Manual de Coleta Fepagro Versao Online PDF

Boletim
Tcnico
20
NOVEMBRO 2011
ISSN 0104-9089
BOLETIM TCNICO DA
FUNDAO ESTADUAL DE
PESQUISA AGROPECURIA
Secretaria da Agricultura,
Pecuria e Agronegcio
Rio Grande do Sul - Brasil
Manual de Coleta e
Remessa de Amostras
para DIAGNSTICO
Laboratorial Veterinrio
Alexander Cenci
Alexandre de Carvalho Braga
Benito Guimares de Brito
Cristine Cerva
Fabiana Quoos Mayer
Fernando Srgio Castilhos Karam
Joo Ricardo de Souza Martins
Jos Antnio Simes Pires Neto
Jlio Csar de Almeida Rosa
Kelly Cristina Tagliari de Brito
Mario de Menezes Coppola
Maurcio Gauterio Dasso
Paulo Michel Roehe
Rovaina Laureano Doyle
Sandra Maria Borowski
GOVERNO DO ESTADO DO RIO GRANDE DO SUL

SECRETARIA DA AGRICULTURA, PECURIA E AGRONEGCIO
FUNDAO ESTADUAL DE PESQUISA AGROPECURIA
Boletim Tcnico
MANUAL DE COLETA E REMESSA
DE AMOSTRAS PARA DIAGNSTICO
LABORATORIAL VETERINRIO
Alexander Cenci
Cristine Cerva
Fabiana Quoos Mayer
Jos Antnio Simes Pires Neto
Jlio Csar de Almeida Rosa
Paulo Michel Roehe
PORTO ALEGRE, RS
2011
FUNDAO ESTADUAL DE PESQUISA AGROPECURIA - FEPAGRO

Diviso de Comunicao Social
Programa de Editorao e Publicaes
Rua Gonalves Dias, 570 Bairro Menino Deus
Porto Alegre/RS CEP 90130-060
Telefone: (51) 3288-8000 Fax: (51) 3233-7607
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Luciano Kayser Vargas Presidente; Andr Dabdab Abichequer; Bernadete Radin; Lia Rosane Rodrigues; Paulo Roehe; Rodrigo Favreto; Simone Linck; Zlia
M. de Souza Castilhos.
Diviso de Comunicao Social:
Simone Linck Coordenadora de Comunicao Social; Fernando Kluwe Dias
Fotgrafo; Gislaine Freitas Jornalista MTb 6637; Lia Rosane Rodrigues
Coordenadora do Programa de Editorao e Publicaes; Nmora Arlindo
Rodrigues Bibliotecria CRB 10/820; Diego Luis Policeno dos Santos Estagirio de Biblioteconomia; Rafaela dos Santos Estagiria de Design Grfico.
Tiragem: 500 exemplares
CATALOGAO NA FONTE
BOLETIM FEPAGRO, Boletim Tcnico da Fundao Estadual de Pesquisa Agropecuria /
FEPAGRO ; Secretaria da Agricultura, Pecuria e Agronegcio Porto Alegre, 2011.
ISSN 0104-9089
Contedo: n. 20, Cenci, Alexander et al.
CDU 636.09
I Cenci, Alexander ; II Braga, Alexandre de Carvalho ; III Brito,

Benito Guimares ; IV Cerva, Cristine ; V Mayer, Fabiana Quoos ; VI Karam,
Fernando Srgio Castilhos ; VII Martins, Joo Ricardo de Souza ; VIII Simes
Pires Neto, Jos Antnio ; IX Rosa, Jlio Csar de Almeida ; X Brito, Kelly Cristina Tagliari de ; XI Coppola, Mrio de Menezes ; XII Dasso, Maurcio Gautrio ;
XIII Roehe, Paulo Michel ; XIV Doyle, Rovaina Laureano ; XV Borowski, Sandra
Maria XVI Ttulo. 1 Sanidade animal anlises clnicas
REFERNCIA
CENCI, A. ; BRAGA, A. de C. ; BRITO, B. G. ; CERVA, C. ; MAYER, F. Q. ; KARAM,
F. S. C. ; MARTINS, J. R. de S. ; SIMES PIRES NETO, J. A. ; ROSA, J. C. de A. ;
BRITO, K. C. T. de ; COPPOLA, M. de M. ; DASSO, M. G. ; ROEHE, P. M. ; DOYLE,
R. L. ; BOROWSKI, S. Manual de Coleta e Remessa de Amostras para Diagnstico
Laboratorial Veterinrio. Porto Alegre : FEPAGRO, 2011. Boletim Tcnico, n. 20.
Acesse a verso online desta publicao em www.issuu.com/fepagro
Apresentao
O Instituto de Pesquisas Veterinrias Desidrio Finamor
(IPVDF), localizado em Eldorado do Sul, RS, e pertencente
Fundao Estadual de Pesquisa Agropecuria (Fepagro), tem
como misso maior atuar no desenvolvimento de pesquisas, realizar anlises laboratoriais para diagnstico das principais enfermidades das espcies domsticas de interesse econmico,
formar recursos humanos e difundir tecnologias atuando como
centro de referncia em sanidade animal e sade pblica para o
Rio Grande do Sul.
O presente manual tem por finalidade servir de fonte de informao aos Mdicos Veterinrios que atuam no campo, orientando sobre os procedimentos bsicos de coleta e remessa de
materiais biolgicos para confirmao de suspeitas clnicas e
complementaridade do diagnstico clnico.
Os exames laboratoriais disponveis abrangem provas bacteriolgicas, virolgicas, parasitolgicas, histopatolgicas e moleculares. Os Mdicos Veterinrios que integram os diferentes laboratrios encontram-se disposio para auxiliarem em casos de
ocorrncia de suspeitas de surtos de enfermidades em campo,
atravs de consultas telefnicas ou meio eletrnico.
Corpo Tcnico da Fepagro Sade Animal

Instituto de Pesquisas Veterinrias Desidrio Finamor
Diretor
Laboratrio de Bacteriologia
Laboratrio de Biologia Molecular
Cristine Cerva
Fabiana Quoos Mayer
Laboratrio de Brucelose
Laboratrio de Histopatologia
Anglica Cavalheiro Bertagnolli
Laboratrio de
Leptospirose/Epidemiologia
Jos Antonio Simes Pires Neto
Rogrio Oliveira Rodrigues
Laboratrio de Parasitologia
Jos Reck Jnior
Laboratrio de Patologia Suna
Laboratrio de Sade das Aves
Laboratrio de Virologia
Jos Carlos Ferreira
Julio Cesar de Almeida Rosa
Lissandra Souto Cavalli
Paulo Michel Roehe
Sumrio
I. COLETA E REMESSA DE AMOSTRAS PARA
DIAGNSTICO LABORATORIAL VETERINRIO .......................9
1. COLETA DE AMOSTRAS......................................................... 9
2. CONSERVAO E ACONDICIONAMENTO
DAS AMOSTRAS .................................................................... 10
3. IDENTIFICAO DE AMOSTRAS ......................................... 13

4. FORMULRIO PARA SOLICITAO DE EXAMES .............. 14
5. TRANSPORTE DE AMOSTRAS ............................................ 16
6.
REMESSA DAS AMOSTRAS PARA O IPVDF ...................... 17

6.1 COMO ENVIAR POR EMPRESA TRANSPORTADORA ......17
6.2 ENDEREO PARA REMESSA
DE AMOSTRAS AO IPVDF ............................................. 17
6.3 PAGAMENTO DOS SERVIOS PRESTADOS............... 17
6.4 CONTATOS...................................................................... 17
II. COLETA DE AMOSTRAS PARA

EXAME B ACTERIOLGICO .......................................................19
7. AMOSTRAS PARA EXAME BACTERIOLGICO.................. 19

7.1 VSCERAS ....................................................................... 19
7.2 SANGUE .......................................................................... 20
7.3 EXSUDATO E PUS.......................................................... 20
7.4 AMOSTRAS DE LEITE PARA DIAGNSTICO
DE MASTITE BOVINA ........................................................... 21
7.5 AMOSTRAS PARA DIAGNSTICO DE
CARBNCULO HEMTICO (ANTRAZ) .......................... 22
7.6 AMOSTRAS PARA DIAGNSTICO
DE LEPTOSPIROSE ..................................................................22
7.7 AMOSTRAS PARA DIAGNSTICO DE TUBERCULOSE......23

7.8 AMOSTRAS PARA DIAGNSTICO DE BRUCELOSE ...........24
7.8.1 EXAME DIRETO (BACTERIOLGICO).................. 24
7.8.2 EXAME INDIRETO (SOROLGICO) ...................... 25
7.8.3 ESPCIES ANIMAIS E TESTES SOROLGICOS
REALIZADOS NO IPVDF PARA DIAGNSTICO
DE BRUCELOSE ..................................................... 28
8. ANTIBIOGRAMA .............................................................. 29
9. DOENAS BACTERIANAS DIAGNOSTICADAS
NO IPVDF E AMOSTRAS A SEREM COLETADAS ....... 30
III. COLETA DE AMOSTRAS PARA EXAME VIROLGICO .......31

10. AMOSTRAS PARA EXAME VIROLGICO ....................... 31
11. TESTES SOROLGICOS ................................................. 32
12. COLETA PARA DOENAS VIRAIS ................................... 33
12.1 RGOS E TECIDOS................................................ 33
12.2 AMOSTRAS PARA DIAGNSTICO DE RAIVA ......... 34
12.2.1 CUIDADOS NA COLETA.................................. 34
12.2.2 INSTRUES PARA COLETA......................... 34
12.3 SECREES ............................................................. 35
12.4 SANGUE ..................................................................... 36
12.5 SORO ......................................................................... 36
13. DOENAS VIRAIS DIAGNOSTICADAS NO IPVDF,

TESTES REALIZADOS E MATERIAIS
A SEREM ENVIADOS ..................................................................39
14. FRMULAS........................................................................ 40
IV. COLETA DE AMOSTRAS PARA EXAME PARASITOLGICO .....41

15. AMOSTRAS PARA EXAME PARASITOLGICO .............. 41
15.1 ENDOPARASITOS .................................................... 41
15.2 ECTOPARASITOS...................................................... 43
15.3 HEMOPARASITOS ..................................................... 45
16. FRMULAS........................................................................ 46
V. COLETA DE AMOSTRAS PARA EXAME HISTOPATOLGICO ....47
17. AMOSTRAS PARA EXAME HISTOPATOLGICO ............. 47
18. COLETA DE AMOSTRAS QUANDO A SUSPEITA
FOR INTOXICAO ........................................................... 49
18.1 INTOXICAO POR PLANTAS .................................. 49
18.1.1 COLETA DA PLANTA PARA IDENTIFICAO ......50
18.2 INTOXICAO POR FUNGOS .................................. 51
18.3 INTOXICAO POR PRODUTOS QUMICOS ......... 51
VI. COLETA DE AMOSTRAS PARA O LABORATRIO DE

PATOLOGIA SUNA .................................................................52
19. AMOSTRAS PARA O LABORATRIO DE PATOLOGIA SUNA.... 52

19.1 DOENAS BACTERIANAS DIAGNOSTICADAS NO
LABORATRIO DE PATOLOGIA SUNA DO IPVDF ....... 53
VII. COLETA DE AMOSTRAS PARA O LABORATRIO DE

BIOLOGIA M OLECULAR ........................................................54
20. AMOSTRAS PARA O LABORATRIO DE BIOLOGIA

MOLECULAR ..................................................................... 54
VIII. COLETA DE AMOSTRAS PARA DIAGNSTICO DE

DOENAS DAS AVES ....................................................................56
21. AVES VIVAS OU MORTAS ............................................... 57
22. RGOS. .......................................................................... 58

23. SUABES ............................................................................ 59
23.1 TRAQUEIA................................................................ 59
23.2 CLOACA ................................................................... 59
23.3 ARRASTO................................................................. 60
24. SORO ................................................................................ 60

IX. COLETA DE AMOSTRAS DE RAO E FARINHAS
DE ORIGEM ANIMAL PARA EXAME MICROBIOLGICO ......62
25. AMOSTRAS ACONDICIONADAS EM EMBALAGENS

INDIVIDUAIS............................................................................... 62
26. AMOSTRAS ACONDICIONADAS EM EMBALAGENS

