**INMUNOELECTROFORESIS**

La inmunoelectroforesis es una tcnica que se realiza en dos fases. Primero

se separa la mezcla de Ags por electroforesis y posteriormente el antgeno
que se desea detectar se hace reaccionar con un anticuerpo especfico
colocado en un pocillo lateral.. En Inmunologa clnica, esta tcnica puede
utilizarse en la identificacin de las protenas de mieloma

Inmunoelectroforesis

Tcnica que combina la electroforesis de protena y la inmunodifusin doble. En este

procedimiento las protenas primero se separan por electroforesis en gel (usualmente
agarosa), luego se hacen visibles por inmunodifusin deanticuerpos especficos. Se produce
un arco elptico especfico de precipitina para cada protena detectable por el antisuero

Orden

Enfermedades

Valoracin

Bibliogr.

Expandir

Hipoprotrombinemias

100

++

Paraproteinemias

85

++

->

Mieloma Mltiple

83

++

->

Plasmacitoma

72

++

Enfermedad de las Cadenas Pesadas

68

++

Deficiencia de Antitrombina III

57

++

Deficiencia del Factor X

56

++

Macroglobulinemia de Waldenstrm

54

++

Trastornos de Coagulacin Sangunea

52

++

->

10

Gammopatas Monoclonales Benignas

49

++

->

11

Hipergammaglobulinemia

46

++

->

->

12

Enfermedad de von Willebrand

43

++

13

Amiloidosis

42

++

14

Hemofilia B

40

++

15

Tromboflebitis

39

++

16

Trastornos de las Plaquetas Sanguneas

37

++

->

->

Inmunoelectroforesis
La inmunoelectroforesis es el nombre genrico que reciben un amplio nmero de mtodos bioqumicos
para la separacin y caracterizacin de protenas basadas en la electroforesis y la reaccin
con anticuerpos. Todas las variantes de la inmunoelectroforesis requieren inmunoglobulinas, anticuerpos
que van a reaccionar con las protenas que se desea separar o caracterizar. Los mtodos fueron
desarrollados y usados ampliamente durante la segunda mitad del Siglo XX.

Procedimiento
Se suele utilizar un gel de agarosa al 1% con un grosor cercano al milmetro, y un pH en torno al 8,6.
Esto sirve tanto para la electroforesis como para la reaccin con los anticuerpos. Se prefiere la agarosa
como matriz de soporte porque tiene un tamao de poro mayor que otros medios, que permiten el libre
paso y separacin de las protenas, pero en cambio es lo suficientemente estrecho como para impedir el
paso de los complejos antgeno-anticuerpo. El elevado pH se utiliza porque, en esas condiciones, los
anticuerpos son prcticamente inmviles. Se suele emplear una baera de electroforesis de tipo
horizontal.
Los complejos de inmunoprecipitacin se pueden ver en el mismo gel de agarosa, pero requieren ser
teidos con colorantes para protenas tales como el Azul Coomassie. En contraste con la electroforesis
en gel SDS, la electroforesis en gel de argarosa permite que las protenas estn en forma nativa
(estructura cuaternaria), por lo que la inmunoelectroforesis permite la caracterizacin de la actividad
enzimtica y la unin a ligandos adems de la separacin electrofortica.

Tipos
En orden de aparicin, los mtodos inmunoelectroforticos fueron:

Anlisis inmunoelectrofortico (Inmunoelectroforesis de una dimensin)

Inmunoelectroforesis cruzada (Inmunoelectroforesis cuantitativa en dos dimensiones)

Inmunoelectroforesis en cohete (Inmunoelectroforesis cuantitativa de una dimensin)

Contrainmunoelectroforesis

Inmunoelectroforesis de afinidad

El Anlisis inmunoelectrofortico es el ms clsico de los ensayos. Se fundamenta en la separacin

