IDENTIFICACIN DE AMINOCIDOS Y PROTENAS

I.

INTRODUCCIN
En este trabajado desarrollamos el reconocimiento de protenas y aminocidos y
para esto hemos realizado un trabajo de laboratorio mediante el cual estamos
poniendo diferentes formas de reconocer la presencia de las protenas en una
sustancia (clara de huevo), las reacciones a utilizar, etc.
Los aminocidos son compuestos de bajo peso molecular y de alta polaridad, que
poseen simultneamente carcter cido y bsico. En la naturaleza, los
aminocidos se encuentran de manera libre o formando parte de las protenas, de
los cuales podemos obtenerlas por hidrolisis
Por la estructura peptdica y la presencia de determinados grupos (grupos R), las
protenas y los aminocidos pueden reaccionar con una variedad de agentes
originndose productos coloreados. Estas reacciones son la base para la
determinacin cuantitativa y cualitativa de las protenas y aminocidos. Por
presentes variaciones en la composicin de los aminocidos de las diferentes
protenas, se manifiestan diferentes colores y grados de intensidad para una
misma reaccin, ntimamente relacionado con la naturaleza de la protena
analizada
Este informe contiene la experiencia en el laboratorio, imgenes de ellas y algunos
resultados que se peda en la realizacin del informe y que se requera saber en
cada experimentacin.

II.

OBEJETIVOS
Reconocer la presencia de los aminocidos contenidos en la albumina
(protena que constituye la clara del huevo).
Aprender a preparar las diversas soluciones que se utilizaran en las pruebas.
Conocer las propiedades de los aminocidos.
Identificar las pruebas que nos son tiles para identificar las protenas
(aminocidos)

III.

MARCO TERICO

PRUEBAS PARA DETERMINAR PROTENAS Y AMINOCIDOS.

Prueba de la ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno).
Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo
libre, reaccionaran con la ninhidrina. La positividad se manifiesta por la aparicin
de un color violceo o amarillo. Debido a que las protenas y los aminocidos,
poseen esta caracterstica, la reaccin sirve para identificarlos. Algunas soluciones
de amonio y aminas, dan la coloracin caracterstica, aparentemente debido a una
oxidacin y reduccin intramolecular de la ninhidrina en presencia de amonaco.
Los aminocidos porina e hidroxiprolina, que no poseen grupo amino sino imino (NH-), dan un color rojo que pasa rpidamente a amarillo. La reaccin se muestra
en la figura 1

Prueba de biuret
Es una prueba general para polipptidos y protenas ya que sirve para reconocer
las uniones peptidicas. La positividad se manifiesta por la aparicin de una
coloracin violeta. La formacin de un complejo de coordinacin entre los cationes
cpricos en medio alcalino con las uniones peptdicas.

Prueba xantoprotica:
Es una reaccin que reconoce los aminocidos que poseen el grupo bencnico
(tirosina, fenilalanina, triptfano). Las protenas que tienen en su composicin
estos aminocidos tambin darn la reaccin. La positividad se reconoce por la
aparicin de un color amarillo o verde debido a la formacin de nitrocompuestos.
Prueba de los grupos SH:
Es una prueba para identificar aminocidos azufrados y las protenas que los
contienen, se reconocen por la formacin de una coloracin negra o gris. La figura
siguiente muestra dicha reaccin.

Prueba de Milln:
La reaccin es debida a la presencia del grupo hidroxifenlico (-C6H4OH) en la
molcula proteica. Cualquier compuesto fenlico no sustituido en la posicin 3,5,
como la tirosina, fenol y timol, dan positiva la reaccin. El mecanismo de la
reaccin es poco conocido, posiblemente se deba a la formacin del complejo
oxido de mercurio y fenol.

IV.

METODOLOGA
MATERIALES

Equipos
Tubos de ensayo

Huevo

Esptula

Mechero

Luna de reloj

Balanza analtica

Reactivos
Acetato de plomo

Reactivo de biuret

Cloruro de sodio

Ninhidrina

Reactivo de Millon

PROCEDIMIENTO
1) Separamos la clara del huevo y lo colocamos en un vaso beaker
2) Vertimos 1ml de clara con 9ml de agua destilada en un tubo de ensayo.

