A BIOLOGIA MOLECULAR

NA GENTICA FORENSE
Profa. Gabriela Souto

GENTICA FORENSE
Ramo da gentica humana voltada para questes
legais
Identificao Humana atravs do DNA
Estabelecimento de vnculo gentico
Quem a vtima?
Quem o pai dessa criana?
A quem pertence a mancha de sangue deixada em
um local de crime?
Quem deixou os espermatozoides no corpo da vtima?

GENTICA FORENSE
Justia Cvil: Testes de paternidade
Justia Criminal: Identificao humana, crimes sexuais,
crimes contra a vida, crimes contra o patrimnio,
desastres de massa
Identificao Humana
Caracteres morfolgicos
Tatuagens
Fotografias
Impresses digitais

Nem sempre esto presentes para serem resgatadas

Ossadas antigas enterradas
Crimes de violncia sexual
Superfcies speras ou tecidos

Marcadores genticos

GENTICA FORENSE
Identificao de carnes de animais protegidos contra caa
Identificao de suspeitos em casos de crimes sexuais;
Iden. de cadveres carbonizados, em decomposio e mutilados;
Identificao de partes e rgos de cadveres;

Relao entre instrumento(s) lesivo(s) e vtima(s)

Investigao de paternidade
Gravidez resultante de estupro;
Anulaes de registros civis de nascimento
Raptos e sequestros de crianas e trfico de menores

Cadveres de aborto provocado, infanticdio e de falta de assistncia

COLETA
Cuidados na coleta de material biolgico

Usar luvas e mscaras

Evitar conversar sobre as amostras
Coletar quantidade suficiente
Evitando ao mximo contaminao

Cuidados na preservao do material biolgico

Secar os suportes utilizados para a coleta
Manter as amostras em baixa temperatura
Todo procedimento de coleta de material biolgico deve considerar
preceitos de biossegurana padronizadas pela legislao e pelos
programas de acreditao laboratorial, visando a proteo pessoal do
perito e evitando o que se denomina de erro humano.

CASO O. J. SIMPSON
A polcia encontrou uma cena de crime farta em
evidncias: muito sangue, peas de vesturio,
pegadas e uma trilha de sangue que revelava o
caminho seguido pelo criminoso. Os policiais
chegaram casa do ex-marido de Nicole, o astro
de cinema e dolo do futebol norte-americano O. J.
Simpson, obtendo ali mais evidncias: manchas de
sangue em seu carro, nas suas meias e no cho do
jardim. Exames de DNA comprovaram que esse
sangue era das vtimas. Assim, a promotoria
acreditava ter nas mos um caso fechado, que no
poderia ser contestado, mas foi surpreendida pela
estratgia dos advogados de O. J. Simpson: o
questionamento das provas. As cmeras de
televiso flagraram o principal perito da polcia
coletando
amostras
sem
luvas,
policiais
manipulando evidncias sem trocar as luvas e
muitas pessoas circulando na cena do crime, que
no tinha sido bem isolada.

DNA
Autossmico

Mitocondrial

DNA MITOCONDRIAL
Fita dupla de DNA circular extra cromossomal
Haploide
Mais de1000 cpias por clula;
Impossibilidade do uso para exame de paternidade

Taxa de mutao de 5 a 10X maior que o DNA nuclear

Pobre atividade reparadora da polimerase

Ausncia de histonas
Maior sensibilidade ao dano oxidativo - ambiente com

grande nmero de radicais livres

DNA MITOCONDRIAL

DNA MITOCONDRIAL
Maior

resistncia

degradao

devido

sua

natureza circular e seu elevado nmero de cpias,

til em casos onde o material biolgico est muito
degradado

(corpos

carbonizados

ou

muito

decompostos)
Heteroplasmia
Mais de um tipo de DNA mitocondrial em um mesmo indivduo
Amostra

referncia

da

mesma

natureza

da

amostra

questionada, pois h variaes de taxas de heteroplasmia

entre diferentes tecidos

DNA MITOCONDRIAL
Regio no codificante
D-Loop
1122 pares de bases
3 regies hipervariveis