de las protenas por electroforesis, tras la que se aplica, sobre el gel de agarosa, el suero de anticuerpos
sobre las protenas ya separadas, tras lo que se forma un precipitado tras un perodo adecuado de
difusin, para permitir que las protenas se encuentren con sus anticuerpos especficos. La introduccin
de este ensayo conllev un gran avance de la qumica de las protenas, y muchos de los
descubrimientos de protenas en lquidos y extractos biolgicos se realizaron por este mtodo: permiti
caracterizar un gran nmero de protenas en suero y adems se pudo establecer la existencia de
distintas clases de inmunoglobulinas y sus diferentes caractersticas electroforticas.
La inmunoelectroforesis cruzada, tambin llamada Inmunoelectroforesis cuantitativa de dos
dimensiones, difiere del mtodo anterior en el hecho de que las protenas, tras su electroforesis inicial,
no se incuba con anticuerpos. En su lugar, se vuelven a someter a una segunda electroforesis, esta vez
en un gel que adems de buffer y agarosa, contiene los propios anticuerpos contra la protena de
inters., de forma que es durante esta segunda operacin cuando se forman los inmunoprecipitados, de
tal manead que cada precipitado tendr sus propias caractersticas migratorias, con lo cual, cada banda
que veamos corresponder a un antgeno diferente, y adems podremos, segn la posicin del
precipitado, conocer la cantidad de protena as como la cantidad de anticuerpo especfico en el gel, de
manera que se puede realizar una relativa cuantificacin de los componentes. La sensibilidad de este
ensayo es similar al anlisis inmunoelectrofortico convencional, pero hay mltiples variaciones de la
tcnica que la hacen mas til segn el propsito concreto. Este tipo de inmunoelectroforesis ha sido
especialmente usado en estudios de protenas serias y extractos biolgicos.
La inmunoelectroforesis en cohete se denomina as por la forma caracterstica del precipitado que se
forma en el gel. El principio consiste en cargar en el gel, de forma consecutiva y en perpendicular a la
direccin del campo elctrico, diluciones seriadas con progresivo aumento de la cantidad de antgeno,
mientras que el anticuerpo se encuentra repartido por el gel. Esto dar lugar a un precipitado cada vez
mayor (a medida que hay mas antgeno) que da un aspecto cnico que recuerda a un cohete). Estos
mtodos se utilizan para la cuantificacin de protenas serias antes de que aparecieran los mtodos
automatizados.

La contrainmunoelectroforesis consiste en el aprovechamiento de la distinta movilidad electrofortica

de los dos componentes implicados. Dado que las inmunoglobulinas migran hacia el polo negativo y las
protenas, dada su carga neta negativa, lo hacen hacia el positivo, se colocan de forma inversa a su
migracin, forzando as su encuentro. Es decir, cerca del polo positivo colocaremos el suero con los
anticuerpos que irn contra nuestro antgeno, migrando estos hacia el polo negativo, mientras que cerca
del polo negativo se cargarn los antgenos de inters, a sabiendas de que migrarn hacia el polo
positivo. De este modo, ambos se encontrarn (segn su movilidad electrofortica) a una distancia
intermedia, asegurando as la interaccin.
Por ltimo, la Inmunoelectroforesis de afinidad est basada e los cambios del patrn electroforticode
las protenas debido a su interaccin especfica con sus ligandos. Esta tcnica se utiliza para estimar
constantes de unn. Algunas variantes de esta inmunoelectroforesis son similares a la cromatografa de
afinidad dado el uso de ligandos inmovilizados.
La estructura laxa del gel permite la unin adicional de anticuerpos marcados radiactivamente para
revelar protenas especficas. Esta variacin se ha usado en la identificacin de alrgicos a travs de su
reaccin con IgE.
Existen dos factores que determinan porque los mtodos inmunoelectroforesis no son los ms
utilizados. Por un lado, requieren un trabajo intensivo y cierta experiencia manual. Adems, requieren
largos stocks de anticuerpos policlonales. Hoy en da, la electroforesis en gel es el mtodo de eleccin
para la caracterizacin de protenas, ya que es fcil de realizar, altamente sensible y requiere un bajo
nmero de anticuerpos especficos. Adems, las protenas son separadas en base a su peso molecular,
lo cual no sucede en la inmunoelectroforesis, aunque este mtodo sigue siendo prctico cuando no se
requieren condiciones reductoras.

Inmunoelectroforesis (IEF)
Introduccin
La inmunoelectroforesis es una tcnica cualitativa que permite la identificacin de diferentes
componentes proteicos a travs de arcos de precipitacin, que tienen movilidad
electrofortica semejante, pero poseen diferente peso molecular y/o diferentes
determinantes antignicos.
La inmunoelectroforesis se realiza preferentemente en geles agarosa y se distinguen dos
etapas:
1) la muestra de protenas se somete a separacin electrofortica y 2) terminada la
electroforesis, las protenas son precipitadas con antisueros poli o monoespecficos,
aplicados en el agar en un canal paralelo al eje de migracin. Luego de un perodo de
difusin en cmara hmeda, se observan arcos de precipitacin cuya forma y posicin
dependen de las caractersticas inmunoqumicas y de la concentracin de cada protena.

