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Instituto Superior Tcnico

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

1 Semestre 2010/2011
2 Ano Mestrado Integrado em Engenharia Biomdica
1Ano - Mestrado Integrado em Engenharia Biolgica

Upgrade dos apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular de Ins Amorim,


baseado nas aulas tericas e laboratoriais de 2010, dos docentes Arsnio Fialho,
Jorge Leito e Miguel Teixeira

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

ndice
I.

Evoluo Prebitica Evoluo Molecular .......................................................................................... 4

II.

gua e pH........................................................................................................................................... 10

III.

Aminocidos e Protenas ............................................................................................................... 13


a.

Catlise Enzimtica ........................................................................................................................ 28

IV.

Glcidos ......................................................................................................................................... 34

V.

Lpidos ................................................................................................................................................ 37

VI.

cidos Nucleicos ............................................................................................................................ 44

VII.

Metabolismo ................................................................................................................................. 48

a.

Gliclise e Neoglucognese ........................................................................................................... 50

b.

Ciclo de Krebs ................................................................................................................................ 53

c.

Cadeia Respiratria ....................................................................................................................... 55

d.

Outras vias metablicas ................................................................................................................ 59


i.

Oxidao de cidos gordos ....................................................................................................... 59

ii.

Catabolismo proteico ................................................................................................................ 62

VIII.

Fotossntese .................................................................................................................................. 62

a.

Fase fotoqumica ........................................................................................................................... 65

b.

Fase qumica .................................................................................................................................. 67

c.

Variantes do processo ................................................................................................................... 68

IX.

Replicao do DNA ........................................................................................................................ 70

X.

Reparao do DNA ............................................................................................................................. 75

XI.

Recombinao do DNA .................................................................................................................. 79

XII.

Transcrio de DNA ....................................................................................................................... 87

a.

XIII.

Regulao da Transcrio .............................................................................................................. 92


i.

Opero da lactose ..................................................................................................................... 93

ii.

Opero do triptofano ................................................................................................................ 96

iii.

Regulao em eucariotas .......................................................................................................... 99


Processamento de RNA ............................................................................................................... 101

a.

Processamento de tRNA .............................................................................................................. 101

b.

Processamento de rRNA .............................................................................................................. 103

c.

Processamento de mRNA ............................................................................................................ 104

XIV.

Traduo de RNA ......................................................................................................................... 106

XV.

Ciclo Celular ................................................................................................................................. 111

XVI.

Laboratrio Restrio de Plasmdeos ....................................................................................... 121

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

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A bioqumica estuda a estrutura e funo de biomolculas (compostos de carbono com uma
grande variedade de ligaes qumicas e de grupos funcionais) e as reaces qumicas
envolvidas nos processos biolgicos.
Grupos Funcionais
Nome do Grupo Funcional
Hidroxilo
Carbonilo
Carboxilo
Imino
Estrutura
Nome do
Grupo Funcional

Amino

Tiol

Fosfato

Pirofosfato

Estrutura

De todos os elementos qumicos, apenas uma pequena parte entra na composio das
biomolculas. Os mais abundantes so H, O, C e N e existem vestgios de outros elementos
como Na, Ca, K, P ou S. Em concentraes ainda mais reduzidas, mas desempenhando funes
muito importantes, podemos encontrar Fe, Ni, Zn, I, Cu, etc.
Quanto aos elementos que mais contribuem para a massa de um organismo, destacam-se O, C
(mais abundante nos organismos que no resto do universo), H, N, P e S, que se ligam entre si
por ligaes muito estveis, as ligaes covalentes.
Os diferentes tomos e molculas reagem entre si e estabelecem diferentes ligaes e
interaces:
Covalentes tm origem na partilha de electres e so as ligaes mais fortes;
No-covalentes Individualmente so mais fracas que as ligaes covalentes mas em
conjunto tornam-se mais fortes e so essenciais para a estrutura e funo das
macromolculas:
Ligaes inicas um ou mais electres so transferidos de um tomo para o
outro, mais electronegativo.
Interaces de Van der Waals;
Ligaes por pontes de hidrognio;
Ligaes hidrofbicas.
As biomolculas englobam 4 tipos de macromolculas:
Lpidos;
Protenas cujos monmeros so os aminocidos;
Glcidos cujos monmeros so os monossacardeos;
cidos Nucleicos cujos monmeros so os nucletidos.
A formao destas macromolculas ocorre quando dois monmeros se juntam atravs de uma
reaco de condensao (com libertao de uma molcula de gua, por exemplo).
Todas estas molculas e macromolculas participam em reaces bioqumicas que
apresentam uma srie de caractersticas:
Do-se em ambiente aquoso (condies suaves);
Esto associadas a variaes de energia. A sua forma mais vulgar de energia qumica
o ATP (Adenosina TriFosfato);

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Reaces bioqumicas diferentes localizam-se em diferentes partes da clula;
Esto frequentemente organizadas em vias metablicas;
So reguladas de acordo com a necessidade de controlar a quantidade e a actividade
de enzimas do sistema.

I.

Evoluo Prebitica Evoluo Molecular

Com o arrefecimento da crusta terrestre tornou-se possvel a condensao da gua e


a formao de massas de gua (sopas pr-biticas), onde se acumulavam vrias
molculas.
Como no havia proteco contra os raios ultra-violeta, estes alcanavam as massas de
gua e, funcionando como fontes de energia (em conjunto com a energia geotrmica),
criaram condies para o estabelecimento de novas ligaes qumicas entre as
molculas j existentes.
Deste modo surgiram molculas de origem biolgica, como cidos gordos,
nucletidos, glucose, aminocidos, etc., molculas que conduziram ao aparecimento
das primeiras formas de vida primitivas.

Em 1950 foi realizada uma experincia, a experincia de Urey-Miller, com o intuito de


descobrir como ocorreram as primeiras reaces que originaram as macromolculas:

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Ilustrao 1 - Esquema da Experincia de Urey-Miller.

Com esta experincia foram verificados alguns factos:


Glucose, ribose, desoxirribose e outros acares formaram-se a partir de CH2O quando
este composto estava exposto radiao UV.
A adenina, formada a partir de 5 HCN e radiao UV, foi provavelmente a primeira
base a surgir.
Formaram-se pptidos com mais de 50 aminocidos de comprimento.
Os aminocidos e bases eram facilmente sintetizados a partir das molculas da
atmosfera primitiva e num ambiente redutor, no ocorrendo a sua formao numa
atmosfera neutra ou rica em oxignio.
Apesar de ser impossvel recriar com exactido as condies da Terra primitiva, foi
possvel verificar a sintetizao de macromolculas in vitro partindo de compostos
inorgnicos.
A glicina, um dos aminocidos mais abundantes produzidos na
experincia Urey-Miller, sintetizada da seguinte forma:

Onde:
CH2O formaldedo
NH3 amonaco
HCN cianeto de hidrognio

Ilustrao 2 - Frmula de
Estrutura da Glicina.

NH2CH2COOH glicina
NH2CH2CN ammonitrile

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Apesar das experincias a seu favor, a teoria da sopa pr-bitica tem alguns pontos fracos
como o facto de ser uma mistura diluda, j que nessas condies as molculas tm tendncia
a separar-se e no a serem sintetizadas. Contudo, a evaporao da gua devido ao calor
interno da Terra pode ter levado ao aumento da concentrao das substncias presentes
nessa sopa, facilitado as reaces que levaram formao de molculas mais complexas.
Produtos formados sob condies pr-biticas
cidos carboxlicos
Nucletidos e Bases
Aminocidos
Acares
cido Frmico
Adenina
Glicina
Pentoses
cido Actico
Guanina
Alanina
Hexoses
cido Propanico
Xantina
cido -aminobutrico
cidos Gordos (C4-C10)
Hipoxantina
Valina
cido Gliclico
Citosina
Leucina
cido Lctico
Uracilo
Isoleucina
cido succnico
Prolina
cido arprtico
cido glutmico
Serina
Treonina
Pensa-se que a primeira molcula da vida a surgir ter sido o RNA pois este cido nucleico
no necessita de enzimas ou primers para se replicar; pode, ele prprio, actuar como uma
enzima; e, ainda nos dias de hoje, se encontram organismos cujo material gentico se
restringe a molculas de RNA (ex. retro-vrus).
Num primordial Mundo do RNA tero sido produzidas molculas de RNA com sequncias
aleatrias. Alguns fragmentos ter-se-o auto-replicado, num processo catalisado por ribozimas
segmentos do prprio RNA. Os segmentos seleccionados tero catalisado a sntese de
pptidos especficos que, por sua vez, participaram na replicao do RNA. Deu-se ento um
perodo de co-evoluo do RNA e protenas seguido da evoluo dos sistemas primitivos de
traduo e do aparecimento no genoma de RNA. O papel cataltico e gentico deste genoma
foi sendo separado ao longo do tempo, acabando o DNA por ser a fonte de material gentico e
as protenas os principais agentes catalticos.
Estes e muitos outros factores contriburam para a crescente complexidade do mundo prbitico e para a evoluo da vida.

Ilustrao 3 - RNA e a sua importncia na evoluo biolgica.

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Desde o aparecimento das primeiras clulas at diversidade de organismos que se verifica
nos dias de hoje deu-se uma grande evoluo. As primeiras clulas a surgir eram
quimioheterotrficas e utilizavam como fonte de carbono e energia molculas sintetizadas
por processos no biolgicos. A escassez de nutrientes favoreceu a evoluo de seres
autotrficos capazes de sintetizar as suas prprias molculas orgnicas, primeiro a partir de
compostos qumicos e, mais tarde, a partir da radiao solar. A evoluo de seres
fotossintticos levou libertao de O2 para a atmosfera terrestre e, apesar de este gs ser
txico para a maioria dos seres anaerbios (os nicos existentes at esta altura), o aumento da
sua concentrao favoreceu a evoluo de seres aerbios. Estes seres apresentavam uma
enorme vantagem em relao aos seres anaerbios quando competiam num ambiente rico em
oxignio e, devido sua maior eficincia energtica, tinham ainda maior potencialidade de se
desenvolverem para formas de vida mais complexas.

Relativamente organizao celular, as primeiras clulas tinham uma estrutura muito simples,
sem ncleo individualizado, organitos celulares ou sistema endomembranar. Estas clulas
procariticas foram sofrendo uma srie de alteraes at darem origem s clulas
eucariticas, mais complexas e com um ncleo perfeitamente organizado e delimitado,
diversos organitos celulares e sistema endomembranar.

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Comparao entre uma clula eucaritica e uma clula procaritica


Escherichia coli
Clula Animal ou Vegetal
(Clula Procaritica)
(Clula Eucaritica)
Clula pequena e simples que cresce e
se replica depressa. Pode adaptar-se
Clula de grandes dimenses e muito complexa.
rapidamente a alteraes do meio em
que se encontra.
Possui ncleo (onde se encontra a informao
No possui um ncleo individualizado; o
gentica), organelos membranados para assegurar
ADN e outras molculas coexistem na
variadas funes celulares, desde a digesto
clula numa regio nucleide. No
produo de energia e armazenamento de
possui organelos membranados.
nutrientes.
Normalmente encontra-se sob forma
Normalmente forma seres multicelulares.
singular.
Pode no precisar de oxignio para
Precisa normalmente de oxignio para existir.
existir.
Existe ADN extra-cromossomal nas mitocndrias e
Existe ADN extra-cromossomal sob
nos cloroplastos.
forma de plasmdeo.
Diferencia-se em vrios tipos de clulas.
Os ribossomas so do tipo 70S.
Os ribossomas so do tipo 80S.

Ilustrao 4 - Clula de E. coli.

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Ilustrao 5 - Clula animal ( esquerda) e clula vegetal ( direita).

Esta evoluo das clulas procariticas para clulas eucariticas pode ser explicada pela teoria
da endossimbiose.
O
modelo
endossimbitico,
desenvolvido por Lynn Margulis,
defende que os seres eucariontes
tero resultado da evoluo
conjunta de vrios organismos
procariontes, os quais foram
estabelecendo
associaes
simbiticas entre si. Este modelo
admite
que
os
sistemas
endomembranares e o ncleo
resultaram de invaginaes da
membrana plasmtica e que as
mitocndrias e os cloroplastos, at
h cerca de 2100 M.a., eram
organismos autnomos. Nessa
altura, algumas clulas de maiores
dimenses (clulas hospedeiras)
tero capturado clulas mais
pequenas, como os ancestrais das
mitocndrias e dos cloroplastos.
Alguns
destes
ancestrais
conseguiram sobreviver digesto
no interior da clula procaritica de
maiores dimenses, estabelecendo
relaes de simbiose. A ntima
cooperao entre estas clulas ter
conduzido ao estabelecimento de

Ilustrao 6 Modelo endossimbitico.

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uma relao simbitica estvel e permanente que trouxe inmeras vantagens, desde uma
maior capacidade de metabolismo aerbio (levado a cabo pelas mitocndrias) at a uma maior
facilidade de obter nutrientes (produzidos pelo endossimbionte autotrfico).
Alguns aspectos que suportam a teoria so os seguintes:
As mitocndrias tm um ADN mitocondrial e dividem-se como algumas bactrias;
Algumas protenas usadas na mitocndria so importadas do citoplasma e traduzidas a
partir de mRNA produzidos a partir de genes nucleares;
A mitocndria e a clula hospedeira apresentam uma relao simbitica;
H mil milhes de anos, uma bactria aerbica sofreu endocitose por uma clula
eucaritica anaerbica que, desde ento, a manteve para produzir energia.
Existem evidncias em sequncias do ADN, membrana e comportamentos da
mitocndria que so semelhantes aos encontrados em bactrias.
A dada altura, organismos unicelulares comearam a agrupar-se e a organizar-se em colnias.
As vantagens deste tipo de relaes acabaram por prevalecer e surgiram os primeiros seres
multicelulares. Com o decorrer da evoluo deu-se a diferenciao celular e a especializao
de grupos de clulas em determinadas funes.
Hoje em dia, considera-se que todos os organismos vivos pertencem a um dos domnios/ramos
da rvore da vida e que evoluram a partir de um ancestral comum. Os domnios baseiam-se
no RNA Ribossomal.

Ilustrao 7 - rvore da vida.

II.

gua e pH

A gua a substncia qumica predominante nos organismos vivos, perfazendo cerca de 70%
da sua massa. um ptimo solvente para a maioria das molculas polares e apresenta diversas
caractersticas que fazem dela uma molcula nica. Entre as principais caractersticas da gua
destacam-se:
Molcula polar ligao entre tomos com electronegatividades diferentes (a partilha
dos electres entre os tomos assimtrica);
Forma pontes de hidrognio;
Constante dielctrica elevada.

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As pontes de hidrognio ocorrem quando dois tomos muito electronegativos (oxignio, flor
ou azoto, os elementos mais electronegativos, ou seja, com
maior tendncia para captar um electro) competem pelo
mesmo tomo de hidrognio, o doador dos electres que
acabam por ser atrados principalmente pelos tomos
electronegativos.
Apesar de isoladamente cada ligao hidrognio no ser muito
energtica (sendo, contudo, mais forte com um ngulo de
ligao de 180), a uma escala macroscpica estas
interaces tornam-se bastante relevantes. No estado slido,
cada molcula de gua forma 4 ligaes hidrognio estveis
com molculas vizinhas. Por outro lado, no estado lquido
essas ligaes esto constantemente a formar-se e a ser
quebradas, durando cerca de 1 ns. No entanto, em qualquer Ilustrao 8 - Estabelecimento de
dos casos, a quebra das ligaes requer uma quantidade uma ponte de hidrognio entre
considervel de energia, justificando o facto de os pontos de duas molculas de gua.
fuso e ebulio da gua serem elevados.
Assim, as pontes de hidrognio so fortes o suficiente para serem teis mas fracas o suficiente
para serem quebradas e restabelecidas de forma reversvel.
Como as molculas de gua formam pontes de hidrognio, a gua adquire propriedades
nicas:
Tenso Superficial mede a fora da superfcie da gua. A tenso superficial
Coeso
da gua elevada, de tal forma que permite a alguns insectos permanecer
sua superfcie sem se afundarem.
A adeso a atraco entre duas substncias diferentes. A gua estabelece
Adeso
pontes de hidrognio com outras superfcies, como o vidro, o solo, tecidos
vegetais e algodo.
Os seus pontos de fuso e ebulio so elevados devido formao de pontes
de hidrognio, que mantm as molculas mais ligadas umas s outras e leva a
que apenas com mais energia elas se desagreguem.
Temperatura
Tambm o seu calor especfico e calor latente de fuso e evaporao so
elevados, o que implica fornecer maior quantidade de energia para que a gua
mude de fase.
A gua um bom solvente para molculas hidroflicas como algumas
Solvncia
molculas polares e sais, e mau solvente para molculas hidrofbicas como os
cidos gordos.
A Energia Livre de Gibbs
Permite fazer uma previso acerca das concentraes e direco de uma reaco
qumica;
Traduz-se pela equao:
, onde H a variao da entalpia, T a
temperatura e S a variao da entropia;
A reaco procede espontaneamente na direco em que foi escrita;
A reaco requer energia para ocorrer.

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A gua um bom solvente de molculas polares pois forma
pontes de hidrognio com os mesmos e tambm dissolve
sais atravs de interaces electrostticas. Neste ltimo
caso, a gua rodeia os ies que compem o sal e diminui as
interaces electrostticas entres eles, contrariando a sua
tendncia para cristalizar e tornando-os solveis. Durante a
sua dissoluo h um aumento da entropia e a energia livre
de Gibbs negativa, o que significa que a dissoluo
favorecida.
Quando uma molcula apolar (os elementos que a
constituem tm electronegatividades muito semelhantes)
colocada em gua, a gua tenta dissolv-la, criando uma
espcie de jaula em torno dessa molcula. Este processo
desfavorvel pois a entropia das molculas de gua diminui.
Contudo, a molcula apolar tende a agregar-se a outras
Ilustrao 9 - Dissoluo de um sal pela
gua.

molculas iguais a si para diminuir a rea de contacto com a


gua. Este o efeito hidrofbico.

Molculas anfiflicas (como cidos gordos), que contm simultaneamente grupos polares e
grupos no-polares, tendem a dispor-se em aglomerados de modo a que as suas regies
hidrofbicas no estejam em contacto com a gua, verificando-se assim a formao de
micelas. Nas micelas, as molculas mantm-se juntas no porque existam interaces entre si
mas porque essa configurao contribui para a estabilidade do sistema e para o aumento da
sua entalpia. A formao deste tipo de estruturas constitui o princpio base da formao de
membranas celulares.

Ilustrao 10 - Formao de micelas.

Uma outra propriedade caracterstica das molculas de gua a sua tendncia para sofrerem
ionizao segundo a reaco:

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Produto Inico da gua


pH
Constante de dissociao de um cido

A 25C,
,

Equao de Henderson-Hasselbach
O valor de pKa expressa a fora relativa de um cido: quanto mais baixo for o valor de pKa mais
forte o cido. Este valor corresponde ao valor de pH do ponto mdio de uma curva de
titulao, ou seja, ao ponto para o qual [HA]=[A-] (ponto isoelctrico).
O pH do sangue ronda os 7.4 e pequenas variaes, como 0.2, so suficientes para provocar a
morte de um indivduo. No entanto, o pH noutros locais do organismo pode ter valores muito
diferentes (ex. pH do estmago pode variar entre 2.5 e 3.0) de acordo com as reaces que
ocorrem nos diferentes rgos/tecidos. Apesar dos diferentes valores que se podem registar
nos mais variados tecidos,
necessrio que, em cada caso, o
pH se mantenha constante,
qualquer que seja o seu valor
ideal, para que as reaces
metablicas
se
dem
correctamente. para isso muito
importante a existncia de
solues tampo.
Alguns cidos ou bases e os seus
conjugados podem ser utilizados
como solues tampo na
medida em que mantm o pH do
meio relativamente constante
face a pequenas variaes das
concentraes
de
outros
cidos/bases da soluo. cidos e
bases fracas so os que melhor
desempenham esta funo. O
intervalo de pH em que as
solues se comportam como
tampo
.

Ilustrao 11 - Curvas de Titulao.

III.

Uma curva de titulao permite


determinar o pKa de um cido
fraco.

Aminocidos e Protenas

As Protenas so as molculas mais abundantes e mais versteis de todos os organismos vivos.


Esto presentes em todos os locais das clulas e resultam da expresso de informao
gentica. So formadas por polmeros de aminocidos ligados atravs de ligaes peptdicas,

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surgem em dimenses variadas, como pequenos pptidos at grandes cadeias, e
desempenham variadssimas funes, desde mediar reaces qumicas a transmitir impulsos
nervosos e a controlar o crescimento e diferenciao celular. Tanto podem ser estruturais
como participar num ciclo enzimtico, e podem ser reactivas ou meramente mediadoras. Entre
os diferentes tipos de protenas conhecidas podem destacar-se:
Enzimas (ex. amilase);
Hormonas (ex. insulina);
Protenas transportadoras (ex. hemoglobina);
Protenas de armazenamento (ex. mioglobina);
Protenas estruturais (ex. colagnio);
Protenas protectoras (ex. anticorpos);
Protenas contrcteis (ex. actina e miosina);
Protenas Txicas.
Apesar da sua grande diversidade, as protenas so formadas apenas por 20 tipos de
aminocidos cuja natureza e sequncia condiciona a estrutura final da cadeia polipeptdica e,
consequentemente, a funo da protena. Algumas das
propriedades dos aminocidos que mais contribuem
para a estrutura e funo das protenas so:
Estereoqumica (disposio espacial das
molculas);
Hidrofobilidade e polaridade relativas;
Propriedades das ligaes hidrognio;
Propriedades de ionizao.
Cada aminocido apresenta a estrutura representada
na imagem direita. o grupo R que permite distinguir
os aminocidos, dando-lhes propriedades diferentes.
A glicina o nico aminocido cujo carbono central, o
carbono-, possui duas ligaes iguais, pois o seu Ilustrao 12 - Estrutura de um aminocido.
grupo R um hidrognio. Todos os outros aminocidos
possuem um carbono- quiral, ou seja, um carbono com todas as 4 ligaes diferentes.
A treonina e a isoleucina apresentam dois carbonos quirais e, portanto, podem apresentar 4
estereoismeros.
Devido

sua
configurao
tetradrica, dois aminocidos com a
mesma constituio qumica podem
apresentar imagens espelhadas, que
representam
uma
classe
de
estereoismeros os enatefilos. De
um modo simples, podemos
classificar cada ismero em L (levo)
ou D (dextro) conforme o seu grupo
amina esteja orientado para a
esquerda
ou
direita,
Ilustrao 13 - Ismeros da Alanina.
respectivamente,
numa
representao esquemtica do aminocido (esta classificao tem origem na comparao dos
aminocidos com gliceraldedo, que tambm apresenta este tipo de ismeros).

