UNIVERSIDAD EVANGELICA BOLIVIANA

UNIVERSIDAD EVANGLICA
BOLIVIANA
FACULTAD: CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA: BIOQUMICA Y FARMACIA

CONTADOR CELULAR AUTOMTICO

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Santa Cruz, junio del 2015

ANLISIS INSTRUMENTAL
CONTADOR CELULAR AUTOMTICO

1. Un poco de historia sobre los contadores hematolgicos.

El primer contador celular hematolgico conocido fue desarrollado por
Moldavan en 1934. Se trataba de un contador que tena un tubo capilar
por el que se hacan pasar las clulas teidas.
El capilar estaba puesto sobre un microscopio ptico equipado con un objetivo
que tena un detector fotoelctrico que registraba el paso de las clulas por los
cambios de luz que reciba. Este aparato presentaba muchos problemas, como
que el capilar se obstrua con facilidad. El mtodo capilar de Moldavan, ya muy
perfeccionado, ha sido usado en aparatos como el autoanalizador Technicon R
En 1941, Kielland patent un modelo similar al de Moldavan.
En 1953, Crosland y Taylor inventaron una cmara de flujo. La muestra
se introduca en un fluido de arrastre a travs de un capilar que se
estrechaba y centraba el flujo.
Tambin en 1953, Parker y Horst describieron el primer contador
diferencial hematolgico. Usaba hemates teidos en rojo, leucocitos en
azul, luz visible y detectores para luz roja y azul.
En 1956, Coulter describe pblicamente su contador en Chicago
(EE.UU.).
En 1965,

Katmensky

expone

la

posibilidad

de

la

medicin

multiparamtrica de la luz dispersada.

En 1967, Van Dilla detall el primer citmetro de flujo (usaba la cmara
de flujo de Crosland-Taylor).

2. INTRODUCCIN
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Hasta hace unos 25 aos el recuento celular sanguneo se efectuaba

nicamente de forma manual, mediante una cmara cuentaglbulos.
Hoy da, los recuentos sanguneos se efectan mediante contadores
automticos. La automatizacin mejora la precisin y exactitud de las
determinaciones y logra una mayor rapidez en la realizacin y presentacin de
los resultados.
Los aparatos disponibles en el mercado varan considerablemente en
capacidad y complejidad. Los ms sencillos pueden identificar y contar
hemates, leucocitos y plaquetas. Los ms sofisticados llegan a discriminar
entre tipos de leucocitos y pueden identificar clulas portadoras de cualquier
molcula para la que se disponga de un anticuerpo monoclonal especfico.

Elementos Bsicos de un contador hematolgico

Diluidor

Cmara de flujo

Dispositivo de
medida
transductor

Sistema que diluye la sangre a la concentracin

adecuada para el tipo de clulas de que se trate.
Lugar por donde fluye la muestra diluida de tal forma que
las clulas pasen de forma aislada. Debe disponer de un
sistema de aspiracin para hacer pasar la muestra a
travs de dicha cmara.
Parte del sistema, acoplada a la cmara de flujo, que
detecta el paso de las clulas.
Elemento donde se convierte en datos electrnicos, las

Sistema

seales recogidas por el dispositivo de medida.

Parte que procesa los datos recibidos desde el

informtico
Lectora

transductor.
Sistema encargado de mostrar los resultados. Suele

impresora

constar de una pantalla y de una impresora.

Los contadores automticos detectan el paso de la clula aprovechando la

interferencia que sta produce al paso de la corriente elctrica o al paso de la
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luz. En el primer caso se trata del mtodo de la resistencia elctrica y en el

segundo de los mtodos pticos.
2.1 Mtodo de la resistencia elctrica.
Es conocido como mtodo Coulter, ya que fue Wallace H. Coulter quien
lo describi en 1956. Se basa en que las clulas sanguneas conducen
la electricidad menos que el lquido diluyente.

Para realizar el recuento, la sangre es diluida con un diluyente

conductor isotnico (conductor para que conduzca la electricidad e
isotnico para que no se rompan las clulas). Posteriormente la sangre
diluida pasa a travs de la cmara de flujo. Esta Cmara presenta un
pequeo orificio o apertura que hace que la mayora de las clulas
pasen alineadas y aisladas. A los lados del orificio se encuentran dos
electrodos de platino entre los que se establece una corriente elctrica
constante.

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Si el lquido es atravesado nicamente por el lquido diluyente, la

resistencia elctrica medida por los electrodos es mnima y constante,
pero cuando una clula pasa por el orificio se produce un aumento de la
resistencia elctrica y un cambio de potencial entre los electrodos que
es recogido por el transductor.
Cambio de resistencia = Impulso
El nmero de seales elctricas generadas indica el nmero de clulas
presentes.
La amplitud del impulso elctrico es proporcional al tamao y
complejidad de la clula. Eso significa que una clula pequea, como
una plaqueta, genera un pequeo cambio de resistencia, mientras que
los leucocitos, por ser mayores y ms complejos, originan un cambio
mayor de resistencia. Los eritrocitos, dado su tamao mediano,
producen un impulso intermedio.
Los impulsos registrados pasan al discriminador, que los clasifica por
tamao. Los distintos tamaos de los impulsos suministran informacin
de las diversas clulas.