NO INDIVIDUAIS ............................................................... 62
X. COLETA DE AMOSTRA DE GUA PARA EXAME

DE CONTAMINAO BACTERIANA .......................................64
27. COLETA DE GUA EM TORNEIRAS E BEBEDOUROS .........65

27.1 PROCEDIMENTOS DE COLETA ................................. 65
28. COLETA DE GUA EM RIOS, POOS, CAIXAS DGUA

E RESERVATRIOS EM GERAL. ..................................... 68
28.1 PROCEDIMENTOS DE COLETA ................................. 68
XI. COLETA DO ENCFALO NA NECROPSIA DE BOVINOS

29. RETIRADA DO ENCFALO ............................................... 70
30. COLETA E SELEO DE AMOSTRAS DO ENCFALO PARA
VIROLOGIA, BACTERIOLOGIA E HISTOPATOLOGIA...........70
XII.
REFERNCIAS .......................................................................80
XIII. ANEXO 1 FORMULRIO DE SOLICITAO DE EXAMES ......83
I Coleta e Remessa de
Amostras para Diagnstico
Laboratorial Veterinrio
1 Coleta de amostras
Para o diagnstico laboratorial ser realizado com sucesso, importante uma boa anamnese, suspeita clnica fundamentada e amostra
coletada corretamente.
A qualidade da amostra recebida essencial para o diagnstico. A
coleta e o transporte inadequados dificultam ou at inviabilizam o isolamento do agente etiolgico e, por consequncia, o diagnstico da
enfermidade.
Durante a coleta de material biolgico, h risco de exposio a agentes potencialmente causadores de doenas ao ser humano, razo
pela qual altamente recomendvel que o profissional utilize avental
ou macaco, luvas, botas de borracha, culos de proteo e mscara
no momento da coleta.
A coleta dever ser feita de modo a evitar a contaminao com
produtos e outros microrganismos presentes no ambiente ou no
prprio animal. Por essa razo, frascos, tubos, seringas, agulhas
e demais instrumentais a serem utilizados devem estar estreis.
Quando no for possvel a utilizao de frascos estreis, recomenda-se lav-los com gua e desinfetante e ferv-los em gua limpa,
no mnimo, durante 30 minutos. Amostras contaminadas por produtos ou microrganismos que no esto envolvidos na etiologia
da doena dificultam a realizao da prova e a interpretao dos
resultados.
2 Conservao e
acondicionamento das amostras
A forma de conservao depende da amostra e do tipo de exame
requerido e ser descrita nos captulos posteriores do manual.
As amostras devero ser remetidas em condies de biossegurana
desde o transporte at a chegada ao Instituto. Para tal, devem ser
acondicionadas em um sistema de embalagem tripla:
a) Embalagem primria: compreende a embalagem que comporta
a amostra, entrando em contato direto com a mesma. Podem ser
frascos, tubo de ensaio ou embalagem plstica sem utilizao
prvia (exemplo: embalagens para congelamento de alimentos,
com fecho).
b) Embalagem secundria: reveste a embalagem primria, deve ser
impermevel e vedada, de modo a evitar vazamentos, garantindo
maior segurana (Figura 1).
c) Embalagem terciria: recebe o conjunto (embalagem primria dentro da secundria) e deve ser um recipiente isotrmico prova de
gua (exemplo: caixa de isopor ntegra).
No caso de envio de amostras refrigeradas, no interior da embalagem
terciria deve ser colocado gelo reciclvel ou gua congelada dentro
de garrafas plsticas, para evitar acmulo de gua. Para aumentar
a durabilidade do gelo, adicionar sal gua na proporo de 5 colheres de sopa por litro de gua. O gelo precisa estar em quantidade
suficiente para garantir a refrigerao do material. Na Figura 2 esto
demonstrados alguns tipos de gelo reciclvel.
Gelo seco tambm pode ser utilizado e particularmente recomendado para amostras visando o isolamento de vrus. Nesse caso, as
amostras embaladas, como acima descritas, devem ser dispostas
10
em uma embalagem terciria (caixa de isopor) ampla, para permitir

a colocao de gelo seco suficiente para manter o material congelado at a chegada ao laboratrio. Nitrognio lquido igualmente
pode ser utilizado, porm, nesse caso, faz-se necessrio um recipiente especial.
Folhas de jornal podem ser usadas para separar o gelo reciclvel
dos frascos de coleta e preencher espaos vazios, conforme a Figura 3. A tampa da embalagem terciria deve ser lacrada com fita
adesiva.
Os recipientes e embalagens devem ser desinfetados externamente
com soluo antissptica, como lcool iodado ou hipoclorito de sdio,
a fim de evitar a contaminao de indivduos que iro manipular esses objetos durante o transporte e recepo do material.
Amostras acondicionadas incorretamente e conservadas de forma
inadequada inviabilizam o diagnstico.
Figura 1 Tipos de embalagens primrias dentro das secundrias:

(A) Tubos tipo eppendorf dentro de embalagem plstica com n;
(B) Tubos com tampas-rosca, dentro de caixa plstica tampada.
11
Figura 2 Alguns tipos de gelo reciclvel, disponveis no comrcio, e gelo em garrafas plsticas para conservao da amostra.
Correto
Incorreto
Figura 3 (A) Correto: Tubos de vidro com tampas de borracha (embalagem primria), dentro de caixa plstica tampada (embalagem secundria),
no interior de caixa de isopor (embalagem terciria), com gelo reciclvel e
folhas de jornal. (B) Incorreto: Amostra em embalagem plstica rompida
pelas pedras de gelo soltas na caixa de isopor.
12
3 Identificao das amostras

necessrio que os frascos e embalagens, contendo as amostras,
sejam corretamente identificados com etiquetas resistentes (exemplo: esparadrapo) e informaes legveis. No devero ser utilizadas
canetas para retroprojetor ou similares. A identificao dever estar
no frasco de coleta e no na tampa.
No lado externo da caixa em que so transportadas as amostras, fixar
o formulrio de solicitao de exames (ver item 4 deste captulo) e
rtulo de risco biolgico, como demonstrado nas Figuras 4 e 5.
Figura 4 (A) Caixa de isopor (embalagem terciria) para transporte das

amostras, com a tampa lacrada. Rtulo de identificao de risco biolgico
e formulrio de solicitao de exames fixados no lado externo. (B) Detalhe
apresentando formulrio de solicitao de exames no interior de embalagem plstica e de envelope de papel, fixado no lado externo da caixa.
13
Figura 5 Rtulo de identificao de risco biolgico que est disponvel

no IPVDF e no site do Instituto: www.ipvdf.rs.gov.br .
4 Formulrio para Solicitao

de Exames
Todas as amostras encaminhadas para realizao de exames precisam estar acompanhadas do formulrio de solicitao de exames,
fornecido pelo IPVDF, disponvel no site www.ipvdf.rs.gov.br e apresentado no Anexo 1 deste manual.
No momento do recebimento, ser verificado o adequado preenchimento do formulrio, sendo que no sero processadas pelo IPVDF
amostras cuja falta de informaes comprometam a emisso do laudo diagnstico.
No formulrio, devem ser preenchidos os dados referentes espcie
animal, tipo e quantidade das amostras, conservao das mesmas,
data da coleta, modo de transporte (rodovirio, areo), suspeita clnica e exames solicitados. Alm desses, so solicitados dados do
cliente, proprietrio e veterinrio responsvel.
14
Importante que, no histrico do animal, sejam relatadas informaes

como sexo, idade, vacinao e vermifugao, tratamentos realizados,
sinais clnicos (incio e durao dos mesmos), descrio das leses,
alimentao recebida, provvel ingesto de plantas txicas. Em caso
de surtos, incluir o nmero de animais doentes, nmero de mortos e
o tempo decorrido entre a morte e a coleta das amostras.
Informaes incompletas e preenchimento inadequado do formulrio podem comprometer a realizao do exame laboratorial e o diagnstico.
O Formulrio para Solicitao de Exames, ou outro formulrio especfico (ex.: raiva, certificao de granjas), dever ser protegido por uma
embalagem plstica e afixado, obrigatoriamente, no lado externo da
caixa (embalagem terciria), evitando contato com as amostras.
15
5 Transporte das amostras

Para transporte, as amostras devem estar sempre acondicionadas em embalagens triplas (ver item 2 deste captulo) e devidamente identicadas com o rtulo de risco biolgico e o formulrio de solicitao de exames xados.
16
6 Remessa das amostras

para o IPVDF
6.1 Como enviar por empresa transportadora
O IPVDF dispe de servio de coleta na Estao Rodoviria de Porto
Alegre e em garagens de empresas transportadoras terrestres e areas. Para utilizar esse servio, necessrio que seja feito contato
prvio com o Setor de Protocolo Tcnico, pelo telefone (51) 3481
3711 (ramais 213 e 214), informando a data e horrio da remessa das
amostras, previso de chegada, bem como o nmero do conhecimento de transporte de mercadorias da empresa pela qual foi remetida.
6.2 Endereo para remessa de amostras

ao IPVDF
As amostras enviadas diretamente ao Instituto devero ser entregues
no Setor de Protocolo Tcnico do IPVDF ou remetidas para o seguinte endereo:
INSTITUTO DE PESQUISAS VETERINRIAS
DESIDRIO FINAMOR
PROTOCOLO TCNICO
Estrada do Conde, n. 6000 Bairro Sans Souci
Eldorado do Sul RS Brasil CEP 92990-000
6.3 Pagamento dos servios prestados

O custo dos exames obtido atravs de contato com o Setor de Protocolo Tcnico ou pelo site www.ipvdf.rs.gov.br .
Os pagamentos pelos servios prestados pelo IPVDF podero ser
efetuados diretamente no Setor de Protocolo Tcnico ou atravs de
depsito bancrio, em conta informada por este setor.
17
Quando o pagamento for feito atravs de depsito bancrio, o comprovante deste dever ser encaminhado ao Setor de Protocolo Tcnico, atravs do fax (51) 3481 3711 (ramal 205) ou e-mail protocolo@
ipvdf.rs.gov.br.
No ser aceito material remetido a cobrar, ou cujo recolhimento
acarrete algum nus Instituio. O IPVDF somente comunicar os
resultados dos exames aps a comprovao do pagamento pelos
servios prestados.
Os resultados so emitidos pelo IPVDF atravs de laudos remetidos
via correio, e-mail ou fax.
6.4 Contatos
Telefone: (51) 3481 3711
Fax: (51) 3481 3711 (ramal 205)
E-mail: protocolo@ipvdf.rs.gov.br
contato@ipvdf.rs.gov.br
Fale conosco, no site www.ipvdf.rs.gov.br.
18
II Coleta de Amostras
para Exame
Bacteriolgico
7 Amostras para exame
bacteriolgico
O isolamento de bactrias patognicas em laboratrio depende
do envio correto das amostras, de acordo com a suspeita clnica,
perodo de tempo aps a morte do animal, forma de coleta, temperatura e acondicionamento e tempo da remessa do material at
o laboratrio.
Os procedimentos para coleta de amostras para exame bacteriolgico so descritos a seguir neste captulo.
As amostras para exame bacteriolgico precisam ser conservadas
sob refrigerao, entre 2 e 8C, imediatamente aps a coleta. Amostras de soro sanguneo podem ser congeladas.
importante que a coleta, acondicionamento, identificao e remessa das amostras sigam as recomendaes bsicas descritas nos
itens de 1 a 6 do captulo I deste manual.
7.1 Vsceras
Para a realizao do exame bacteriolgico, podem ser coletados
fragmentos dos rgos, no sendo necessrio o envio de rgos inteiros. O fragmento deve conter a poro que apresenta alteraes
macroscpicas, quando estas existirem.
19
A coleta deve ocorrer de forma mais assptica possvel, durante a necropsia, para evitar a presena de microrganismos contaminantes que
podem interferir no isolamento do agente etiolgico. Alm disso, a carcaa e os rgos no devem estar em estado de autlise. As amostras
devem ser remetidas sob refrigerao, preferencialmente em at 48
horas aps a coleta, acondicionadas individualmente em frascos estreis ou em sacos de plstico resistentes e de tamanho apropriado.
7.2 Sangue
Antes da coleta, deve ser feita antissepsia do local, com lcool 70%.
O sangue deve ser coletado por puno da veia jugular ou coccgea
com seringa e agulha estreis. O contedo deve ser transferido para
tubos ou frascos estreis e remetido sob refrigerao, preferencialmente em at 24 horas aps a coleta. No adicionar anticoagulante,
pois pode interferir no isolamento bacteriolgico.
7.3 Exsudato e pus