Reactivos y Materiales
Tampn barbital-HCl 0.1 M;pH 8.6, diludo 1/2 para corrida.
Agarosa al 1 % en tampn barbital-HCl 0,1 M; pH 8.6; diluido 1/3.
Antisueros polivalentes y monoespecficos.
Suero control: suero humano normal teido con azul de bromofenol.
Solucin salina, cloruro de sodio al 0.9 %

Desarrollo del proceso (microtcnica de Scheidegger)

Preparar placa de agarosa, aplicar muestra y suero control segn plantilla.
Realizar separacin electrofortica a 220 V por 60 minutos.
Aplicar antisueros monoespecficos segn plantilla. Dejar difundir 24 horas en
cmara hmeda a temperatura ambiente.
Identificar y comparar los arcos de precipitacin de la muestra con el suero
control.

Inmunoelectroforesis en sangre
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Definicin

Es un examen de laboratorio que mide las protenas llamadas inmunoglobulinas en la sangre.

Existen muchos tipos de inmunoglobulinas, algunas de las cuales pueden ser anormales y deberse
a cncer.

Nombres alternativos
Inmunoelectroforesis en suero; Electroforesis de inmunoglobulinas en la sangre; Electroforesis de
gammaglobulinas; Electroforesis de inmunoglobulinas sricas

Forma en que se realiza el examen

Se necesita una muestra de sangre. Para obtener informacin sobre la forma en que se hace esto,
ver el artculo: venopuncin.

Lo que se siente durante el examen

Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, la persona puede sentir un dolor moderado o
slo un pinchazo o sensacin de picadura. Despus, puede haber algo de sensacin pulstil.

Razones por las que se realiza el examen

Este examen casi siempre se usa para verificar los niveles de ciertas inmunoglobulinas (o
anticuerpos) en su sangre, asociados con mieloma mltiple y macroglobulinemia de Waldenstrom.
Este examen ha sido reemplazado en su mayora por otro examen llamado inmunofijacin.

Valores normales
Un resultado normal (negativo) significa que no se observaron inmunoglobulinas en la muestra de
sangre.

Significado de los resultados anormales

Los resultados anormales pueden deberse a ciertos tipos de cncer como el mieloma mltiple y
la leucemia linfoctica crnica.
Los resultados anormales tambin pueden deberse a:

Amiloidosis

Linfoma

Algunas personas tienen inmunoglobulinas monoclonales, pero no tienen cncer. Esto se

denomina "gammapata monoclonal de significado incierto" o GMSI.

Riesgos

Sangrado excesivo

Desmayo o sensacin de mareo

Hematoma (acumulacin de sangre debajo de la piel)

Infeccin (un riesgo leve en cualquier momento que se presente ruptura de la piel)

Las venas y las arterias varan de tamao de un paciente otro y de un lado del cuerpo a otro, razn
por la cual obtener una muestra de sangre de algunas personas puede resultar ms difcil que de
otras.

1. InmunoelectroforesisEs un examen o tcnica de

laboratorio que mide las inmunoglobulinasEstas son
protenas las que se encargan de producir la reaccin
antgeno anticuerpo en el organismo

2.2. INMUNOELECTROFORESIS (IEF).

Prueba CUALITATIVA.

Mtodo combinado de precipitacin.

Precipitacin por difusin.

Electroforesis de los antgenos de acuerdo a su carga.

til para determinar mezclas complejas de Ag o Ac (Acs monoclonales

clsicas en mieloma, linfomas).

En esta tcnica, hay 5 fases:

1. Se prepara un gel de agarosa sobre un porta y se hace un pocillo para el suero y
un canalillo para el anticuerpo especfico.
2. Migracin de antgenos por carga (Separacin). Los Ag del suero se separan
primero en base a su carga elctrica. El pH se elige de modo que unos Ags se
carguen positivamente y migren hacia el ctodo, y otros Agsse carguen
negativamente y migren hacia el nodo.
3. Difusin. El canalillo se llena con el Ac especfico y se deja reposar para
conseguir la difusin.
4. Formacin del precipitado. Ag y Ac reaccionan y precipitan, formando arcos de
precipitacin.
5. Interpretacin de las bandas.

2.3. RADIOINMUNOELECTROFORESIS.
- Se marca radiactivamente los Ag y se hace una IEF; despus se hace una
autorradiografa de las bandas obtenidas (se visualizan mejor).
- Es una prueba CUALITATIVA y/o semicuantitativa.

http://books.google.com.mx/books?id=cKGyh_81voC&pg=PA176&lpg=PA176&dq=electroforesis+diferencia+
+inmunoelectroforesis&source=bl&ots=sYmEZFApR&sig=5jClHNOgzby5l6rlwBUNellCByc&hl=es&ei=j67uSdPrDIXFtgf41qHHDw&sa
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