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Peptidoglicanos, constituintes das paredes celulares de clulas bacterianas, so formados por
D-aminocidos. No entanto, essa uma excepo pois, apesar de em laboratrio a sntese de
aminocidos dar origem a molculas L e D, na maioria dos organismos vivos apenas se
encontram L-aminocidos.
Classificao dos aminocidos

Alanina
Apolares

Glicina

Isoleucina

Leucina

Prolina

Valina

Serina
Asparagina

Treonina

Cistena
Glutamina

Bsicos

Polares sem carga

Metionina

Histidina

Lisina

cidos

Arginina

cido Asprtico

cido Glutmico

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Aromticos

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Fenilalanina

Tirosina

Triptofano

Os aminocidos apolares so tendencialmente hidrofbicos;


Os aminocidos polares sem carga so hidroflicos e possuem grupos R ionizveis;
Os aminocidos bsicos ou positivamente carregados possuem um grupo R com carga
positiva e comportam-se como bases;
Os aminocidos cidos ou negativamente carregados possuem um grupo R com carga
negativa e comportam-se como cidos;
Os aminocidos aromticos apresentam anis no seu grupo R, so hidrofbicos e
absorvem radiao UV, enquanto todos os outros aminocidos absorvem radiao IV.
Os aminocidos a laranja tm de ser obtidos pela dieta visto que o corpo humano
incapaz de os produzir.
Os aminocidos tm grupos ionizveis (grupo amina, grupo carboxlico e, por vezes, tambm o
grupo R), pelo que podem encontrar-se sob a forma de catio ou anio. Excepto para valores
de pH extremos, coexistem vrias formas ionizveis de um aminocido, predominando uma
delas, de acordo com a natureza cida ou bsica do meio.
Em condies fisiolgicas, nomeadamente em meio aquoso, os aminocidos designam-se
zwiteries porque se apresentam na forma de dipolos inicos, com ambos os grupos amina e
carboxlico ionizados. Estes grupos comportam-se como cidos ou bases fracas,
respectivamente, pelo que possvel representar uma curva de titulao de um aminocido.
Em aminocidos com grupos R no ionizveis (aminocidos dibsicos) destacam-se dois
pontos na curva de titulao que correspondem, cada um, ao pKa de um dos grupos amina ou
carboxlico.
pKa do grupo amina (NH3+) corresponde ao pH para o qual h 50% do aminocido na
forma aninica e na forma de zwiterio, tendo um valor bsico.
pKa do grupo carboxilo (COO-) corresponde ao pH para o qual h 50% do
aminocido na forma de zwiterio e na forma catinica, tendo um valor cido.

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Ilustrao 14 - Titulao da Alanina, um aminocido dibsico.

Para aminocidos com grupos R


ionizveis (aminocidos tribsicos)
distingue-se um outro pKa, num local
que varia conforme a natureza cida
ou bsica do grupo.
O ponto isoelctrico corresponde ao
pH no qual predomina a forma de
zwiterio do aminocido, ou seja, o
aminocido no tem carga.
Para um aminocido dibsico, o seu
ponto isoelctrico calcula-se pela
expresso:
Onde:

e
.

Para um aminocido tribsico, o pI a


Ilustrao 15 - Curva de Titulao para a Histidina, um
mdia dos pKas de valor mais prximo,
aminocido tribsico.
correspondentes passagem de um
estado neutro para negativo ou de um estado positivo para neutro.

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Exemplo de um problema:
Qual o pH de uma soluo de glicina em que o grupo NH3 est 1/3 dissociado?
A equao Henderson-Hasselbalch apropriada :

Se o grupo NH3 est 1/3 dissociado, existe uma parte de glicina com carga negativa para
duas partes de glicina neutra. O pKa a utilizar neste caso o do grupo amina (9.6). Tem-se
ento:

A formao de pptidos d-se por reaco de


polimerizao de condensao de aminocidos. A ligao
peptdica forma-se entre o tomo de carbono do grupo
carboxlico e o tomo de azoto do grupo amina, com
eliminao de gua. As duas extremidades da cadeia
assim formada so designadas por "terminal amino" e
"terminal carboxlico" ou N-terminus e C-terminus.
As ligaes peptdicas so ligaes covalentes muito
estveis, com 40% de carcter duplo (tm comprimento
de 0,133 nm, so mais curtas que uma ligao simples e
mais longas que uma ligao dupla), e tm uma disposio espacial dos seus tomos bem
definida.
O carcter duplo parcial da ligao C-N inibe a rotao em torno da ligao peptdica e os
quatro tomos O, C, N e H definem um plano, o plano peptdico. Uma cadeia polipeptdica
pode ento ser considerada como um conjunto de planos que podem rodar em torno das
ligaes N-C (ngulo ) ou C-C (ngulo ).
Ilustrao 16 - Reaco de condensao
para formao de um pptido.

Ilustrao 17 - Pptido.

Os ngulos de diedro, e , no podem assumir valores arbitrrios pois certas configuraes


da molcula so impossveis devido sobreposies de nuvens atmicas. Deste modo, estes

18

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


ngulos esto restritos a determinados valores que podem ser representados recorrendo a um
grfico de Ramachandran:

Ilustrao 18 - Grfico de Ramachandran.

Os diagramas de Ramachandran indicam quais as combinaes dos ngulos de diedro


possveis numa ligao peptdica e so semelhantes para todos os aminocidos. Pequenas
variaes podem ocorrer devido complexidade dos grupos R envolvidos: as zonas favorveis
tendem a diminuir quando a complexidade dos aminocidos aumenta.
As ligaes peptdicas so maioritariamente trans, ou seja, os grupos laterais de aminocidos
consecutivos esto de lados opostos. As configuraes cis, por norma, so mais desfavorveis
energeticamente pelo que ocorrem numa razo de cerca de 1/1000 em relao s trans. A
excepo est no aminocido prolina, em que as configuraes cis e trans tm a mesma
energia a sua razo cis/trans 1/4. As ligaes cis conferem instabilidade s protenas, pelo
que as clulas desenvolveram mecanismos capazes de reverter as configuraes das ligaes.

Ilustrao 19 - Configuraes trans e cis.

Os aminocidos ligam-se entre si em nmero variado, dando origem a cadeias de dimenses e


constituio diversa.
Pptidos ou Oligopptidos cadeias com 10 resduos, no mximo;
Polipptidos apresentam geralmente entre 10 e 50 resduos;
Protenas tm mais de 50 aminocidos e pesos moleculares elevados (expressam-se
em Dalton 1Da=1uma).
No entanto, a distino entre pptidos e protenas no se baseia unicamente na sua dimenso,
mas sim nas respectivas funes biolgicas de cada molcula.

19

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


As protenas apresentam 4 nveis de organizao estrutural:
Estrutura primria Sequncia linear de aminocidos, determinada pela informao
gentica a partir da qual a protena transcrita, que se mantm por ligaes
covalentes (peptdicas). A sequncia de uma protena l-se a partir do terminal amina
para o terminal carboxilo;
Estrutura secundria Arranjo local dos aminocidos em cadeia hlices- e folhas-
(60% das estruturas mais frequentes), loops, turns, etc., que se mantm por ligaes
fracas (pontes de hidrognio e interaces Van der Waals) e se consegue atravs da
variao dos ngulos e ;
Estrutura terciria Arranjo 3D da molcula em soluo que se mantm por ligaes
fracas (pontes de hidrognio e interaces Van der Waals);
Estrutura quaternria Organizao da protena em subunidades que se mantm por
ligaes fracas (pontes de hidrognio e interaces Van der Waals). Nem todas as
protenas apresentam este tipo de estrutura.

Ilustrao 20 - Estruturas de uma protena.

20

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Hlice-

Estruturas Secundrias
Forma cilndrica com o esqueleto da cadeia linear em hlice e os grupos laterais em
direco ao exterior.
Forma-se quando o oxignio do grupo carboxlico forma uma ligao de hidrognio com
o hidrognio do grupo amina de um aminocido quatro resduos a seguir, em direco ao
terminal-C. Ao longo da hlice, todos os tomos de oxignio do grupo carboxlico
estabelecem este tipo de ligao na mesma direco, o que confere direccionalidade a
este arranjo peridico.
ngulos caractersticos:
A solubilidade desta estrutura fica determinada pela natureza das cadeias laterais porque
os seus grupos polares j esto envolvidos em ligaes hidrognio.
Cada espira da hlice representa, aproximadamente, 3.6 resduos de aminocidos e
envolve 13 tomos 3.613 helix. Cada resduo estende-se por 1.5 , logo o passo da
hlice (altura de cada volta) tem 5.4 .

Turns

Folhas-

A hlice possui um momento dipolar bem definido: o terminal amina possui uma carga
parcialmente positiva e o terminal carboxilo possui uma carga parcialmente negativa.
Cadeias, de 5-8 resduos, agrupadas lado a lado, cujas folhas adjacentes se ligam por
pontes de hidrognio. A natureza das ligaes estabelecidas leva as folhas a formarem
planos e a terem uma conformao final pregueada.
Tm uma direco definida pelo que folhas adjacentes podem progredir na mesma
direco paralelas, ou em direces opostas anti-paralelas (menos estveis). Em
ambas as situaes, cadeias laterais R dispem-se para um e outro lado da folha.
Nas zonas de ligao, que fazem a continuao de uma folha para a outra, podem existir
turns e loops.
Pequenas estruturas em forma de U, formadas por 3 ou 4 aminocidos, que
redireccionam o esqueleto da cadeia para o seu interior, revertendo a sua direco, e
permitem que as protenas se tornem estruturas compactas.
Em cada turn estabelece-se apenas uma ligao hidrognio entre o oxignio do grupo
carboxlico do primeiro resduo e o hidrognio do grupo amina do quarto aminocido.

Loops

-turns so das estruturas mais comuns e fazem a ligao entre cadeias anti-paralelas de
folhas-. Muitas vezes contm resduos de glicina ou prolina e formam-se
preferencialmente superfcie da protena, de modo a que os grupos que no esto
envolvidos na ligao hidrognio possam interagir com a gua.
Fazem a ligao entre vrios elementos da estrutura secundria das protenas (ex. ligam
folhas- paralelas).
Podem ocorrer em vrias formas e tamanhos. No entanto, tambm se localizam
superfcie das protenas e, por isso, podem desempenhar um papel importante no
reconhecimento de processos biolgicos (por exemplo, os antignios podem
diferenciam-se entre si pelos loops que ligam as suas folhas-).
Devido sua estrutura no organizada, uma mutao que ocorra numa zona associada a
um loop tem tendncia a ser menos grave do que se ocorresse numa folha ou numa
hlice pois no implica a destruio da estrutura proteica e, consequentemente, a perda
de funo.

21

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 21 - Estrutura Secundria - Hlice-.

Ilustrao 22 - Estrutura Secundria - Folhas-.

Ilustrao 23 - Estrutura Secundria - Turns.

As cadeias polipeptdicas podem ainda apresentar sequncias com estrutura no tipificada,


chamas sequncias random. Apesar do nome, estas sequncias so bem definidas para cada
protena e mantm-se mesmo aps renaturao, no encaixando, contudo, em nenhuma das
tipologias anteriores.

22

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


A funo das protenas est
relacionada com a sua configurao
tri-dimensional e esta configurao,
por sua vez, especificada pela
sequncia de aminocidos pelo que
a natureza dos vrios resduos
favorece a adopo de diferentes
tipos de estrutura secundria. Por
exemplo, o cido glutmico, a
alanina e leucina do sobretudo
origem a hlices-; a valina e a
isoleucina originam folhas-; e a
prolina, a glicina e a asparagina
esto muitas vezes associadas a
turns.
Aos diferentes tipos de estruturas
secundrias
esto
associados
ngulos e diferentes, pelo que
Ilustrao 24 - Diagrama de Ramachandran.
a cada tipo corresponde uma zona especfica de um diagrama de Ramachandran.
A adopo de estruturas secundrias por parte das protenas traz vantagens:
Permite uma compactao da estrutura, o que tende a minimizar o contacto das
cadeias laterais hidrofbicas com a gua;
As ligaes por pontes de hidrognio entre os grupos polares CO e NH das cadeias
principais (ligaes essas que estabilizam as estruturas) compensam a energia gasta
para as desviar das interaces com a gua.
Destacam-se ainda 3 aminocidos com
caractersticas especiais:
Prolina o seu grupo amina no livre,
encontrando-se ligado ao radical, o que
lhe confere grande rigidez; introduz
quebras nas hlices e nas folhas;
Glicina Pode ser encontrada em
qualquer lugar do diagrama de
Ramachandran e, nas protenas,
muitas vezes encontrada em regies
flexveis;
Cistena forma pontes de dissulfureto.
Ilustrao 25 - Pontes de dissulfureto estabelecidas
entre cistenas.

A estrutura terciria das protenas referese ao arranjo tridimensional dos resduos


de aminocidos e tem uma importncia
fundamental para a actividade biolgica
das protenas. Por exemplo, resduos de
aminocidos muito distantes na cadeia
linear podem aproximar-se devido a
enrolamentos
e
formar
regies
indispensveis ao funcionamento da
protena, como o centro activo das
enzimas.
Ilustrao 26 - Estrutura terciria da Ribonuclease.

23

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Enquanto os elementos da estrutura secundria so estabilizados por ligaes hidrognio, a
estrutura terciria influenciada essencialmente pela natureza dos grupos R dos aminocidos
e depende de diversos tipos de ligaes: inicas, electrostticas, pontes de hidrognio,
ligaes hidrofbicas e covalentes. Podem ainda estabelecer-se ligaes difusas que ajudam a
estabilizar a estrutura da protena atravs de pontes cruzadas (crosslinks). As pontes mais
comuns so as pontes dissulfureto, formadas pela ligao S-S entre duas cistenas
aminocido cistena aps a oxidao do seu grupo HS, e que ocorrem maioritariamente em
meio extracelular.
A estabilizao da estrutura final leva dobra de elementos da estrutura secundria e, como
maioritariamente devida a foras de interaco fracas, est em constante alterao
(mantendo, no entanto, uma conformao base), o que tem consequncias importantes para a
sua funo.
Por fim, a estrutura quaternria no est presente em todas as protenas. Tambm
influenciada pelos grupos R, no linear e tem origem na associao entre vrias cadeias
polipeptdicas, idnticas ou diferentes, atravs de ligaes no covalentes. Permite o aumento
da estabilidade da protena pela reduo da relao superfcie/volume, contribui para a
economia e eficincia energtica e favorece a cooperatividade e a aproximao de centro
catalticos eficaz nas vias metablicas/catalticas.
A desnaturao de uma protena resultado da alterao (perda) das suas estruturas
secundria, terciria e quaternria, mas no da sua estrutura primria pois as ligaes
peptdicas s so afectadas em condies extremas. A desnaturao leva perda de funo da
protena e pode ser devida a agentes qumicos, como o pH, ou fsicos, como a temperatura.
Quando so repostas as condies fisiolgicas a protena adquire a sua conformao funcional
ocorre renaturao. Nalguns casos, nomeadamente quando a estrutura primria alterada,
a protena no capaz de recuperar a sua funo.
Em 1953 Frederick Sanger sequenciou as duas cadeias proteicas da insulina (protena com 51
resduos composta por dois polipptidos ligados por pontes de dissulfureto) atravs de um
processo de identificao do terminal amina de uma cadeia. Os resultados de Sanger
estabeleceram que todas as molculas de uma determinada protena tm a mesma sequncia
de aminocidos.
As protenas podem ser sequenciadas de duas maneiras:
Sequenciao real da cadeia polipeptdica;
Sequenciao do DNA do gene correspondente.
Tambm o processo de Edman permite sequenciar uma protena:
Ocorre uma reaco do terminal amina com fanil-isotiocianato;
A protena modificada submetida a hidrlise cida e liberta o terminal amina
modificado, que identificado por cromatografia;
Segue-se novo ciclo de reaco com o prximo aminocido da protena, que se tornou
no terminal amina.
Deste modo os aminocidos vo sendo sucessivamente (e ordenadamente) individualizados, o
que permite determinar a sequncia completa de uma protena.

24

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Purificao e Anlise proteica

Ilustrao 27 - Separao de protenas com base na sua massa.

A separao das protenas pode basear-se em propriedades fsicas ou qumicas:


Solubilidade;
Foras interactivas;
Hidrofobicidade dos resduos;
Carga dos aminocidos;
Ponto isoelctrico;
Tamanho e forma.
A cromatografia um processo utilizado para separar componentes, podendo separar as
vrias protenas de uma amostra.

25

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 29 - Cromatografia de excluso por peso


molecular: as protenas so separadas pelo
tamanho. Tambm se chama filtrao gel. O gel
possui poros de determinados tamanhos; as
molculas de maiores dimenses no entram nos
poros e migram mais rapidamente; as molculas
pequenas entram nos poros e demoram mais
tempo a migrar ao longo do gel.
Ilustrao 28 - Cromatografia de troca inica.

26

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 30 - Cromatografia por afinidade: as protenas com afinidade com o gel do tubo ficam ligadas ao
mesmo, enquanto que as protenas sem afinidade saem do tubo.

Na primeira experincia realizada a bioqumica utilizouse a tcnica da electroforese em gel de SDSPoliacrilamida para separar protenas. O SDS um
detergente que cobre as protenas de carga negativa e
confere uma taxa carga/massa similar a todas as
protenas a que se liga. O SDS tambm contribui para
desnaturar as protenas.
Ilustrao 31 - Aco do SDS sobre uma protena.

27

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Outra tcnica de separao de protenas combina dois mtodos de separao: primeiro as
protenas so separadas segundo o seu ponto isoelctrico num gel com um pH decrescente;
depois o gel colocado num poo medida feito num gel de SDS-Poliacrilamida para se dar a
electroforese e separar as protenas por pesos moleculares.

Ilustrao 32 - Separao de protenas pela combinao de dois mtodos: ponto isoelctrico e electroforese.

a. Catlise Enzimtica
As enzimas, uma classe particular de protenas, so
catalisadores bioqumicos cuja funo baixar a
energia de activao necessria a uma dada reaco e
permitir que esta decorra a uma velocidade muito mais
elevada.
Em condies biologicamente favorveis, muitas
reaces comuns em bioqumica no so favorveis e
s ocorrem devido interveno de enzimas.
Entre as caractersticas das enzimas possvel
destacar:
So todas de natureza proteica, embora
possam conter uma parte no proteica o

Ilustrao 33 - Aco cataltica.

28

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


cofactor;
Baixam a energia do estado transiente, diminuindo a energia de activao necessria a
uma reaco aceleram a sua velocidade (velocidade at 1016x superior!);
No modificam a constante de equilbrio K;
Encontram-se intactas no final da reaco;
Tm elevada especificidade;
A sua actividade pode ser sujeita a controlo.
De acordo com o tipo de reaco que catalisam, as enzimas classificam-se da seguinte forma:
Subclasses
N
Classe
Tipo de Reaco catalisada
importantes
Dehidrogenases;
Oxidases;
Transferncia de electres (ies hidratados
Peroxidases;
1 Oxidorredutases
ou tomos H)
Reductases;
Monooxigenases;
Dioxigenases.
C1 Transferases;
Glicosiltransferases;
2
Transferases
Transferncia de grupos
Aminotransferases;
Fosfotransferases.
Esterases;
Hidrlises
(transferncia
de
grupos
Glicosidases;
3
Hidrolases
funcionais para a gua)
Peptidases;
Amidases.
C-C liases;
Adio de grupos para formar ligaes
C-O liases;
4
Liases
duplas ou formao de ligaes duplas para
C-N liases;
remoo de grupos
C-S liases.
Epimerases;
Transferncia de grupos entre uma mesma
Cis trans isomerases;
5
Isomerases
molcula para formar ismeros
Transferases
intramoleculares.
C-C ligases;
Formao de ligaes C-C, C-S, C-O ou C-N
C-O ligases;
6
Ligases
por reaces de condensao acopladas a
C-N ligases;
clivagem de ATP
C-S ligases.
As enzimas so divididas em classes, subclasses, sub-subclasses e nmeros de srie. Na sua
nomenclatura internacional (EC) indicam-se 4 nmeros que correspondem, respectivamente, a
cada uma das subdivises mencionadas. Ex: Phosphoglucomutase (EC 5.4.2.2)
As enzimas podem ter especificidade para um determinado tipo de substrato e/ou de ligao,
apresentando diversos nveis de especificidade. A especificidade controlada pela estrutura
um encaixe nico do substrato com a enzima assegura a selectividade. s enzimas pouco
especficas costuma dar-se o nome de enzimas promscuas.
Em qualquer enzima, o substrato liga-se ao centro activo onde a reaco catalisada. O centro
activo, constitudo pelo conjunto de aminocidos que entram em contacto com o substrato,
compreende o local de fixao, que se combina com o substrato por ligaes fracas, e o centro
cataltico, que actua sobre o substrato levando-o a sofrer a reaco qumica.

29

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


A interaco enzima-substrato pode dar-se segundo dois modelos:
Chave-fechadura: sistema rgido, a configurao da enzima no alterada aquando da
ligao do substrato;
Induced-fit: a enzima e o substrato alteram a sua conformao aps a ligao.
A ligao entre a enzima e o substracto pode estabelecer-se devido a interaces hidrofbicas
ou inicas, por exemplo.

Ilustrao 34 - Modelos da interaco enzima-substrato.

Um grande nmero de enzimas necessita, para a sua aco cataltica, de um cofactor ou de


uma coenzima que promova a reaco.
Os cofactores so elementos qumicos, como ies metlicos ou grupos prostticos (grupos
orgnicos de natureza no proteica), e as coenzimas so molculas, orgnicas ou metaloorgnicas, mais complexas e de natureza no proteica.
A reaco entre uma enzima (E) e um substrato (S) de modo a dar um produto (P) pode ser
representada por:

(Numa fase inicial, assume-se que a reaco inversa formao do produto P negligencivel
porque se verifica [P]~0 ).
Cintica enzimtica Michaelis-Menten
Concentrao total de enzima
Taxa de formao de [ES]
Taxa de desaparecimento de [ES]
Como se assume
, ento
Assim,
Constante de Michaelis
Assim,
Velocidade da reaco
Ento tem-se
Quando [S] suficiente para saturar a enzima, a velocidade da reaco mxima. Em
saturao, [ES]=[ET]

30

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Equao Michaelis-Menten
Turnover number
ndice de eficincia cataltica

Quando:

Ilustrao 35 - Cintica de Michaelis-Menten.

A equao de Michaelis-Menten assume algumas condies:


Formao de um complexo ES enzima substrato;
Equilbrio rpido entre o complexo ES e a enzima livre;
A dissociao de ES em E+P mais lenta que a formao do complexo ES a partir de
E+S e que a reaco inversa, a dissociao de ES para voltar a dar E+S.
Vmax uma constante e representa um valor terico pois nunca alcanada na realidade
implicaria que todas as enzimas estivessem ligadas ao substrato.
Km, constante de Michaelis,
a constante de equilbrio para a dissociao do complexo E-S;
definida como a concentrao de substrato quando a velocidade de reaco
metade da velocidade mxima;
caracterstica de cada enzima e no depende da concentrao do substrato;
uma medida da afinidade da enzima em relao ao seu substrato, sendo 1/Kmo valor
dessa medida. Deste modo, quanto menor for o valor de Km maior a afinidade
enzima-substrato e menor a quantidade de substrato necessria para atingir metade
da velocidade mxima.
O turnover number, que se representa por Kcat, uma medida da actividade cataltica mxima
de uma enzima. O Kcat definido como o nmero de molculas de substrato que so
convertidas em produto por molcula de enzima e unidade de tempo quando a enzima est
saturada de substrato.