Conforme o tipo de leso e a regio afetada, coletam-se esses materiais com seringa e agulha ou swabs estreis.
Se o exsudato ou pus for coletado por puno do abscesso, a superfcie da leso e a regio ao redor da mesma devem ser descontaminadas com soluo antissptica, como lcool iodado ou PVPI (povidone iodo). O contedo da seringa deve ser transferido para tubos ou
frascos estreis.
No caso de secreo ocular, nasal ou genital, os swabs estreis
devem ser densamente envolvidos com material infeccioso e acondicionados individualmente em tubos e remetidos sob refrigerao,
preferencialmente em at 24 horas aps a coleta.
20
7.4 Amostras de leite para diagnstico

de mastite bovina
Para evitar a contaminao da amostra para o diagnstico, devese, antes da coleta, desprezar os primeiros 3 ou 4 jatos de leite e
realizar a antissepsia dos tetos com lcool 70%, iniciando pelos
quartos mais distantes em relao ao operador e, aps, o restante
dos quartos mamrios, para evitar que ocorra a recontaminao
durante a limpeza.
O leite deve ser coletado em frascos ou tubos estreis, em um volume de aproximadamente 10 ml. Podem ser enviadas amostras de
leite de tanque ou de cada animal. As amostras de cada quarto mamrio devero ser coletadas em recipientes individuais, conforme
demonstrado na Figura 6, pois a causa da infeco pode no ser a
mesma. recomendvel que, durante a coleta, o tubo permanea
aberto o menor tempo possvel.
Os frascos devem conter a identificao do quarto mamrio coletado,
de acordo com o seguinte cdigo:
AD - Teto anterior direito AE - Teto anterior esquerdo
PD - Teto posterior direito PE - Teto posterior esquerdo
As amostras devem ser remetidas sob refrigerao, preferencialmente em at 24 horas aps a coleta.
21
Figura 6 - Amostras de leite em tubos com rtulo de identificao.
7.5 Amostras para diagnstico de carbnculo

hemtico (Antraz)
Quando ocorrer suspeita desta doena, no recomendvel a realizao da necropsia, para evitar a disseminao dos esporos da bactria no ambiente e a contaminao dos demais animais do rebanho.
Alm disso, sendo uma zoonose, a bactria ou seus esporos podem
vir a contaminar humanos por inalao ou leses cutneas.
Pode-se coletar sangue da veia jugular ou auricular aps a morte do
animal, com seringa e agulha estreis, e transferir para tubo de ensaio. Essas amostras devem ser enviadas sob refrigerao.
7.6 Amostras para diagnstico de leptospirose

O material de eleio para diagnstico sorolgico de leptospirose o
soro sanguneo, que deve ser lmpido, no hemolisado, sem cogulo
22
e enviado congelado ao laboratrio. Caso seja de interesse o acompanhamento da evoluo dos ttulos de anticorpos, podem ser coletadas
amostras de soro do mesmo animal, com intervalo de 15 a 20 dias
entre as coletas (amostras pareadas).
Para isolamento do agente, podem ser enviados fetos, natimortos e
urina. A velocidade de processamento do material para isolamento
de Leptospira sp. crucial, de forma que a remessa deve ser comunicada ao IPVDF para evitar atrasos no processamento das amostras.
Urina, para tentativa de isolamento, no deve exceder o intervalo de
duas horas entre a coleta e a chegada ao laboratrio.
Para isolamento de Leptospira sp., a amostra no pode ser congelada em hiptese alguma.
7.7 Amostras para diagnstico de tuberculose

As amostras de origem animal para diagnstico de tuberculose so
linfonodos ou partes de rgos e tecidos procedentes de matadouro
sob inspeo sanitria e de necropsias realizadas.
Para avaliar melhor as leses dos rgos e tecidos, efetuar cortes durante a inspeo ou necropsia. Coletar preferencialmente linfonodos
do trato respiratrio: mediastinais (anteriores, posteriores e ventrais),
bronquiais (esquerdo, direito, dorsal ou mdio) e pulmonares. Observar a pleura e o tecido pulmonar por palpao, a fim de constatar
reas com leses nodulares. Verificar presena de leses tuberculosas nos linfonodos mesentricos e no fgado. Inspecionar ainda os
linfonodos da cabea e os cervicais.
Coletar os fragmentos, logo aps a morte do animal. Retirar somente
a leso de aspecto caseoso, evitando resduos, como, por exemplo,
sangue e outros lquidos. importante coletar parte do tecido lesado
e parte do tecido normal de uma mesma pea, perfazendo um total
de at 200 gramas. As amostras para diagnstico bacteriolgico de
tuberculose devero ser acondicionadas conforme o item 7.1 deste
23
captulo. Enviar tambm parte da amostra em soluo de formol a 10

% para exames histopatolgicos, seguindo as instrues descritas
no captulo V.
O tempo tcnico para isolamento de tuberculose pode variar de 60 a
90 dias.
7.8 Amostras para diagnstico de brucelose

Todas as amostras enviadas para diagnstico de brucelose devem
estar acondicionadas no sistema de embalagem tripla, descrita no
item 2 do captulo I.
7.8.1 Exame direto (bacteriolgico)

A amostra ideal para o isolamento de Brucella sp. o proveniente do
aborto. Entre os materiais de eleio, destacam-se:
Feto e anexos fetais
O feto pode ser enviado inteiro. Se for mediante necropsia efetuada no prprio estabelecimento, coletar pulmo, linfonodo bronquial,
bao, fgado, swab retal e lquido do abomaso. No caso de membranas fetais, escolher aqueles cotildones que apresentem aspecto
anormal, com perda da cor e do brilho caracterstico; eles devero ser
cuidadosamente manipulados (usar luvas e mscaras especiais com
pelo menos 95% de eficincia), em funo da alta concentrao de
bactrias presentes.
Exsudato vaginal
A eliminao de Brucella abortus pode durar vrias semanas aps
o parto ou aborto. O exsudato vaginal deve ser coletado mediante o
uso de swabs especiais ou pipetas de inseminao. Existem swabs comerciais com meio de transporte que mantm as bactrias viveis por perodos mais prolongados.
24
Leite
Para coleta, seguir os mesmos procedimentos descritos no item 7.5
sobre amostras de leite para diagnstico de mastite bovina.
Animais necropsiados ou coleta em matadouro
Os materiais de escolha para isolamento de Brucella sp so os componentes do sistema retculo-endotelial. Os linfonodos mais importantes so os supramamrios, parotdeos, retrofarngeos, ilacos internos e pr-escapulares, alm do bao. Nas fmas, cotildones, tero
e bere so tambm recomendados. Nos machos, alm do bao e
linfonodos, so tambm teis para isolamento, testculos, prstata,
epiddimo e vesculas seminais.
Para o exame histopatolgico, podem ser remetidas amostras dos
mesmos linfonodos ou rgos indicados acima, com ou sem leses
macroscpicas, conforme as instrues descritas no captulo V.
7.8.2 Exame indireto (sorolgico)

Soro
A coleta de sangue para a obteno de soro visando realizao dos
testes para o diagnstico de brucelose, alm de ser mais simples,
oferece menor risco de contgio ao profissional, se comparada com a
coleta de material para o exame bacteriolgico.
O material para a coleta deve ser constitudo de tubos que contenham vcuo (sem anticoagulante) e siliconizados, para facilitar a retrao do cogulo, com agulhas individuais e descartveis. Tubos e
agulhas convencionais tambm podem ser utilizados; apresentam,
porm, o inconveniente de aumentar o risco de contaminao biolgica na manipulao.
As etapas da coleta exigem o cumprimento de algumas normas que
podem ser assim resumidas:
25
a) A amostra de sangue coletada deve cobrir no mnimo 50 % da

capacidade de um tubo de 10 ml. Na Figura 7 est exemplificada a
coleta de sangue da veia caudal de um bovino;
b) Para obter um soro adequado, os tubos com sangue devem ser
mantidos temperatura ambiente por, no mnimo, 2 ou 3 horas, ao
abrigo da luz, at que ocorra a coagulao sangunea. Aps a separao do cogulo, transferir o soro para um frasco estril. No usar
frascos ou tubos midos, pois pode ocorrer hemlise do sangue. Na
Figura 8 est representada uma amostra de soro ideal e uma imprpria, hemolisada;
c) O soro deve ser conservado refrigerado e enviado o quanto antes
ao laboratrio, evitando-se, assim, a deteriorao da amostra. Em
caso de demora no envio (mais de 72 horas), deve-se congelar o soro
e enviar sob refrigerao;
d) Os tubos devem ser identificados de modo que o nmero corresponda ao especificado no Formulrio de Solicitao de Exames, preenchido conforme as recomendaes do item 4 do captulo I;
e) necessrio constar no formulrio dados referentes situao
relativa vacinao (data da vacinao).
Figura 7 - Coleta de sangue de bovino da veia caudal.
26
Figura 8 (A) Amostra de soro ideal. (B) Amostra de soro imprpria

(soro hemolisado).
Leite (para o Teste do Anel em Leite)

A coleta correta da amostra fundamental para a obteno de resultados confiveis. As amostras devem ser coletadas de mistura de
leite em resfriador ou tanque de expanso. preciso misturar o leite
para homogeneiz-lo de forma que o creme no se separe. A agitao suave do leite no recipiente de coleta imprescindvel para uma
boa homogeneizao da gordura.
O leite deve ser coletado utilizando-se como conservante o formol a
1 %, ou o cloreto de mercrio a 2 %, na proporo de 1 ml de conservante para cada 10 ml de leite. A amostra de leite deve ser refrigerada
e enviada ao laboratrio.
A prova pode ser afetada pelos seguintes fatores: amostra de leite
mal homogeneizada, contendo excesso ou falta de gordura; excessivos: aquecimento, tempo de armazenamento, temperatura e agitao. Amostras armazenadas a 4 C, durante at duas semanas,
podem ser usadas para o teste, j que no h perdas nos ttulos de
anticorpos, sucedendo o contrrio com o aumento de temperatura.
27
A prova pode apresentar resultados falso-positivos nas seguintes situaes:

Alterao do leite como consequncia de mastites que originam a
presena de protenas, clulas e bactrias no habituais, que dificultam a leitura da prova;
Presena de colostro;
Utilizao de leite fresco, ou seja, quando o teste realizado no
mesmo dia da coleta. Em geral, essa situao desaparece aps a
refrigerao do leite.
7.8.3 Espcies animais e testes

sorolgicos realizados no IPVDF
para diagnstico de brucelose
ESPCIE
TESTE REALIZADO
PROVA COMPLEMENTAR
Bovina
Bubalina
Caprina
Equina
Suna
Antgeno Acidificado Tamponado
2-Mercaptoetanol
Ovina
Canina
28
Imunodifuso em Gel de gar

