosis anaerobiosis

movilidad.
Realizacin de pruebas secundarias y terciarias a efectos de llegar a
especie. Estas dependern del gnero o familia determinado.

BIBLIOGRAFA

http://www.monografias.com/trabajos73/manual-control-calidadmicrobiologia/manual-control-calidad-microbiologia3.shtml
http://www.rlc.fao.org/es/inocuidad/codex/rla3013/pdf/aseg4.pdf
www.pfizer.net.ve/cvcm/colecc.htm
PROCEDIMIENTO CONTROL DE CALIDAD DE CEPAS PUREZA, VIABILIDAD,
IDENTIFICACION, Laboratorio De Microbiologia, UCE, Facultad De Ciencias
Qumicas