31

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 36 - Curva de Michaelis para diferentes concentraes de substrato e para diferentes enzimas.

A interpretao da cintica enzimtica de


Michaelis no estabelece uma relao linear entre
as grandezas em estudo. Na cintica de
Lineweaver-Burk representam-se as variveis 1/v
e 1/[S], em vez de v e [S], obtendo-se uma relao
linear mais fcil de interpretar.
Equao linear de Lineweaver-Burk:

A velocidade das reaces afectada por uma


srie de factores, tais como a temperatura e o pH
do meio, ou a presena de activadores ou
inibidores.
A actividade enzimtica tende a aumentar com a
elevao da temperatura de forma exponencial, at que se atinge um determinado valor de T
a que a enzima desnatura. A relao da velocidade com o pH um pouco mais complexa, na
medida que o pH do meio influencia vrios aspectos das enzimas, desde o seu estado de
ionizao ionizao dos aminocidos do centro activo e, em casos extremos, desnaturao.
Cada enzima tem assim uma gama de valores de T e pH para os quais a sua actividade
optimizada.
Ilustrao 37 - Equao de Lineweaver-Burk.

Ilustrao 38 - Variao da actividade enzimtica com a temperatura e com o pH.

32

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


A regulao alostrica, alterao da conformao
proteica e das propriedades de um dos locais de ligao
(pode ser o centro activo) de uma enzima pela associao
de uma molcula ligante a outro local de ligao da
mesma enzima (sem ser o centro activo), inclui
mecanismos tanto de activao como de inibio
enzimtica e muito importante pois intervm no
controlo das sequncias centrais do metabolismo.
Inibidores so compostos que, ligando-se a uma enzima,
reduzem a sua actividade e a velocidade da reaco
catalisada. Os chamados inibidores reversveis no
provocam alteraes irreversveis nas enzimas em que
actuam. Existem diversos tipos de inibidores que provocam a diminuio da velocidade da
reaco actuando de modo diferente sobre a enzima:
Inibidores competitivos so
quimicamente semelhantes ao
substrato e ligam-se ao centro
activo das enzimas impedindo a
ligao enzima-substrato. Tm
semelhanas estruturais com o
substrato para se conseguirem
Ilustrao 39 - Cintica alostrica de uma
enzima.

associar mas no reagem com a


Ilustrao 40 - Inibio competitiva.
enzima e, portanto, no do origem
a nenhum produto. Uma inibio deste tipo diminui medida que se aumenta a
concentrao de substrato para concentraes mais elevadas mais provvel que a
enzima se ligue ao substrato que ao inibidor, mantendo-se assim o valor de vmax.
Apenas Km alterado, verificando-se o seu aumento;

Ilustrao 41 - Inibio competitiva.

Inibidores no competitivos ligam-se a


locais da enzima que no o seu centro
activo antes ou depois da formao do
complexo ES, pelo que podem formar-se
trs tipos de complexos: ES, ESI (enzimasubstrato-inibidor) ou EI. Como continuam
a permitir a ligao do substrato o valor
de Km mantm-se inalterado. No entanto,
como apenas o complexo ES funcional
verifica-se a diminuio de vmax;
Ilustrao 42 - Inibio no competitiva.

33

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 43 - Inibio no competitiva.

Inibidores anti-competitivos ligam-se a locais da enzima que no o seu centro activo


apenas aps a formao do complexo ES.
H a formao de dois complexos, ES e
ESI, sendo o complexo ES o nico com
actividade cataltica. Como o inibidor
apenas se liga ao complexo ES, medida
que a concentrao de substrato
aumenta a inibio mais acentuada.
Verifica-se a diminuio do Km e de vmax
na mesma proporo.
Ilustrao 44 - Inibio anti-competitiva.

Ilustrao 45 - Inibio anti-competitiva.

IV.

Glcidos

Glcidos, glcidos ou hidratos de carbono, as molculas mais abundantes na Terra, so


compostos de carbono, oxignio e hidrognio [(CH2O)n], e podem conter outros elementos
como azoto e enxofre. Desempenham diversas funes, desde energticas (glucose e
sacarose) a funes de armazenamento ou estrutural. Classificam-se em:
Monossacardeos so os monmeros dos glcidos, como a frutose, glucose e
galactose;
Dissacardeos so compostos por dois monmeros, sendo, portanto, dmeros, tais
como a sacarose, a maltose e a lactose;
Oligossacardeos so compostos por 3 a 10 monmeros;

34

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Polissacardeos so compostos por mais de 10 monmeros, dividindo-se ainda em:
Polissacardeos de armazenamento como o amido e o glicognio, que so
polmeros de reserva energtica nas clulas vegetais e animais,
respectivamente;
Polissacardeos estruturais como a celulose e a quitina, que so constituintes
da parede celular de clulas vegetais e fungos, respectivamente.

Ilustrao 46 - Exemplos de glcidos em ambiente celular.

Alguns glcidos apresentam grupos aldedo (H-C=O) ou cetona (C=O). Se o grupo carbonilo
(C=O) se localizar no final da cadeia carbonada (inclusive num grupo aldedo), ento o glcido
uma aldose. Caso contrrio, uma cetose.
Os hidratos de carbono tm estereoismeros cuja classificao (comparao com
gliceraldedo) segundo uma representao no plano se baseia na posio do grupo OH do
carbono mais afastado do grupo aldedo ou cetona: D - lado direito; L - lado esquerdo. Ao
contrrio do que acontece nos aminocidos, em que a forma mais comum L-aminocido, no
caso dos glcidos, estes apresentam-se maioritariamente sob a forma D.

35

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Pentoses e hexoses (glcidos com 5 e 6
carbonos,
respectivamente)
tm
tendncia a assumir uma forma cclica,
principalmente quando se encontram em
meio aquoso. No processo de ciclizao
h eliminao de uma molcula de gua
quando o grupo carbonilo reage com um
grupo OH distante e o glcido passa a
formar um anel, designado de
hemiacetal. Tambm nestes casos se
verifica a existncia de ismeros, desta
Ilustrao 47 - Aldose e cetose.
vez relacionados com a posio do grupo
OH correspondente ao carbono-1: se este se localizar
abaixo do anel tem a designao , caso se localize
acima do anel designa-se .
Alm dos glcidos constitudos unicamente por
monmeros existem tambm derivados de acares:
lcoois no possuem o aldedo ou a cetona.
Ex.: D-ribitol;
cidos o aldedo ou mesmo o grupo OH so
oxidados para um grupo carboxilo. Ex.: cido
glucnico e cido glicurnico;
Amino acares o grupo amina substitui um
grupo OH. Esse grupo amina pode tambm
ser acetilado. Ex.: glucosamina e N
acetylglucosamine.
A formao de polissacardeos d-se pelo
estabelecimento de ligaes glicosdicas. Estas Ilustrao 48 - Ciclizao de glcidos. A forma
ciclizada mais comum a piranose (anel com
reaces de condensao resultam numa ligao 5 carbonos e 1 oxignio), ocorrendo tambm
covalente e na libertao de uma molcula de gua e furanose (anel com 4 carbonos e 1 oxignio).
tm liberdade de rotao. De acordo com o nmero de
carbonos implicados na ligao e da configurao ou de cada monmero, as ligaes tm
diferentes classificaes.
Cada monmero pode estabelecer vrias ligaes glicosdicas em simultneo.

Ilustrao 49 - Exemplos de ligaes glicosdicas.

36

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Tal como as protenas apresentam uma estrutura tridimensional, tambm os glcidos podem
adquirir essa mesma estrutura, consoante os tomos entre os quais a ligao glicosdica
estabelecida.
(1 4) Zig-zag ribbon like
(1 3) & (1 4) U-turn hollow helix
(1 2) Twisted crumpled
(1 6) Sem uma conformao ordenada
Os polissacardeos podem ser classificados de acordo com o tipo de monmeros e com o tipo
de cadeia que formam:
Homopolissacardeos
Heteropolissacardeos
Constitudos por apenas um tipo de
Constitudos por diversos tipos de
monmeros
monmeros
NoNoRamificados
Ramificados
ramificados
ramificados
Cadeia ramificada; alguns
Cadeia ramificada; alguns
Cadeia
Cadeia
monmeros estabelecem
monmeros estabelecem
simples
simples
mais do que uma ligao
mais do que uma ligao

Para alm de ligaes glicosdicas os glcidos podem estabelecer outros tipos de ligaes. Por
exemplo, podem estabelecer-se pontes de hidrognio entre monmeros adjacentes como
acontece na celulose (glcido que o organismo humano no consegue digerir sem o auxlio de
outros organismos) e os peptidoglicanos (encontrados na parede celular de procariontes)
formam cadeias ligadas entre si por aminocidos (L e D).

V.

Lpidos

Lpidos so compostos de carbono e hidrognio (cadeias alifticas, formadas por CH2),


geralmente com mais de 8 carbonos, caracterizados por uma baixa solubilidade em gua e
elevada solubilidade em solventes no-polares (como o benzeno e o clorofrmio).
Desempenham funes variadas destacando-se os papis de reserva energtica (armazenam
cerca de 38 KJ/mol contra os 17 KJ/mol das protenas e glcidos), precursores hormonais,
constituintes das membranas biolgicas, cofactores, etc. A sua composio qumica variada e
dividem-se em vrias classes, entre as quais se destacam os cidos gordos e os fosfolpidos.

37

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Os cidos gordos so cidos carboxlicos (tm um grupo
COOH) com cadeias de hidrocarbonetos formadas por um
nmero variado de carbonos (entre 4 e 36). Raramente
ocorrem livres na natureza e podem ser considerados como
a unidade fundamental da classe dos lpidos.
O grupo carboxlico, que tem um pKa entre 4-5, encontra-se
ionizado em condies fisiolgicas e constitui a extremidade
polar do cido gordo. A cadeia hidrocarbonada apolar e as
ligaes covalentes entre os tomos de carbono so
maioritariamente simples, mas tambm podem apresentar
carcter duplo. Se todas ligaes C-C forem simples, o cido
gordo diz-se saturado. Caso existam ligaes duplas, ento o
cido gordo insaturado monoinsaturado se tiver apenas
uma ligao dupla ou polinsaturado se estas forem em
maior nmero. O nvel de saturao dos cidos gordos est
relacionado com o seu ponto de fuso. Regra geral, quanto
mais insaturado o lpido for menor ser a sua temperatura
de fuso.
Ilustrao 50 - cido Gordo.

Na nomenclatura dos cidos gordos indica-se o nmero de tomos de carbono da cadeia


hidrocarbonada e o n de ligaes duplas, separados por :. Em ndice superior e antecedido
do smbolo , indica-se a posio das ligaes duplas. Assume-se que essas ligaes so cis,
excepto se especificado em contrrio, e numeram-se os carbonos a partir do grupo carboxilco.
Ex: C 18:3 9,12,15.
Todos os cidos gordos sintetizados pelo organismo humano so do tipo cis, ou seja, nas suas
ligaes duplas C=C os tomos de hidrognio ligados aos tomos de carbono encontram-se
orientados para o mesmo lado. Esta insaturao em cis altera a conformao das caudas
carbonadas deixam de ser lineares e passam a estar dobradas, formando-se um ngulo de
~30 na zona da ligao dupla. Este facto muito importante quando os cidos gordos se
encontram em membranas ou agregados pois confere flexibilidade s estruturas.
cidos gordos insaturados em trans so produzidos por algumas bactrias presentes no
sistema digestivo dos ruminantes e so obtidos pelos humanos atravs do consumo de
produtos lcteos, carne animal ou pelo consumo de produtos que sofreram hidrogenao. A
natureza da ligao trans no altera a conformao das caudas carbonadas do mesmo modo
que a ligao cis (no altera muito significativamente a linearidade da cadeia de carbonos) e
est associada ao aumento dos nveis de LDL (mau colesterol) e diminuio de HDL (bom
colesterol), pelo que recomendvel a sua ingesto moderada.

38

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 51 - cidos gordos insaturados.

A partir de cidos gordos podem formar-se diferentes tipos de lpidos, sendo os triglicridos
dos mais simples. Os triglicridos constituem uma grande fonte de reserva energtica
(encontram-se armazenados nas clulas adiposas) e so formados a partir de uma molcula de
glicerol associada a trs cidos gordos. Se esses cidos gordos forem iguais o triglicrido diz-se
simples.
A hidrlise de um triglicrido/diglicrido uma forma de obter energia metablica. A reaco
de degradao leva formao de um diglicrido/monoglicrido e libertao de um cido
gordo, energia e uma molcula de gua. Posteriormente o cido gordo pode ser degradado
fornecendo grandes quantidades de energia.

Ilustrao 52 - Formao de um triglicrido.

Os fosfolpidos pertencem a uma outra classe de lpidos.


Estas molculas so os principais constituintes das
membranas biolgicas e apresentam duas zonas com
polaridade distintas so molculas anfipticas, ou
anfiflicas.
Tm uma cabea polar hidroflica formada por um grupo
fosfato ligado a uma molcula de glicerol e, por vezes, a um
outro grupo varivel. Ao glicerol ligam-se dois cidos
gordos, que podem ser diferentes entre si, e que
constituem a cauda apolar hidrofbica.
Ilustrao 53 - Fosfolpido.
Quando se encontram em meio aquoso estas molculas
tendem a associar-se de modo a que as regies polares estejam em contacto com a gua e as
regies apolares no. Os agregados que se formam s so estveis em ambiente aquoso e,

39

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


dependendo do tipo de lpidos, podem originar micelas estruturas esfricas constitudas por
cidos gordos (com forma mais cnica), ou lipossomas bicamadas de forma cilndrica
formadas por fosfolpidos (com forma mais cilndrica). Este princpio est na base da formao
das membranas biolgicas.

Ilustrao 54 - Micelas, lipossomas e bicamadas fosfolipdicas.

As membranas biolgicas so compostas por lpidos, maioritariamente fosfolpidos,


glicolpidos, colesterol, e protenas, que conferem especificidade. As funes das membranas
so:
Individualizao das clulas;
Compartimentalizao celular;
Criao de uma barreira selectiva;
Localizao de sistemas enzimticos (metabolismo energtico);
Localizao de sistemas de transporte (transporte de molculas para o interior e
manuteno da concentrao inica);
Localizao de sistemas de reconhecimento especfico (hormonas, antignios, etc).
As membranas so uma
bicamada
fosfolipdica
assimtrica intercalada por
outras molculas, tanto de
natureza lipdica (colesterol)
como de natureza proteica
(protenas transportadoras). Os
fosfolpidos tm liberdade para
sofrer rotaes, movimentos
laterais e, por vezes, at trocas
entre camadas.
Ilustrao 55 - Movimentos laterais e flip-flop que ocorrem numa
membrana fosfolipdida.

40

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

A fluidez das membranas afectada pelo nvel de saturao das cadeias carbonadas (quanto
mais insaturadas forem maior ser a fluidez) e pela presena de colesterol. Se as membranas
fossem constitudas por cadeias saturadas verificar-se-ia uma cristalizao das mesmas a
temperaturas mais baixas, ou seja, haveria uma grande tendncia das cadeias para se
empacotarem de forma extremamente ordenada e as interaces intermoleculares seriam
fortes, o que diminuiria a fluidez da membrana. Com as ligaes duplas cis ao longo da cadeia
de carbonos, esta deixa de ser linear e no se arruma to perfeitamente como na situao
anterior, o que permite diminuir a temperatura de transio de fase e aumentar a fluidez da
membrana.

Ilustrao 56 - 4 Dos fosfolpidos mais abundantes nas membranas celulares dos mamferos.

superfcie das membranas destacam-se zonas mais densas, as jangadas lipdicas, que so
mais ricas em colesterol e cidos gordos saturados. Estas jangadas so menos fluidas que as
zonas adjacentes e so ricas em protenas com determinadas funes. So bem definidas mas
podem deslocar-se ao longo da membrana.
O colesterol um tipo de lpido formado por um conjunto rgido de anis associado a uma
pequena cadeia carbonada. maioritariamente hidrofbico mas apresenta um grupo
hidrxido OH polar, pelo que uma molcula anfiptica. produzido apenas por animais (no
fgado), intercala-se nas membranas plasmticas (pode formar pontes de hidrognio com os
fosfolpidos adjacentes) regulando a sua fluidez (diminuindo-a, neste caso), e um precursor
de hormonas como a testosterona e o estrognio.

41

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 57 - Colesterol.

As protenas que ocorrem numa membrana tm


vrias funes. Podem ser:
Intrnsecas atravessam a membrana por
completo, tm uma conformao de hlice onde os grupos hidrofbicos dos
aminocidos so projectados para o
exterior da hlice, para contactarem com as
caudas hidrofbicas dos fosfolpidos,
enquanto os grupos hidroflicos formam
pontes de hidrognio entre si no interior da
hlice.
Perifricas
Ilustrao 58 - Organizao dos grupos
polares e apolares numa protena intrnseca.

42

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Principais funes das protenas numa membrana plasmtica:

O transporte de substncias para o interior da clula pode classificar-se da seguinte forma:

43

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Transporte passivo as substncias movem-se espontaneamente a favor do seu
gradiente de concentrao, atravessando a membrana sem gastos energticos. A taxa
de difuso pode ser aumentada atravs das protenas membranares transportadoras.
Difuso molculas hidrofbicas e pequenas molculas carregadas podem
difundir atravs da membrana.
Difuso facilitada muitas das substncias hidroflicas difundem atravs
membrana com o auxlio de protenas transportadoras, quer pelos seus canais
quer pela alterao de forma das mesmas.
Transporte activo algumas protenas injectam substncias, no interior ou no exterior
da membrana celular, contra o seu gradiente de concentrao atravs da utilizao de
energia proveniente, habitualmente, do ATP.

Ilustrao 59 - Difuso, Difuso Facilitada e Transporte activo.

VI.

cidos Nucleicos

Os cidos nucleicos so macromolculas (polmeros de nucletidos) onde armazenada a


informao gentica de uma clula. Esto presentes em todos os seres vivos e podem surgir
sob a forma de DNA (cido desoxirribonucleico) ou RNA (cido ribonucleico). O DNA
actualmente a forma dominante de informao gentica, embora alguns organismos, como os
retrovrus, utilizem apenas RNA.
As unidades fundamentais dos cidos nucleicos, os nucletidos, so formadas por uma base
azotada e um grupo fosfato ligados a uma pentose. A estrutura bsica de um nucletido
compreende ento:
Base azotada
Purinas: formadas por um anel duplo (penta-anel e hexa-anel)
Adenina (A)
Guanina (G)
Pirimidinas: formadas por um anel simples (hexa-anel)
Citosina (C)
Timina (T) exclusiva do DNA
Uracilo (U) exclusiva do RNA
Pentose acar de 5 carbonos
Ribose RNA
Desoxirribose DNA (tem menos um grupo OH do que a ribose)

44

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Grupo fosfato responsvel pelo carcter cido das molculas. Tem um pKa1, pelo
que em condies fisiolgicas (pH7) est sempre ionizado e com carga negativa.
Assim, os cidos nucleicos necessitam de Mg2+, poliaminas, histonas e outras protenas
para equilibrar esta carga.

Ilustrao 60 - Bases azotadas

Ilustrao 61 Pentoses e grupo fosfato.

Na formao de cada nucletido intervm


reaces de condensao: a base azotada liga-se
ao carbono 1 da pentose, dando origem a
nuclesidos. As bases azotadas tm a
capacidade de rodar em torno do acar a que
esto ligadas, podendo apresentar configurao
syn ou anti, sendo a ltima a mais comum.
Ilustrao 62 - Ismeros do nuclesido de adenina.

Com a ligao de um grupo fosfato ao carbono 5 da pentose, forma-se um nucletido. Os


nucletidos livres so tri-fosfatos dNTP, perdendo dois grupos fosfato durante as reaces
de polimerizao passam a dNMP (ex: dAMP nucletido de adenina monofosfato). No caso
do RNA temos NTP e NMP, respectivamente.
A polimerizao de nucletidos, que d origem aos cidos nucleicos propriamente ditos,
requer a formao de ligaes fosfodiesters entre o grupo hidroxilo do carbono 3 de um
nucletido e o grupo fosfato do carbono 5 do nucletido seguinte. A cadeia polinucleotdica
adquire assim uma direco, apresentando no terminal 5 um grupo fosfato (terminal
negativo) e no terminal 3 um grupo hidrxido (terminal positivo), e a sua sntese sempre
feita na direco 5-3.

45

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 63 - Nucletido do ADN.

Em 1928, Fredrick Giffith descobriu um factor gentico nas bactrias que modificava bactrias
inofensivas em bactrias mortais e, em 1952, Rosalind Franklin obteve a primeira imagem de
raio-X do DNA. Finalmente em 1953, com base nos resultados de experincias anteriores,
James Watson e Francis Crick apresentaram, na Universidade de Cambridge, o modelo de
dupla hlice para o DNA.
Segundo este modelo, a molcula de DNA composta por duas cadeias polinucleotdicas, que
se dispem em sentidos inversos, designando-se, por isso, antiparalelas. No esqueleto da
cadeia distinguem-se duas cadeias laterais e degraus centrais: as bandas laterais so formadas
por molculas do grupo fosfato alternadas com pentoses e unidas por ligaes fosfodiesters;
os degraus centrais so pares de bases ligados por pontes de hidrognio. A especificidade das
ligaes hidrognio entre as purinas e pirimidinas a chamada complementaridade de bases:
a adenina liga-se timina por uma ligao dupla (A=T) e a guanina liga-se citosina atravs de
uma ligao mais forte, uma ligao tripla (G C) a quantidade de adenina e timina, e de
guanina e citosina numa clula sensivelmente a mesma (Regra de Chargaff).
O DNA de dupla-hlice (dsDNA double-stranded DNA) adquire, geralmente, a forma uma
dupla hlice de mo
direita
com
aproximadamente
10 pares de bases
(3.4 cada par) por
volta, ou seja, tem
um passo de 34 ;
20 de dimetro e
uma rotao de 36
entre os resduos.
De um ponto de
vista vertical, a
distncia entre as
cadeias de DNA
pode ser pequena
minor groove, ou
grande major
groove.
Ilustrao 64 - Estrutura do ADN.