Imunodifuso em Gel de gar e
Antgeno Acidificado Tamponado
2-Mercaptoetanol
8 Antibiograma
Quando os animais doentes submetidos ao tratamento com antibiticos no se recuperam como esperado, conveniente realizar um
antibiograma, que possibilita a escolha de antibiticos efetivos contra
o agente bacteriano causador da infeco.
Para determinar a sensibilidade do agente frente a um grupo de princpio-ativo de antimicrobianos, necessrio o isolamento da bactria
em laboratrio a partir de amostras coletadas de animais doentes.
29
9 Doenas bacterianas
diagnosticadas no IPVDF
e amostras a serem coletadas
DOENA
CLOSTRIDIOSES
HEPTICAS E
MIONECROSES
AMOSTRAS
Fragmentos de fgado, bao e rim
No caso de mionecroses, enviar tambm exsudato da tumefao muscular e fragmentos do msculo com a leso
CARBNCULO
HEMTICO (ANTRAZ)
Sangue
MASTITE BOVINA
Leite
PNEUMONIAS
Fragmento do pulmo, contendo a rea com a leso
CERATO
CONJUNTIVITE
INFECCIOSA BOVINA
Lquido conjuntival de animais na fase inicial da doena

antes do aparecimento das leses da crnea, coletado
com swabs estreis
LEPTOSPIROSE
Soro sanguneo, fetos, natimortos e urina
TUBERCULOSE
Linfonodos do trato respiratrio: mediastinais, bronquiais

e pulmonares
BRUCELOSE
Exame bacteriolgico: fetos e anexos fetais, exsudato vaginal, leite, linfonodos, bao. Fmeas: cotildones, tero e
bere. Machos: testculos, prstata, epiddimo e vesculas
seminais.
Exame sorolgico: soro sanguneo, leite
No caso de necessidade de diagnstico de outras doenas bacterianas

no contempladas neste manual, entrar em contato com o Laboratrio
de Bacteriologia pelo telefone (51) 3481 3711 (ramal 223) ou pelos
e-mails bacteriologia@ipvdf.rs.gov.br, brucelose@ipvdf.rs.gov.br e
leptospirose@ipvdf.rs.gov.br.
30
III Coleta de Amostras

para Exame Virolgico
virolgico
O laboratrio de virologia do IPVDF realiza o isolamento viral, a deteco antignica e a avaliao sorolgica (pesquisa de anticorpos
especficos) para algumas viroses importantes sade animal.
Durante a fase aguda da doena, perodo em que geralmente ocorre
a viremia, a chance de deteco do vrus maior. Nesta fase, buscase identificar diretamente o agente viral ou seus antgenos. Assim, o
melhor material para o isolamento do vrus ou para a deteco antignica aquele coletado no incio da enfermidade, quando esto
presentes os sinais clnicos. A coleta deve ser efetuada no animal
vivo, ou logo aps a sua morte, e a amostra enviada o mais breve
possvel ao laboratrio.
Para o isolamento viral e a deteco antignica, as amostras a serem
coletadas podem ser fragmentos de rgos ou tecidos, secrees,
fezes e sangue.
31
11 Testes sorolgicos
O exame sorolgico outra importante ferramenta de diagnstico laboratorial. Na maioria das infeces, a resposta imune humoral do
hospedeiro torna-se detectvel aps a fase aguda, geralmente 3 a 4
semanas depois do incio dos sinais clnicos. Esta resposta pode ser
detectada atravs da pesquisa de anticorpos especficos.
Se houver interesse em detectar a evoluo dos nveis de anticorpos
no animal (por exemplo, para confirmar a suspeita de determinado
vrus em doena aguda recente), podem ser coletadas amostras pareadas de soro, uma durante a fase aguda da doena e outra 3 a 4
semanas aps a primeira coleta. A suspeita confirmada se houver
aumento igual ou superior a quatro vezes o ttulo de anticorpos detectados entre a primeira e a segunda amostra.
Para analisar o desenvolvimento de anticorpos no soro de um mesmo
animal, aps a administrao de uma vacina, estes anticorpos podem
ser titulados em amostras seriadas, isto , coletadas em sequncia.
Para tanto, os soros podem ser coletados no dia da vacinao (dia
zero) e subsequentemente nos dias 30, 60 e 90, ou ainda mais adiante, caso exista interesse em acompanhamento mais prolongado.
32
12 Coleta para doenas virais

As amostras devem ser acondicionadas, separadamente, em frascos estreis. Os frascos e as embalagens devem estar bem vedados
para evitar extravasamento do material.
Cada amostra deve ser corretamente identificada, com rtulos resistentes e letras e nmeros legveis.
Os materiais especficos a serem coletados para cada tipo de teste
que se deseja solicitar esto descritos no item 13.
12.1 rgos e tecidos:

a) Coletar os rgos de animais com quadro clnico compatvel ao
da suspeita, aps o sacrifcio ou logo em seguida da morte, de forma mais assptica possvel, no devendo ser utilizados instrumentos
com os quais se fez a necropsia;
b) Existindo a suspeita clnica, na realizao da necropsia, coletar
inicialmente os rgos alvo de escolha para a doena em questo, e
posteriormente o restante. O item 13 indica os rgos recomendados
para o diagnstico das doenas virais;
c) Os rgos podem ser coletados inteiros. Se for necessrio seccionar, o fragmento a ser submetido deve incluir o tecido com a leso;
d) Para conservao de rgos e tecidos, utiliza-se a refrigerao.
Em caso de demora no envio (mais de 72 horas), pode-se congelar o
material e envi-lo sob refrigerao;
e) No recomendvel o congelamento de amostras para o isolamento viral, a no ser em temperaturas muito baixas (por exemplo,
gelo seco ou nitrognio lquido), pois temperaturas de 0 a -40 oC podem inativar alguns vrus;
33
f) Para o isolamento viral, existe a possibilidade de conservao de

amostras em preservativos com glicerina tamponada, conhecidos
como lquido de Bedson ou lquido de Valle (vide frmulas no item
14 deste captulo), mantidos refrigerados. Estes preservativos so
muito eficazes, pois tm atividade bactericida e preservam os vrus.
No Formulrio de Solicitao de Exames, deve ser informado qual o
preservativo utilizado;
g) Formol, glutaraldedo, lcoois ou outros produtos qumicos no
devem ser utilizados para a remessa de amostras para diagnstico
virolgico, pois estas substncias inativam os vrus.
12.2 Amostras para diagnstico de raiva

12.2.1 Cuidados na coleta:
a) Uma vez que as amostras para exame de raiva representam claro
risco sade humana, o uso de equipamentos de proteo individual
(luvas, avental, macaco, botas, culos de proteo e mscara)
muito importante no momento da coleta;
b) Na coleta de morcegos, muito cuidado ao coletar animais vivos,
pois eles podem eventualmente reagir e morder a pessoa ao serem
capturados, causando a necessidade de tratamento ps-exposio.
Para este tipo de coleta, fundamental o uso de luvas grossas. Na
indisponibilidade de luvas, coletar o morcego com o auxlio de uma
caixa ou vidro, de forma a evitar o contato direto com o animal;
c) Profissionais de campo devem ser previamente imunizados contra
a raiva.
12.2.2 Instrues para coleta:

a) Coletar encfalo do animal suspeito. No captulo XI est descrita a
coleta de encfalo na necropsia de bovinos;
34
b) No caso de morcego, envi-lo inteiro ao laboratrio, de preferncia morto;

c) As amostras devem ser conservadas refrigeradas e em embalagens hermeticamente fechadas. Em caso de demora no envio (mais
de 72 horas), pode-se congelar o material;
d) Encfalo de bovino no deve ser congelado. O congelamento prejudica o exame diferencial de Encefalopatia Espongiforme Bovina
(BSE), feito atravs da histopatologia.
12.3 Secrees
a) Secrees para isolamento viral devem ser coletadas com swabs sem alginato de sdio, uma vez que esta substncia inativa alguns vrus;
b) Os swabs devem ser colocados em frascos ou embalagens estreis e mantidos refrigerados, enviados em embalagem tripla;
c) Se for inevitvel o congelamento das amostras, utilizar gelo seco
ou nitrognio liquido, quando se desejar o isolamento viral, pois
temperaturas de 0 a -40 oC podem inativar alguns vrus;
d) Para o isolamento viral, existe a possibilidade de conservao destas amostras em preservativos com glicerina tamponada, conhecidos
como lquido de Bedson ou lquido de Valle (vide frmulas no item
14 deste captulo), mantidos refrigerados. Estes preservativos so
muito eficazes, pois tm atividade bactericida e preservam os vrus.
No Formulrio de Solicitao de Exames, deve ser informado qual o
preservativo utilizado;
e) Formol, glutaraldedo, lcoois ou outros produtos qumicos no
devem ser utilizados para a remessa de amostras para diagnstico
virolgico, pois estas substncias podem inativar os vrus;
35
f) A amostra deve ser remetida ao laboratrio o mais breve possvel,

j que as secrees so coletadas, geralmente, para isolamento viral
ou deteco antignica.
12.4 Sangue
a) Para coleta de sangue, o local da puno deve ser desinfetado e
devem ser utilizados materiais estreis, como seringas e agulhas ou
tubos de vacutainer com anticoagulante;
b) Se forem utilizados, para o envio de sangue, frascos de antibiticos ou de outros quimioterpicos, deve-se ter o cuidado de realizar
lavagem adequada, com detergente e gua corrente, antes de fervlos, pois os produtos contidos nos frascos podem tornar o sangue txico para o teste realizado, inviabilizando o diagnstico. Estes frascos
no so recomendveis;
c) A amostra deve conter, aproximadamente, 1 ml de sangue para
cada teste solicitado;
d) Para conservao de sangue, utiliza-se a refrigerao, nunca o
congelamento;
e) O sangue deve ser remetido ao laboratrio em at 24 horas.
12.5 Soro
a) Para se obter o soro deve-se coletar o sangue, com material estril;
b) Se forem utilizados, para envio de soro, frascos de antibiticos ou
de outros quimioterpicos, deve-se ter o cuidado de realizar lavagem
adequada, com detergente e gua corrente, antes de ferv-los, pois
os produtos contidos nos frascos podem tornar o soro txico para o
teste realizado, inviabilizando o diagnstico. Estes frascos no so
recomendveis;
36
c) Os tubos ou seringas, contendo o sangue, precisam permanecer

temperatura ambiente ( sombra), para que ocorra a separao entre
o soro e o cogulo, o que se consegue mais facilmente mantendo o
tubo inclinado;
d) Separar o cogulo do soro, transferindo este ltimo, cuidadosamente, para um novo tubo estril;
e) Se o soro no for separado do cogulo, durante o transporte, o
sangue poder hemolisar, inutilizando a amostra;
f) O soro deve ter aparncia lmpida, de colorao amarelo claro e
sem turbidez (Figura 9);
g) A amostra deve conter 0,5 ml de soro para cada teste solicitado;
h) O soro deve ser conservado refrigerado e, em caso de demora no
envio (mais de 72 horas), pode-se congel-lo e envi-lo sob refrigerao;
i) Nunca congelar amostras de soro contendo cogulo, pois ocorrer
hemlise, tornando o soro imprprio para o exame;
j) Para amostras pareadas de soro, a primeira pode ser congelada e
enviada ao laboratrio juntamente com a segunda, que dever ser coletada de 3 a 4 semanas aps a primeira. As amostras precisam estar
bem identificadas em relao data da coleta e ao animal coletado.
37
Incorreto
Correto
Figura 9 (A) Frascos de antibitico, sem lavagem e

desinfeco corretas, contendo soro hemolisado.
(B) Frascos lavados e esterilizados, corretamente
identificados, contendo soro translcido.
38
13 Doenas virais diagnosticadas

no IPVDF, testes realizados
e materiais a serem enviados
DOENA
DOENA DE AUJESZKY
PROVA
ELISA
2
SN
1
IV
4
AMOSTRA PARA COLETA

9
Soro
9
Soro
Pulmo, bao, rim, encfalo de animais doentes
IHA
Soro
PESTE SUNA CLSSICA
ELISA
Soro
NEWCASTLE
ELISA
Soro
INFLUENZA AVIRIA
ELISA
Soro
PARVOVIROSE SUNA
IV
DIARREIA VIRAL
BOVINA (BVD)
IBR / IPV / IPB

(BHV-1)
ELISA
ELISA
2
SN
1
IV
MAMILITE POR
HERPESVRUS (BHV-2)
IV
Sangue total, leses de mucosas,

soro, fezes, fragmentos de rgos,
placas de Peyer do intestino
9
Soro
9
Soro
Soro
Leses vesiculares nas mucosas, pulmo, bao, rim, swabs nasais e conjuntivais, feto e tecidos fetais
9
Leses vesiculares na glndula mamria
SN
IV
IDGA
ENCEFALITE BOVINA POR

HERPESVRUS (BHV-5)
Soro
Encfalo
LNGUA AZUL
Soro
LEUCOSE BOVINA
IDGA
Soro
IVIC
Encfalo
Encfalo, pulmo, tecidos fetais
ENCEFALITE EQUINA
HERPESVRUS EQUINO
TIPO-1
IV
3
8
IF
Cabea/Encfalo
IVIC
Cabea/Encfalo
RAIVA
7
IV = isolamento viral em cultivo celular