Abundantes polimorfismos
entre indivduos
Suscetvel a ocorrncia de
mutaes
Regio alvo de anlises

forenses

DNA AUTOSSMICO
Os genes essenciais - Sofrem pouca mutao;
O DNA no codificante est sujeito pouca seleo
natural variao entre indivduos;
Sequncias hipervariveis no DNA humano
codificante so utilizadas na gentica forense
O gmeos univitelinos?

no

MARCADORES MOLECULARES
a) Os de polimorfismos de Sequencia
Diferentes
nucleotdeos
em
uma
determinada
localizao no genoma
Substituies, adies ou delees de bases
b) Os de polimorfismos de comprimento

Regies que se repetem no DNA genmico

Microssatlites (STRs) e minissatlites (VNTRs)
Os mais usados na atualidade.
Variao do nmero de repeties entre os indivduos

REGIES DE MICROSSATLITES
STRs - short tandem repeats
Repeties curtas consecutivas, repetidas dezenas
ou centenas de vezes ao longo do DNA
NMERO de repeties varia entre indivduos

REGIES DE MICROSSATLITES
Exemplo: Marcador X
Alelo 1: 7 repeties
AGCTAATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATGC

Alelo 2: 8 repeties
AGCTAATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATCGATGC

REGIES DE MICROSSATLITES
Devido ao pequeno tamanho
amplificados por PCR;
Reao de PCR Multiplex

necessitam

ser

So amplificados diversos fragmentos do DNA de interesse ao

invs de apenas um

REGIES DE MICROSSATLITES
STRs do cromossomo Y
Regio exclusiva
recombinao

no

sofre

Homens de uma mesma famlia

apresentam mesmo padro de DNA
nessa regio
A evidncia em anlise constitui uma
mistura de material gentico do
agressor e da vtima

REGIES DE MINISSATLITES - VNTRS

VNTRs - Variable Number of Tandem Repeats
9 100 pb repetidos sequencialmente em loci
O nmero de repeties varia entre indivduos
RFLP - Restriction fragment lenght polymorphism

Baseada em mutaes que alteram sequncias no DNA de um

indivduo impedindo a atuao das enzimas de restrio

Indivduos so diferenciados pelo comprimento de sequncias

VNTR aps ao da enzima de restrio;
O padro de fragmentos caracterstico e herdado
Desvantagem - Requer DNA ntegro e grande quantidade (100500 ng)

REGIES DE MINISSATLITES - VNTRS

PRINCIPAIS TCNICAS
PCR Reao em cadeia da polimerase
20 clulas suficiente para a identificao do DNA
A quantidade de material obtido em torno de 1 a 20 ng
Antes da PCR - Apenas com abundante material gentico,
impossvel para criminalstica

PRINCIPAIS TCNICAS
Enzimas de restrio - ENDONUCLEASES

Produzidas por bactrias para defesa contra vrus invasores;

Tesouras qumicas
Agem apenas em regies especficas do DNA
Pequenos fragmentos contendo pontas adesivas
Enzimas de restrio - Hae III, Pst I e Hinf I

PRINCIPAIS TCNICAS
Eletroforese
Cada fragmento tem diferentes tamanhos - migrao diferente;
A revelao - diretamente no gel ou em membrana
intermediria (Shouthern Blotting)
Identificao dos fragmentos feita apenas quanto ao
tamanho e no quanto sequncia

PRINCIPAIS TCNICAS
Eletroforese

PRINCIPAIS TCNICAS
Shouthern Blotting
Identifica uma sequncia de bases especficas
Sonda especfica marcada por radioatividade ou fluorescncia

VANTAGENS DAS TCNICAS DE BIOLOGIA

MOLECULAR PARA FIM FORENSE
DNA possibilita identificao sobre qualquer fonte de
material biolgico
DNA permite anlise de traos de qualquer material
biolgico
Sorologia (ABO) - capacidade discriminatria de um em
trs indivduos
DNA - capacidade discriminatria de um indivduo entre
bilhes
DNA tem alta estabilidade qumica aps longo perodo
de tempo

DESVANTAGENS DAS TCNICAS DE BIOLOGIA

MOLECULAR PARA FIM FORENSE
Vestgio de outros materiais biolgicos ou impurezas
colhidas com as amostras biolgicas (tecidos
coloridos) inibem a PCR ou produzem reaes
cruzadas;
Falta de padronizao dos mtodos de anlise
Falta de banco de dados de DNA

Alta dependncia de produtos importados