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Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


O RNA apresenta uma estrutura em cadeia simples e est presente em 3 formas:
RNA mensageiro (mRNA): cadeia de nucletidos que transporta a informao para a
sntese de protenas aos ribossomas;
RNA de transferncia (tRNA): transfere os aminocidos para os ribossomas;
RNA ribossmico (rRNA): entra na constituio dos ribossomas.
Nos seres procariontes, o DNA encontra-se no hialoplasma e uma molcula circular. J nas
clulas eucariticas, 99% do material gentico est no ncleo e apresenta-se sob a forma de
cromatina filamentos de DNA associados a protenas, as histonas.
Tipo de
Cadeia

Pentose

Bases
Azotadas

Localizao

ADN

Dupla
Hlice

Desoxirribose

A, G, C, T

Principalmente no
ncleo

RNA

Simples,
por vezes
dobrada

Ribose

A, G, C, U

Forma-se no ncleo
e migra para o
citoplasma

Quantidade
Constante para
todas as clulas da
mesma espcie
Varivel de clula
para clula e com a
actividade celular

Uma vez que o DNA se encontra sob a forma de uma dupla hlice, a sua estrutura pode ser
modificada por factores externos, como a temperatura ou acidez do meio.
O aquecimento do material gentico enfraquece e quebra as ligaes por pontes de
hidrognio entre bases complementares, levando desnaturao do DNA. A quantificao
deste processo pode fazer-se atravs da medio da absorvncia a 260 nm (pico de absoro
das bases azotadas), verificando-se que quanto maior for o valor medido maior a
desnaturao da cadeia em cadeia simples, as bases outrora viradas para o interior da
molcula, esto mais sujeitas radiao, absorvendo-a em maior quantidade. Registando os
valores de absorvncia medida que se aumenta a temperatura do meio verifica-se que estes
vo aumentando, o que indica que a elevao da temperatura actua como agente
desnaturante.
Representando graficamente a absorvncia em funo da temperatura obtm-se as curvas de
melting, nas quais se distingue um ponto de inflexo. Este ponto corresponde temperatura
qual 50% da cadeia dupla de DNA se encontra desnaturada e designa-se temperatura de
melting (TM), ou de fuso. Esta temperatura depende directamente do contedo de citosina e
guanina da molcula, pois quanto maior for o contedo CG maior o nmero de ligaes
triplas. Como estas ligaes so mais fortes, para que sejam quebradas e ocorra desnaturao
necessria uma temperatura mais elevada, pelo que a um maior contedo CG corresponde
uma maior TM.

Ilustrao 65 - Temperaturas de Melting.

47

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Aps a desnaturao, se a temperatura diminuir h
hibridao do DNA, ou seja, restabelecem-se as
ligaes hidrognio entre as bases complementares e
volta a formar-se uma cadeia dupla.
As molculas de RNA so cadeias simples no lineares
que apresentam estrutura secundria, como ganchos
e hlices, pelo que pode ocorrer desnaturao do
RNA. Cada molcula possui uma curva de melting
diferente, em funo do seu tipo de estrutura
Ilustrao 66 - Variao da Temperatura de
secundria, que pode no estar associada a nenhum
ponto de inflexo, pelo que no se define temperatura Melting com a maior quantidade de ligaes
GC.
de melting para o RNA.

VII.

Metabolismo

Entende-se por metabolismo o conjunto de todas as reaces qumicas que se do dentro das
clulas. Inclui:
Catabolismo processos oxidativos e exergnicos nos quais h libertao de energia
pela degradao de produtos complexos em produtos mais simples.
Ex: glicogenlise produz glicose a partir de glicognio;
Anabolismo processos redutivos endergnicos que requerem o uso de energia para
formar produtos complexos a partir de molculas mais simples.
Ex: glicognese armazena excesso de glicose sob a forma de glicognio. Lipognese
armazena glicose e aminocidos sob a forma de lpidos.
Enquanto as vias catablicas convergem para poucos produtos finais as vias anablicas
divergem para a sntese de muitas biomolculas diferentes. Por exemplo, o catabolismo de
lpidos, glcidos e protenas origina um intermedirio comum acetil-CoA, que utilizado na
respirao celular. Este intermedirio, por processos anablicos, pode depois dar origem s
mais variadas molculas, desde fosfolpidos a triglicridos, hormonas esterides e vitaminas.
A maioria dos processos metablicos inclui uma srie de reaces e est organizada em vias
metablicas reguladas por enzimas. As enzimas intervenientes podem encontrar-se isoladas,
em complexos multienzimticos ou formar sistemas associados a membranas. A localizao
de todo o complexo numa zona especfica da clula, como uma regio da membrana, permite
que o processo seja mais eficiente.
Uma via metablica tem incio num substrato especfico e termina num determinado produto.
Durante todo o processo do-se vrios passos, cada um catalisado por uma enzima especfica,
e os produtos de uma reaco tornam-se substratos das seguintes, pelo que se designam
intermedirios. O facto de as vias estarem divididas em vrias reaces permite no s que se
obtenham produtos que, de forma espontnea, no seria possvel obter (acoplamento de
reaces termodinamicamente favorveis a processos desfavorveis), como tambm que se
regule o calor/energia libertado e se mantenha a temperatura da clula dentro de valores
fisiolgicos.
Embora as vias anablicas e catablicas de degradao e sntese dos mesmos compostos
sejam semelhantes, necessrio que apresentem alguns passos diferentes. S assim se obtm
mecanismos de regulao que permitem favorecer uma das vias e inibir a outra, e tambm s
deste modo que ambas as vias podem ocorrer em simultneo e de forma espontnea, j que

48

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


se no existisse qualquer
diferena entre elas as leis
do
equilbrio
termodinmico
ditariam
que as vias apenas se
dessem num sentido.
As
principais
vias
metablicas da maioria dos
organismos
apresentam
muitas semelhanas, o que
sugere que todas as formas
de vida descendem de um
ancestral
comum.
A
molcula de ATP, por exemplo, o intermedirio energtico mais utilizado por todos os seres
vivos embora outras molculas, como o NAD ou NADP, tambm desempenhem o mesmo
papel.
O
ATP,
adenosina
trifosfato,
armazena energia nas ligaes dos
seus grupos fosfato e a sua sntese ou
degradao est acoplada a muitos
processos
endergnicos
ou
exergnicos,
respectivamente.
Atravs do ciclo do ATP, a energia
conseguida durante a fotossntese ou
outros processos catablicos
Ilustrao 67 - Ciclo do ATP.

transportada para os processos


celulares que necessitam de energia.

Ilustrao 68 - ATP.

As reaces de oxidao-reduo adquirem uma enorme importncia na produo de ATP e de


energia. Sempre que uma substncia oxidada, perdendo energia por atingir um nvel mais
estvel, outra substncia sofre reduo e adquire mais energia. Existem coenzimas que agem
como aceitadoras de electres. Algumas das mais importantes so o FAD (dinucletido de
flavina-adenina), o NAD (dinucletido de nicotinamida-adenina), e o NADP (dinucletido de
nicotinamida-adenina fosfato), cujas formas reduzidas so, respectivamente, FADH, NADH e
NADPH. Estas coenzimas so transportadoras de electres e armazenam energia sob a forma
de electres num alto nvel energtico.

Ilustrao 69 - FAD (a) e NAD (b).

49

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


A sntese de ATP d-se por 3 processos:
Gliclise, ou outras vias metablicas que levem formao de acetil-CoA
(metabolismo glicdico, lipdico ou proteico);
Ciclo de Krebs, ou ciclo do cido ctrico;
Cadeia respiratria.

a. Gliclise e Neoglucognese
A gliclise o processo no qual uma molcula de glicose degrada, atravs de 10 reaces
catalisadas enzimaticamente, e forma 2 molculas de cido pirvico, um composto de 3
carbonos. comum a todos os organismos, no utiliza oxignio e d-se no citoplasma, onde se
localizam as enzimas necessrias ao processo.
Pode dividir-se em 3 fases:

50

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 70 - Gliclise.

A equao global da gliclise :

O balano energtico desta fase :


Reaco
1
3
6
7
10
Balano energtico final

ATP NADH+H+
-1
0
-1
0
0
2
2
0
2
0
2
2

51

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


O produto final da gliclise o cido pirvico, que vai depois ser utilizado na respirao
celular.
Em condies anaerbicas (ausncia de oxignio) ocorre fermentao. H vrios tipos de
fermentao, cada um com produtos finais diferentes, mas em todos os casos o balano final
de ATP sempre de 2 molculas:
Fermentao alcolica ocorre, por exemplo, nas plantas e leveduras, e os produtos
finais so o CO2 e o etanol. Neste tipo de fermentao o cido pirvico proveniente da
gliclise descarboxilado, libertando CO2 e originando aldedo actico, um composto
com 2 carbonos. Por aco do NADH reduzido, tambm proveniente da fase da
gliclise, forma-se etanol.

Fermentao lctica verifica-se, por exemplo, nos bacilos lcticos, e o cido pirvico
reduzido a cido lctico. Aps a gliclise, o piruvado combina-se com o H+
transportado pela NADH e origina o cido lctico.

O ciclo de Cori traduz uma cooperao metablica entre os msculos e o fgado quando
ocorre fermentao lctica. Aps ser produzido nos msculos, o cido lctico transportado
pelo sangue at ao fgado, onde novamente convertido em glucose pelo processo da
gluconeognese.
Na respirao aerbia (em
presena de oxignio) o
cido pirvico, formado
durante a gliclise,
transportado para o interior
das mitocndrias, onde vai
integrar o ciclo de Krebs e a
cadeia
de
transporte
electrnico. No final de todo
este processo o balano
terico final de ATP ser de
36
nos
organismos
eucariotas e de 38 nas
bactrias.

Ilustrao 71 - O processo que se segue gliclise depende da presena ou


ausncia de oxignio.

Os seres humanos consomem cerca de 160 gramas de glucose por dia, sendo que 75% dessa
quantidade consumida no crebro. Os fluidos corporais contm apenas 20 gramas de glucose
e as reservas de glicognio rendem cerca de 180 a 200 gramas de glucose. , portanto,
necessrio que os seres humanos e outros organismos sejam capazes de sintetizar a sua
prpria glicose.
A neoglucognese, ou gluconeognese, a via metablica que conduz sntese de glicose a
partir de cido pirvico. Ocorre, principalmente, no fgado e nos rins e, apesar da maioria das
suas reaces serem inversas s da glicose, algumas, que por razes de ordem termodinmica
no so reversveis (
), variam. Nesses casos, as reaces so
catalisadas por enzimas diferentes e constituem os principais pontos de regulao das duas
vias. Os passos alterados so:

52

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Reaco 10 converso de piruvato em fosfoenolpiruvado;
Reaco 3 converso da frutose-1,6-fosfato em frutose-6-fosfato;
Reaco 1 converso da glicose-6-fosfato em glicose.
A regulao da neoglucognese est relacionada com a regulao da gliclise:
Quando a gliclise est em funcionamento, a gluconeognese no est a realizar-se;
Quando o estado energtico da clula elevado a gliclise deve ser desligada e o
piruvato, entre outros, deve ser utilizado para a sntese e armazenamento de glucose;
Quando o estado energtico da clula baixo a glucose deve ser rapidamente
degradada de modo a fornecer energia;
Os passos regulados da gliclise so os mesmos passos que so regulados na direco
oposta.
Destacam-se ainda outros processos que envolvem a glucose:
Glicognese processo de formao de glicognio quando a glucose existe em
excesso;
Lipognese processo de produo de lpidos, atravs de aminocidos e glucose,
quando as reservas de glicognio esto lotadas;
Glicogenlise processo de formao de glucose a partir da quebra das ligaes do
glicognio.

b. Ciclo de Krebs
O ciclo de Krebs, ou ciclo do cido ctrico, d-se na matriz mitocondrial e consiste na oxidao
de acetil-CoA a CO2 com libertao de energia sob a forma de electres, que armazenada em
NADH e FADH2, molculas transportadoras de electres.
A acetil-coenzima A o
produto de diversas vias
metablicas mas no um
produto final da gliclise. Para
que o cido pirvico possa
integrar o ciclo de Krebs
necessrio
um
passo
preparatrio em que o
piruvato convertido em
acetil-CoA.
Ilustrao 72 - Formao da acetilcoenzima A.
Na respirao aerbia, aps a
etapa da gliclise o cido pirvico entra nas mitocndrias e, ao nvel da matriz mitocondrial,
sofre 3 reaces que culminam na formao de acetil-CoA:
Descarboxilao removido um carbono ao cido pirvico. Forma-se acetaldedo e
dixido de carbono;
Oxidao so removidos dois H ao acetaldedo. Forma-se cido actico e reduz-se
NAD+ a NADH+H+;
Formao de acetil-CoA o cido actico combina-se com uma coenzima A e forma-se
acetil coenzima A.
O acetil-CoA vai agora integrar o Ciclo de Krebs, que tem 8 passos:

53

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 73 - Ciclo de Krebs.

A equao global do Ciclo de Krebs :

O balano energtico desta fase :


Balano do Ciclo de Krebs Por acetil-CoA Por ciclo
ATP
1
2
NADH+H+
3
6
FADH2
1
2
CO2
2
4

54

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

c. Cadeia Respiratria
A cadeia respiratria, ou cadeia de transporte electrnico, a etapa em que culminam todos
os processos oxidativos de degradao de glcidos, lpidos ou protenas. Esta fase d-se nas
cristas mitocondriais e permite a sntese de ATP utilizando a energia libertada durante a
reduo de O2 a H2O, cujos electres so doados pelo NADH e FADH2 provenientes da gliclise
e ciclo de Krebs.
Nas cristas mitocondriais encontra-se um conjunto de 3 complexos enzimticos (I, III, IV),
ligados por dois transportadores electrnicos (CoQ e Citocromo C). O conjunto destas 8
enzimas, associadas a tomos metlicos (cofactores) capazes de aceitar e doar electres,
forma a cadeia respiratria. Seis das protenas que fazem parte desta cadeia encontram-se
fixas, enquanto as restantes duas so mveis.
Quando os cofactores NADH+H+ e FADH2 libertam hidrognio para a cadeia respiratria d-se
incio ao processo de fosforilao oxidativa. Neste processo as reaces de oxidao e
fosforilao esto acopladas, o que permite a sntese de ATP:
Cada H fornecido cadeia separado em H+ + e-;
Os protes so bombeados para o espao intermembranar criando um
gradiente de pH e um potencial electroqumico transmembranar de H+. Por
cada NADH+H+ so bombeados 10 H+ e por cada FADH2 apenas 6 H+, pois o
FADH2 liberta os seus protes apenas no segundo transportador;
Os electres vo passar de transportador electrnico em transportador
electrnico at serem entregues ao oxignio;
Os electres so fornecidos ao O2, dando origem a ies;
Os ies oxignio atraem H+ e forma-se gua;
O potencial de H+ provoca a difuso destes ies de novo para o interior da matriz
mitocondrial e permite a sntese de ATP via ATPsintase;
O complexo V, ATPsintase, formado por trs partes. A corrente criada pela
passagem de H+ provoca a rotao de duas dessas partes, o rotor e o haste, e
activa os stios activos da terceira parte, o basto, onde formado ATP a partir
de ADP+Pi;
Cada NADH origina 3 ATP e cada FADH2, como s leva ao bombeamento de 6
H+, permite apenas a sntese de 2 ATP.

55

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 74 - Complexos enzimticos que participam na cadeia respiratria.

Ilustrao 75 - Processo de bombeamento de protes pelos complexos enzimticos.

Curiosidade o cianeto uma substncia que adere cadeia transportadora de electres e


impede a produo de ATP, asfixiando as clulas e podendo levar morte do indivduo.

56

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Em 1960, Peter Mitchell props


uma
teoria,
a
teoria
quimiosmtica, para a formao
de ATP (teoria que lhe valeu o
prmio Nobel em 1978). Quando
os protes so bombeados para o
espao intermembranar cria-se
um gradiente de pH e um
potencial
electroqumico
transmembranar de H+. Os
protes regressam, contudo,
matriz (movimentando-se para
uma zona de menor concentrao
de H+) atravs da ATP sintetase. O
fluxo de protes atravs desta
enzima fornece a energia
necessria para a fosforilao do
ADP a ATP.

Ilustrao 76 - ATP sintetase.

Ilustrao 77 - Modelo da teoria quimiosmtica.

57

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


O balano energtico desta fase :
N de molculas ATP por molcula ATP formado
+
NADH+H
10
3
30
FADH2
2
2
4
Total
34
O balano final :
ATP NADH+H+ FADH2 CO2
Gliclise
2
2
Obteno de acetil-CoA
2
2
Ciclo de Krebs
2
6
2
4
Cadeia Respiratria
34
-10
-2
Por molcula de glicose 38
0
0
6
Nos eucariontes, as molculas de NADH formadas na gliclise so incapazes de atravessar a
membrana da mitocndria, sendo necessria a sua converso para FADH2. Como na gliclise se
formam 2 NADH, ento, os 6 ATP provenientes destes NADH passam a ser somente 4 (uma vez
que so obtidos pelo NADH convertido em FADH2 e este s origina 2 ATP, em vez de 3). Assim,
o total de ATP produzido num eucarionte de 36.
O valor de 36 ATP , contudo, um valor terico. Na prtica, verifica-se que os organismos
eucariontes produzem apenas 30 ATP por molcula de glicose. Esta diferena deve-se ao facto
de a clula utilizar o gradiente de protes criado durante o transporte electrnico para outros
propsitos que no apenas a actividade da ATPsintetase.

Ilustrao 78 - As vrias etapas de produo de ATP.

A equao global da oxidao da glucose :

58

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

d. Outras vias metablicas


Uma pessoa de 70 Kg tem cerca de
135000 kcal de energia armazenadas
como gordura, 24000 kcal sob forma
de protenas e 720 kcal de reservas de
glicognio, assim como 80 kcal de
glucose em circulao no sangue.
importante, pois, que o nosso
organismo tenha mecanismos extra
para produzir ATP, partindo de outras
matrias-primas.
Outras vias metablicas que levam
produo de energia metablica so a
oxidao dos cidos gordos (as
reservas de lpidos no corpo humano
perfazem cerca de 85% do total de
energia disponvel) e o catabolismo de
protenas.
Ilustrao 79 - As vrias vias que conduzem produo de ATP.

i.

Oxidao de cidos gordos

Os triglicridos podem ser degradados e dar origem a 3 cidos gordos, que entram no ciclo de
oxidao dos cidos gordos, e a uma molcula de glicerol, que se torna um substrato da
gliclise. As enzimas responsveis pela quebra das ligaes dos cidos gordos so as lipases.
Para poderem entrar no ciclo de oxidao os cidos gordos livres tm que ser activados, isto ,
tm que ser convertidos em acil-CoA gordo e transportados para as mitocndrias, onde se vai
dar todo o processo de extraco de energia. A activao dos cidos gordos d-se no
citoplasma, pela enzima acil-CoA gordo sintetase e com gasto de 2 ATP, e o seu transporte
est dependente da bomba de carnitina, onde o grupo acil-CoA substitudo por acil-carnitina
para poder entrar na mitocndria. Uma vez dentro do organelo a acil-carnitina volta a ser
convertida em acil-CoA. A enzima acilcarnitina transferase I, enzima responsvel pela
substituio do grupo acil-CoA do cido gordo, pode ser inactivada por malonil-CoA. Este
processo impede o transporte de cidos gordos para a mitocndria quando estes se
encontram a ser sintetizados.

Ilustrao 80 - Processo de activao de um cido gordo.

59

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


A oxidao de cidos gordos (activados) ocorre
no interior das mitocndrias e envolve trs
etapas:
1 Etapa -oxidao: uma cadeia de
cidos gordos oxidada dando origem a
resduos de acetil-CoA;
2 Etapa acetil-CoA entram no ciclo de
Krebs e so oxidadas a CO2;
3 Etapa os electres provenientes das
oxidaes anteriores entram na cadeia
respiratria e permitem a sntese de ATP.
Ilustrao 81 - Bomba de carnitina.

A -oxidao um ciclo em espiral e engloba 4 reaces:


Reaco 1, oxidao remoo de H dos carbonos e (primeiros dois carbonos
ligados a hidrognios), formao de uma ligao dupla C=C em trans e reduo de FAD
a FADH2;
Reaco 2, hidratao adio de H2O ligao dupla acabada de formar, processo
catalisado pela enzima enoil-CoA hidratase. Ao carbono adicionado um H e ao
carbono adicionado um grupo OH, formando um grupo hidroxilo (COH).
A enzima enoil-CoA hidratase s actua em ligaes duplas do tipo trans.
Consequentemente, cidos gordos insaturados, que contm ligaes duplas do tipo
cis, requerem a aco um outra enzima uma isomerase, que converte as ligaes cis
em trans;
Reaco 3, segunda oxidao oxidao do grupo hidroxilo, formao de um grupo
cetona no carbono e reduo de NAD+ a NADH;
Reaco 4, clivagem a ligao entre C e C clivada dando origem a uma molcula
de acetil-CoA e a um acil-CoA gordo com menos dois carbonos que entra de novo no
ciclo de -oxidao.

60

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 82 - -oxidao de um cido gordo.

A oxidao de cidos gordos o processo mais rentvel para a obteno de energia


metablica. O nmero de carbonos de um cido gordo determina o nmero de oxidaes
necessrias e o nmero de acetil-CoA formadas, determinando consequentemente a
quantidade de ATP que pode ser sintetizada. Deste modo, por cada cido gordo com n
carbonos (n par) tem-se:
Balano energtico final n carbonos
N de ciclos
Informaes
Activao do cido
gordo
-oxidao
Ciclo de Krebs
(Acetil-CoA)

ATP

-2

(1 ciclo origina 1 NADH e 1


FADH2)
(existem n/2 acetil-CoA)

61

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

ii.

Catabolismo proteico

O catabolismo de protenas nos mamferos d-se principalmente no fgado e envolve:


Quebra das ligaes peptdicas e degradao das protenas em aminacidos;
Deaminao dos aminocidos (remoo de um grupo amina NH2) com formao de
amnia (NH3) e de um cido orgnico;
A amnia entra no ciclo da ureia e produz ureia, que eliminada pelo
organismo;
O
cido
orgnico
formado pode entrar
em diferentes fases da
gliclise ou do ciclo de
Krebs, de acordo com a
natureza do seu grupo
R. Por exemplo, a
deaminao da alanina
d origem a piruvato
mas o aspartato j
origina oxaloacetato.
Devido s diferentes
molculas que podem
resultar do catabolismo
das protenas no
possvel estimar a
quantidade de ATP
formado de um modo
geral cada caso um
caso.

VIII.

Ilustrao 83 - Entrada dos diversos aminocidos no Ciclo de Krebs.

Fotossntese

Fotossntese o processo atravs do qual alguns seres vivos produzem matria orgnica a
partir de matria mineral utilizando energia luminosa (armazenada, posteriormente, nas
ligaes qumicas da matria produzida). Os seres que realizam este processo chamam-se
fotoautotrficos e neles esto includas as plantas, as algas e algumas bactrias. A equao
que traduz o processo :

A fotossntese d-se ao nvel dos cloroplastos. O prolongamento da sua membrana forma


tilacides onde se encontram os pigmentos fotossintticos, responsveis pela absoro da luz,
e a cujo conjunto se d o nome de grana. Estas estruturas esto inseridas no estroma, uma
matriz fluida.