2
SN = prova sorolgica de soroneutralizao, qualitativo ou quantitativo (titulagem)
3
IF = deteco antignica por imunofluorescncia
4
IHA = prova sorolgica de inibio da hemoaglutinao
5
ELISA = prova sorolgica de ELISA para deteco de anticorpos
6
IDGA = prova sorolgica de imunodifuso em gel de gar
7
IVIC = isolamento viral com inoculao em camundongo (prova biolgica)
8
Zoonoses = doenas transmissveis ao homem
9
Em caso de quadro clnico, recomenda-se amostras pareadas
39
14 Frmulas
Frmula do Lquido de Bedson
gua Destilada Deionizada.......................................475 ml
Glicerina neutra..........................................................500 ml
Fosfato Dissdico (Na2HPO4).....................................5,27 g
Fosfato Monopotssico (KH2PO4)...............................2,02 g
Tcnica: misturar a glicerina na gua e acrescentar os fosfatos. Ajustar o pH a 7,5 - 7,6 com o prprio fosfato tanto dissdico quanto monopotssico. Esterilizar em autoclave, 115 C, 15 minutos.
Frmula do Lquido de Valle:
Fosfato Monopotssico (KH2PO4)..............................................0,9 g
Fosfato Bipotssico (K2HPO4)..................................................1,15 g
gua Destilada Deionizada......................................................500 ml
Glicerina neutra........................................................................500 ml
Tcnica: dissolver os fosfatos na gua e, em seguida, adicionar a
glicerina. Ajustar o pH a 7,6 com NaOH. Esterilizar em autoclave, 115
C, 15 minutos.
No caso de solicitao de outro exame virolgico que no esteja descrito no manual, contatar o Laboratrio de Virologia, pelo telefone (51)
3481 3711 (ramais 220 e 238) ou por e-mail virologia@ipvdf.rs.gov.br
40
IV Coleta de
Amostras para Exame
Parasitolgico
parasitolgico
15.1 Endoparasitos
a) Para contagem de ovos e pesquisa de oocistos em fezes:
Recomenda-se coletar um mnimo de 20 g de fezes, diretamente do
reto do animal. Pode-se utilizar, por exemplo, uma luva de toque que
serve de embalagem quando invertida aps a coleta da amostra.
Para preservao, o material deve ser mantido refrigerado at chegar
ao laboratrio ou em formol a 10 % na proporo de uma parte para
quatro de fezes (considerar que o formol pode alterar a morfologia
dos protozorios e larvas) ou, ainda, em MIF (mertiolato, iodo, formol), cuja frmula encontra-se no item 16 deste captulo.
As amostras devem ser embaladas em sacos plsticos amarrados nas
extremidades ou em frascos de plstico/vidro tampados, identificadas
individualmente. Enviar ao laboratrio sempre sob refrigerao.
41
b) Para contagem e identificao de parasitos adultos:

rgos suspeitos de conter helmintos, como abomaso e intestino,
devem ter as extremidades ligadas, para se evitar perda de contedo,
e ser enviados ao laboratrio sob refrigerao ou congelados.
As demais vsceras devem ser embaladas em sacos plsticos devidamente identificados, preservadas sob refrigerao ou congeladas.
Ao colher helmintos adultos, torna-se importante que eles sejam manipulados sem laceraes, para se evitar alteraes morfolgicas.
Aps lavagem (separar sujidades, fezes, sangue), os helmintos devem ser colocados em frascos contendo lquidos adequados para
remessa e preservao (Lquido de Raillet: 5 ml de Formol, 2 ml de
cido Actico e 93 ml de gua Destilada).
c) Pesquisa de anticorpos contra Toxoplasma sp.:
Em casos de suspeitas de aborto por toxoplasmose, recomenda-se
coletar aproximadamente 5 ml de sangue do animal suspeito em tubos, sem anticoagulante e siliconizados, para facilitar a retrao do
cogulo, utilizando-se seringa e agulhas estreis descartveis. Aps
a separao do soro, o mesmo deve ser removido para outro frasco,
devidamente identificado e tampado, deve ser mantido sob refrigerao e enviado ao laboratrio em 24 horas. Se no for possvel o envio nesse perodo, o soro pode ser congelado aguardando remessa
posterior nessas condies. Considerar a possibilidade do envio de
amostras pareadas.
O Laboratrio de Parasitologia Veterinria do IPVDF realiza testes
sorolgicos para pesquisa de anticorpos contra Toxoplasma nas espcies suna, canina, felina, ovina e caprina.
42
15.2 Ectoparasitos
a) Carrapatos:
Para testes carrapaticidas: Amostras de fmeas adultas ingurgitadas (teleginas) devem ser coletadas diretamente dos bovinos, antes
de qualquer tratamento carrapaticida (ideal 3 semanas aps o ltimo
tratamento), e enviadas ao laboratrio dentro de 24 horas. Enviar, no
mnimo, 100 teleginas, para que possam ser testados os principais
carrapaticidas. Os carrapatos devem ser acondicionados em recipientes limpos, realizando-se pequenas perfuraes que permitam
a entrada de ar (garrafas plsticas de gua mineral, por exemplo).
Evitar sempre a exposio a raios solares durante o armazenamento e transporte at o laboratrio (Figura 10). Se possvel, enviar as
amostras em embalagem tripla, conforme captulo I, porm sem gelo.
No caso da propriedade utilizar banheiro de imerso, importante
uma remessa da calda do banheiro em uso, a qual deve ser coletada
aps a homogeneizao da mesma, o que se consegue imediatamente aps a passagem de pelo menos 20 bovinos adultos, coletando-se amostras aproximadamente a 1 metro da superfcie, em uma
garrafa tipo pet (500 ml), por exemplo. Manter e enviar ao laboratrio
sempre separada das amostras de carrapatos.
importante que o histrico de utilizao de produtos carrapaticidas
na propriedade, bem como carrapaticida em uso e demais informaes de manejo bovino, constem na ficha de requisio do teste carrapaticida.
Para identificao: Amostras de carrapatos (colhidos em outras
espcies de animais) devem ser colocadas em frascos vedados, contendo lcool 70 (preferentemente) ou 96, e enviadas ao laboratrio,
com identificao do hospedeiro, local e data de coleta.
43
b) Sarnas: raspados profundos da leso, especialmente das bordas,

so os mais apropriados para a pesquisa de caros causadores de
sarna. A coleta deve ser feita da seguinte maneira:
Fazer uma prega na pele do animal, prxima s bordas da leso.
Caso no apresente leses, preferir regies da base da cauda ou
orelhas (especialmente no caso de sunos);
Pingar algumas gotas de leo (mineral ou de soja) sobre a prega
de pele;
Raspar a prega de pele vrias vezes com uma lmina de vidro ou
de bisturi, usada em ngulo de 90 em relao pele, promovendo
escarificao profunda at o aparecimento de pequenos pontos de
sangue;
Colocar o material sobre uma lmina de vidro e cobrir com outra
lmina de mesmo tamanho, lacrando todas as bordas com fita adesiva ou enrolando as lminas em filme de PVC at a chegada ao
laboratrio;
Conter adequadamente o animal durante a raspagem, para evitar
possveis acidentes por agresses, uma vez que este procedimento
pode provocar dor e desconforto/irritao.
c) Piolhos: exemplares para identificao laboratorial devem ser
mantidos em frascos lacrados a seco ou imersos em lcool 70.
Amostras de plo ou l com material suspeito devem ser mantidas
em recipientes vedados (placas de Petri com as bordas lacradas por
fita adesiva, por exemplo).
d) Larvas de dpteros (moscas): as larvas causadoras de bernes e
bicheiras devem ser colhidas diretamente do animal e podem ser enviadas ao laboratrio para identificao em frascos contendo lcool 70.
Para evitar o escurecimento das larvas em soluo conservante, podese coloc-las em gua fervente e depois transferi-las para a soluo.
44
e) Outros ectoparasitos: moscas, mosquitos, hempteras (barbeiros) e outros insetos para identificao podem ser mantidos em frascos tampados a seco, com naftalina, evitando-se o contato direto com
o espcime (conforme Figura 11) ou imersos em soluo conservante, preferentemente lcool 70.
15.3 Hemoparasitos
a) Esfregaos de sangue: exames para confirmar suspeita de babesiose e anaplasmose bovina podem ser requisitados atravs de
esfregaos finos de sangue, preferencialmente fixados em metanol.
A coleta deve ser feita em extremidades como orelhas ou cauda, coletandose a primeira gota extravasada aps a perfurao da pele com agulha estril. Para formar o esfregao, distende-se suavemente a gota de sangue
sobre uma lmina para microscopia com o auxlio de outra lmina. Logo
a seguir, com rpidos movimentos, agita-se a lmina no ar, de modo que
a secagem do esfregao acontea o mais rpido possvel. A lmina pode
ser identificada com o auxlio de um lpis comum e remetida ao laboratrio
devidamente protegida, preferentemente aps fixao em lcool metlico.
Alternadamente, uma pequena amostra de sangue (2 a 5 ml), coletada
com anticoagulante (ACD ou EDTA, por exemplo), mantida sob refrigerao, pode ser enviada ao laboratrio para a pesquisa de hemoparasitas.
b) Vsceras: fragmentos de bao, fgado, corao, rim e crebro (suspeita
de babesiose cerebral) devem ser colhidos durante a necropsia, embalados em recipientes ou sacos plsticos devidamente vedados, e enviados
ao laboratrio em embalagem tripla como descrito no item 2 do captulo I.
c) Soros: devem ser enviados sob refrigerao ou congelados para
a pesquisa de anticorpos contra Babesia sp. e Anaplasma marginale. Utiliza-se sorologia especialmente para estudos epidemiolgicos,
avaliaes de estabilidade ou instabilidade enzotica dos rebanhos
bovinos e acompanhamento de animais imunizados contra babesiose e anaplasmose.
45
16 Frmulas
SOLUO MIF
gua destilada......................................... 250 ml
Mertiolato N 99 a 1:1000........................200 ml
Formol.........................................................25 ml
Glicerina........................................................5 ml
LCOOL 70:
lcool 96 (comercial)..............................750 ml
gua .........................................................250 ml
Figura 10 - Embalagem correta

para envio de carrapatos
para testes carrapaticidas.
FIGURA 11 - Forma correta de envio

de ectoparasitos (insetos) a seco
para identificao.
Em caso de dvidas, entrar em contato com o Laboratrio de Parasitologia, pelo telefone (51) 3481 3711 (ramal 236) ou pelo e-mail
parasitologia@ipvdf.rs.gov.br .
46
V Coleta de Amostras para

Exame Histopatolgico
17 Amostras para Exame
Histopatolgico
Os tecidos para exame histopatolgico devem ser colhidos na necropsia logo aps a morte, para se evitar autlise, e no podem ser
congelados. Devem ser remetidos em soluo fixadora de formol a
10 %. Os fragmentos precisam ser delgados (mximo de 1 centmetro
de espessura) e devem estar imersos na soluo na proporo de 1
parte de tecido para 10 partes de formol (Figura 12).
Incorreto
Correto
Figura 12 (A) Frasco contendo excesso de tecido em relao

quantidade de formol e (B) Proporo adequada de tecidos e formol
e frasco identificado corretamente.
47
O material deve conter, sempre que possvel, pores do tecido lesado e do tecido normal adjacente. Deve-se colocar uma camada de
algodo na parte superior do frasco quando forem coletados tecidos
que flutuam, como no caso do pulmo, evitando-se que alguma poro no fique imersa no formol.
Os frascos necessitam ter boca larga, evitando a dificuldade do laboratorista para retirar o tecido fixado do recipiente. Cada frasco deve
ser bem vedado e estar identificado de forma legvel, acompanhado
do Formulrio para Solicitao de Exames, demonstrado no Anexo 1.
Caso haja necessidade de exame bacteriolgico e/ou virolgico, tambm, devem ser remetidas pores de material conservado sob refrigerao, sem serem fixados no formol.
Frmula do formol a 10 %
Formaldedo (35 40 %) (= formalina comercial) ........... 100 ml
gua de torneira............................................................. 900 ml
48
18 Coleta de amostras quando

a suspeita for intoxicao
Para o diagnstico de intoxicao, fundamental que o material
enviado seja acompanhado de informaes que incluam espcies
atingidas, idade dos animais, sintomas, curso clnico, achados de necropsia, regio, localizao e lotao de animais na propriedade, bem
como as condies em que costuma ocorrer a manifestao clnica
da doena.
Em muitas intoxicaes, o diagnstico definitivo fornecido pela histopatologia.
18.1 Intoxicao por plantas