Laboratorio de bioqumica practica N 4

3) Proseguimos con las siguientes pruebas:
Prueba de la ninhidrina:

 En un tubo de ensayo colocamos 3ml de la muestra y adicionamos 0.5 ml

de la solucin de ninhidrina al 0.1%.
Mezclamos y calentamos por 1min. Dejamos enfriar y se torn de color
azul, esto indica que en nuestra muestra final hay presencia de
aminocidos con grupo libre NH2.
Prueba de Millon:
Colocamos 2ml de la muestra y aadimos a esta 5 gotas del reactivo de
Millon, mezclamos bien y lo calentamos cuidadosamente durante 30 s
sobre una pequea flama.
Observamos que este reactivo produjo un precipitado blanco que por la
accin del calor se torn color rosado, esto nos indica que este compuesto
contiene radical Hidroxibenceno.

Laboratorio de bioqumica practica N 4

Prueba Xantoproteica:
Agregamos cuidadosamente 0.5 ml de cido
ntrico concentrado a 1.5ml de la clara de
huevo mezclamos bien y lo calentamos
ligeramente en la llama del mechero luego
observamos un cambio de color amarillo
mientras se enfriaba.
Posteriormente enfriamos la solucin con
agua a chorro y luego gota a gota aadimos
el NaOH 10M hasta que esta muestra se
torn color anaranjado.

Laboratorio de bioqumica practica N 4

Esta prueba nos indica que en nuestra muestra contiene aminocidos con
el grupo bencnico (fenilalanina, tirosina, triptfano).
Prueba del reactivo de Biuret:
Aadimos 0.5 ml del reactivo de Biuret a 2ml de la muestra, luego lo
mezclamos.
Observamos que cambio a un color violeta esto se debe a que la prueba
contiene polipptidos y protenas ya que sirve para reconocer Las uniones
peptdica.

Laboratorio de bioqumica practica N 4

Prueba de los grupos SH:
Aadimos 2ml de Hidrxido de Sodio

al 20% a la muestra con 3ml,

enseguida agregamos 5 gotas de acetato de plomo 0.2M luego lo llevamos

a calentamiento a una llama ligera alrededor de 4 min.

Laboratorio de bioqumica practica N 4

Luego de mezclar se observ un color negro, esto quiere decir que en
nuestra prueba hay presencia de aminocidos azufrados y las protenas
que los contienen.

Laboratorio de bioqumica practica N 4

V.

RESULTADOS

Resultados:
PRUEBAS

COLOR

Reactivo de Ninhidrina Azul violeta

Reactivo de Milln
Rosado

RECONOCIMIENTO
aminocidos y protena con grupo NH2
libre
o compuestos con radical Hidroxibenceno

Xantoproteica
Reactivo de biuret
Grupo SH

ladrillo
Amarillo
Violeta
Negro

aminocidos con grupo bencnico

unin peptdicas en las protenas
aminocidos azufrados

Estas pruebas hechas en el laboratorio de bioqumica de los cuales obtenemos

productos coloreados debido a su estructura peptdica y por su variedad de radicales,
podemos determinar cuantitativa y cualitativamente los tipos de aminocidos y
protenas que se encuentran en una determinada muestra, como en la clara de huevo.
VI.

CONCLUSIONES
Las protenas constituyen una de las molculas ms importantes en el
organismo ya que cumplen muchas funciones.
Al realizar las diferentes pruebas con la albmina se pudo
comprobar experimentalmente efectivamente que se trata de una protena.
Las protenas estn constituidas por aminocidos, por los cuales los mtodos
se basan en el reconocimiento de aminocidos.
Este proceso nos sirve para reconocer si existe protenas o no en ciertos tipos
de sustancias en una solucin.
Segn los resultados, ninguna sustancia muestra la mismacomposicin que la
solucin original.
Las protenas son sensibles con las sales metlicas pesadas,
precipitados.

formando

En las reacciones donde se obtuvo precipitacin se debi a un cambio en el

estado fsico de la protena , mientras que en la coagulacin se ha producido
un cambio en el estado fsico y en la estructura qumica por eso es irreversible

VII.

OBSERVACIONES
Los reactivos que se utilizaran debern estar vigentes es decir hay que ver su
fecha de caducidad de lo contrario la identificacin de las protenas y
aminocidos ser errnea.
Las pruebas se encargan de identificar aminocidos pero no identifican en
especfico existen excepciones.

 Para realizar de forma correcta las pruebas se deber realizar bien las
concentraciones de sustancias a utilizar.
Utilizar el uniforme de laboratorio es esencial para evitar cualquier accidente
debido a que los reactivos son peligrosos.
VIII.