62

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 84 A maioria dos cloroplastos encontra-se nas folhas das plantas, existindo, contudo, um pouco por
todas as zonas verdes da mesma.

Existem diversos pigmentos fotossintticos, que apresentam diversas cores e se encontram em


diferentes seres vivos:
Tipo de pigmento
Clorofilas

Caratenides
Ficobilinas

Cor

Distribuio
Plantas, algas, algumas bactrias
Plantas, algas verdes
Algas castanhas, diatomcia
Algas vermelhas
Algas e plantas
Algas castanhas, diatomcias

A
B
Verde
C
D
Carotenos
Laranja
Xantofilas
Amarela
Ficoeritrina Vermelha
Algas vermelhas, algumas bactrias
Ficocianina
Azul

Os dois grandes grupos de pigmentos fotossintticos que absorvem energia luminosa,


elevando electres para nveis de energia mais altos (o que aumenta a energia potencial), so
as clorofilas e os carotenides. Cada um destes pigmentos absorve preferencialmente uma
gama de radiaes: as clorofilas a e b absorvem principalmente radiaes correspondentes s
faixas azul-violeta e vermelho-alaranjado (apresentando assim cor verde), enquanto os
carotenides se restringem faixa azul-violeta. No entanto, apenas a clorofila a participa
directamente nas reaces luminosas.
Todos os outros pigmentos apenas adicionam energia clorofila ou dissipam energia que foi
absorvida em excesso.

63

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 85 - Clorofila a.

Note-se que os fotes azuis, mais energticos, excitam os electres para estados de energia
mais elevados que no caso dos fotes vermelhos.
Em 1930, Van Niel, estudando o comportamento de bactrias sulfurosas capazes de realizar a
fotossntese, concluiu que o oxignio libertado neste processo provinha da gua e no do
dixido de carbono. Marcou a gua com oxignio O18 e verificou que este era libertado na
fotossntese e no integrava os compostos orgnicos formandos. Mais tarde, na experincia de
Calvin, atravs da marcao do dixido de carbono com carbono radioactivo comprovou-se
que as substncias formadas, de carcter radioactivo, derivavam do CO2 fornecido.
Atravs de uma experincia realizada em 1951, Gaffron provou que a luz era necessria para
iniciar o processo fotossinttico, o qual poderia depois continuar durante alguns segundos
mesmo na sua ausncia. A fotossntese compreende assim duas fases sucessivas:
Fase fotoqumica, ou fase luminosa/clara dependente da luz. D-se a excitao dos
pigmentos fotossintticos e a fotlise da gua. uma fase exergnica, produzindo-se
ATP, NADPH e O2;
Fase qumica, ou fase escura tambm conhecida como Ciclo de Calvin. Esta fase
depende no da luz mas sim da presena de CO2 e endergnica. A partir de dixido
de carbono e ATP e electres do NADPH, provenientes da fase fotoqumica, produz-se
glicose (C6H12O6).

64

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

a. Fase fotoqumica
A fase fotoqumica ocorre nos tilacides e transforma a energia luminosa captada pelos
pigmentos fotossintticos em energia qumica. Nesta fase intervm dois fotossistemas
conjuntos de pigmentos associados a protenas que se encontram na membrana dos tilacides
e
providenciam
a
energia
necessria para excitar os electres
da clorofila:
Fotossistema
II
(PSII)
absorve comprimentos de
onda correspondentes a
680 nm e participa na
sntese de ATP. Encontramse na face da membrana
dos tilacides que est
virada para o interior do
grana;
Fotossistema
I
(PSI)
absorve comprimentos de
onda correspondentes a
700 nm e participa na
sntese
de
NADPH.
Encontra-se na face da
membrana que est em
contacto com o estroma.

Ilustrao 86 - Fotossistema.

Ilustrao 87 - Tilacides.

Nos fotossistemas os fotes so absorvidos pelos pigmentos antena e a sua energia


canalizada para o centro de reaco, composto por uma clorofila a e por um aceitador

65

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


primrio de electres. A energia captada oxida a clorofila e o electro libertado removido
atravs da reduo do aceitador primrio de electres, podendo ento ser conduzido por dois
caminhos:
Fotofosforilao acclica;
Fotofosforilao cclica.

Ilustrao 88 - Fotofosforilao.

Na fotofosforilao acclica a clorofila a do centro de reaco do PSII oxidada e os electres


libertados vo ser transferidos para outras molculas atravs de sucessivas reaces de
oxidao-reduo, dando incio ao transporte electrnico que permite a sntese de ATP por
quimiosmose. As protenas responsveis por esse transporte so as plastocianinas. Electres
provenientes da fotlise da gua reduzem a clorofila desse sistema, deixando-a apta a
recomear um novo ciclo, e libertado O2 segundo a reaco:
.
Ao longo do transporte electrnico os electres vo perdendo energia e ao chegar ao PSI, j
num baixo nvel energtico, reduzem a Cla+ a existente. Pela incidncia da luz solar, a Cla
oxidada de novo e d-se incio a mais um transporte electrnico que, juntamente com os
protes libertados pela gua, contribui para a reduo de NADP+ a NADPH.

Ilustrao 89 - Fosforilao acclica.

66

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


A fosforilao do ATP d-se por quimiosmose, ou seja, a difuso de ies, neste caso H+,
permite a sntese de ATP aquando da passagem de 2H+ pela enzima ATP Sintetase. A difuso
destes protes garantida pelo gradiente de concentrao existente entre o estroma e o
interior do tilacide, um meio de pH muito mais baixo. Uma vez que na fotlise da gua se
libertam no s e- como tambm H+, este processo ajuda a assegurar a diferena de pH
necessria ao sucesso da fotossntese.
Ao passarem para o estroma um dos H+ utilizado na formao de NADPH enquanto o outro
de novo enviado por transporte activo para o interior do tilacide. A energia necessria a este
transporte provm da energia libertada durante o transporte electrnico de electres no PSII e
durante a fotofosforilao cclica.

Ilustrao 90 - Processo de produo de ATP.

A fotofosforilao cclica s contribui para a sintetizao de ATP. Um electro sai do PSI em


direco zona de transporte activo de H+, voltando depois ao PSI onde recebe energia para
recomear o processo. Durante o seu percurso o e- liberta energia que vai ser utilizada no
transporte activo de H+ que cria o gradiente necessrio sntese de ATP.

b. Fase qumica
A fase qumica tambm conhecida como Ciclo de Calvin, ocorre no estroma dos cloroplastos
e onde se d a produo de acares. Este ciclo engloba 3 fases:
Fase 1, fixao de CO2 3 molculas de CO2 reagem com 3 molculas de RuBP
(ribulose bifosfato), um composto com 5 carbonos e 2 fosfatos, dando origem a um
composto com 6C muito instvel. A enzima que participa nesta reaco a RuBP
carboxilase, ou rubisco. O composto instvel divide-se rapidamente formando 6
molculas de 3-fosfoglicerado, que tm apenas 3C cada;
Fase 2, produo de acares seguidamente, d-se a fosforilao do 3-fosfoglicerado
em 1,3-bifosfoglicerado utilizando-se 6 ATP e a sua reduo em gliceraldedo 3fosfato (PAGL) recorrendo-se a 6 NADPH. Formam-se ento 6 PGAL, dos quais um
abandona o ciclo e mobilizado para a sntese de molculas orgnicas. Os restantes 5
PGAL permanecem no ciclo de Calvin;

67

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Fase 3, regenerao de RuBP 5 gliceraldedo 3-fosfato originam 3 molculas de
RuMP (ribulose monofosfato), um composto com 5C mas apenas 1P. Recorrendo-se a
3 ATP regeneram-se os 3 RuBP que sero utilizados para dar incio a um novo ciclo.

Ilustrao 91 - Ciclo de Calvin.

Quando se fala no ciclo de Calvin consideram-se 3 ciclos como a unidade, pois apenas assim se
permite a formao e regenerao correcta de todos os elementos. O ATP e NADPH utilizados
neste processo provm da fase fotoqumica e o ADP e NADP+ resultantes so reintegrados
nessa fase, onde se regeneram. Durante este processo gasta-se mais ATP do que NADH o que
explica a necessidade da fotofosforilao cclica.

c. Variantes do processo
Tanto a mitocndria como os cloroplastos geram ATP via difuso de ies H+, resultante de
uma concentrao de H+ diferente no interior e exterior dos tilacides. Ambos utilizam uma
cadeia transportadora de electres e um complexo ATP sintetase similar. A diferena surge ao
nvel do combustvel a utilizar no processo.
O processo de fotossntese descrito do tipo C3, que o tipo mais comum e ocorre em
plantas que tendem a ocupar reas onde a intensidade da luz do Sol e a temperatura so

68

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


moderadas, a concentrao de dixido de carbono cerca de 200 partes por milho ou
superior e a concentrao de gua no solo tambm elevada. As plantas que utilizam este tipo
de fotossntese no podem crescer em zonas quentes pois a rubisco incorpora mais oxignio
em RuBP medida que a temperatura aumenta (comea a ocorrer fotorrespirao, com
libertao de CO2 e sem produo de ATP e NADPH).
Os outros tipos de fotossntese so:
Fotossntese C4 ocorre principalmente em gramneas (como a cana-de-acar e o
milho), plantas adaptadas a altas temperaturas. As clulas mesfilas das plantas C4
captam o CO2, com o auxlio da enzima FosfoEnolPiruvato carboxilase (PEP) e formam
cidos com 4 carbonos, como o cido mlico. Estes cidos podem ser descarboxilados
a 3PGA, utilizado ento pela rubisco. Tambm podem ser descarboxilados nas clulas
da bainha vascular, libertando CO2 e aumentando a concentrao deste gs. Esta
grande concentrao de CO2 permite evitar a competio entre CO2 e O2 na rubisco.
Este tipo de fotossntese mais eficiente que C3 pois h um maior aproveitamento de
CO2 e menor perda de gua, graas a uma menor dependncia do controlo da abertura
e fecho dos estomas.
Fotossntese CAM (Metabolismo cido das Crassulceas) ocorre em plantas
suculentas, adaptadas a condies ridas. As plantas CAM abrem os estomas durante
a noite, absorvendo dixido de carbono durante este perodo e reduzindo a perda de
gua por transpirao, e armazenam-no sob a forma de cido mlico. Durante o dia,
com a incidncia de luz solar, o cido mlico entra no Ciclo de Calvin para originar
molculas de glicose.

Ilustrao 92 - Fotossntese C4 e CAM.

69

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

IX.

Replicao do DNA

Durante a diviso celular necessrio copiar o material gentico para que toda a informao
possa ser transferida da clula-me para a clula-filha sem erros. A clula cria cpias do seu
prprio DNA atravs de um processo de replicao semi-conservativa no qual 50% do DNA da
clula-filha pertenceu anteriormente clula-me cria-se uma nova cadeia com base numa
cadeia-molde original.

Ilustrao 93 - Experincia que apoia a teoria de que o DNA se replica de forma semi-conservativa.

Para que ocorra replicao necessrio que o DNA se encontre na forma de cadeia simples.
Existem 3 enzimas responsveis por esta tarefa (helicases, SSB e girases) que, embora no
participem directamente no processo de replicao, so auxiliares de replicao.
A replicao tem incio em zonas
especficas, denominadas origem de
replicao (Ori). Nos procariotas existe
apenas uma destas regies, contrariamente
ao que acontece nos eucariotas, que
apresentam vrias origens de replicao. As
regies Ori so ricas em timina e adenina
a natureza desta ligaes mais fraca que
as de guanina e citosina o que facilita a
abertura da cadeia dupla, e so
reconhecidas por um par de enzimas, as
helicases. Cada helicase envolve uma
cadeia simples do DNA e move-se num
Ilustrao 94 - Aco das helicases e das SSB.
dado sentido, quebrando as pontes de
hidrognio entre bases complementares. Essa quebra bidireccional existem duas foras de
replicao para cada origem de replicao, e requer consumo de ATP.
Quando j se encontra em cadeia simples o DNA tem tendncia a voltar a estabelecer uma
cadeia dupla, uma vez que esta a sua forma mais estvel. Para impedir esse processo existe
um conjunto de protenas, as SSB (single-stranded DNA-binding proteins), que actuam
estabilizando a cadeia simples.

70

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


H medida que ocorre a separao do
DNA um outro tipo de enzimas, as
DNA-girases ou topoisomerases, vo
distorcendo a cadeia para que esta
no se enrole em si prpria e dificulte
ou impea o processo de replicao.
Uma vez separada em cadeia simples a
molcula de DNA pode finalmente ser
replicada. Os dNTPs existentes na
clula vo sendo mobilizados e
inseridos sequencialmente na cadeia
(respeitando a complementaridade de
bases) libertando um pirofosfato (dois
fosfatos), por aco das DNA
polimerases. Estas enzimas actuam
Ilustrao 95 - Aco das topoisomerases sobre o DNA.
apenas no sentido 53 e so
incapazes de colocar os primeiros nucletidos, pelo que no do incio replicao. Para isso
existem as RNA polimerases, ou primases.
As RNA polimerases comeam o processo de replicao adicionando alguns NTPs cadeia de
DNA e formam os chamados primers, ou iniciadores, constitudos por cerca de 3 a 10
nucletidos de RNA. Uma vez sintetizados estes pedaos de RNA a DNA polimerase III (pol III)
continua a replicao no sentido 53, agora j utilizando dNTPs.

Ilustrao 96 - Aco das primases e das DNA polimerases.

A replicao d-se em simultneo nas duas cadeias do DNA. No entanto, enquanto na cadeia
3-5 (leading strand) ocorre replicao contnua no sentido da abertura da cadeia, isto , a pol
III actua sem interrupes no sentido 5-3, na cadeia 5-3 (lagging strand) d-se replicao
descontnua. Como a polimerase s actua no sentido 5-3 e est acoplada a um complexo que
se movimenta na direco da abertura da cadeia dupla, o nico modo de fazer com que a
enzima v nessa direco sintetizar a lagging strand por partes. Os fragmentos descontnuos
so chamados fragmentos de Okasaki e esto associados, cada um, a um novo primer.
Quando a polimerase chega ao final de um destes fragmentos e encontra o fragmento
anterior, dissocia-se da cadeia e a replicao desse pedao termina.

71

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


medida que ocorre a
replicao, a polimerase I
(pol I) percorre as cadeias
formadas em busca de
erros
de
sntese,
corrigindo-os,
e
de
primers, substituindo-os
pelos nucletidos de DNA
correctos. Tem, por isso,
actividade de exonuclease
hidrolisa DNA ou RNA
nos sentidos 5-3 ou 3-5,
para alm de actividade
de polimerase adiciona
Ilustrao 97 - Replicao do DNA.
novos nucletidos.
Tambm as DNA polimerases III actuam como exonucleases. No entanto, enquanto as DNA
polimerases I so capazes de
reconhecer e corrigir erros de
insero de nucletidos em
qualquer ponto da cadeia e em
qualquer sentido, as pol III apenas
detectam erros nos ltimos
nucletidos
adicionados

correco in loco, e no sentido 53.

Ilustrao 98 - Configurao da DNA polimerase III consoante a sua


funo.

Na tabela seguinte resumem-se as diferenas entre as diferentes polimerases:


Polimerase
I
II
III

Polimerizao
(53)
Sim
Sim
Sim

Exonuclease
(35)
Sim
Sim
Sim

Exonuclease
(53)
Sim
No
No

N de
Cpias
400
?
10-20

Note-se a importncia da aco, principalmente, da polimerase I, cujas correces do DNA


permitem reduzir a taxa de erros do DNA para
, enquanto que, sem a sua aco, a
taxa de erro seria de
.
Como a pol I no consegue estabelecer a ligao entre os nucletidos que substitui e os que se
encontram nas extremidades dos fragmentos de Okazaki, formam-se lacunas entre o grupo
fosfato de um nucletido e o carbono 3' do outro. Essas falhas so posteriormente corrigidas
pelas DNA ligases atravs do estabelecimento de uma ligao covalente.

72

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Como as DNA polimerases
apenas estendem os primers
na
direco
5-3
so
incapazes de copiar a
extremidade 5 (onde ocorre
replicao descontnua) de
cromossomas lineares, pelo
que se torna necessria a
interveno de mecanismos
especializados nesta tarefa.
Existem ento projeces de
nucletidos na extremidade
3, os chamados telmeros,
que no so mais do que
repetidas de
Ilustrao 99 - Na extremidade 3' do DNA no h local de colocao de um sequncias
primer, o que origina problemas na replicao descontnua do DNA nessa nucletidos nos terminais dos
extremidade.
cromossomas.
Estas
sequncias so replicadas custa de enzimas, as telomerases, que catalisam a sntese dos
telmeros mesmo na ausncia da DNA polimerase.
As telomerases so transcriptases reversas, ou seja, sintetizam DNA a partir de um molde de
RNA, e cada telomerase tem um molde complementar da sequncia do telmero. As
telomerases ligam-se ento ao telmero e prolongam-no, sintetizando uma cadeia simples de
DNA a partir do RNA complementar. Findo este processo, a telomerase desconecta-se e a
replicao de mais uma poro da cadeia de DNA pode dar-se por replicao descontnua
convencional. Forma-se um novo telmero que pode ser prolongado de novo.

Ilustrao 100 - Aco das telomerases.

73

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


A maioria das clulas somticas no tem nveis de telomerases suficientemente altos para
manter o comprimento dos seus telmeros por um nmero indefinido de divises celulares.
Deste modo, medida que a clula envelhece verifica-se o desaparecimento progressivo dos
telmeros e o encurtamento dos cromossomas, o que pode levar morte ou senescncia
(envelhecimento) celular.
Algumas patologias humanas, como o envelhecimento precoce, tm vindo a ser associadas a
mutaes nas telomerases. Por outro lado, verifica-se que clulas cancergenas apresentam
nveis anormalmente altos destas enzimas, o que lhes permite dividirem-se indefinidamente.
O problema da existncia e replicao dos telmeros no se pe nos organismos procariotas
pois estes tm um cromossoma circular. Neste caso, no existe nenhuma ponta solta e,
portanto, todo o DNA replicado sem problemas.
importante referir que a replicao do DNA mitocondrial feita por enzimas especficas e
que as enzimas mencionadas anteriormente, nomeadamente as polimerases, so responsveis
pelo processo de replicao em E.coli. Nos mamferos intervm outros complexos, como
exemplificado na imagem seguinte:

Ilustrao 101 - Enzimas intervenientes na replicao do DNA em E. coli e em mamferos.

Na seguinte tabela encontram-se algumas das enzimas que participam na replicao do DNA
em mamferos:
Capacidade de
DNA Polimerase
Localizao
Funo
Proofreading (reviso)
Tem actividade da RNA
primase inicia a replicao
do DNA

Ncleo

Replicao do DNA

No

Ncleo

Reparao do DNA
Replicao do DNA
mitocondrial

No

Mitocndria

Sim

Substitui a pol para continuar


a replicao

Ncleo

Replicao do DNA

Sim

Similar a pol , existe em


leveduras

Ncleo

Replicao do DNA

Sim

Ncleo

Reparao do DNA

74

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

X.

Reparao do DNA

Alteraes no DNA so de grande importncia visto esta molcula guardar uma cpia
permanente do genoma da clula. Se uma alterao no for corrigida antes da replicao
ento vai ser perpetuada para todas as geraes seguintes.
Apesar da replicao ser muito fivel podem verificar-se algumas modificaes do DNA no final
deste processo devido insero de bases incorrectas. E no s nesta fase da vida da clula,
mas em todas as fases do ciclo celular, podem ocorrer alteraes na sequncia e estrutura do
DNA, espontneas ou induzidas por diversos factores externos como qumicos e radiao.
Alteraes ao nvel da molcula de DNA podem impedir os processos de replicao e
transcrio, bem como aumentar a frequncia de mutaes. Para manter a integridade dos
seus genomas as clulas desenvolveram mecanismos de reparao que actuam no sentido de
reverter reaces qumicas responsveis pela alterao do DNA e/ou substituir bases
incorrectas ou danificadas.
As alteraes espontneas dos nucletidos manifestam-se das seguintes formas:
Deaminao remoo de um grupo amina de uma base;
Depurinao remoo da base purina de um nucletido);
Metilao adio de grupos metilo; embora seja um processo normal nos
nucletidos, caso se d de forma incontrolada prejudicial.
A deaminao ocorre principalmente nos nucletidos de citosina e adenina e o resultado da
substituio, na base, de um grupo amina (NH2) por um tomo de oxignio. A deaminao da
adenina d origem a hipoxantina, uma base modificada, e da alterao da citosina resulta
uracilo pelo que esta base, considerada exclusiva do RNA, pode surgir em DNA danificado.
Durante a replicao de uma regio que sofreu deaminao vai formar-se uma cadeia mutada
e outra cadeia intacta pois apenas uma das cadeias originais est modificada. Na deaminao
da citosina, por exemplo, um dos moldes ter um nucletido de uracilo pelo que a cadeia
complementar ir apresentar uma adenina no local de guanina ocorre uma mutao. A outra
cadeia molde, como tem um nucletido de guanina que complementar da citosina, vai
manter-se inalterada.

Ilustrao 102 - Deaminao de uma citosina.

Na depurinao h remoo total da base de um nucletido, por clivagem da ligao entre


essa base e a desoxirribose. No local do nucletido fica apenas a base associada ao grupo
fosfato e designa-se esse local por local AP local apurnico ou apirimidnico.
semelhana do que acontece na deaminao, a replicao de uma regio danificada vai dar
origem a uma cadeia mutada e outra cadeia intacta. S que neste caso, a cadeia mutada tem
um nucletido a menos no local em que ocorre depurinao pois no apresenta nenhuma base
que permita a ligao de uma base complementar. Esta mutao pode ter consequncias
gravssimas para a clula, visto que se ocorrer numa regio codificante pode modificar
completamente a protena resultante.

75

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 103 - Depurinao de uma adenina.

Das alteraes induzidas por radiao ou qumicos, destacam-se a formao de dmeros de


timina e de aductos de DNA, e a alquilao.
A exposio radiao UV induz a formao de ligaes entre timinas de nucletidos
adjacentes, dando origem a um dmero de
timina. As duas bases de timina ligam-se
entre si, formando um anel de ciclobutano, e
deixam de estabelecer ligaes com as
adeninas da cadeia complementar (ligao TT mais forte que a ligao A-T).
Consequentemente h distoro da estrutura
das cadeias de DNA, o que pode bloquear a
transcrio ou a replicao.
A reparao directa dos dmeros de timina
d-se atravs de fotorreactivao. Nesta
reaco, inversa dimerizao, utilizada
energia da luz visvel para quebrar o anel de
ciclobutano e permitir que as timinas se
liguem de novo s adeninas complementares.
Apesar de as bactrias utilizarem este
processo
muito
frequentemente,
os Ilustrao 104 - Fotoreactivao para corrigir um dmero
mamferos e, nomeadamente, os seres
de timina.
humanos, no so capazes de corrigir os dmeros de timina directamente, estando por isso
mais sujeitos aos efeitos novios da radiao UV.
Muitos agentes qumicos so agentes alquilantes, isto , so agentes reactivos que transferem
grupos metilo ou etilo para bases do DNA, modificando-as quimicamente. A alquilao da
guanina em particular d origem a O6-metilguanina, uma base complementar da timina em vez
da citosina, pelo que a cadeia complementar desta molcula vir alterada. Este tipo de
alterao do DNA pode ser reparada directamente por aco de enzimas (O6 metilguanina
metiltransferase) que transferem o grupo metilo, adicionado posio O6 da guanina, para um
resduo de cistena presente no stio activo da enzima.