Para a grande maioria das intoxicaes com plantas, alm da histria clnica e necropsia, a histopatologia de extrema importncia e,
muitas vezes, determinante para o diagnstico. Neste caso, sempre
devem ser enviadas amostras de fgado, sistema nervoso central,
rim, miocrdio, pulmo e, quando houver envolvimento do trato gastrintestinal, amostras do rmen e retculo mais prximas ao crdia,
bem como partes lesadas do tubo digestivo. aconselhvel tambm
o envio de bexiga, vescula biliar, bao e fragmentos de qualquer outro rgo e/ou tecido com leses macroscpicas, devidamente identificados, sendo que a remessa deve ser feita da mesma forma como
descrita anteriormente para exame histopatolgico.
No Rio Grande do Sul, as plantas responsveis por cerca de 50 %
das intoxicaes em bovinos so do gnero Senecio (maria mole) e
as mais frequentes na epidemiologia da doena so S. brasiliensis
(Figura 13) e S. selloi (Figura 14).
49
Figura 13 Senecio brasiliensis.
Figura 14 Senecio selloi.
Dentre outras plantas, variando entre regies, so importantes tambm: Ateleia glazioviana (timb), Pteridium aquilinum (samambaia),
Nierembergia veitchii, Baccharis coridifolia (mio-mio), Cestrum spp.
(coerana), Lantana spp., Amaranthus spp. (caruru), Enterolobium
spp. (timbava), Halimium brasiliense, Solanum fastigiatum (jurubeba), Ammi majus, Xanthium cavanillesii (carrapicho), Manihot spp.
(mandioca brava), Prunus spp. (pessegueiro bravo) e Mascagnia sp.
18.1.1 Coleta da planta para identificao

As amostras de plantas devem ser colocadas entre jornal e papelo.
Na parte interna, colocam-se dados como nome popular da planta, local da coleta (alm do municpio e regio, informar se foi encontrada
em mato, banhado, etc.); poca de ocorrncia; se uma rvore, arbusto, cip etc.; ocorrncia de flores (poca, cor, forma) e de frutos (forma,
tamanho); data, nome e telefone do coletor. Esse material deve ser
prensado ou atado com cordo. Se for curto o espao de tempo entre
a coleta e a remessa do material, as plantas podem ser colocadas em
sacos plsticos individuais com os dados correspondentes.
50
18.2 Intoxicao por fungos

Intoxicaes por fungos como Fusarium moniliforme (leucoencefalomalcia equina), Ramaria flavo-brunnescens (mal do eucalipto),
Claviceps paspali (mal do melador), dentre outros, podem ter a histopatologia como auxlio importante no diagnstico. O material a ser
enviado, alm da histria clnica, deve seguir a mesma orientao
descrita na suspeita de planta txica.
18.3 Intoxicao por produtos qumicos

Intoxicaes por produtos base de organofosforados, carbamatos,
ureia, etc. podem, tambm, ter a histopatologia como auxiliar no diagnstico. O material a ser enviado segue as mesmas recomendaes
feitas anteriormente, alm da histria clnica.
Em caso de dvidas, entrar em contato com o Laboratrio de Patologia, pelo telefone (51) 3481 3711 (ramal 223) ou pelo e-mail patologia@ipvdf.rs.gov.br .
51
VI Coleta de Amostras
para o Laboratrio de
Patologia Suna
19 Amostras para o Laboratrio
de Patologia Suna
O Laboratrio de Patologia Suna realiza a necropsia de sunos, exame macroscpico e bacteriolgico.
Quando necessrio, exames complementares so realizados, principalmente para estabelecer o diagnstico diferencial.
52
19.1 Doenas bacterianas diagnosticadas no

Laboratrio de Patologia Suna do IPVDF
DOENA
PROVA LABORATORIAL
MATERIAL A SER ENVIADO
Colibacilose Neonatal
Exame bacteriolgico
Alas intestinais, fezes, suabe retal

ou leito em refrigerao
Colibacilose da 3a
semana
Exame bacteriolgico

Exame bacteriolgico

Exame histopatolgico
Encfalo em formol a 10 %
Doena do edema
Exame bacteriolgico
Enterotoxemia
Exame bacteriolgico
Salmonelose
Doena de Glasser
Exame bacteriolgico
Alas intestinais ou leito em

refrigerao
Fragmentos de alas intestinais em
formol a 10 %
Alas intestinais, fezes, suabe retal,
bao ou leito em refrigerao
Fragmentos de alas intestinais
(leo e ceco) em formol a 10 %
Leses serofibrinosas, lquido pericrdico, lquido cefaloraquidiano, lquido
sinovial, corao, bao, crebro,
fgado, leito em refrigerao
Exame bacteriolgico
Pulmo, pleura ou leito em

refrigerao
Pulmo, pleura em formol a 10 %
Pasteurelose pulmonar
(Pasteurella multocida
tipo capsular A e D)
Exame bacteriolgico
Pulmo, pleura ou leito

em refrigerao
Rinite atrfica
progressiva
Exame bacteriolgico
Suabe nasal, tonsilas (em meio de

transporte, sempre que possvel)
em refrigerao
Pleuropneumonia
Exame bacteriolgico
Meningite estreptoccica
Erisipela
Exame bacteriolgico
Epidermite exsudativa
Exame bacteriolgico
Artrites
Exame bacteriolgico
Encfalo, suabes de meninge,

lquido cefaloraquidiano ou leito
em refrigerao
Fragmento de encfalo, incluindo
meninge em formol a 10 %
Bao, lquido sinovial, leses de
pele em refrigerao
Pele, suabes da pele lesionada,
rins ou leito em refrigerao
Suabe da articulao ou lquido
sinovial em refrigerao
Em caso de dvida, entrar em contato com o Laboratrio de Patologia Suna, pelo

telefone (51) 3481 3711 (ramal 231) ou pelo e-mail sunos@ipvdf.rs.gov.br .
53
VII Coleta de Amostras

para o Laboratrio de
Biologia Molecular
20 Amostras para o Laboratrio
de Biologia Molecular
O laboratrio atua na realizao de anlises laboratoriais de DNA e
RNA de agentes infecciosos de animais de produo, utilizando tcnicas de biologia molecular, mantendo tambm o foco em atividade
de pesquisa.
Atualmente, esto sendo realizados os diagnsticos das seguintes
enfermidades pela tcnica de PCR:
Agente infeccioso
Listeria monocytogenes
Escherichia coli
Salmonella sp.
Campylobacter jejuni
Mycobacterium bovis
Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium complexo MAC
54
Os materiais a serem enviados so: sangue com EDTA, leite, outros fluidos e tecidos. Os materiais devem ser enviados sob refrigerao em at 48 horas aps a coleta e, depois deste perodo,
enviar congelado.
Dependendo da demanda, h a possibilidade da implantao de
diagnstico molecular para outros microrganismos.
Em caso de dvida, entrar em contato com o Laboratrio de Biologia
Molecular, pelo telefone (51) 3481 3711 (ramais 208 e 243), ou pelo
e-mail biologiamolecular@ipvdf.rs.gov.br .
55
VIII Coleta de Amostras

para Diagnstico de
Doenas das Aves
As principais enfermidades diagnosticadas no Laboratrio de Sade
das Aves do IPVDF so:
Doenas das Aves
Aspergilose
Botulismo
Colibacilose
Clostridiose
Pasteurelose
Salmonelose
Micoplasmose
Metapneumovirose
Anemia Infecciosa
Doena de Gumboro
Bronquite Infecciosa
56
21 Aves vivas ou mortas

Tipos de exames: necropsia, bacteriolgico, antibiograma, micolgico
e PCR.
Quando possvel, desejada uma amostragem mnima de 10 aves
de 1 dia de idade ou 5 aves adultas por lote.
As aves mortas devem ser encaminhadas sob refrigerao (2-8 C),
o mais rpido possvel, evitando o estado de decomposio.
As aves vivas devem ser enviadas em caixas forradas, evitando estresse e/ou morte por temperatura, oxigenao e espao inadequados.
57
22 rgos
Tipos de exames: bacteriolgico, antibiograma, micolgico, bioensaios e PCR.
Os rgos devem ser coletados de forma assptica, durante a necropsia, para evitar a contaminao do material e interferncia no isolamento do agente etiolgico. Tambm no devem estar em estado
de autlise.
Coletar amostras de 5 animais do mesmo lote, sendo 3 aves com
sintomas e 2 aparentemente sadias.
Pode ser coletado crebro, cerebelo, traqueia, pulmo, sacos areos,
corao, papo, proventrculo, moela, fgado, bao, timo, pncreas,
rim, bursa, tonsilas cecais, intestinos, ovrio, testculo, ossos, nervo
citico e vago.
As amostras devem ser enviadas em embalagens limpas e estreis
sob refrigerao (2-8 C), em at 24 horas.
58
23 Suabes
23.1 Traqueia
Tipos de exames: bacteriolgico, antibiograma e PCR.
A coleta deve ser realizada com a ave bem imobilizada e observada
a introduo do suabe estril (haste com algodo) no local correto,
atentando para a proximidade entre o rgo alvo e o esfago. necessrio abrir o bico da ave e abaixar a lngua da mesma para poder
atingir a traqueia. Os suabes estreis devem ser abertos e seguros
pelo cabo onde no h algodo, sendo esfregados com firmeza em
toda a circunferncia da parede da traqueia, evitando que toquem
nas mucosas da boca. Utilizar um suabe por ave e, aps a coleta,
cortar a extremidade que estava em contato com a mo e mergulhar
o restante no frasco que contm o meio de transporte Stuart.
O caldo Frey deve ser utilizado como meio de transporte quando o
exame for para PCR para Mycoplasma.
Devem ser coletados suabes individuais de 20-30 aves por lote. Utilizar um tubo com meio de transporte para cada suabe coletado. As
amostras devem ser enviadas sob refrigerao (2-8 C), no intervalo
mximo de 24 horas.
23.2 Cloaca
A coleta deve ser realizada com suabe estril seguro pelo cabo onde
no h algodo, realizando movimentos circulares no orifcio da cloaca. Utilizar um suabe por ave e, aps a coleta, cortar a extremidade
que estava em contato com a mo e mergulhar o restante no frasco
que contm soluo de gua peptonada tamponada estril.
59
Devem ser coletados suabes de 20-30 aves por lote, agrupando 10

suabes em cada recipiente. As amostras para isolamento bacteriano
e PCR devem ser enviadas sob refrigerao (2-8 C), no intervalo
mximo de 24 horas.
23.3 Arrasto
Fazer todo o procedimento utilizando luvas descartveis estreis. A
coleta deve ser realizada com gaze ou esponja estril, que sero arrastadas pelo galpo para entrarem em contato direto com a cama do
avirio. Aps o trmino, colocar o material coletado no frasco contendo soluo de gua peptonada tamponada estril.
As amostras para isolamento bacteriano e PCR devem ser enviadas
sob refrigerao (2-8 C), em at 24 horas.
24 Soro
Tipos de exames: SAR e bioensaios.
A coleta do sangue deve ser realizada de maneira assptica, utilizando material e instrumentos estreis, conforme descrito nos itens 12.4
e 12.5 deste manual. No adicionar anticoagulante, para no interferir
nos resultados dos exames.
Nas aves adultas, a coleta pode ser realizada por puno cardaca ou
na veia ulnar (asa). Em aves de 1 dia, realizar puno cardaca ou na
veia jugular (decapitao).
O nmero de amostras mnimo para realizao de testes sorolgicos
de 25 soros por lote de pontos distintos do galpo.
Observar os itens 12.4 e 12.5 deste manual para o envio das amostras.
Os soros enviados para o teste de SAR no podem ser congelados.
60
Enfermidade
Exames
Amostras
Aspergilose
Isolamento fngico
Aves e pulmes
Botulismo
Bioensaio em
camundongos
Soro, fgado, contedo do papo,

moela e intestinos
Colibacilose
Isolamento
bacteriano
Aves e rgos afetados (ovrio,

fgado, corao, sacos areos e
tecido subcutneo)
Clostridiose
PCR
Aves e intestinos
Pasteurelose
Isolamento
bacteriano
Aves, suabes, fgado, pulmes,

traqueia, corao, barbelas,
cabea e ossos longos (fmur)
Salmonelose
SAR
Isolamento
bacteriano
PCR
Soros, aves, suabes, rgos

afetados (fgado, intestinos,
corao, bao e ovrio)
Micoplasmose
PCR
Aves, suabe traqueal, traqueia,

pulmes e sacos areos
Metapneumovirose
PCR
Aves, suabe traqueal, traqueia,

pulmes e cabea
Anemia Infecciosa
PCR
Aves, timo e bao
Doena de Gumboro
PCR
Aves e bursa
Bronquite Infecciosa
PCR
Aves, pulmes, traqueia e rins
Em caso de dvida, entrar em contato com o Laboratrio de Sade

