Universidad Politcnica Salesiana

Ingeniera en Biotecnologa de los RR.NN

Curso: 6to semestre B

Alumna: Johana Lozano

Materia: Biotecnologa Vegetal

Tema:

Protocolo grfico de micropropagacin de Coffea arbiga (caf).

Fecha: 22/11/2016

-El medio debe contener Tiamina 30 M., KIN 20 M

y 2,4 D 20 M para inducir a callognesis.
-Se debe incubar en la oscuridad a 25C (40-45 das)
para la formacin del callo (Sondahl, Nakamura, &
Sharp, 1981).
- Luego se va a inducir la masa callognica a embriones
somticos, que pueden desarrollarse de 100 a 200.
(AIA 23 M y ZEA 15 M) (Garca & Menndez,
1987).
-Finalmente se induce a la brotacin en donde bajamos
los niveles de auxinas y citoquininas (AIA 13 M Y
ZEA 9 M). Presencia de luz (germinacin del
embrin).

Se debe tomar en cuenta:

-El estado fisiolgico y edad de la planta
(Planta de caf joven y en estado generativo).
-Condiciones sanitarias (Planta de caf libre de patgenos).
-La planta debe ser recolectada en verano, cuando existe
brotacin activa en las yemas.
-Caractersticas agronmicas deseables (color, tamao, etc).
-Temperatura 25C y HR 75% para evitar patgenos
(Observar y mantener a la planta 1 mes en campo) (Levitus,
Echenique, Rubinstein, Hopp, & Mogrinski, 2010).

PROBLEMA: Clorosis
CAUSA: falta de calcio y boro en las sales del medio
de cultivo.
SOLUCIN: cambiar las concentraciones de macro y
micronutrientes, aumentar calcio y boro.

-Se cortan 1mm2, debe excluirse la nervadura, los mrgenes y las porciones apicales y
basales de la lmina foliar (Dublin, 1980)
-Protocolo de desinfeccin: sumergir al explante en una solucin con detergente al
1% por 5 min y enjuagas con agua destilada, si se dispone de agua ozonizada, se
recomienda una inmersin del explante de 5 min. Uso de antibiticos y fungicidas
sistmicos en una solucin de 1,6% de NaClO por 30 min y finalmente enjuagar tres
veces con agua estril doblemente destilada (Sondahl, Nakamura, & Sharp, 1981).
Nota: no usar etanol (70%), es toxico para las hojas de caf

Obligatoriamente se debe usar un sistema auttrofo

hidropnico.
- Aumentar la Humedad relativa, con riego continuo de las
plantas cada cinco horas al da o usar nebulizadores.
-Envolver en plstico, ayuda a que las plantas vuelvan a ser
auttrofas, reducir poco a poco la HR (riego dos horas al
da).

-Fotoperodo: 8horas luz/16 horas oscuridad.

-Usar carbn activado.
-AIA 23 M y ZEA 18 M.
Reducir las sales MS
PROBLEMA: dificultad para formar races.
CAUSA: fotosensibilidad.
SOLUCIN: aumentar el footperio 5horas luz/19 horas
oscuridad, bajar la concentracion de las sales en un 25%.

-Se incrementa la cantidad de cido giberlico a 20 M

para la elongacin de los tallos de la planta de caf.
-Fotoperiodo: 8horas luz/16 horas oscuridad.

-Se hacen subcultivos para la multiplicacin convencional, no se puede hacer mas de 10 repeticiones porque
hay riesgo de variacin somaclonal. Las plantulas de caf por embriones somticas varan entre 1-10 por
subcultivo (Dublin, 1980).
- El medio debe tener sacarosa 0,015 M, presencia de luz.
-Se hacen pruebas microbiolgicas antes de pasar al SIT.
-Tres ciclos de cuatros horas al da con un tiempo de contacto entre el medio lquido y los explantes de cinco
minutos (Durante un da).
PROBLEMA: Vitrificacin
CAUSA: excesiva HR, falta de ventilacin.
SOLUCIN: adicionar filtros de aire para mejorar el intercambio gaseoso, mejor paso del O 2 y CO2.
Tambin se puede reducir la temperatura a 22C.

Referencias Bibliogrficas.
Dublin, P. (1980). Multiplicacin vegetativa de caf. Tokyo, Japn: Papers Collage Gen. Edu. Universidad de Tokyo.
Garca, E., & Menndez, A. (1987). Embriognesis somtica a partir de explantes foliares de cafeto. Mexico: Interamericana, S.A.
Levitus, G., Echenique, V., Rubinstein, C., Hopp, E., & Mogrinski, L. (2010). Biotecnologa y Mejoramiento Vegetal II. Buenos Aires, Argentina: Ediciones: INTA.
Sondahl, M., Nakamura, T., & Sharp, W. (1981). Propagacin in vitro del caf. Nueva Jersey, Estados Unidos: Cinnamison.