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Ilustrao 105 - AAlquilao da guanina.

Ilustrao 106 - Reparao de uma alquilao de uma guanina.

Muitos agentes carcinognicos danificam o DNA pela introduo de grandes grupos aos
nucletidos, os aductos de DNA, que alteram a configurao normal das cadeias e, por vezes,
at da prpria molcula de DNA.

Ilustrao 107 - Introduo de aductos de DNA numa guanina.

Nem todas as alteraes do DNA podem ser reparadas directamente, como acontece com os
dmeros de timina e a alquilao, pelo que as clulas tm mecanismos que permitem reparar
vrios tipos de danos. Os mecanismos mais importantes, tanto em procariotas como em
eucariotas, so os mtodos de reparao por exciso exciso de base, exciso de nucletido
e mismatch repair. Estes mecanismos reconhecem a zona danificada e eliminam a base ou
nucletido alterados permitindo depois a sntese de uma nova cadeia de DNA a partir da
cadeia complementar intacta.
A reparao por exciso de base permite corrigir problemas em bases individuais, quer estas
tenham sido danificadas por oxidao ou ionizao quer sejam o resultado de deaminao ou
depurinao. Neste processo de reparao a base danificada reconhecida e, por aco de

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enzimas especficas, clivada a ligao entre a pentose e a base, formando-se um local AP.
Este local posteriormente reconhecido por uma AP endonuclease que quebra a ligao
fosfodiester entre o fosfato do local AP e a pentose do nucletido adjacente, deixando um nick
(interrupo) na cadeia. O que resta do nucletido a ser reparado ento removido e, por
aco da DNA polimerase e DNA ligase, adicionada uma nova base.

Ilustrao 108 - Reparao por exciso de base.

A reparao por exciso de


nucletidos corrige dmeros
de timina e aductos de ADN
atravs da remoo de uma
poro da cadeia de DNA que
contm a leso. Em E.coli
existe um sistema, o sistema
Uvr, constitudo por 3
protenas (UvrA, UvrB e
UvrC) que actua neste
sentido.
A
zona
danificada

reconhecida
por
uma
protena (UvrA) e outras
protenas, as nucleases,
clivam ligaes fosdiesters na
extremidade 3 e 5 da leso
(UvrB
e
UvrC,
respectivamente). Por aco
de helicases, so quebradas
as pontes hidrognio entre as
bases complementares e
removido um oligonucletido
(com cerca de 12 a 13 bases)
que contm a regio
Ilustrao 109 - Reparao por exciso de nucletidos.
alterada. DNA polimerase I e
ligases actuam, de seguida, no sentido de sintetizar correctamente o pedao da cadeia
excisado.

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O sistema mismatch repair reconhece e corrige bases no complementares adicionadas nova


cadeia de DNA durante o decorrer da replicao. Em E. coli esse sistema, designado sistema
MUT, formado por um conjunto de 3 protenas (MutS, MutL e MutH) que reconhecem a
cadeia-filha por esta ainda no estar metilada (a metilao ocorre nos resduos de adenina de
sequncias GATC).
MutS reconhece a base alterada e forma um complexo com as restantes protenas. De seguida,
a MutH, uma endonuclease, cliva a nova cadeia (ainda no metilada) no local da sequncia
GATC e a MutS e MutL, juntamente com uma helicase e uma endonuclease, removem a cadeia
de DNA entre o local de clivagem e a base mal colocada. Posteriormente, polimerases e ligases
procedem sntese do DNA em falta.

Ilustrao 110 - Sistema mismatch repair.

XI.

Recombinao do DNA

O genoma de um organismo tem uma enorme plasticidade, facto para o qual contribui a
recombinao gentica troca de material gentico. Podem distinguir-se 2 tipos de
recombinao:
Recombinao homloga entre sequncias de DNA semelhantes homlogas;
Site-specific requer homologia localizada e pode ser considerada um
subgrupo da recombinao homloga;
Recombinao no homloga ou heterloga entre sequncias de DNA no
homlogas;

79

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Transposo elementos genticos (transposes) movem-se ao longo do
genoma, sendo inseridos e/ou retirados de diferentes locais.
Do ponto de vista biolgico, a recombinao tem diversos papis importantes, dos quais
podemos destacar:
Gerar novas combinaes de genes/alelos. Ex: crossing-over da meiose;
Gerar novos genes. Ex: rearranjo de imunoglobulinas;
Integrar elementos de DNA especficos. Ex: vrus;
Reparar DNA.
Relativamente utilidade prtica deste fenmeno, em biologia molecular utiliza-se
recombinao para, por exemplo, mapear genes em cromossomas e criar clulas e organismos
transgnicos.

Ilustrao 111 - Recombinao gentica atravs de vrus.

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A recombinao homloga requer extensa homologia gentica, ou seja, necessrio que haja
uma extensa complementaridade entre os nucletidos de 2 cadeias de cromossomas
diferentes, ou mesmo de zonas do mesmo cromossoma que estejam repetidas ou invertidas.
Usualmente a recombinao envolve a quebra de duas molculas de DNA na mesma regio,
onde as sequncias so muito semelhantes, e a juno de um DNA ao outro, o que resulta num
processo de "cross-over".
Neste tipo de recombinao o local de troca pode estar localizado em qualquer zona da regio
homloga e no implica a alterao do arranjo dos genes nos cromossomas. O processo
mediado por enzimas e pode dar-se segundo dois modelos:
Recombinao por copy choice d-se durante a replicao, quando duas cadeias de
DNA prximas e homlogas esto a ser replicadas simultaneamente e, a dada altura,
trocam de cadeia molde;
Recombinao por breakage and rejoining (que ocorre com a aco de enzimas) no
se d durante o decorrer da replicao e requer que as duas cadeias de DNA
homlogas sofram um nick no mesmo local. A partir desses nicks, uma das cadeias de
cada molcula parcialmente separada e emparelha com a cadeia da outra molcula
que lhe complementar.
Em ambos os casos, h o cruzamento de duas cadeias de DNA e a formao de
heteroduplexes, regies da molcula de DNA formadas por cadeias de origens diferentes.
zona de cruzamento d-se o nome de juno de Holliday e da sua resoluo pode resultar uma
recombinao com ou sem alterao de genes.

Ilustrao 112 - Modelos da recombinao homloga.

Aps a formao da juno de Holliday, que pode migrar ao longo da cadeia, as duas
molculas rodam em torno do seu ponto de ligao. Dependo do sentido dessa rotao, as
cadeias cruzam em direces diferentes e o produto final deste processo pode resultar em
heteroduplexes recombinantes ou no recombinantes.
Para separar as duas molculas ento necessrio cortar as cadeias cruzadas ao nvel da
juno. Se o corte for horizontal ento, aps a ligao das cadeias obtm-se molculas iguais
s originais heteroduplexes no-recombinantes. Por outro lado, se o corte for vertical
verifica-se a recombinao propriamente dita, pois s neste caso h alterao na composio
da cadeia as molculas resultantes so heteroduplexes recombinantes e, caso a regio
recombinada seja codificante, o gene pode deixar de ser transcrito ou a sua traduo pode
resultar numa protena completamente diferente da protena original.

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Ilustrao 113 - Juno de Holliday e recombinao gentica.

No processo de recombinao
homloga intervm enzimas e
protenas especficas, como as DNA
polimerase e ligase e protenas SSB.
Em E.coli, existem dois sistemas
principais que tm um papel
fundamental na regulao dos
mecanismos de recombinao
sistema Rec e sistema Ruv.
O Sistema Rec constitudo por 4
protenas RecA e complexo
RecBCD, e est envolvido nos
passos centrais da recombinao
homloga. O complexo RecBCD
liga-se ao DNA de cadeia dupla
(dsDNA)
e
processa-o,
transformando-o
em
cadeias
simples (ssDNA) prontas a serem
utilizadas pela RecA. A protena
Ilustrao 114 - Aco do complexo RecBCD: RecBCD makes ss
RecA tem trs locais especficos de
nicks where RecA binds; Heterotrimeric product of recB, recC and
recD SOS genes; Complex binds to free end of dsDNA and unwind ligao ao DNA, pelo que comea
it in ATP dependent reaction; Cleavage of both DNA strands; por se ligar a ssDNA, formando um
After Chi sequence (GCTGGTGG), stops cleaving 3 end.
filamento de DNA-protenas, e, de
seguida, associa-se tambm a dsDNA. Segue-se o alinhamento das cadeias homlogas e a
RecA, custa de ATP, catalisa o emparelhamento da cadeia simples com a sua cadeia
complementar proveniente do dsDNA, dando origem a um heteroduplex.

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Ilustrao 115 - Aco da protena RecA.

O Sistema Ruv responsvel pela resoluo das junes de Holliday. A protena RuvA
reconhece a juno e recruta a protena RuvB. O complexo RuvAB, que tem actividade de
helicase, catalisa a migrao da juno, promovendo a variao da extenso do heteroduplex,
e RuvC, que tem actividade de endonuclease, cliva as cadeias cruzadas. DNA ligases actuam no
sentido de ligar as cadeias das molculas recombinantes, e termina o processo recombinao.
A recombinao site-specific apenas requer homologia de pequenas regies especficas e
permite a introduo ou perda de informao gentica. A grande variedade de
imunoglobulinas do organismo humano deve-se a fenmenos de recombinao site-specific
durante a maturao de linfcitos B e a construo de organismos geneticamente modificados
(OMG) pode ser feita utilizando este processo.
Na criao de OGMs e tambm em processos de recombinao, por exemplo, entre
cromossomas de bactrias e plasmdeos, o que acontece que existem genes flanqueados por
informao gentica homloga a uma regio do DNA. Por recombinao, essa informao
inserida na molcula. Por outro lado, recombinao entre sequncias homlogas de uma
mesma molcula pode levar perda da regio entre essas sequncias.

83

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Os eventos recombinantes podem ser classificados em dois grupos:
Recombinao intermolecular entre molculas diferentes;
Cross-over simples forma-se uma nica juno de Holliday;
Cross-over duplo formam-se duas junes de Holliday;
Recombinao intramolecular entre regies da mesma molcula;
Repeties directas as sequncias homlogas so exactamente iguais.
Implica a perda irreversvel de DNA;
Repeties invertidas as sequncias homlogas esto invertidas. Pode
resultar na perda de funcionalidade de um gene mas um processo reversvel.
Este tipo de recombinao muito utilizada por bactrias patognicas que, ao
inverterem as suas sequncias, baralham o sistema imunitrio do hospedeiro.

Ilustrao 116 - Tipos de recombinao.

A produo de flagelina, um agente virulento, por parte das salmonelas um bom exemplo de
recombinao intramolecular com repeties invertidas. As bactrias podem produzir,
alternadamente, flagelina H1 ou H2 conforme a orientao de uma das suas sequncias, o
chamado segmento H. Este segmento flanqueado por duas sequncias invertidas, podendo
sofrer inverso por recombinao, e contm o promotor do gene da flagelina H2 e de um
repressor do gene da flagelina H1. Quando o segmento H se encontra numa orientao que
permite a sua transcrio, produzida H2 e silenciado o gene da H1. Quando ocorre
recombinao, o gene de H2 deixa de ser transcrito e passa a ser produzida H1.
A alterao do tipo de flagelina produzida pela salmonela permite-lhe resistir mais tempo num
organismo pois assim que o sistema imunitrio do hospedeiro j est preparado para
combater um tipo de virulncia ela altera o tipo de flagelina produzida, desencadeando uma
nova resposta imunitria.

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Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 117 - Produo de flagelina pelas salmonelas.

A recombinao no homloga no requer qualquer semelhana entre sequncias de DNA,


estando antes associada ao movimento de sequncias transposes, ao longo do genoma. Os
transposes so encontrados tanto em procariotas como em eucariotas e, em algumas
leveduras e protozorios, fazem parte de mecanismos de regulao de genes.
As unidades fundamentais dos transposes so as sequncias de insero (IS), sequncias de
800 a 2000 nucletidos que contm um gene que codifica a protena transposase flanqueado
por curtas sequncias invertidas repeties invertidas (IR).

Ilustrao 118 Sequncia de insero.

A transposase responsvel por encontrar sequncias especficas de DNA e cortar a molcula


nessa zona, separando a dupla-cadeia e deixando as sequncias complementares por
emparelhar. Ao nvel dos transposes, esta protena cliva as extremidades da sequncia de
insero e junta a IS cadeia previamente cortada. As falhas no DNA resultantes deste
processo so reparadas por DNA polimerase e ligase.

Ilustrao 119 - Insero de um transposo.

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Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Destacam-se 2 tipos de mecanismos de transposio:
Transposio mediada por DNA;
Transposio conservativa o transposo move-se do stio dador para o local
alvo;
Transposio replicativa uma cpia do transposo inserida no local alvo,
mantendo-se o elemento original. A frequncia desta transposio de cerca
de 1 em 104 a 107 divises celulares.
Transposio mediada por RNA feita uma cpia de RNA do retrotransposo que
depois traduzida em DNA e inserida no genoma. Este tipo de transposio ocorre, por
exemplo, nos retrovrus como o HIV.

Ilustrao 120 - Transposio conservativa.

Ilustrao 121 - Transposio replicativa.

Ilustrao 122 - Retrotransposio.

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A insero de transposes em locais no especficos do genoma pode interferir com a
expresso de genes, o que pode ter consequncias negativas para a clula. No entanto, em
algumas leveduras e protozorios, transposes fazem parte de mecanismos de regulao
gentica.
Alguns transposes mais complexos, como os transposes compostos, so formados por
genes flanqueados por sequncias de insero. Esses genes, por exemplo de resistncia a antibitico, podem ser copiados para vrios locais do genoma e contribuir para uma maior
resistncia por parte desse organismo.

Ilustrao 123 - Transposo composto.

XII.

Transcrio de DNA

Transcrio o processo atravs da qual se sintetiza RNA a partir da informao contida nos
genes da molcula de DNA. Este processo apresenta algumas diferenas nos organismos
procariotas e eucariotas e est sujeito a mecanismos de regulao, verificando-se que os genes
so transcritos de acordo com as necessidades da clula.
O genoma de procariontes constitudo maioritariamente por regies codificantes, isto ,
regies que contm genes e codificam a sntese de RNA. J nos eucariotas, a maior parte do
seu genoma est sob a forma de regies intergnicas regies no codificantes (cerca de 98%
do genoma humano so regies no codificantes). Sabe-se actualmente que estas regies,
anteriormente sem qualquer funo atribuda e designadas por junk-DNA, tm um papel
importante na transcrio.
Os genes contm informao para a sntese de vrios tipos de RNA, cujo processo de
transcrio o mesmo:
RNA mensageiro, mRNA molde utilizado pelos ribossomas para a sntese de
protenas;
RNA de transferncia, tRNA intermedirio entre mRNA e os aminocidos durante a
sntese proteica ao nvel dos ribossomas;
RNA ribossomal, rRNA um dos constituintes dos ribossomas.
Um gene apresenta 3 regies:
Regio promotora onde se encontra o promotor, o local onde a RNA polimerase se
liga para iniciar a transcrio essencial ao incio da transcrio mas no transcrito.
Tem sequncias especficas em determinados locais as zonas consenso, que so
reconhecidas pela polimerase e que tm que ser semelhantes para todos os genes pois
nos procariotas s existe uma RNA polimerase (apesar de se verificar a existncia de
vrios factores que direccionam a transcrio para locais diferentes, de acordo com
as condies a que a clula sujeita).

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Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Nos procariotas existem duas zonas consenso de 6 nucletidos cada uma, uma na
regio -10 e outra na regio -35, respectivamente 10 e 35 nucletidos antes do incio
da transcrio propriamente dita, em +1. A regio -10, tambm designada caixa TATA,
rica em adenina e timina e, devido natureza mais fraca das suas ligaes, mais
sensvel aco das helicases pelo que a cadeia dupla se abre preferencialmente nesta
zona.
Os promotores dos eucariotas so maiores e mais complexos. A sua caixa TATA
encontra-se na posio -25 e outras zonas consenso localizam-se em -50, -75 e -100.
Parte estrutural zona transcrita. Encontra-se apenas numa das cadeias e a sua regio
complementar, no codificante, denomina-se zona nonsense.
Zona de terminao onde a transcrio terminada.

Ilustrao 124 - Promotor de um procariota.

Ilustrao 125 - Promotor de um eucariota.

Na transcrio intervm uma enzima especfica, a RNA polimerase. Esta enzima transcreve a
informao contida no DNA para RNA e, semelhana das DNA polimerases, catalisa o
crescimento de cadeias de RNA no sentido 5-3. No entanto, no necessita de um primer para
iniciar o processo. A RNA polimerase, assim como o processo de transcrio de procariotas e
eucariotas apresenta algumas diferenas:
A RNA polimerase de E. coli um complexo enzimtico formado por 5 subunidades
(duas , , , e ). O factor essencial para o reconhecimento da regio
promotora do gene e para a correcta ligao da RNA polimerase ao DNA mas no tem
actividade cataltica, libertando-se da
enzima quando j se encontram
sintetizados alguns nucletidos de RNA;
Nos eucariotas existe uma polimerase
diferente para cada tipo de RNA
(mensageiro,
de
transferncia
e
ribossomal) mas todas so complexos
formados por 12 a 17 subunidades e
partilham algumas caractersticas, tanto
entre si como com a polimerase dos
Ilustrao 126 - RNA polimerase procaritica.
procariotas.
RNA
polimerase
II
II
III

Tipo de RNA sintetizado

Genes nucleares

mRNA
miRNA
tRNA
rRNA
5.8S, 18S,

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28S
5S
snRNA e
scRNA
Genes
mitocondriais
Genes dos
cloroplastos

III
II e III
Mitocondrial
Cloroplastos

Semelhantes RNA
polimerase bacteriana

O processo de transcrio pode ser dividido em 3 fases:


Iniciao RNA polimerase liga-se a uma zona no especfica do DNA e migra ao longo
da cadeia at encontrar o promotor. A liga-se especificamente s zonas -35 e -10 e, ao
nvel da caixa TATA, helicases e girases promovem a abertura da cadeia dupla de DNA
ao longo de 12-14 nucletidos. A transcrio iniciada na posio +1 pela adio de 2
NTPs cadeia molde e, aps a polimerizao de cerca de 10 nucletidos no sentido 53, o factor libertado e d-se incio prxima fase.
Nota: os nucletidos livres encontram-se na forma de trifosfatos NTPs, pelo que
durante a sua polimerizao so libertadas molculas de pirofosfato (dois fosfato);
Elongao o crescimento da cadeia de RNA continua. A polimerase mantm-se ligada
ao DNA e vai desenrolando a cadeia dupla sua frente e hibridizando a cadeia que
deixa para trs, ficando apenas uma regio com cerca de 15 pares de nucletidos na
forma de cadeias simples. A transcrio continua at que a polimerase encontre um
sinal de terminao;
Terminao quando a RNA polimerase encontra a zona de terminao dissocia-se do
DNA e o processo de transcrio termina. Existem dois mecanismos diferentes
responsveis pela terminao:
Dependente de factor , independente da sequncia a terminao est
dependente de uma protena, o factor , que se liga a longos segmentos
(cerca de 60 nucletidos) no final da molcula de RNA;
Independente de factor , dependente da sequncia a zona de terminao
formada por duas sequncias invertidas de citosina e guanina, intercaladas por
outras bases e seguidas de nucletidos de adenina. A transcrio das zonas
ricas em CG leva associao das bases complementares e formao de uma
estrutura secundria um gancho de terminao, que destabiliza a ligao da
RNA polimerase ao DNA e leva sua dissociao.
Para alm do seu papel na terminao da transcrio, os ganchos de
terminao desempenham tambm um papel protector: o RNA mensageiro
tem um tempo de vida muito curto, sendo rapidamente digerido por RNAses
no sentido 3-5. A formao de ganchos de terminao nos terminais do
mRNA dificulta a sua digesto por parte dessas enzimas e funciona como uma
forma de proteco, permitindo que o RNA se mantenha ntegro o tempo
suficiente para que ocorra traduo.

89

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 127 - Processo de transcrio dos procariotas.

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Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 128 - Formao de um gancho de terminao.

O processo de transcrio acima descrito diz respeito aos organismos procariotas. Nos
eucariotas a estrutura dos promotores e das RNA polimerases diferente, pelo que vo existir
algumas diferenas nos mecanismos de transcrio.
O reconhecimento do promotor e a ligao da RNA polimerase no esto associados a um
factor mas dependem de diversos factores de transcrio factores gerais, comuns
transcrio de todos os genes, ou especficos para determinados genes. Os factores de
transcrio so, geralmente, protenas que tm uma regio que se liga ao DNA e outra regio
que interage com outras protenas e estimula a transcrio.
Na iniciao da transcrio, a RNA polimerase II associa-se ao promotor, ao mediador e a
outros factores de transcrio, dando origem ao complexo RNA polimerase II/Mediador o
complexo de iniciao. A este complexo podem ligar-se ainda estimuladores (enhancers), que
so sequncias de DNA
que se associam a
factores de transcrio
que regulam a actividade
da RNA polimerase. Os
estimuladores situam-se
em regies intergnicas
que
podem
estar
localizadas em qualquer
ponto dos cromossomas,
sendo a sua ligao
possvel
devido

existncia de loops na
Ilustrao 129 - Factores de transcrio dos eucariotas.
molcula de DNA.
A transcrio iniciada quando se d a fosforilao dos resduos de serina e treonina do CDT
(carboxi terminal domain), uma sequncia de aminocidos que faz parte da RNA polimerase.

91

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Iniciada a transcrio, o complexo de iniciao dissocia-se e o CDT fosforilado permite a ligao
de factores de transcrio que intervm na elongao e no processamento de RNA.

Ilustrao 130 - Transcrio dos eucariotas.

Na terminao da transcrio em eucariotas, a RNA polimerase reconhece uma sequncia de


terminao e libertada cerca de 10-35 nucletidos depois. As sequncias de terminao, por
exemplo AAUAAA, so sempre semelhantes, embora possam no ser exactamente iguais em
todos os genes

a. Regulao da Transcrio
O genoma de um organismo contm milhares de genes que no so todos transcritos em
simultneo. Existem mecanismos de regulao, tanto em procariotas como em eucariotas,
que actuam ao nvel da iniciao ou da elongao no sentido de silenciar ou promover a
transcrio de determinados genes, de acordo com as necessidades da clula.
Em organismos procariotas a regulao d-se principalmente na etapa da iniciao e pode
envolver diversos mecanismos, dos quais iremos estudar dois exemplos: a regulao do
opero da lactose e do opero do triptofano em E.coli.