CUESTIONARIO
DIGA CUALES SON LOS FUNDAMENTOS QUMICOS DE LAS
PRUEBAS ESTUDIADAS.
Prueba de Ninhidrina
Esta prueba es positiva tanto para protenas como para aminocidos. En
aquellos casos donde no da positiva la prueba de biuret y da positiva la de
ninhidrina, indica que no hay protenas, pero si hay aminocidos libres.
Resulta que cuando el grupo NH2 reacciona con la ninhidrina se forma un
complejo azul violeta.
Prueba de Biuret
El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina (gracias a
la presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un
compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo de
coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos
del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos. La reaccin debe
su nombre al biuret, una molcula formada a partir de dos de urea (H2NCO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da positiva esta reaccin,
comn a todos los compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos
consecutivos en sus molculas
Prueba Xantoproteica
La reaccin xantoproteica es un mtodo que se puede utilizar para
determinar la presencia de protenas solubles en una solucin,
empleando cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en
aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos aromticos,
especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se
neutraliza con un lcali, se torna color amarillo oscuro.
La reaccin xantoproteica se puede considerar como una sustitucin
electroflica aromtica de los residuos de tirosina de las protenas por el
cido ntrico dando un compuesto coloreado amarillo a pH cido.
Segn las guas qumicas es una reaccin cualitativa, ms no cuantitativa.
Por ende determina la presencia o no de protenas. Para cuantificar se usa
otra reaccin, como la de Biuret, y se hace un anlisis espectro fotomtrico
Prueba de los grupos SH

Es una prueba para identificar aminocidos azufrados y las protenas que

los contienen, se reconocen por la informacin de una coloracin negra o
gris.
Prueba de Milln
La presencia de cantidades relativamente altas de mercurio conduce a la
formacin de Nitrato de mercurio (I) Hg2 (NO3)2 el cual en un medio
fuertemente cido reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo
una coloracin roja caracterstica.
Al finalizar la reaccin, durante la cual se desprende gran cantidad
de xidos de nitrgeno, el reactivo se puede diluir con dos veces su
volumen en agua y deber ser decantada algunas horas despus
la solucin clara sobrenadante.
CULES SON LAS APLICACIONES PRCTICAS DE LA PRUEBA
Las aplicaciones de las pruebas en protenas son importantes para
reconocer si la muestra analizada presenta protenas y aminocidos, si es
as para poder analizar en s que tipo de protena presenta y darle el uso
que se requiera.
Las protenas son muy importantes el para desarrollo de la vida, para
aplicarlas a la biotecnologa para la creacin de diversos compuestos, son
tiles para los diversos campos de la ciencia.
PARA EL SIGUIENTE PENTAPPTIDO, DIGA CUALES PRUEBAS Y
PORQUE SERN POSITIVAS (ALA-VAL-GLY-GLU-LYS)
ALANINA (ALA)

Prueba
positivo

Prueba
de biuret: Da negativo
debido a que solo presenta un aminocido y no ms para poder
formar enlaces peptdicos.

Prueba xantoproteica: Resulta negativo porque no existen

grupos aromticos en su estructura molecular.
Prueba de los grupos SH: Da negativo porque en su cadena
lateral no contiene tomos de azufre

de
Ninhidrina:
resulta
debido al grupo amino

Prueba de Milln: No contienen el radical hidroxibenceno en su

estructura molecular por lo que la prueba es negativa.

VALINA (VAL)

Prueba de Ninhidrina: resulta positiva debido a la presencia del

grupo amino.
Prueba de biuret: da negativo debido a que solo presenta un
aminocido y no ms para poder formar enlaces peptdicos.

Prueba xantoproteica: Resulta negativo porque no existen

grupos aromticos en su estructura molecular.

Prueba de los grupos SH: Da negativo porque en su cadena

lateral no contiene tomos de azufre

Prueba de Milln: No contienen el radical hidroxibenceno en su

estructura molecular por lo que la prueba es negativa.

GLICINA (GLY)

Prueba de Ninhidrina: resulta positivo debido al grupo amino.

Prueba de biuret: da negativo debido a que solo presenta un
aminocido y no ms para poder formar enlaces peptdicos.

Prueba xantoproteica: Resulta negativo porque no existen

grupos aromticos en su estructura molecular.
Prueba de los grupos SH: Da negativo porque en su cadena
lateral no contiene tomos de azufre

Prueba de Milln: No contienen el radical hidroxibenceno en su

estructura molecular por lo que la prueba es negativa.

CIDO GLUTMICO (GLU)

Prueba de
Ninhidrina: es positiva
debido a la presencia del grupo amino
Prueba de biuret: da negativo debido a que solo presenta un
aminocido y no ms para poder formar enlaces peptdicos.

Prueba xantoproteica: Resulta negativo porque no existen

grupos aromticos en su estructura molecular.

