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DETERMINACIN ANTICUERPOS ANTI-V.I.H. (ELISA)
OBJETIVO
Determinacin de anticuerpos anti-VIH por el mtodo de ELISA.
FUNDAMENTO
El procedimiento estndar para la deteccin de anticuerpos anti-VIH es el ensayo
inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA, por sus siglas en ingls), que
consiste en serie de pruebas sanguneas a fin de diagnosticar la infeccin por el
virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), responsable del sndrome de
inmunodeficiencia adquirida (SIDA).
Cabe mencionar, que segn los especialistas la medicin de anticuerpos en
plasma o suero medianteELISA es el mtodo de rutina ms sensible para la
deteccin de anticuerposanti-VIH.
El ELISA se basa e el uso de antgenos o anticuerpos marcados con una enzima,
de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunolgica
como enzimtica. Al estar uno de los componentes (antgeno o anticuerpo)
marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte (inmunoadsorbente) la
reaccin antgeno-anticuerpo quedar inmovilizada y, por tanto, ser fcilmente
revelada mediante la adicin de un substrato especifico que al actuar la enzima
producir un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un
espectrofotmetro o un colormetro. Los diferentes tipos de ELISA son los que se
enumeran a continuacin:
Anticuerpos marcados:
ELISA Directo
ELISA Indirecto
ELISA sndwich
Doble (DAS)
o Heterlogo (HADAS)
o
o
o
o
Antgeno marcado
o ELISA competitivo
GUA DE ESTUDIO
DIAGRAMA DE LA TCNICA
Extraccin
sangunea.
Dejar coagular
Agregar solucin
parado Stop.
Leer la micro placa.
Centrifug
ar
Incubar.
Mover, incubar.
Agitar y lavar.
Agregar solucin de
antgeno conjugado
con HRP a cada
pocillo VIH.
Control
positivo,
negativo, muestra.
Espcimen diluyente.
TCNICA
1. Extraer 3 ml de sangre, dejar coagular y centrifugar durante 5 minutos a 3,000
r.p.m.
2. Separar el suero.
3. Seleccionar el nmero de micropozos a utilizar, de acuerdo al nmero de
muestras y controles a probar
Preparacin del Reactivo
1. Mantener los reactivos a temperatura ambiente y mezclar suavemente.
control
Negativo <1.00
Positivo >1.00
Un resultado negativo indica la ausencia o la no posibilidad de detectar
anticuerpos anti-VIH I/II en la muestra, Un resultado positivo es evidencia
presuntiva de la presencia de anticuerpos contra el VIH-1 y / o VIH-2 en la
muestra.
OBSERVACIONES
La determinacin anticuerpos ANTI-V.I.H. (ELISA) Se aplic para la deteccin del
virus de inmunodeficiencia humana, este tipo de pruebas se realiza de una
manera rpida para la deteccin de anticuerpos provocados por este virus y as
poder detectar la infeccin en su fase inicial, s la muestra resulta positiva, se debe
proseguir a relizar una prueba de confirmacin que podra ser el wester blot.
Tcnica de ELISA
Tira reactiva
RESULTADO
Negativo
CONCLUSIN
Se realiz la tcnica ELISA para la determinacin de anti-VIH en el cual se obtuvo
un resultado negativo, al aplicar esta tcnica pueden haber falsos positivos, se
recomienda proceder a realizar otras pruebas para verificar resultados.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Fundamentos y tipos de Elisa. Consultado el 20 de noviembre del 1026.
http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-ELISA-protocolos.pdf