92

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

i.

Opero da lactose

A lactose pode ser degrada em glicose e galactose,


molculas de onde extrada energia metablica, por
aco de uma enzima especfica, a -galactosidase. Esta e
outras enzimas envolvidas no metabolismo da lactose s
so sintetizadas quando existe lactose disponvel na
clula, evitando assim a sntese de protenas e RNA
desnecessrias, pelo que se diz que h regulao da
transcrio por induo do substrato. Essa induo pode
ser positiva ou negativa.

Ilustrao 131 Degradao da lactose.

Os genes responsveis por esse metabolismo distribuem-se por uma estrutura monocistrnica
e por uma estrutura tricistrnica. O opero da lactose, a estrutura tricistrnica, constitudo
por um promotor, um operador e por 3 genes que so transcritos em conjunto:
Promotor (P) sequncia promotora, local de ligao da polimerase;
Operador (O) sequncia qual se pode ligar uma protena reguladora (LacI), que
impede a transcrio dos genes do opero;
Gene LacZ codifica a -galactosidase, enzima responsvel pela quebra da ligao
glicosdica entre a glucose e a galactose. o gene mais importante, apresentando
maior afinidade na regio RBS, e o facto de estar na extremidade 5 protege o seu
transcrito de mRNA de uma degradao demasiado precoce;
Gene LacY codifica a permease, uma protena de membrana especfica para o
transporte de lactose para o interior das clulas;
Gene LacA codifica a transacetilase, uma protena que modifica a galactose mas que
no essencial ao seu metabolismo. o gene menos importante e, por esse motivo,
est mais sujeito degradao que os restantes genes.
A estrutura monocistrnica consiste em:
Promotor (Pi) promotor do gene LacI;
Gene LacI gene repressor que codifica uma protena reguladora (LacI). Na ausncia
de lactose, LacI liga-se ao operador do opero da lactose e impede a transcrio dos
seus genes.
Quando h lactose disponvel na clula, esta liga-se protena reguladora LacI, alterando a sua
configurao tridimensional. Consequentemente, deixa de existir afinidade entre esta protena
e o operador pelo que os genes do opero podem ser transcritos. So sintetizadas as protenas
LacZ, LacY e LacA e a lactose degradada. Este tipo de regulao diz-se por induo negativa
visto a presena de LacI impedir a transcrio.

93

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular

Ilustrao 132 - Na ausncia de lactose, o opero silenciado pela LacI.

Ilustrao 133 - Na presena de lactose, a protena LacI bloqueada e os genes so transcritos.

Apesar de a lactose ser uma fonte de energia, como a glicose um acar mais simples o seu
metabolismo mais rpido. Como tal, quando existe glucose disponvel na clula esta vai ser
utilizada primeiro e, s quando a glucose se tiver esgotado, que a lactose comea a ser usada
como fonte de energia.
Na presena apenas de um acar, um grfico do crescimento populacional de uma colnia de
bactrias do tipo (1). Mas na presena de dois acares, digamos glucose e lactose, o
crescimento do tipo (2) e diz-se um crescimento diauxico. Em (2) verifica-se que as bactrias
se dividem exponencialmente para depois o seu crescimento estabilizar (a) medida que o
acar mais simples, neste caso a glucose, consumido. Segue-se uma nova etapa de
crescimento e estabilizao (b) quando consumido o acar restante, a lactose. Se
representssemos os nveis de -galactosidade na clula ao longo do tempo obteramos uma
curva do tipo (c).

94

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Ilustrao 134 - (1) Crescimento normal. (2) Crescimento diauxico. (a) Glucose e lactose disponveis; consumo de
glucose. (b) Apenas lactose disponvel; consumo de lactose. (c) Nveis de -galactosidade.

Verifica-se ento que a o opero da lactose reprimido na presena de glucose. Esta


represso catablica pela glucose mediada por um mecanismo de induo positiva
associado aos nveis de AMP cclico (cAMP adenosina monofosfato cclica): cAMP associa-se
a uma protena reguladora, CAP (catabolic activator protein), que se liga a uma sequncia de
DNA perto do promotor do opero da lactose. A CAP actua interagindo com a subunidade da
RNA polimerase e facilita a sua ligao ao promotor, promovendo a transcrio.
Quando os nveis de glucose na clula so baixos h maior produo de cAMP, pelo que
favorecido o metabolismo da lactose. Por outro lado, em condies de elevada disponibilidade
de glucose, a produo de cAMP baixa e o operador da lactose silenciado.

Ilustrao 135 - Na ausncia de glicose h maior produo de cAMP e o opero da lactose activado.

Resumindo, a regulao da transcrio do opero da lactose uma regulao por induo do


substrato:
Induo negativa LacI impede a transcrio. Na presena de lactose LacI
desactivado e a lactose degrada;
Induo positiva CAP promove a transcrio do opero. Na presena de glucose
cAMP no activa o CAP e no h degradao da lactose.

95

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Lactose
Lactose+Glucose
LacI inactivado
LacI inactivado
cAMP-CAP funcional
cAMP-CAP no funcional
Elevada transcrio do opero Baixa transcrio do opero
Em engenharia gentica comum utilizar-se o promotor do opero da lactose (Plac) para
clonar genes de interesse em plasmdeos, pois para iniciar a transcrio basta fornecer lactose
clula. No entanto, em vez de lactose utiliza-se uma molcula sinttica anloga lactose mas
no metabolizvel, IPTG (IsoPropilTrioGalactosdeo), que inibe o repressor LacI mas no
consumida pela clula, o que torna o processo mais rentvel e igualmente eficaz.

ii.

Opero do triptofano

A regulao da transcrio do opero do triptofano pode ser generalizada para os restantes


aminocidos e uma regulao por represso do produto final pois, ao contrrio do opero
da lactose que est sempre silenciado na ausncia do substrato, o opero do triptofano est
sempre activo, sendo reprimido apenas quando este aminocido abunda na clula.
A represso da transcrio requer dois elementos:
Apo-repressor protena que por si s no capaz de se ligar ao operador e inibir a
transcrio. Necessita de um co-repressor para adquirir a sua forma activa;
Co-repressor elemento que se liga ao apo-repressor, activando o complexo repressor
e inibindo a transcrio. Neste caso, o co-repressor o prprio triptofano.
O opero do triptofano uma estrutura pentacistrnica que apresenta regies especficas:
Promotor (P) regio promotora, local de ligao da polimerase;
Operador (O) tal como no opero da lactose, uma sequncia qual se podem ligar
protenas reguladoras que impedem a transcrio dos genes do opero;
Regio R (R) codifica o apo-repressor;
Regio Lder (L) e regio do Atenuador (A) localizadas entre o promotor/operador e
os genes. Participam na regulao da transcrio por um mecanismo diferente do
repressor, o mecanismo de atenuao;
Genes E, D, C, B, A codificam as protenas que intervm na sntese de triptofano.

Ilustrao 136 - Situao de ausncia do triptofano.

96

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Ilustrao 137 - Situao de presena de triptofano.

Para alm da regulao por um complexo repressor existe um outro mecanismo que controla a
transcrio de triptofano. Este mecanismo, associado s regies L e A, de regulao por
atenuao e permite que a transcrio seja inibida mesmo quando a quantidade de triptofano
na clula no suficiente para activar o apo-repressor ou quando este mecanismo no
eficaz.
Se no houve represso ao nvel do operador inicia-se a transcrio das regies L e A. O RNA
resultante pode ser dividido em 4 zonas 1 (L) e 2, 3 e 4 (A), ricas em contedo CG e que
tendem a formar ganchos. Dependo dos ganchos que se formam pode ou no ocorrer
transcrio:
Gancho 2-3, gancho de anti-terminao: este gancho forma-se relativamente longe da
RNA polimerase, no a destabilizando, pelo que a transcrio dos genes continua;
Gancho 3-4, gancho de terminao: a sua formao destabiliza a RNA polimerase e
provoca a sua dissociao do DNA, interrompendo a transcrio.
A quantidade de triptofano disponvel na clula que vai determinar o tipo de gancho que se
forma.

Ilustrao 138 - Ganchos que se podem formar.

Logo aps a transcrio inicia-se a traduo da regio L no chamado pptido Lder. Este
pptido formado por 14 aminocidos e na posio 11 e 12 requer a introduo do triptofano.
De acordo com a quantidade de Trp disponvel duas situaes so possveis:

97

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Se a concentrao de Trp
elevada a traduo rpida, o
que apenas permite a
formao de um gancho 3-4. A
transcrio pra e no
sintetizado Trp, que existe em
abundncia;
Se existe carncia de Trp a
traduo mais demorada e
as zonas 2, 3 e 4 ficam livres
para se associarem entre si.
Como o gancho 2-3 mais
forte
forma-se
preferencialmente, implicando
a continuao da transcrio e
a
posterior
sntese
de
triptofano.
A regulao por atenuao exclusiva
dos procariotas pois implica que a
transcrio e a traduo ocorram em
simultneo, o que no se verifica em
organismos eucariotas.
Ilustrao 139 - Formao de ganchos consoante a ausncia ou
presena de triptofano.

Ilustrao 140 - Diferentes tipos de controlo positivo e negativo da transcrio.

98

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iii.

Regulao em eucariotas

Como nos organismos eucariotas no existem estruturas policistrnicas nem ocorre


transcrio e traduo em simultneo, os mecanismos reguladores j descritos s se aplicam a
seres procariotas. Nos eucariotas existem inmeros factores de transcrio e estimuladores,
como j foi visto anteriormente, e vrios mecanismos, como a metilao, que regulam o
processo de transcrio.
Metilao a adio de grupos metilo no carbono-5 de resduos de citosina que precedem
uma guanina, as chamadas ilhas CpG. As enzimas responsveis pela metilao so as metilases
e as deacetilases catalisam o processo inverso.
A regulao da transcrio d-se pela presena ou ausncia de metilao do promotor de um
gene: quando o promotor se encontra metilado verifica-se que a transcrio inibida; se o
promotor no est metilado ento a transcrio decorre normalmente.

Ilustrao 141 - Processo de metilao das ilhas CpG.

Nos eucariotas necessria a interaco com vrias protenas e entre diferentes regies do
cromossoma para que ocorra a transcrio. No entanto, o DNA encontra-se muito compactado
e associado a protenas, as histonas, o que pode comprometer a sua disponibilidade para a
transcrio. O DNA precisa ento de ser uma estrutura compacta, para que se possa
concentrar no ncleo da clula, mas simultaneamente dinmica, de modo a permitir a
transcrio.
O genoma dos eucariontes est concentrado no ncleo e organizado em cromossomas. Os
cromossomas s se encontram individualizados durante a diviso celular, chamando-se
cromatina sua forma indiferenciada. A unidade bsica da cromatina so os nucleossomas,
sequncias de cerca de 200 nucletidos enroladas em torno de um conjunto de protenas, as
histonas (H1, H2A, H2B, H3 e H4). A cadeia dupla de DNA d duas voltas em torno de dois
discos de 4 histonas (H2A, H2B, H3 e H4) empilhados e ligados lateralmente por uma outra
histona (H1). Os nucleossomas so depois compactados e, no seu conjunto, podem
apresentar-se na forma de:

99

Apontamentos de Bioqumica e Biologia Molecular


Eucromatina contm genes e sequncias que
participam na transcrio. No est demasiado
compactada;
Heterocromatina contm apenas regies no
codificantes (por exemplo, a regio do centrmero)
e est extremamente compactada.
A descompactao da cromatina est associada acetilao
(adio de grupos acetil Ac) das histonas e demetilao
do DNA. Por outro lado, a compactao da cromatina
acompanhada pela metilao do seu DNA e pela
desacetilao das histonas.

Ilustrao 142 - Nucleossoma.

Ilustrao 143 - Condensao da cromatina.

100

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Ilustrao 144 - A descondensao da cromatina permite a transcrio.

XIII.

Processamento de RNA

Aps a sua transcrio, os RNAs sofrem processamento antes de adquirirem a sua forma
funcional. rRNAs e tRNAs de procariotas e eucariotas so processados, em contraste com os
mRNAs, em que os nicos sujeitos a este processo so provenientes de organismos
eucariotas.

a. Processamento de tRNA
Os aminocidos so adicionados s protenas durante a traduo por intermdio de RNA de
transferncia. Como existem 20 aminocidos tm que existir, pelo menos, 20 tRNAs. Na
realidade verifica-se que, conforme a espcie, existem 60 a 80 molculas diferentes de RNA de
transferncia, o que indica que um mesmo aminocido pode ser transportado por vrios
tRNAs.
Cada molcula de tRNA codificada por um gene diferente e da sua transcrio resulta uma
sequncia de nucletidos, pr-tRNA, que se organiza numa estrutura secundria caracterstica.
Essa estrutura, comum ao pr-tRNA e ao tRNA, em forma de trevo devido s ligaes
hidrognio que se estabelecem entre bases complementares e levam formao de ganchos.
Por ser muito estvel, permite ao RNA ter um tempo de vida na clula bastante longo.
O processamento do pr-tRNA leva sua maturao em RNA e sua activao. O
processamento tem duas fases, sendo que em algumas molculas de pr-tRNA ainda
necessrio clivar previamente sequncias nos seus terminais, processo levado a cabo pela
enzima RNase P. O processamento engloba ento 2 fases sucessivas:
Adio de uma sequncia CCA ao terminal 3. Nalguns casos esta sequncia
codificada no prprio gene do RNA de transferncia, mas noutros casos tem que ser
colocada por aco de uma enzima. neste local que posteriormente se vai ligar
covalentemente o aminocido;

101

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Alterao de bases. Aproximadamente 10% das bases de nucletidos em posies
especficas so modificadas. O papel desta modificao ainda no foi bem esclarecido.

Ilustrao 145 - Processamento do tRNA.

Aps o processamento ainda necessrio activar o tRNA, passando este a ser designado
aminoacil tRNA. A activao d-se pela ligao de um aminocido ao terminal 3, reaco com
gasto de ATP e mediada pela enzima aminoacil tRNA sintetase. Existe uma enzima para cada
aminocido, verificando-se que a activao de diferentes tRNAs que transportam o mesmo
aminocido feita pela mesma enzima.

Ilustrao 146 - Activao do tRNA.

Uma vez activado, o tRNA pode seguir para os ribossomas e intervir na sntese proteica. A
sequncia de 3 nucletidos, anti-codo, que permite o reconhecimento do codo de mRNA e a
adio do aminocido correcto, oposta ao local de ligao do aminocido, localizando-se no
terminal de um dos ganchos da molcula de tRNA.

102

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Ilustrao 147 - tRNA final.

b. Processamento de rRNA
Os ribossomas, locais onde ocorre a sntese proteica, so formados por rRNA e protenas
ribossomais. Cada ribossoma tem duas subunidades, uma subunidade pequena e outra
grande, formadas por diferentes rRNAs que so caracterizados pelo seu coeficiente de
sedimentao (S). Tambm os prprios ribossomas se caracterizam por este coeficiente.
Ser
Tipo de
Ribossoma

Subunidade
pequena

Subunidade
grande

Tipo
N de
Protenas
rRNA
constituintes
Tipo
N de
Protenas
rRNA
constituintes

Procariota

Eucariota

70S

80S

30S

40S

21

33

16S (1540 nucletidos; este rRNA


tem valor taxonmico e utilizado
para determinar, por exemplo, a
espcie de bactrias)
50S

18S (1900 nucletidos)


60S

34

49

5S (120 nucletidos) e 23S (2900


nucletidos)

5S (120 nucletidos),
5.8S (160 nucletidos) e
28S (4700 nucletidos)

Ilustrao 148 - Ribossomas de procariotas e eucariotas.

103

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No processamento de rRNA d-se a clivagem do transcrito de pr-rRNA nas sequncias finais.
Nos procariotas essa clivagem feita em simultneo para os 3 rRNAs mas nos eucariotas, para
alm de o 5S ser codificado separadamente, o transcrito que contm as restantes sequncias
primeiro divido em duas molculas precursoras uma que contm apenas 18S e outra onde se
encontram 5.8S e 28S, e s depois que estas so clivadas dando origem ao produto final.
Posteriormente, o rRNA 5.8S liga-se ao 28S atravs de pontes hidrognio.

Ilustrao 149 - Processamento de rRNA de procariotas.

Ilustrao 150 - Processamento de rRNA de eucariotas.

c. Processamento de mRNA
Nos procariotas, o mRNA est pronto a ser traduzido logo aps a transcrio. J nos
organismos eucariotas, o transcrito de pr-mRNA sintetizado no ncleo ainda vai sofrer
extensas modificaes at poder ser utilizado no processo de traduo.
O processamento de mRNA de eucariotas ocorre no ncleo e inclui:
Capping em 5 adio ao terminal 5 de um nucletido com uma base modificada,
m7G 7-metilguanina. neste terminal que se vo ligar os ribossomas para que se d
a traduo completa do mRNA;
Poliadenilao adio de nucletidos de adenina ao terminal 3 e formao de uma
cauda poli-A de comprimento varivel (pode atingir as 300 bases). Para alm de
regular mecanismos de traduo e estabilidade, esta cauda tem ainda um papel
protector na medida em que atrasa a digesto do RNA pela RNase, permitindo assim
que a sua sequncia codificante se mantenha ntegra durante um perodo de tempo
maior.

104

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Nota: a poliadenilao no um processo exclusivo dos eucariotas, tendo-se vindo a
verificar que tambm ocorre em alguns mRNAs de procariotas;
Splicing remoo de intres e colagem de exes intres so sequncias que no
codificam para o mRNA final, em oposio ao exes, que codificam informao para o
mRNA maduro. Ocorre em grandes complexos, os spliceossomas, formados por
protenas e pequenos RNAs nucleares (snRNA). Os snRNAs reconhecem sequncias
nos locais de splicing do pr-mRNA e catalisam a reaco de splicing.
A maioria dos genes de eucariotas contm mltiplos intres pelo que possvel juntar
exes em diferentes combinaes atravs de mecanismos de splicing alternativo.
Estes mecanismos, muito importantes na regulao da expresso gentica, permitem
ainda que intres passem a ser considerados exes, no sendo removidos e
permitindo novas combinaes.

Ilustrao 151 - Processamento do mRNA.

Ilustrao 152 - Splicing alternativo.

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XIV.

Traduo de RNA

Traduo o processo que, ao nvel dos ribossomas, permite a sntese de protenas a partir de
mRNA. Os mecanismos de sntese so semelhantes nos procariotas e eucariotas, embora
existam algumas diferenas, nomeadamente na iniciao da traduo e no nmero de
protenas traduzidas a partir do mesmo mRNA.
O mRNA de eucariotas monocistrnico, ou seja, apenas contm informao para a sntese de
uma protena. J o mRNA de procariotas pode ser policistrnico, o que significa que pode
albergar informao para a sntese de vrias protenas. sequncia de genes contemplados no
mesmo RNA, do qual resulta um mRNA policistrnico, d-se o nome de opero.
Nos terminais do mRNA, tanto de procariotas como de eucariotas, existem regies no
traduzidas (UTR unstranslated regions) que podem conter informao necessria iniciao
e terminao da traduo.

Ilustrao 153 - mRNA monocistrnico e policistrnico.

O processo de traduo pode ser divido em 3 fases iniciao, elongao e terminao:

Ilustrao 154 - Processo de traduo.

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Iniciao as subunidades pequenas dos ribossomas ligam-se aos locais de iniciao do mRNA
e quando encontrado o codo de iniciao (metionina AUG) liga-se a subunidade grande e
forma-se um complexo funcional. A iniciao depende de diversos factores de iniciao, tanto
nos eucariotas como nos procariotas, embora os locais de iniciao sejam diferentes para cada
um dos casos.
Nos eucariotas, os ribossomas ligam-se ao terminal 5 do mRNA, que reconhecido por ter a
base modificada 7-metilguanina, e migram at encontrarem o codo de iniciao. A eficincia
da iniciao afectada pela sequncia que rodeia o codo de iniciao que, em certos casos,
pode no ser reconhecido.
Nos procariotas, como no existe cap em 5, os locais de iniciao so sequncias especficas
que precedem o codo de iniciao, as chamadas sequncias Shine-Dalgarno (SD) ou
ribossome binding-site (RBS). Estas sequncias esto presentes antes da informao para a
traduo de qualquer protena, mesmo nos mRNAs poliscistrnicos, e so complementares de
uma regio do rRNA 16S que constitui a subunidade pequena dos ribossomas procariotas. A
maior ou menor afinidade do rRNA com as sequncias SD traduz-se numa maior ou menor
traduo, respectivamente, da protena em questo. Deste modo possvel que num mRNA
poliscistrnico o balano final das vrias protenas produzidas possa no ser o mesmo. De um
modo semelhante, as protenas mais longe do terminal 3 (por onde comea a degradao por
parte das RNases) tm maior probabilidade de serem traduzidas;

Ilustrao 155 - Iniciao do processo de traduo.

Elongao a cadeia polipeptdica cresce pela sucessiva adio de aminocidos. A traduo


inicia-se pelo terminal N (amina) da protena e segue at ao seu terminal C (carboxilo).
O mecanismo de elongao muito semelhante em
procariotas e eucariotas. subunidade pequena dos
ribossomas encontra-se ligado o mRNA (a ligao
corresponde a 9 nucletidos, 3 codes) e a subunidade
grande tem 3 locais de ligao para tRNA activado, os locais
APE:
Local A aminoacyl onde se liga o aminoacil-tRNA
que contm o aminocido a ser adicionado ao
pptido em crescimento;
Local P peptidyl local onde se encontra ligado o
peptidil-tRNA, isto , o tRNA cujo aminocido j se
encontra ligado ao pptido em formao;
Local E exit local de sada.

Ilustrao 156 - Locais APE do


ribossoma.

107

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Quando o ribossoma atinge o codo de iniciao liga-se um tRNA de metionina ao codo
iniciador e recrutada a subunidade grande do ribossoma. Formado o complexo, o tRNA de
metionina encontra-se no local P e o local A fica vazio. O tRNA complementar do prximo
codo ocupa ento o local A, forma-se uma ligao peptdica entre os aminocidos adjacentes
e o tRNA iniciador muda-se para o local E, sendo depois expulso. No ribossoma, o mRNA
desloca-se 3 nucletidos no sentido 5-3, ou seja, desloca-se um codo, levando a que o
segundo tRNA passe para o local P e que o local A fique livre para a ligao de outro tRNA. Este
processo repete-se at que seja encontrado um codo stop e a sntese da protena termine.

Ilustrao 157 - Processo de traduo.