Prueba de los grupos SH: Da negativo porque en su cadena

lateral no contiene tomos de azufre
Prueba de Milln: No contienen el radical hidroxibenceno en su
estructura molecular por lo que la prueba es negativa.

LISINA (LYS)

Prueba de
Ninhidrina:
resulta
positiva debido a la presencia del grupo amino
Prueba de biuret: Da negativo debido a que solo presenta un
aminocido y no ms para poder formar enlaces peptdicos.

Prueba xantoproteica: Resulta negativo porque no existen

grupos aromticos en su estructura molecular.

Prueba de los grupos SH: Da negativo porque en su cadena

lateral no contiene tomos de azufre

Prueba de Milln: No contienen el radical hidroxibenceno en su

estructura molecular por lo que la prueba es negativa.

 DESARROLLE PRUEBAS BIOQUMICAS DIFERENTES DE LAS

REALIZADAS EN CLASE PARA IDENTIFICAR AMINOCIDOS Y
PROTENAS.
REACCIN DE HOPKINS-COLE
Los derivados indol dan productos de condensacin cuando se tratan con
aldehdos aromticos en presencia de cido sulfrico o clorhdrico. El
aminocido triptfano contiene un grupo indol y por eso la reaccin es
especfica para triptfano.
Cuando se agrega el reactivo a una solucin que contenga triptfano o una
protena con triptfano, y lentamente se aade una capa de sulfrico
concentrado, se formar un anillo de color violeta en la interface de los
lquidos.
Protenas que no contengan triptfano, como la gelatina, darn negativa la
prueba. Se desconoce la naturaleza de los productos que se forman. El
triptfano puro no da la reaccin a menos que contenga indicios de iones
frricos o cpricos. Los cloratos, nitratos, nitritos y cloruros en exceso
impiden la reaccin.
REACCIN DE SAKAGUCHI
Es una reaccin de los compuestos que contengan grupo guanido o
guanidino. De ah que sea una indicacin de la presencia de arginina libre
de protenas que contengan arginina. La prueba consiste en tratar la
muestra con alfa-naftol e hipoclorito de sodio o hipobromito de sodio, con lo
cual se desarrollar un color rojo intenso. El desarrollo del color se altera o
se previene por completo por la presencia de amino, histidina o triptfano.
La arginina libre de la prueba positiva, an a concentraciones tan bajas
como de 4 microgramos por mililitro.
Fuente: E. I. Vjar (2005). Prcticas de Bioqumica descriptiva. Editorial
UniSon. Hermosillo, Sonora, Mxico. Pg. 169

Reaccin de EHRLICH
La presencia de anillos aromticos fenlicos o nitrogenados en la cadena
lateral de los Aminocidos se puede identificar mediante la reaccin con
cido sulfanlico y nitrito de Sodio por formacin de sales de Diazonio
fuertemente coloreadas permitiendo as detectar la presencia de Tirosina e
Histidina libres o formando pptidos y protenas.
REACCIN CON ACETATO DE PLOMO ALCALINO
Los Aminocidos azufrados como Metionina, Cisteina y Cistina se
reconocen por la formacin de precipitados de Sulfuro de Plomo de color

gris oscuro o negro que se forman cuando reacciona con Acetato de Plomo
en medio alcalino.
Fuente:http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basi
cas/organica/guia_9_aminoacidos.pdf

PRECIPITACIN O SEPARACION POR PUNTO ISOELECTRICO

Las molculas proteicas son polivalentes, es decir, llevan varias cargas en
forma simultnea. Aparte de los grupos carboxilo (COO-) y amino
terminales (NH3), la molcula proteica puede tener otras cargas positivas
provenientes de aminocidos diaminados. Otras cargas negativas pueden
provenir de aminocidos dicarboxlicos, aminocidos con grupos SH y
aminocidos de carcter fenlico.
El punto isoelctrico, queda definido como aquel valor de pH al que la
molcula proteica no posee carga elctrica neta ya que hay igualdad de
cargas positivas y negativas y es incapaz de desplazarse en un campo
elctrico.
Cada protena y aminocido tiene un punto isoelctrico (pH) caracterstico
que depende del nmero de grupos ionizables y de sus constantes de
disociacin. 5 La menor solubilidad en el pH igual al punto isoelctrico, se
debe a que como la molcula no tiene carga elctrica neta, no existen
repulsiones electroestticas entre molculas de protenas vecinas, lo cual
conduce a la formacin de agregados insolubles.
Puesto que las diferentes protenas poseen valores de pH, tambin
diferentes, con frecuencia pueden separarse, unas de otra, mediante
precipitacin isoelctrica. La menor solubilidad de una protena en su punto
isoelctrico puede ser utilizado como un mtodo conveniente para
determinar este punto.
Fuente:http://academico.upv.cl/doctos/KINE-7011/%7BB1987286-67F34C1E-B40E-59C33C389AE4%7D/2012/S2/GUIALABN%C2%B02-2012.pdf

DIBUJE LOS 20 L--AA Y CLASIFQUELOS SEGN LA POLARIDAD DE

SUS GRUPOS R.

