UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE MEDICINA
E.A.P. ENFERMERA
DEPARTAMENTO ACADMICO DE CIENCIAS DINMICAS
CURSO BIOQUMICA 2016 II
PRCTICAS N5 y6
DETERMINACIN DEL COLESTEROL TOTAL, HDL, LDL Y TRIGLICERIDOS
COMPETENCIAS:
- El alumno explica la importancia del colesterol total y las fracciones HDL y LDL en el
metabolismo humano y su relacin con diversas patologas.
- Explica el fundamento del mtodo y determina la concentracin de colesterol total, HDL y LDL
en una muestra problema mediante el mtodo enzimtico colorimtrico.
- Demuestra experimentalmente la concentracin de triglicridos srico de una muestra problema
mediante el mtodo enzimtico colorimtrico.
El colesterol se sintetiza sobre todo en el hgado, pero tambin en la piel, intestino, glndulas
suprarrenales, el ovario, el testculo, etc. Todas las sustancias que en el organismo producen Acetil
CoA pueden ser precursoras del colesterol (cidos grasos, glucosa, algunos aminocidos.) El
colesterol es esencial para el funcionamiento normal del organismo ya que es componente
estructural esencial de membranas de todas las clulas animales.
Las fuentes dietticas aportan tan slo de 150 a 300 mg diarios mientras que el hgado sintetiza 1.5
g al da. De hecho el exceso de carbohidratos y protenas de la dieta se utiliza para producir
molculas de acetato, que posteriormente sirven para producir colesterol y cidos grasos.
El colesterol es un constituyente primario de las lipoprotenas de baja densidad (LDL), pero
tambin se encuentra en lipoprotenas de alta densidad (HDL) y en las de muy baja densidad
(VLDL), las cuales lo transportan en la sangre. Clnicamente es importante, ya que existe una
relacin entre la concentracin del colesterol plasmtico y la presencia de problemas cardacos
coronarios.
Las concentraciones sricas de colesterol disminuyen en: desnutricin, esteatorrea, hepatitis,
hipertiroidismo, personas con infeccin aguda y anemia, cncer. Las concentraciones sricas de
colesterol aumentan en: hiperlipoproteinemia, cncer de la cabeza del pncreas, hipotiroidismo,
sndrome nefrtico, el tercer trimestre del embarazo, predisposicin gentica.
Los triglicridos o triacilglicridos son acilgliceroles, un tipo de lpidos, formados por una molcula
de glicerol, que tiene esterificados sus tres grupos hidroxilo por tres cidos grasos, saturados o
insaturados. Los cidos grasos estn unidos al glicerol por el enlace ster. Son transportados en la
sangre por las lipoprotenas en diferente proporcin y concentracin. Los valores normales varan
ampliamente con la edad desde 20 mg/dL pero es deseable que su concentracin sea menor a 150
mg/dL.
FUNDAMENTOS :
- Determinacin Colesterol Total
CEH
steres de colesterol + H2O
Colesterol + cidos grasos.
Colesterol oxidasa
Colesterol + O2
Colesterol-4-en-3-ona + H2O2
Peroxidasa
2H2O2 + 4-amino-antipirina + fenol
Quinonimina + H2O

El reactivo enzimtico para colesterol contiene lipasa, colesterol oxidasa, peroxidasa, 4-AF y fenol.
- Determinacin de colesterol-HDL
Se realiza la precipitacin de las lipoprotenas LDL y VLDL adicionando al suero puro una
solucin de cido fosfotngstico en cloruro de magnesio. Luego de la centrifugacin, en el
sobrenadante se determina el colesterol de la fraccin HDL con el sistema colorimtrico de
colesterol total y se lee a 505 nm
- Determinacin de Triglicridos
Triglicridos
Glicerol + ATP
Glicerol 1 fosfato + O2
2H2O2 + 4-AAP + DHBS