2.2 Mtodos pticos o de dispersin lumnica

Los mtodos pticos para el recuento automtico consisten en hacer
pasar las clulas individualmente a lo largo de una cmara de lectura,
sobre la que incide un haz de luz, y analizar la dispersin de la luz.
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Esta dispersin es recogida por sensores especficos y depender del

tamao, de la forma y del ndice de refraccin celular.
Los mtodos pticos puedes ser de dos tipos:
a) Mtodo de campo oscuro
b) Mtodo de rayo lser
A. Mtodo de campo oscuro
El procedimiento consiste en hacer pasara las clulas por una
cmara de flujo y atravesar una zona sobre la que incide una haz de
luz homognea.
Cuando no pasan las clulas por la zona de incidencia del haz
lumnico, ste no se desva e incide sobre un disco oscuro que se
encuentra delante de un fotodetector. El disco absorbe toda luz y no
deja que llegue al fotodetector.
Si el rayo de luz choca con una clula que est atravesando su zona
de incidencia, la luz es dispersada y el disco de campo oscuro no
absorbe toda la luz, sino que parte de ella llega al fotodetector.
Llegara ms o menos dependiendo de la dispersin provocada por la
clula. La dispersin ser mayor o menor en funcin del tamao,
forma e ndice de refraccin de la clula.
El recuento, por tanto, tendr en cuenta el nmero de veces que
incide la luz en el fotodetector y la intensidad de la dispersin
lumnica producida.

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B. Mtodo de rayo lser

Las clulas se

hacen pasar por una cmara de flujo de pequeo

dimetro para que lo hagan aisladamente. Esta cmara, en un punto

concreto, es atravesada por un rayo lser que incide sobre un sensor.
Cuando una clula se interpone en el paso del rayo lser, ste se
desva y no incide sobre el sensor. De esta forma se cuanta el nmero
de clulas que pasan por la cmara de flujo.
El procedimiento se completa con otros sensores, llamados de
dispersin, que son estimulados por los rayos desviados.

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3. Tipos de contadores
Todos los contadores existentes en el mercado son capaces de efectuar el
recuento de las clulas que pasan por su cmara de flujo y discriminar entre
hemates, leucocitos y plaquetas. Sin embargo, existen diversos tipos de
contadores en funcin de su distinta capacidad para identificar poblaciones
leucocitarias.
En todos los contadores la muestra es diluida en funcin del tipo de clula
que se vaya a contar; como se trata de conseguir que las clulas pasen de
modo aislado (de una en una_) por el dispositivo de medida, las diluciones
han de ser mayor cuanta mayor sea la concentracin de clulas de la
muestra. As, para contar hemates la dilucin debe ser muy superior a la
que se realiza para contar leucocitos.
A su vez, cada elemento forme requiere un liquido de dilucin especfico;
para el recuento de hemates se requiere un liquido isotnico y el recuento
de leucocitos un liquido que hemolice los hemates.

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Existen contadores de una, de tres y de cinco poblaciones y el citmetro de

flujo.

Contadores de una poblacin

Estos aparatos cuentas hemates, leucocitos y plaquetas. Utilizan
dos canales, uno para el recuento de hemates y plaquetas y otro
para el recuento de leucocitos.
El discriminador del primero canal no cuenta los impulsos de las
clulas grandes y el discriminador del segundo canal solo registra los
impulsos de las clulas grandes. Su dispositivo de medida suele ser
de resistencia elctrica.

Contador de tres poblaciones

Son los que distinguen tres poblaciones leucocitarias: pequeas
(linfocitos), medianas (monocitos, eosinofilos, basfilos y linfocitos
grandes) y grandes (neutrfilos).

Contadores de cinco poblaciones

Estos contadores hacen el recuento diferencial de cinco poblaciones
leucocitarias:

linfocitos,

monocitos,

basfilos,

eosinofilos

neutrfilos. Adems cuentan plaquetas y hemates y determinan la

concentracin de hemoglobina.

Citmetro de flujo
Es un contador basado en el mtodo de dispersin de rayo laser, que
tiene adems unos detectores con filtros incorporados que slo
detectan luz fluorescente. Las clulas son trasportadas en un flujo de
corriente de forma que pasan una a una por la zona donde inciden el
rayo lser.
En sentido amplio todos los contadores automticos estudiados se
pueden considerar citmetros de flujo, pero en la prctica, este
trmino se reserva para el aparato que tiene incorporados detectores
de fluorescencia.
La posibilidad de medir fluorescencia permite detectar cualquier
molcula para la que se disponga de un anticuerpo monoclonal
especfico; para ello el anticuerpo se asocia a un fluorocromo y se
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aade a la muestra en estudio. Al incidir la luz lser sobre la muestra

se produce fluorescencia que es recogida por los detectores
especficos, si el anticuerpo asociado al fluorocromo se uni a la
molcula buscada (su antgeno)
Los fluorocromo mas empleados son tres: isotiocianato de
fluorescena que una fluorescencia verde, ficoeritrina que da una
fluorescencia naranja y ficocianina que una fluorescencia roja.
El citmetro de flujo es el nico aparato que permite diferencia las
subpoblaciones de linfocitos ere s, de modo que discrimina en
linfocitos T y B y dentro de los linfocitos diferencia entre T4 y T8.
4. Presentacin de resultados
Los resultados de los recuentos pueden ser expresados por los contadores
como listados de cifras, polgono de frecuencias y diagramas de dispersin.
Todos ellos pueden ser presentador en la pantalla el propio aparato,
enviarse a una impresora y almacenarse en una base de datos
5. Causas de error de los recuentos automticos
Si el manejo de las muestras es correcto y el mantenimiento y calibrado del
aparato son adecuados, el error inherente a este tipo de recuento es menor
al 1%.

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6. Marcas de aparatos utilizados en Santa Cruz

7. Bibliografa

Fundamentos y tcnicas de anlisis hematolgicos y citolgicos.

EDITEX

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