das Aves, pelo telefone (51) 3481 3711 (ramais 248 e 249) ou pelo
e-mail aves@ipvdf.rs.gov.br .
61
IX Coleta de Amostras
de Rao e Farinhas
de Origem Animal para
Exame Microbiolgico
Tipos de exames: contagem de mesfilos, contagem de coliformes totais / termotolerantes / E. coli, contagem de bolores e leveduras, contagem de estafilococos coagulase positiva, contagem de clostrdio sulfito
redutor e pesquisa de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes.
25 Amostras acondicionadas
em embalagens individuais
As amostras devem ser enviadas em quantidade igual ou superior a
200 g, na sua embalagem original, fechada e intacta. Caso na embalagem unitria a quantidade no atinja a recomendada para o envio,
coletar vrias embalagens unitrias.
26 Amostras acondicionadas em
embalagens no individuais
Quando as amostras estiverem contidas em embalagens de grande
quantidade, deve-se promover a homogeneizao do material a ser
analisado antes do incio da amostragem. Fazer a coleta de maneira
assptica em pores representativas da massa total para frascos estreis ou embalagens novas, em quantidade igual ou superior a 500 g.
62
As amostras devem ser enviadas sob refrigerao (2-8 C), no tempo

mximo de 24 horas. importante que a coleta, acondicionamento,
identificao e remessa das amostras sigam as recomendaes bsicas descritas nos itens de 1 a 6 do captulo I deste manual.
Microrganismos
Mtodo de anlise
Meslos
Contagem
Coliformes Totais / Termotolerantes / E.coli
Contagem
Estalococos Coagulase Positiva
Contagem
Clostrdio Sulto Redutor
Contagem
Salmonelose
Isolamento bacteriano
PCR
Listeria monocytogenes
PCR
Bolores e Leveduras
Contagem
Em caso de dvida, entrar em contato com o Laboratrio de Sade

das Aves, pelo telefone (51) 3481 3711 (ramal 248) ou pelo e-mail
aves@ipvdf.rs.gov.br .
63
X Coleta de Amostra de
gua para Exame de
Contaminao Bacteriana
A gua considerada recurso de primeira necessidade para todos
os seres vivos. Portanto, a sua salubridade de grande importncia,
pois mesmo sendo subterrnea pode ficar exposta a poluentes e contaminantes. A poluio aqutica pode ocorrer tanto por substncias
qumicas quanto por contaminantes biolgicos, os quais podem ser
veiculados para o homem ou para os animais, causando doenas. A
gua para consumo humano e animal deve ser potvel, ou seja, isenta de agentes biolgicos patognicos, compostos txicos, excesso
de substncias orgnicas e minerais. Uma das formas de controle da
qualidade da gua atravs da anlise bacteriolgica, que determina
o nmero de bactrias totais e de origem fecal, sendo o grupo coliforme bastante utilizado como indicador de contaminao.
64
27 Coleta de gua em torneiras e

bebedouros
A amostragem da gua dever ser realizada em frascos estreis com
volume mnimo de 200 ml. A coleta e o manuseio dos recipientes
devero ser realizados com cuidado, para evitar a contaminao microbiolgica da amostra. Os recipientes devero ser abertos somente
no momento da coleta da amostra e pelo tempo necessrio para seu
preenchimento, devendo ser fechados imediatamente aps a coleta.
27.1 Procedimentos de coleta:

a) Lavar a torneira no local de sada da gua e lavar as mos para
evitar a contaminao:
b) Abrir a torneira, no ponto de coleta, de forma a obter um fluxo baixo e

constante de gua e deixar escoar a gua por dois minutos antes da coleta:
65
c) Abrir o frasco neste momento e colher a gua mantendo o mesmo

inclinado para evitar a sua contaminao pelo ar. Manter a tampa virada
para baixo e nunca tocar nas suas bordas ou no interior do recipiente:
d) Coletar um volume de amostra que preencha 2/3 do recipiente.

Tampar o frasco rpida e firmemente para que se evite a contaminao e o vazamento da amostra durante o transporte ao laboratrio:
e) Identificar o recipiente com as seguintes informaes, escritas de

forma legvel:
Tipo de gua:
Ponto de amostragem:
Local:
Data e hora da coleta:
Nome do responsvel pela coleta:
66
f) Enviar a amostra ao laboratrio imediatamente aps a coleta. Ela

deve ser enviada em caixa isotrmica, chegando ao laboratrio num
perodo mximo de 12 horas aps sua coleta. Os recipientes devero
ser acondicionados de forma que os espaos vazios sejam preenchidos com papel amassado, evitando-se que o recipiente se desloque
dentro da caixa durante o trajeto. Enviar a amostra em esquema de
embalagem tripla, descrita no item 2 do captulo I. O Formulrio para
Solicitao de Exames (Anexo 1) e o rtulo de risco biolgico (item
3 do captulo I) devem ser preenchidos e fixados no lado externo da
caixa que contm as amostras:
67
28 Coleta de gua em rios, poos,

caixas dgua e reservatrios em
geral
A amostragem da gua dever ser realizada em frascos estreis com
volume mnimo de 200 ml. A coleta e o manuseio dos recipientes
devero ser realizados com cuidado, para evitar a contaminao microbiolgica da amostra. Os recipientes devero ser abertos somente
no momento da coleta da amostra e pelo tempo necessrio para seu
preenchimento, devendo ser fechados imediatamente aps a coleta.
28.1 Procedimentos de coleta:

a) Lavar as mos e as demais partes do corpo que entraro em contato com a amostra, para evitar a contaminao:
b) Para facilitar a coleta, amarrar o recipiente com uma corda previamente lavada e desinfetada. Abrir o frasco no momento da coleta. Descer o recipiente abaixo do nvel da gua, cerca de vinte centmetros de
profundidade, evitando o mximo possvel a gua da superfcie:
68
c) Coletar um volume de amostra que preencha 2/3 do recipiente. Tampar rapidamente o frasco e de maneira firme, para evitar a contaminao e o vazamento da amostra durante o transporte ao laboratrio:
d) Identificar o recipiente, que deve conter as informaes necessrias, escritas de forma legvel, conforme descrito anteriormente no
item 27.1.e;
e) Enviar a amostra imediatamente aps a coleta ao laboratrio, conforme descrito anteriormente no item 27.1.f.
Em caso de dvidas, entrar em contato com o Laboratrio de Sade
das Aves, pelo telefone (51) 3481 3711 (ramal 248) ou pelo e-mail
aves@ipvdf.rs.gov.br .
69
XI Coleta do Encfalo na
Necropsia de Bovinos
Esse captulo, assim como suas ilustraes, foi reproduzido e/ou
adaptado a partir do Manual de procedimentos para diagnstico
histolgico diferencial da Encefalopatia Espongiforme dos Bovinos
(BSE), de Barros et al., 2001.
A coleta no criteriosa de amostras de crebro no fixado pode dificultar o exame no laboratrio. Quando houver vrios animais para
necropsia, num surto de uma doena neurolgica, o tempo para a
retirada do encfalo pode ser um fator limitante. Nesse caso, selecione alguns animais para o exame neuropatolgico. Deve-se coletar o
material tentando eliminar ou diminuir ao mximo os danos ao tecido
nervoso durante a sua retirada.
29 Retirada do encfalo
a) Atravs de um acesso ventral, remova a cabea, desfazendo a articulao atlanto-occipital. Localize o ponto da articulao, colocando
o dedo na regio e movimentando a cabea do animal (Figuras 15 e
16). Seccione msculos e ligamentos e faa a extenso da articulao, empurrando o focinho do cadver para baixo;
b) Seccione a pele, longitudinalmente, da nuca ao focinho, rebatendo-a. Remova msculos e tecidos moles;
c) Trace uma linha imaginria logo aps as apfises supraorbitrias dos
ossos frontais, unindo o extremo caudal de um olho ao outro (Figura 17)
e, utilizando um escopro e um martelo ou serra, seccione a seguir;
70
d) Seccione os ossos temporais e o occipital, unindo os extremos da

seco anterior ao forame magno;
e) Retire a calota craniana, fazendo trao com um pequeno gancho
ou usando o escopro como alavanca;
f) Utilizando tesouras, retire a dura-mter, seccionando a foice do crebro e o tentrio do cerebelo, certificando-se de que a poro de meninges entre o crebro e o cerebelo tenha sido retirada, para remover
o conjunto de forma intacta (Figura 18 e 19);
g) Vire a cabea do animal de modo que o crebro fique para baixo e,
assim, aproveitando a gravidade, seccione com cuidado a emerso
dos nervos cranianos, retirando delicadamente o encfalo da cavidade craniana;
h) O gnglio do nervo trigmeo (gnglio de Gasser) deve ser tambm
coletado. O exame desse par de gnglios nervosos do 5 par de nervos cranianos importante para o diagnstico de doenas como raiva e doena de Aujeszky. A rede admirvel carotdea retirada com
o gnglio e a hipfise: fazem-se dois cortes longitudinais e paralelos,
como se estivessem unindo o clinide cranial com o vrtice do rochedo
temporal. Posteriormente, secciona-se transversalmente o diafragma
hipofisrio, cranialmente ao clinide cranial e posteriormente prximo
ao vrtice do rochedo temporal. Com uma pina, retira-se o diafragma
hipofisrio e, em seguida, o gnglio trigeminal. Em casos de encefalite
da febre catarral maligna, os vasos da rede admirvel mostram leso
(vasculite) caracterstica. Em casos de raiva e Aujeszky, a inflamao
(ganglioneurite) do gnglio do nervo trigmeo um achado frequente;
i) Observe com ateno o encfalo, evitando pression-lo, pesquisando leses macroscpicas como aumento de volume, assimetrias, vascularizao, pontos de amolecimento, hemorragias, exsudatos, etc.
71
Figura 15 Remoo da cabea. A faca inserida

no ponto indicado pela seta (reproduzido de Olafson
in: Barros et al., 2001).
Figura 16 Remoo da cabea. A cabea separada do

resto do cadver na articulao antlanto-occiptal (reproduzido de Olafson in: Barros et al., 2001).
72
Figura 17 As linhas marcam os locais onde o crnio deve ser

serrado para retirada do crebro (reproduzido de Olafson in:
Barros et al., 2001).
Figura 18 O crebro ento exposto com a dura-mter

intacta (reproduzido de Olafson in: Barros et al., 2001).
73
30 Coleta e seleo de amostras

do encfalo para virologia,
bacteriologia e histopatologia
A coleta e a seleo de amostras para exames virolgicos e bacteriolgicos devem ser feitas antes da fixao do encfalo, da seguinte forma:
a) Inicialmente, remova o cerebelo, seccionando-o ao nvel dos pednculos cerebelares. Introduza a ponta de uma lmina no 4 ventrculo pela parte caudal do cerebelo. Seccione rostral e horizontalmente os pednculos cerebelares, separando o cerebelo do bulbo num
dos lados e, depois, no outro (Figura 20 e 21);
b) Corte na altura do tlamo, separando o tronco enceflico do resto
do encfalo (Figura 22). Ao findar essa operao, voc obter trs
partes: a) o tronco enceflico, b) o cerebelo e c) o restante do encfalo (Figura 23);
c) Para obter a amostra 1, retire uma fatia sagital (cerca de 0,5 cm)
do verme do cerebelo (Figuras 24 e 25);
d) Para obter a amostra 2, corte uma fatia transversal fina (cerca de
0,5 cm) do bulbo, no ponto onde o tronco enceflico foi separado da
medula espinhal (Figuras 26 e 27);
e) A amostra 3 obtida dividindo-se um dos hemisfrios cerebrais
na altura do quiasma ptico, separando-se a parte rostral do restante
(Figura 28);
f) Nesse ponto, as trs amostras a serem enviadas para o exame virolgico e/ou bacteriolgico foram obtidas (Figura 29). Os fragmentos
selecionados so adequados para o exame da raiva e para exame de
outras doenas causadas no sistema nervoso de bovinos por vrus e
bactrias. Essas trs amostras devem ser conservadas no refrigera-
74
dor e remetidas refrigeradas. No entanto, se o tempo entre a coleta

e a remessa for maior que 24 horas, aconselhvel congelar essas
amostras e envi-las congeladas, mas nunca fixar em formol;
g) O restante do encfalo (Figura 30) deve ser fixado em formol, conforme descrito no Captulo V, e encaminhado ao exame histolgico, assim como o bloco de tecidos constitudo pela rede admirvel carotdea,
o gnglio do nervo trigmeo e a hipfise. Atravs da histopatologia,
pode-se diagnosticar a Encefalopatia Espongiforme Bovina (BSE).
Figura 19 Tanto quanto possvel, o crebro deve ser removido intacto.