Os ribossomas podem existir livres ou associados ao retculo endoplasmtico rugoso. Muitas


vezes uma protena traduzida longe do local onde actua pelo que se torna necessrio
proceder ao seu transporte. Nalguns casos, o mRNA codifica uma sequncia sinal no terminal
amina (N) que no tem actividade cataltica e que participa no transporte da protena, sendo
libertada assim que esta atinge o seu destino final.

108

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Ilustrao 158 - Sequncia sinal no terminal amina que libertada quando a protena chega ao destino.

Assim que um ribossoma se afasta do local de iniciao um outro ribossoma pode ligar-se e dar
incio traduo de mais uma protena. assim possvel que um mesmo mRNA seja traduzido
em simultneo por vrios ribossomas, que esto usualmente espaados de cerca de 100 a 200
nucletidos, e a cujo grupo se d o nome de polissomas.
Durante a traduo, a cadeia polipeptdica que vai sendo sintetizada fica sujeita a interaces
entre os seus aminocidos constituintes. Como a configurao final de uma protena funcional
influenciada pela sua sequncia total de aminocidos e pelo meio em que se encontra, para
prevenir a formao de estruturas tridimensionais antes de ser terminada a traduo e antes
de a protena ter sido transportada para o seu local de aco, um conjunto de protenas
estabilizam a sequncia linear de aminocidos. Quando a cadeia polipeptdica j foi toda
sintetizada e j se encontra no local em que necessria, essas protenas, os chaperes,
dissociam-se da cadeia e permitem ento que a protena adquira a configurao tridimensional
que a torna funcional.

Ilustrao 159 - Chaperes.

Terminao encontrado um codo stop e a sntese termina. A protena libertada e o


ribossoma dissocia-se.
No existem tRNAs com anti-codes complementares aos codes stop. Quando se atinge um
codo stop este reconhecido por factores de terminao, que so protenas que se ligam ao

109

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local A e estimulam a hidrlise da ligao peptdica entre o pptido at a sintetizado e o tRNA
no local P. A protena ento libertada, assim como as subunidades do ribossoma e o tRNA.

Ilustrao 160 - Terminao.

A informao para a ordenao dos aminocidos est contida nos genes, existindo um cdigo
de correspondncia cdigo gentico entre as 4 letras do RNA e os 20 aminocidos
conhecidos. Ao conjunto de 3 nucletidos, tripleto, necessrios para a sntese de um
aminocido, chama-se codogene (DNA), codo (mRNA) e anti-codo (tRNA).
O cdigo gentico apresenta diversas caractersticas:
Universal comum a quase todas as clulas;
No ambguo a um tripleto de nucletidos corresponde apenas um aminocido;
Redundante/degenerado vrios codes podem sintetizar um mesmo aminocido. A
degenerescncia do cdigo gentico vai de 1 a 6 (aminocido arginina est associado a
6 codes diferentes);
O terceiro nucletido no to especfico. A degenerescncia d-se muitas vezes na
terceira base;
O tripleto AUG tem uma dupla funo codifica o aminocido metionina e ao
mesmo tempo um codo de iniciao. Podem existir outros codes de iniciao mas a
metionina o mais comum;
Os tripletos UAA, UGA e UAG so codes de finalizao ou codes stop no
codificam qualquer aminocido e sinalizam o fim da sntese proteica.
Aminocidos

Codificao

Aminocidos

Codificao

Aminocidos

Codificao

cido
Asprtico

GAT, GAC

Glicina

GGG, GGA,
GGC, GGT

Prolina

CCT, CCC,
CCA, CCG

cido
Glutmico

GAA, GAG

Glutamina

CAA, CAG

Serina

AGT, AGC,
TCT, TCC,
TCA, TCG

Alanina

GCT, GCC,
GCG, GCA

Histidina

CAT, CAC

Tirosina

TAT, TAC

Arginina

AGG, AGA,
CGT, CGC,
CGA, CGG

Isoleucina

ATT, ATC,
ATA

Treonina

ACT, ACC,
ACA, ACG

Leucina

TTA, TTG,
CTT, CTC,
CTA, CTG

Triptofano

TGG

Asparagina

AAT, AAC

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Cistena

TGT, TGC

Lisina

AAG, AAA

Valina

GTT, GTC,
GTA, GTG

Fenilalanina

TTT, TTC

Metionina

ATG

Stop

TAA, TAG,
TGA

Ilustrao 161 - O processo de expresso gentica: Transcrio, Processamento e Traduo.

XV.

Ciclo Celular

O conjunto de transformaes sofridas por uma clula desde a sua formao at sua diviso
conhecido como ciclo celular. Este processo, comum a todos os organismos vivos, inclui
perodos de desenvolvimento (interfase) e perodos de diviso (fase mittica).
Durante a diviso celular uma clula-me origina duas clulas-filhas geneticamente iguais a si.
O seu DNA duplicado e os organelos, enzimas e outros constituintes da clula so repartidos
pelas duas clulas-filhas.
Interfase perodo compreendido entre o final da diviso celular e o incio da diviso seguinte.
Corresponde a 90% da vida da clula e um perodo de intensa actividade biossinttica,
verificando-se o crescimento e duplicao do contedo celular, incluindo o seu DNA. Nesta
fase os cromossomas no so visveis ao microscpio ptico. A interfase engloba ainda 3
perodos diferentes:

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Intervalo G1 ou ps-mittico caracterizado por uma intensa actividade
biossinttica havendo a formao tanto de protenas, enzimas e RNA, como de
organitos celulares. Est compreendido entre o fim da mitose e o incio da replicao
do DNA. A clula passa a maior parte do seu tempo de vida neste estado;
Perodo S ou perodo de sntese de DNA d-se a replicao do DNA e cada
cromossoma passa a ser constitudo por dois cromatdeos ligados por um centrmero;
Intervalo G2 ou pr-mittico d-se essencialmente a sntese de biomolculas
necessrias diviso celular, como fibras e o fuso acromtico. Este perodo,
compreendido entre o final da replicao do DNA e o incio da diviso celular,
corresponde a um grande crescimento celular.
Fase mittica fase em que se d a diviso celular, engloba duas etapas mitose e citocinese:
Mitose tambm chamada de cariocinese; perodo correspondente diviso do
ncleo. Est dividido em 4 subfases:
Profase Nesta etapa, a mais longa da fase mittica, a cromatina condensa-se
gradualmente em cromossomas (DNA associado a protenas, diferentes entre
eucariotas e procariotas) bem definidos. Cada cromossoma agora composto
por dois cromatdeos unidos pelo centrmero, uma sequncia especfica de
DNA qual se liga um disco proteico, o cinetocoro. Os dois centrolos (nas
clulas animais) ou o citoesqueleto (nas clulas vegetais) presentes na clula
comeam a afastar-se em sentidos opostos e do origem ao fuso acromtico
ou mittico, constitudo por um sistema de microtbulos proteicos que se
agregam para formar fibrilhas. Os centrolos dirigem-se para os plos e o
invlucro nuclear e os nuclelos desagregam-se;
Metafase fase mais curta em que os cromossomas atingem a condensao
mxima e os pares de centrolos esto nos plos da clula. Algumas fibrilhas
do fuso acromtico ligam-se aos cromossomas e estes dispem-se com os
centrmeros no plano equatorial e os braos para fora, formando a chamada
placa equatorial;
Anafase os dois cromatdeos separam-se e passam a constituir dois
cromossomas independentes que migram para cada um dos plos da clula,
processo chamado ascenso polar. No final desta fase, os dois plos da clula
contm molculas de DNA equivalentes e a clula comea a alongar-se;
Telofase a separao dos dois conjuntos de cromossomas finalizada pela
formao da membrana nuclear. O fuso acromtico desaparece e os
cromossomas relaxam novamente, tornando-se indistintos. O nuclolo
reconstitudo e cada ncleo entra na interfase.
Citocinese perodo correspondente diviso do citoplama e individualizao das
duas clulas-filhas. Nas clulas animais a separao das clulas ocorre por
estrangulamento da membrana. No entanto, nas clulas vegetais, devido existncia
de parede celular, isso no possvel. O complexo de Golgi liberta lamelas/vesculas
que se alinham na regio equatorial e se fundem formando a membrana plasmtica.
Posteriormente, vo depositar-se, nessa mesma membrana, fibras de celulose que vo
dar origem parede celular.
Durante o ciclo celular pode no ocorrer citocinese e as clulas passam a ser
polinucleadas, dizendo-se que tm uma estrutura cenoctica ou que formam sacos de
ncleos. Alguns tipos de glbulos brancos e clulas do msculo cardaco podem
apresentar estas estruturas e durante o desenvolvimento embrionrio comum a
citocinese no conseguir acompanhar a diviso nuclear.
Nota: nos procariotas a diviso celular uma fisso binria.

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Ilustrao 162 - Fases da mitose.

Ilustrao 163 - Citocinese vegetal.

A quantidade de DNA existente na clula vai


variando ao longo do ciclo celular. Durante a
Interfase, no perodo S, a replicao do DNA faz
com que a sua quantidade aumente de Q para
2Q. Quando se d a Anafase essa quantidade
volta a ser reduzida de 2Q para Q.
Um ser humano possui 23 pares de
cromossomas, que constituem o seu caritipo.
Ilustrao 164 - Quantidade de DNA ao longo das
vrias fases do ciclo celular.

Um cromossoma caracteriza-se pelo seu


comprimento, padro de bandas e posio do
centrmero.

Meiose o processo de diviso nuclear atravs do qual se formam 4 ncleos haplides (n) a
partir de uma clula diplide (2n). O nmero de cromossomas da clula reduzido para
metade pelo que a meiose tambm pode ser chamada de reduo cromossmica.
A meiose, tal como a mitose, precedida pela replicao do DNA dos cromossomas. A esta
replicao seguem-se duas divises consecutivas. A primeira diviso chama-se diviso
reducional, ou diviso I, e a segunda diviso tem por nome diviso equacional, ou diviso II.
Estas divises do origem a 4 clulas diferentes entre si, cada uma das quais com metade do
nmero de cromossomas da clula inicial.
Interfase semelhante interfase descrita para a mitose. Precede a diviso I e,
durante o perodo S, d-se a replicao do DNA. No final desta fase cada cromossoma
constitudo por dois cromatdeos. 2
Diviso I nesta diviso, um ncleo diplide (2n) origina dois ncleos haplides (n).
Como ocorre uma reduo no nmero de cromossomas, esta diviso tambm
designada diviso reducional.
Profase I a etapa mais longa e complexa. Os cromossomas condensam e os
cromossomas homlogos emparelham, juntando-se gene a gene. Ao par de
homlogos tambm se chama bivalentes ou ttradas cromatdicas. Durante o
emparelhamento surgem pontos de cruzamento entre dois cromatdeos
irmos, os chamados pontos de quiasma ou sinapses. Pode ocorrer rotura de

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cromatdeos e trocas
recprocas de segmentos
de DNA, fenmeno que
se designa crossing-over.
Os centrolos migram
para os plos da clula e
o
invlucro
nuclear
desintegra-se;
Metafase
I

os
bivalentes ligam-se a
microtbulos do fuso
acromtico
pelos
Ilustrao 165 - Ponto de quiasma.
centrmeros e os pontos
de quiasma localizam-se no plano equatorial do fuso acromtico. A orientao
de cada par d-se ao acaso;
Anafase I os dois cromossomas homlogos de cada bivalente separam-se e
migram aleatoriamente para plos opostos da clula;
Telofase I Em cada plo da clula constitui-se um ncleo haplide (n) cujos
cromossomas apresentam dois cromatdeos. Os cromossomas descondensam,
tornando-se mais finos e mais longos. O fuso acromtico desaparece e o
invlucro nuclear reorganiza-se. Em alguns casos, segue-se a citocinese e
formam-se duas clulas haplides.
Pode ou no existir uma Interfase entre a diviso reducional e a diviso equacional
mas, em qualquer dos casos, no se verifica a replicao do material gentico.
Diviso II nesta diviso ocorre a separao de cromatdeos, obtendo-se assim, quatro
ncleos haplides (n), cujos cromossomas so constitudos por um nico cromatdeo.
Pelo facto de se manter o nmero de cromossomas, esta diviso tambm designada
de diviso equacional. Esta diviso da meiose em tudo muito semelhante diviso
celular por mitose:
Profase II Os cromossomas constitudos por dois cromatdeos tornam-se
mais grossos e curtos. Organiza-se o fuso acromtico e o invlucro nuclear
desaparece;
Metafase II Os cromossomas no seu mximo encurtamento dispem-se com
os centrmeros na zona equatorial do fuso acromtico;
Anafase II Os dois cromatdeos de cada cromossoma separam-se pelo
centrmero, passando a constituir cromossomas independentes, e migram
para plos opostos da clula;
Telofase II Os cromossomas descondensam, tornando-se mais finos e longos.
Organiza-se o invlucro nuclear e formam-se ncleos haplides. D-se a
individualizao das clulas e a partir de uma clula diplide formam-se quatro
clulas haplides.

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Ilustrao 166 - Diviso I da meiose.

Ilustrao 167 - Diviso II da meiose.

A quantidade de DNA das clulas varia ao longo


da meiose. Durante a interfase que precede a
diviso I d-se a replicao do DNA, passando a
sua quantidade para o dobro 2Q para 4Q. Na
Anafase I, devido separao dos
cromossomas homlogos, a quantidade de
DNA diminui para 2Q. Na Anafase II, devido
separao dos cromatdeos, o DNA volta a
diminuir para metade, passando agora de 2Q
para Q.
As
mutaes
cromossmicas
do-se
precisamente durante a meiose, podendo

Ilustrao 168 - Quantidade de DNA ao longo da


meiose.

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acontecer em diversas etapas:
Durante a diviso I, pela no disjuno dos cromossomas homlogos;
Durante a diviso II, pela no separao dos cromatdeos;
Quando ocorre crossing-over.

N de divises
N de ncleos formados
Emparelhamento de
cromossomas homlogos
N de cromossomas das
clulas filhas em relao s
clulas me
Crossing-over
Informao gentica das
clulas filhas em relao s
clulas me
Diviso do centrmero
Funo

Mitose
1
2

Meiose
2
4

No ocorre

Ocorre

Igual

Metade

No ocorre

Ocorre

Igual

Diferente

Anafase
Crescimento e reparao de
estruturas do organismo; reproduo
assexuada com criao de clones em
seres unicelulares

Anafase II
Produo de gmetas
ou esporos para a
reproduo sexuada

A durao do ciclo celular varia com o tipo de clula:


Clula embrionria ciclo com durao inferior a 20 minutos;
Clula da pele estas clulas dividem-se regularmente ao longo da vida; ciclo com
durao de 12 a 24 horas;
Clula do fgado apesar de ter capacidade para se dividir, reserva essa capacidade;
divide-se 1 a 2 vezes por ano;
Neurnios e clulas musculares depois de maduras no se dividem mais; esto
permanentemente em fase G0.
A progresso do ciclo celular regulada por factores externos e internos, como o tamanho da
clula, a quantidade de nutrientes disponvel, a presena de factores de crescimento, etc. Por
exemplo, para que uma clula se divida necessrio haver um suporte (a clula possui touch
sensors) e necessria uma densidade celular baixa pois, perante uma sobrelotao celular,
no ocorrero divises.

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Ilustrao 169 - Factores de crescimento.

Um dos mecanismos de regulao est associado acumulao e degradao cclica de ciclinas


durante o ciclo celular. Existem vrios tipos destas protenas, designadas ciclina A a ciclina H,
cada uma dedicada a uma etapa do ciclo celular, que so sintetizadas e degradadas por
protelise ao longo do ciclo.

Ilustrao 170 - Variao da quantidade e tipo de ciclinas ao longo do ciclo celular.

As ciclinas podem associar-se a enzimas com actividade fosforilativa, as cinases Cdk (cyclindependent kinases), de modo a formarem o complexo MPF maturation promoting factor,
que promove a entrada da clula na fase mittica. Quando se associam s Cdks, as ciclinas
ajudam a direccion-las para as protenas alvo.
A associao de uma ciclina B, sintetizada durante a fase G2, a uma cinase Cdk1 (inactiva) leva
formao de um complexo Cdk1/ciclina B (MPF) e fosforilao de determinados resduos
de treonina (14 e 161) e de tirosina (15). A fosforilao de tri-14 e tir-15 provoca uma inibio
da enzima e impede que esta entre prematuramente em mitose. Segue-se a desfosforilao
desses resduos, ficando apenas fosforilado o resduo de tri-161. Esta uma fosforilao
activadora, verificando-se que activa o complexo MPF e despoleta a desagregao da
membrana nuclear, a reorganizao do citoesqueleto e a condensao dos cromossomas,
permitindo assim a entrada da clula na fase mittica. Terminada essa fase, a ciclina dissociase da Cdk1 e destruda por protelise. A cinase desfosforilada e a clula inicia a citosinese e
a interfase.
Diferentes ciclinas podem associar-se mesma Cdk, consoante a fase do ciclo celular em que a
clula se encontra.

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Ilustrao 171 - Complexo Cdk1/ciclina B que induz a entrada da clula na fase mittica.

Durante o ciclo celular existem pontos de controlo durante os quais a clula verifica o seu
estado e coordena os eventos que ocorrem em cada fase, prevenindo que a clula passe para
uma fase se os eventos da fase anterior ainda no terminaram ou no ocorreram de forma
correcta. Alguns mecanismos de regulao actuam nos perodos G1, S e G2 e na fase mittica:
No final do perodo G1 diversos mecanismos verificam se existe DNA danificado e, em
caso afirmativo, procedem sua reparao para que a clula possa entrar no perodo S
e iniciar a replicao do seu DNA. Mesmo que o DNA no se encontre danificado
algumas clulas podem no iniciar o perodo S, permanecendo num estado de latncia
designado estado G0. O tempo de permanncia nesse estado muito varivel e, em
alguns casos, como nos neurnios e fibras musculares de um indivduo adulto, podem
mesmo no reiniciar o ciclo celular;
Durante o perodo S h monitorizao contnua do DNA replicado de modo a que
qualquer mutao, base incorrecta ou replicao incompleta seja reparada antes da
diviso celular;
No final do perodo G2 h outro momento de controlo em que se verifica a integridade
do DNA replicado. Se a replicao do DNA foi completa e bem sucedida prossegue-se
para a mitose;
Na fase mittica verifica-se se o fuso acromtico est correctamente formado e se os
cromossomas esto alinhados na placa equatorial, podendo ser divididos igualmente
entre as duas clulas filhas.

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Ilustrao 172 - Pontos de controlo do ciclo celular.

Em resposta s deficincias encontradas durante os pontos de controlo, o ciclo celular e a


replicao do DNA de uma clula podem ser inibidos. Por exemplo, quando o DNA se encontra
danificado verifica-se o aumento de um factor de transcrio, o p53, que induz a transcrio
do gene p21. Este gene, por sua vez, permite a sntese de protenas que se ligam s cinases e
ao complexo MPF, inibindo o ciclo celular e a replicao de DNA.

Ilustrao 173 - Aco do factor de transcrio p53 na inibio do ciclo celular e da replicao do DNA.

As mutaes em alguns genes podem conduzir ao aparecimento de cancro:


Os proto-oncogenes so genes normais que, atravs de mutaes, passam a ter a
capacidade de promover o aparecimento de cancro. Um exemplo o gene RAS, que
activa as ciclinas e que, quando se encontra desregulado, estimula o crescimento
celular excessivo.

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Existem genes supressores de tumores que inibem a diviso celular. Quando so
desligados podem levar ao aparecimento de cancro pois as clulas danificadas no
deixam de sofrer diviso, acumulando mais erros e originando clulas cancergenas.
Um exemplo de um gene supressor de tumores o p53 (responsvel pela estimulao
de enzimas reparadoras do DNA, pela entrada das clulas na fase G0, pela
permanncia das clulas na fase G1 e pela apoptose de clulas danificadas). Todos os
cancros apresentam o gene p53 desligado

Ilustrao 174 - Actividade normal e anormal da p53.

O cancro aparece apenas ao fim de cerca de 6 mutaes chave acumuladas por uma clula:
Crescimento ilimitado ligando os genes que promovem o crescimento;
Pontos de controlo ignorados desligando os genes supressores de tumores;
Ausncia de apoptose desligando os genes responsveis pela apoptose;
Imortalidade nmero ilimitado de divises conseguido pelos genes responsveis pela
manuteno dos cromossomas (por exemplo, manuteno dos telmeros);
Crescimento de vasos sanguneos ligando os genes responsveis pelo crescimento
de vasos sanguneos;
Ausncia de dependncia de densidade e de suporte desligando os genes de
touch sensor.
Uma clula danificada deve ser destruda, quer por aco de macrfagos quer por apoptose
morte celular programada que passa pelos seguintes passos:
A clula diminui de tamanho;
Os cromossomas condensam-se e fragmentam-se;
A membrana nuclear rompe-se;
Formam-se corpos apoptticos.

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Ilustrao 175 - Apoptose.

A activao intrnseca da apoptose est dependente das mitocndrias: num dos


transportadores electrnicos destes organelos d-se a produo de citocromo-c, uma protena
que activa as caspases, uma classe de proteases que degradam o DNA no ncleo da clula.
Este processo regulado por dois genes, Bcl2 e BAX, que bloqueiam e promovem a apoptose,
respectivamente. Algumas clulas tumorais produzem demasiado Bcl2 dando origem a cancros
resistentes quimio e radioterapia.

XVI.

Laboratrio Restrio de Plasmdeos

O material gentico dos procariontes consiste, na maioria dos casos, numa molcula circular
de DNA que se encontra numa regio do citoplasma da clula designada por nucleide. Os
plasmdeos so molculas circulares de DNA existentes normalmente no interior de bactrias
e cuja replicao independente da do DNA cromossmico.
Os plasmdeos podem ser modificados geneticamente mediante a sua recombinao com
genes exgenos, que so introduzidos numa regio do plasmdeo designada por regio de
mltipla clonagem (multiple cloning site MCS). Este processo inicia-se pela aco de enzimas
de restrio endonucleases, que, ao reconhecerem determinadas sequncias especficas,
cortam a molcula de DNA nessa regio. De referir que no caso de um vector de clonagem
iremos obter um nico fragmento de restrio enquanto no DNA cromossmico se obtm
vrios fragmentos, pois podem existir vrias regies reconhecidas pelas endonucleases de
restrio. O gene a ser introduzido, previamente cortado pelas mesmas enzimas de restrio,
ser fixado no plasmdeo mediante a aco de DNA ligases, voltando este a adquirir a forma
circular.
Outras regies igualmente importantes nos plasmdeos so as marcas de seleco (selectable
marker) e a origem de replicao (origin of replication Ori). As primeiras permitem isolar os
plasmdeos recombinados mediante a introduo de genes que conferem, por exemplo,
resistncia a um antibitico. Deste modo, na presena do mesmo, as bactrias que sobrevivem
sero as que possuem o plasmdeo recombinado. A segunda regio (Ori), contm uma

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sequncia de nucletidos responsvel pela activao do processo de replicao do DNA
plasmdico.

Ilustrao 176 - Introduo de DNA exgeno num plasmdeo.

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