Fuente: A. Angulo, A. R Galindo (2011). Bioqumica. Universidad Autnoma de

Sinaloa (Culiacn, Sinaloa, Mxico). Pg. 110

EXPLIQUE 4 PROPIEDADES DE LAS PROTENAS

DESNATURALIZACIN

Se conoce como desnaturalizacin, la prdida de las estructuras de orden

superior de la protena y por tanto su funcin.
Los agentes fsicos o qumicos que ocasionan la ruptura de interacciones
no covalentes y la de los puentes disulfuro si estn presentes, se
denominan agentes desnaturalizantes.
La desnaturalizacin no incluye la prdida del nivel primario, este solo se
pierde por hidrolisis de los enlaces peptdicos, el polmero deja de existir y
los aminocidos quedan libres en el medio.

Fuente: L. C. Rosales (2007). Bioqumica Humana. Editorial Ciencias

Mdicas. La Habana, Cuba. Pg. 67

ESPECIFICIDAD
La especificidad se refiere a su funcin; cada una lleva a cabo una
determinada funcin y lo realiza porque posee una determinada estructura
primaria y una conformacin espacial propia; por lo que un cambio en la
estructura de la protena puede significar una prdida de la funcin.
Adems, no todas las protenas son iguales en todos los organismos, cada
individuo posee protenas especficas suyas que se ponen de manifiesto en
los procesos de rechazo de rganos trasplantados. La semejanza entre
protenas son un grado de parentesco entre individuos, por lo que sirve
para la construccin de rboles filogenticos.
Fuente: http://www.uv.es/tunon/pdf_doc/proteinas_09.pdf

SOLUBILIDAD
Las protenas son solubles en agua cuando adoptan una conformacin
globular. La solubilidad es debida a los radicales (-R) libres de los

aminocidos que, al ionizarse, establecen enlaces dbiles (puentes de

hidrgeno) con las molculas de agua. As, cuando una protena se
solubiliza queda recubierta de una capa de molculas de agua (capa de
solvatacin) que impide que se pueda unir a otras protenas lo cual
provocara su precipitacin (insolubilizacin). Esta propiedad es la que hace
posible la hidratacin de los tejidos de los seres vivos.
CAPACIDAD AMORTIGUADORA
Las protenas tienen un comportamiento anftero, al igual que los
aminocidos que las forman. Debido a que pueden comportarse como
cidos o como bases, liberando H+ del medio, las protenas son capaces
de regular y mantener estable las variaciones de pH del medio en el que se
encuentran.
Las protenas pueden funcionar como uno de los sistemas buffers ms
importantes de la sangre y los tejidos y su capacidad amortiguadora
procede de los grupos disociables que poseen los aminocidos que las
forman.
Fuente:http://www.fmed.uba.ar/depto/bioqhum/TP%20Nro%202%20Buffers%20biologicos-%20Acidosis%20y%20Alcalosis.pdf

BIBLIOGRAFIA
E. I. Vjar (2005). Prcticas de Bioqumica descriptiva. Editorial UniSon.
Hermosillo, Sonora, Mxico. Pg. 169
A. Angulo, A. R Galindo (2011). Bioqumica. Universidad Autnoma de Sinaloa
(Culiacn, Sinaloa, Mxico). Pg. 110
L. C. Rosales (2007). Bioqumica Humana. Editorial Ciencias Mdicas.
Habana, Cuba. Pg. 67

La

http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/organic
a/guia_9_aminoacidos.pdf
http://academico.upv.cl/doctos/KINE-7011/%7BB1987286-67F3-4C1E-B40E59C33C389AE4%7D/2012/S2/GUIALABN%C2%B02-2012.pdf
http://www.uv.es/tunon/pdf_doc/proteinas_09.pdf
http://www.fmed.uba.ar/depto/bioqhum/TP%20Nro%202-%20Buffers
%20biologicos-%20Acidosis%20y%20Alcalosis.pdf

http://www.biorom.uma.es/contenido/av_biomo/Mat2.html