As letras mostram os locais onde esto localizados a foice (F) do crebro
e o tentrio (T) do cerebelo.
Figura 20 Introduza a ponta de uma lmina no 4 ventrculo, pela parte

caudal do cerebelo. Corte rostral e horizontalmente os pednculos cerebelares, separando o cerebelo do bulbo num dos lados e, depois, no outro.
75
Figura 21 Ao findar a operao descrita na Figura 20, o cerebelo estar

completamente separado do encfalo. Os hemisfrios telenceflicos (T),
o 4 ventrculo (IV) e o cerebelo (C) esto identificados na figura.
Figura 22 Separe o tronco enceflico do resto do encfalo, cortando em

ambos os lados, na altura do tlamo, como mostra a figura.
76
Figura 23 Ao findar a operao descrita na Figura 22, o encfalo estar

dividido em trs partes: o tronco enceflico (acima, direita), o cerebelo
(abaixo, direita) e os hemisfrios telenceflicos.
Figura 24 Para a obteno da amostra 1, a ser enviada para exames

virolgicos e/ou bacteriolgicos, uma fatia de cerca de 0,5 cm retirada ao
longo do verme do cerebelo.
Figura 25 Esta fatia (1) deve ser refrigerada ou congelada.
Figura 26 Para obter a amostra 2, corte uma fatia transversal de

aproximadamente 0,5 cm do bulbo, no ponto onde o tronco enceflico
foi separado da medula espinhal.
77
Figura 27 O fragmento (2) deve ser refrigerado ou congelado e o restante

fixado em formol.
Figura 28 A amostra 3 obtida dividindo-se um dos hemisfrios cerebrais

na altura do quiasma ptico, separando-se a parte rostral (3) do restante.
78
Figura 29 Estas so as amostras destinadas ao exame virolgico e/ou

bacteriolgico: 1) fatia do cerebelo seccionado ao longo do verme; 2) fatia
do bulbo/medula cervical e 3) metade rostral de um dos hemisfrios telenceflicos. Esses fragmentos devem ser remetidos refrigerados ou congelados.
Figura 30 O material mostrado nesta figura o que resta aps a retirada das amostras 1-3 para exames virolgicos e/ou bacteriolgicos. Este
material formado por todo o tronco enceflico (acima, esquerda), duas
partes do cerebelo (ao centro) e dos hemisfrios telenceflicos. Destina-se
ao exame histolgico e deve ser fixado em formol a 10 %.
Em caso de dvidas, entrar em contato com o Laboratrio de Patologia, pelo telefone (51) 3481 3711 (ramal 223) ou pelo e-mail
patologia@ipvdf.rs.gov.br .
79
XII Referncias
ALTON G.G.; JONES L.M.; ANGUS R.D.; VERGER J.M. Techniques for the
Brucellosis Laboratories. Paris: INRA, 1988. 190 p.
BARROS C.S.L.; LEMOS R.A.A.; CAVALLRO J.C.M. Manual de Procedimentos
para Diagnstico Histolgico Diferencial da Encefalopatia Espongiforme
dos Bovinos (BSE). So Paulo: Lemos, 2001. 56 p.
BRASIL. Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento. Secretaria de
Defesa Agropecuria. Departamento de Defesa Animal. Manual Tcnico
do Programa de Controle e Erradicao da Brucelose e Tuberculose
Animal. Braslia, 2005. 190 p. PNCEBT.
______. Laboratrio de Apoio Animal/Recife. Diagnstico de Doenas dos
Animais: Manual de Instrues para Coleta, Conservao e Remessa de
Material para Laboratrio. 5. ed. Braslia, 2003.
FEPAGRO. Manual de Coleta e Remessa de Materiais para Diagnstico
de Doenas de Animais. 2. ed. Porto Alegre, 1998. 21 p. Circular
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GUERREIRO M.G. et al. Bacteriologia Especial. Porto Alegre: Sulina, 1984.
HIRSH D.C.; ZEE Y.C. Microbiologia Veterinria. Rio de Janeiro: Koogan,
2003. 446 p.
HOFFMAN R.P. Diagnstico de Parasitismo Veterinrio. Porto Alegre:
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HBNER S.O.; OLIVEIRA A.P.; FRANCO A.C.; ESTEVES P.A.; SILVA A.D.;
SPILKI F.R.; RIJSEWIJK, F.A.M.; ROHE P.M.. Experimental Infection
of Calves with a gI, gE, US9 Negative Bovine Herpesvirus Type 5.
Comparative Immunology, Microbiology & Infectious Diseases,
Oxford: Elsevier. n. 28, p.187-196, 2005.
MERIAL. Manual: Necropsia e Remessa de Material para Laboratrio.
Campinas, 2006. 58 p.
OLIVEIRA S.J. Guia Bacteriolgico Prtico: Microbiologia Veterinria. 2.
ed. Canoas: Ulbra, 2000. 240 p.
80
PANAFTOSA. Instruciones para el Envo de Muestras. Rio de Janeiro,

1998. Folleto de Informacin Pblica, 5.
PIANTA C. Mastite Bovina: Informaes ao Produtor.
FEPAGRO, 1997. Circular Tcnica, 15.
Porto Alegre:
RADOSTITS O.M.; GAY C.C.; BLOOD D.C.; HINCHCLIFF K.W. Clnica

Veterinria. 9. ed. Rio de Janeiro: Koogan, 2002. 1735 p.
RIET-CORREA F.; MNDEZ M.C.; SCHILD A.L. Intoxicaes por Plantas
e Micotoxicoses em Animais Domsticos. Montevideo: Agropecuaria
Hemisferio Sur, 1993. 340 p.
______; SCHILD A.L.; MNDEZ M.C. et al. Doenas de Ruminantes e
Eqinos. Pelotas: UFPEL, 1998. 651 p.
81
XIII ANEXO 1
Formulrio para Solicitao de Exames
Secretaria da Agricultura, Pecuria e Agronegcio
Preenchimento sob responsabilidade do IPVDF
Rubrica
Protocolo
Recebido em
N
/
/
/
FORMULRIO PARA SOLICITAO

DE EXAMES
Cliente: ______________________________________________________________________________
Proprietrio: _________________________________________________________________________
Municpio de origem das amostras: ______________________________________________________
Caso o cliente no esteja cadastrado no IPVDF ou necessite atualizar o cadastro, preencha o quadro abaixo:
C.N.P.J. / C.P.F.:
Endereo para correspondncia:
Bairro:
Tel. Fixo:
e-mail:
I.E. / R.G.:
Cidade:
Tel. Cel:
UF:
Fax:
CEP:
Md. Veterinrio responsvel pela remessa: _________________________________________

Caso o Md. Veterinrio no esteja cadastrado no IPVDF ou necessite atualizar o cadastro, preencha o
quadro abaixo:
CRMV/UF:
C.P.F:
R.G:
Cidade:
Tel. Cel:
UF:
Fax:
Endereo para correspondncia:

Bairro:
Tel. Fixo:
E-mail:
CEP:
Identicao das amostras remetidas:

Espcie:____________________________Tipo de Material:____________________________________
Data da Coleta: _____ / _____ / _____ Quantidade de Amostras:________________________________
Conservao durante transporte: ____________________ Tipo de transporte: _________________
Preenchimento pelo Protocolo do IPVDF:
Estado de conservao da amostra no recebimento: ________________________________________
Informaes sobre o histrico do animal e/ou suspeita clnica:
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
___________________________________________________________
Exames solicitados:
_____________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________
__________________________________________________
Eu, ____________________________ assumo total responsabilidade pelas informaes acima prestadas.
______________________,______ de _______________ de 20___.
____________________________
Assinatura do responsvel pelas informaes
IPVDF - ESTRADA DO CONDE, N 6000 - CEP: 92990-000 - ELDORADO DO SUL - RS BRASIL
Fone/Fax: 51 3481 3711 - Site: www.ipvdf.rs.gov.br; e-mail: protocolo@ipvdf.rs.gov.br / saude-animal@fepagro.rs.gov.br
FEPAGRO
Fundao Estadual de Pesquisa Agropecuria
Rua Gonalves Dias, 570
Porto Alegre/RS - CEP 90130-060
Fone: (51) 3288-8000 Fax: (51) 3233-7607
fepagro@fepagro.rs.gov.br | www.fepagro.rs.gov.br

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Boletim

GOVERNO DO ESTADO DO RIO GRANDE DO SUL

FUNDAO ESTADUAL DE PESQUISA AGROPECURIA - FEPAGRO

I Cenci, Alexander ; II Braga, Alexandre de Carvalho ; III Brito,

Corpo Tcnico da Fepagro Sade Animal

3. IDENTIFICAO DE AMOSTRAS ......................................... 13

REMESSA DAS AMOSTRAS PARA O IPVDF ...................... 17

II. COLETA DE AMOSTRAS PARA

7. AMOSTRAS PARA EXAME BACTERIOLGICO.................. 19

7.7 AMOSTRAS PARA DIAGNSTICO DE TUBERCULOSE......23

III. COLETA DE AMOSTRAS PARA EXAME VIROLGICO .......31

13. DOENAS VIRAIS DIAGNOSTICADAS NO IPVDF,

IV. COLETA DE AMOSTRAS PARA EXAME PARASITOLGICO .....41

VI. COLETA DE AMOSTRAS PARA O LABORATRIO DE

19. AMOSTRAS PARA O LABORATRIO DE PATOLOGIA SUNA.... 52

VII. COLETA DE AMOSTRAS PARA O LABORATRIO DE

20. AMOSTRAS PARA O LABORATRIO DE BIOLOGIA

VIII. COLETA DE AMOSTRAS PARA DIAGNSTICO DE

22. RGOS. .......................................................................... 58

24. SORO ................................................................................ 60

25. AMOSTRAS ACONDICIONADAS EM EMBALAGENS

26. AMOSTRAS ACONDICIONADAS EM EMBALAGENS

X. COLETA DE AMOSTRA DE GUA PARA EXAME

27. COLETA DE GUA EM TORNEIRAS E BEBEDOUROS .........65

28. COLETA DE GUA EM RIOS, POOS, CAIXAS DGUA

XI. COLETA DO ENCFALO NA NECROPSIA DE BOVINOS

XIII. ANEXO 1 FORMULRIO DE SOLICITAO DE EXAMES ......83

em uma embalagem terciria (caixa de isopor) ampla, para permitir

Figura 1 Tipos de embalagens primrias dentro das secundrias:

3 Identificao das amostras

Figura 4 (A) Caixa de isopor (embalagem terciria) para transporte das

Figura 5 Rtulo de identificao de risco biolgico que est disponvel

4 Formulrio para Solicitao

Importante que, no histrico do animal, sejam relatadas informaes

5 Transporte das amostras

6 Remessa das amostras

6.2 Endereo para remessa de amostras

6.3 Pagamento dos servios prestados

7.3 Exsudato e pus

7.4 Amostras de leite para diagnstico

Figura 6 - Amostras de leite em tubos com rtulo de identificao.

7.5 Amostras para diagnstico de carbnculo

7.6 Amostras para diagnstico de leptospirose

7.7 Amostras para diagnstico de tuberculose

captulo. Enviar tambm parte da amostra em soluo de formol a 10

7.8 Amostras para diagnstico de brucelose

7.8.1 Exame direto (bacteriolgico)

7.8.2 Exame indireto (sorolgico)

a) A amostra de sangue coletada deve cobrir no mnimo 50 % da

Figura 7 - Coleta de sangue de bovino da veia caudal.

Figura 8 (A) Amostra de soro ideal. (B) Amostra de soro imprpria

Leite (para o Teste do Anel em Leite)

A prova pode apresentar resultados falso-positivos nas seguintes situaes:

7.8.3 Espcies animais e testes

Antgeno Acidificado Tamponado

Imunodifuso em Gel de gar

Fragmento do pulmo, contendo a rea com a leso

Lquido conjuntival de animais na fase inicial da doena

Soro sanguneo, fetos, natimortos e urina

Linfonodos do trato respiratrio: mediastinais, bronquiais

No caso de necessidade de diagnstico de outras doenas bacterianas

III Coleta de Amostras

12 Coleta para doenas virais