Determinacin de TT (Tiempo de trombina)

Objetivos:
1. Describir el fundamento del mtodo.
2. Identificar la utilidad diagnostica del tiempo de trombina.
3. Ejecutar la tcnica.
Introduccin:
La trombina se parece a su precursora, la protrombina, aunque su peso
molecular sea inferior. Es la enzima activa que transforma el fibringeno en
fibrina y n se encuentra en la sangre perifrica. Es una sustancia muy potente,
capaz de transformar en fibrina cantidades de fibringeno equivalentes a
muchos cientos de veces su propio peso, la unidad de trombina es la cantidad
que coagula 1 ml, de solucin estndar de fibringeno en 15 segundos de 38c,
durante la trasformacin del fibringeno en fibrina, gran parte de la trombina
desaparece. La accin de la trombina sobre el fibringeno parece consistir en
la separacin de un pptido, deja libre una glicina terminal. Puesto que la
trombina es una sustancia potentsima, es evidente que el organismo debe
poseer sistemas iguales potentes para inactivar o imitar su actividad.
Fundamento:
La trombina es una enzima que tiene una accin altamente especfica sobre el
fibringeno, transformndolo en fibrina, aun sin la presencia de calcio. La
velocidad de coagulacin con trombina es conocida como tiempo de trombina y
es inversamente proporcional a la cantidad y funcionalidad del fibringeno y
directamente proporcional a la accin de inhibidores de la trombina, como la
heparina.
Material y aparatos:
Tubos de ensayo 10 x 75 mm
Pipetas de 1.0 ml
Pipeta Pasteur
Equipo para puncin venosa
Tubos al vaco con citrato
Gradilla
Cronometro
Bao mara a 37 C
Centrifuga
Reactivos:
Trombina humana a 4U/ml
Material Biolgico:
Sangre Venosa obtenida con citrato de sodio.

Metodologa:
1. Todas las muestras se deben realizar siempre por duplicado.
2. Antes de transcurridos 30 minutos de la extraccin, centrifugar la sangre a
750 rpm, durante 5 minutos.
3. Separar el plasma y conservarlo en refrigeracin hasta su proceso.
4. Incubar durante 2 minutos, a 37 C, la solucin de trombina necesaria para
las pruebas que se vana realizar.
5. En un tubo de ensayo incubar a 37 C 0.1 ml. Del plasma problema, durante
2 minutos.
6. Agregar 0.1 de la solucin de trombina de 4 U/ml y echar a andar
simultneamente el cronometro.
7. Al iniciarse el coagulo, el cronometro se detendr anotar el tiempo, en
segundos en que esto ocurri.
8. El tubo se deja en reposo y al cabo de 1 minuto se observa la integridad del
coagulo.
Comentarios:
El T.T. es un buen mtodo para poder investigar trastornos cualitativos y
cuantitativos del fibrinogeno, o la presencia de inhibidores de la conversin
fibrinogeno-fibrina, como la heparina.
En caso de no disponer de trombina de 4U/ml, se puede utilizar una
concentracin de 5000U/ml, y hacer disolucin necesaria con solucin salina
isotnica para obtener una concentracin final de 5U/ml.
Valores de referencia:
Es variable para cada laboratorio, de acuerdo con el reactivo, el equipo
utilizado y la concentracin de la trombina, por lo que es necesario establecer
los valores de referencia en lada laboratorio. Generalmente, se estandariza la
concentracin de trombina y se obtienen en plasmas normales los siguientes
valores:
Tiempo de trombina: 10 a 15 segundos
Cualquier diferencia de lo por lo menos 5 segundos respecto al testigo normal,
se considera significativa.
Interpretacin:
El TT (tiempo de trombina) es una prueba simple utilizada para determinar la
formacin de fibrina en el diagnstico de trastornos de la coagulacin y en el
examen de la efectividad de la terapia fibrinoltica. El TT puede verse
incrementado en:

Anormalidades del fibringeno: anormalidades cualitativas

(disfibrinogenemia) o cuantitativas (hipofibrogenemia congnita y
afibrinogenemia, hipofibrogenemia adquirida como en la enfermedad
heptica, coagulacin diseminada intravascular, fibrinolisis).

La presencia de antitrombinas, tanto terapeuticas (heparina, hirudina,

argatroban) o anormales (protenas de mieloma inhibidoras de la
polimerizacin de los monmeros de fibrina). El TT es normal en dficit
de factor XIII (factor estabilizante de fibrina).

Bibliografas:
http://www.clinicord.com/wp-content/uploads/2016/04/Tiempo-trombina-TT.pdf
http://pruebasdelaboratorioenhemostasia.blogspot.mx/2011/11/tiempo-detrombina.html