lipasa

Glicerol + cidos grasos

glicerol kinasa

Glicerol 1 fosfato + ADP

G1P oxidasa
peroxidasa

DAP + H2O2
Quinona coloreada + 2H2O

PARTE EXPERIMENTAL:
1.- PREPARACIN DE LA MUESTRA PROBLEMA (SUERO)
Se extrae 5ml. de sangre (con sistema al vaco, aguja libre o jeringa) y separar el suero previa
centrifugacin. Hacer una dilucin 1/10 del suero, es decir, poner en un tubo de ensayo 0.3 mL. de
suero y 2,7 mL. de agua destilada, mezclar hasta homogenizar, de esta manera se obtiene el suero
diludo.
2.- PRECIPITACIN LDL y VLDL (en el tubo ms pequeo)
Para la determinacin de colesterol HDL, hacer la precipitacin: colocar en un tubo 1 ml de suero
puro y solicitar al profesor de prctica 50 uL de reactivo precipitante (Ac.fosfotungstico - Mg)
mezclar suave y constantemente durante 20 segundos, dejar reposar el tubo por 10 minutos y
posteriormente centrifugar a 10 minutos a 4000 rpm, para obtener el sobrenadante.
3.- DETERMINACIN DE COLESTEROL TOTAL,COLESTEROL HDL y LDL
Preparar la siguiente batera de tubos: Blanco (B), el Estandar (St) y Muestra Problema colesterol,
el suero diludo (MpCT) y Muestra problema HDL (MpHDL), el sobrenadante.
TUBO
mL. Suero diluido 1/10
mL. Calibrador 150 mg/L
mL Sobrenadante para HDL
mL. Reactivo enzimtico
colesterol
Adicionar mL. Agua

B
-

St
-

0.2
-

MpCT
0.2
-

MpHDL

0.5

2.0
2.0
2.0
2.0
0.2
Mezclar e incubar 37C por 10 min.

Terminado el tiempo, leer las absorbancias de los tubos a 505 nm.

Determinar la concentracin de la muestra problema restando la lectura del tubo banco a las
lecturas de los otros tubos y aplicando la siguiente frmula:

[MP mg/dL] = DOmp x Wst x 100 x Volmp

DOst VR Volst
Donde:
D.O. es la absorbancia restada del blanco tanto para la mp como st;
Wst es el peso del estndar en el tubo de reaccin de color en mg
VR es el volumen real de muestra que est en el tubo de reaccin de color.
Volmp, es el volumen total del tubo de reaccin de la muestra problema (CT o HDL)
Volst, es el volumen total del tubo de reaccin del calibrador o estndar.
La concentracin VLDL = TAG/ 5
La concentracin de Colesterol LDL = CT (HDL + VLDL)
3.- DETERMINACIN DE TRIGLICRIDOS
Preparar la siguiente batera de tubos :Blanco (B), el Estandar (St) y Muestra Problema (MP): y
emplear el suero diludo 1/10.
TUBO

St

MP

mL Suero diluido 1/10

mL estndar TAG 90 mg/L
mL
Agua
mL Reactivo enzimtico triglicridos

0.2
1.0

0.2
1.0

0.2
1.0

Mezclar e Incubar en bao mara a 37C por 10 minutos. Leer en el espectrofotmetro a 505 nm,
la concentracin de Triglicridos (mg/dL o mg%) en la muestra problema (suero diludo) se calcula
mediante la siguiente frmula:
[ Triglicridos mg/dL] =

[ St ] x DO mp x Fd
DOst

RANGOS DE REFERENCIA:
Colesterol total: 100 a 200 mg%
HDL: Riesgo: valores menores a 45mg/dL en varones y a 55 en mujeres
LDL: Riesgo bajo valor menor a 129 mg/ dL
Riesgo moderado entre 130 a 189 mg/dL
Riesgo alto valor mayor a 190 mg/dL
Triglicridos: 20 a 150 mg/dL
CUESTIONARIO:
1.- Cul es la lipoprotena aterognica?
2.- Cul lipoprotena tiene un efecto protector, por qu?
3.- Cmo varan los niveles de colesterol total en sangre segn la edad?
4.- Cules son los ndices de riesgo aterognico?
BIBLIOGRAFA:
- B Bohinski, R.C. 1991. Bioqumica Addison- Wesley Iberoamericana S.A. Wilmington,
Delaware, USA.
- Lehninger, A.L. 1989. Bioqumica. Las Bases Moleculares de la Estructura y Funcin Celular.
Ediciones Omega S.A. Barcelona Espaa. ohinski, R.C. 1991. Bioqumica Addison- Wesley
Iberoamericana S.A. Wilmington, Delaware, USA.