UNIVERSIDAD DEL CAUCA

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

PROGRAMA DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGA1
VI SEMESTRE
GUA No 6
FERMENTACIN LCTICA
1. INTRODUCCIN
Las bacterias lcticas son un grupo de bacterias Gram-positivas unidas por una amplia
serie de caractersticas morfolgicas, metablicas y fisiolgicas. Se describen como
bacterias Gram positivas, no esporuladas, cocos y bacilos anaerbicos y microaerfilos,
catalasa-negativa, carentes de citocromos y productoras de cido lctico como principal
producto de la fermentacin de carbohidratos.
Las bacterias lcticas son microorganismos extremadamente exigentes adaptados a
sustratos orgnicos complejos; requieren cidos aminados, pptidos, vitaminas, sales y
glcidos fermentables. Los requerimientos en vitaminas son considerados especficos
para cada especie en particular adems, debido a la composicin del medio, ciertas
sustancias pueden reducir o eliminar los requerimientos de una u otra vitamina.
Las bacterias lcticas se encuentran en ambientes naturales caractersticos y
restringidos. Algunas estn asociadas a plantas y crecen a expensas de los nutrientes
liberados por muerte y descomposicin de los tejidos vegetales, tambin se encuentran
en alimentos y bebidas preparadas con materiales vegetales como: pepinillo, repollo,
forrajes, ensilados, vino y cervezas. Otras son miembros de la flora normal de los
animales y se encuentran en un nmero considerable en la nasofaringe y el tracto
intestinal. Un tercer hbitat caracterstico de las bacterias lcticas es la leche a la que
tienen acceso durante el ordeo o a partir de materiales vegetales.
1.1. METABOLISMO ENERGTICO
Todas las bacterias lcticas tienen un metabolismo fermentativo estrictamente
sucroltico, utilizando glcidos y produciendo exclusivamente cido lctico (bacterias
homolcticas estrictas), sin embargo, ciertas cepas pueden adems producir cido
frmico o succnico. Ninguna bacteria del grupo lctico es capaz de producir cidos
voltiles con ms de dos tomos de carbono.
Las bacterias lcticas presentan dos vas para la fermentacin de azucares:
1 mol de glucosa + 2Pi + 2ADP Va homofermentativa

11Elaborada por: Ing.

2 lactato + 2ATP

Jos Luis Hoyos Concha. Esp. Biotecnologa. M.Sc. Docente. Ing. Roco Bonilla Mndez.
M.Sc. DocenteModificaciones a cargo de: Ing. Remigio Yamid Pismag Portilla. M.Sc. Docente.
Bilogo Ivn Otero Ramrez. (c) M. Sc. Docente

1 mol de glucosa + 2Pi + 2ADP Va heterofermentativa 1 lactato +CO 2 + 1 etanol

+ 2ATP
La distincin entre las especies homolcticas y heterolcticas est basada inicialmente
en la proporcin relativa de los productos resultantes de la fermentacin de azcares; las
homolcticas alrededor del 90% y las heterolcticas alrededor del 50% de lactato y otros
compuestos en condiciones variables.
2. OBJETIVOS
2.1. General
Evaluar parmetros cinticos durante el proceso de fermentacin lctica.
2.2. Especficos
2.2.1. Determinar la formacin de biomasa durante el proceso de fermentacin
2.2.2. Cuantificar la generacin de producto durante el proceso de fermentacin.
2.2.3. Verificar el consumo de sustrato disponible durante el desarrollo microbiano.
2.2.4. Elaborar clculos de rendimientos en funcin de Y(p/s), Y(x/s) y Y (p/x) durante
el proceso fermentativo.
3. MATERIALES
Los estudiantes debern traer, tapabocas, guantes, bata de laboratorio, papel vinipel y
cinta de enmascarar.
MATERIAL
Erlenmeyer de 250 Ml
Tubos falcon 15 Ml
Propipetas
Puntas de 1 mL
Puntas de 5 mL
Micropipeta 100 L 1000 L, 1000 L 5000 L
Beaker de 500 mL
Beaker de 100 mL
Beaker de 50 mL
4. REACTIVOS
REACTIVOS
MRS caldo
NaOH 0.1N
Fenolftaleina
Equipo de titulacin.
HCL 1N
5. EQUIPOS

CANTIDAD
POR GRUPO
1
8
1
10
10
1
1
1
1

EQUIPO
pH-metro
Estufa de secado por conveccin de aire a 50C
Incubadora a 35C
Microscopio
Balanza analtica
Bao termostatado
Plancha de agitacin
Incubadora
Autoclave
Vortex
Centrifuga

CANTIDAD
POR GRUPO
Uso general
Uso general
Uso general
Uso general
Uso general
Uso general
Uso general
Uso general
Uso general
Uso general
Uso general

6. PROCEDIMIENTO
6.1. Preparacin de medio de cultivo
Preparar 150 mL de caldo MRS de acuerdo a las indicaciones del proveedor y esterilizar
en autoclave.
6.2. Preparacin de inculo
6.2.1. Activacin de bacterias cido lcticas.
6.2.2. Tomar una colonia del aislamiento conservado e inocular en 10 mL de caldo
MRS.
6.2.3. Llevar a incubacin por 24h a 35C
6.2.4. Inocular 1,5 mL de este medio, llevar a 13,5 mL de caldo MRS y llevar
nuevamente a incubacin.
6.3. Fermentacin
6.3.1. Inocular al 10% el microorganismo activado en 150 mL de caldo MRS.
6.3.2. Tapar los erlenmeyers con gasa y algodn para intercambio de gases.
6.3.3. Llevar a incubacin por 72 horas a 35C.
6.4. Seguimiento de la fermentacin
Se debe tomar muestras al momento inicial y cada 24 horas por un periodo de 72 horas
para medicin de biomasa, consumo de sustrato y formacin de producto as:
6.4.1. Medicin de biomasa y consumo de sustrato

Pesar el tubo falcn vaco, rotulado y sin tapa.

Adicionar 15 mL de muestra en los tiempos sealados.
Centrifugar a 8000 rpm durante 15 minutos y retirar sobrenadante (guardar el
sobrenadante en otro tubo para la determinacin de pH, acidez y azcares).
Llevar el tubo con biomasa a secar por 2 horas a 60C.

Pesar el falcon en las mismas condiciones iniciales.

La biomasa obtenida se calcula por la diferencia entre el peso final del falcon y el
peso inicial.

6.4.2. Determinacin de azucares por DNS

Con el sobrenadante obtenido despus de la centrifugacin anterior tomar 1 mL y

adicionarlo en un tubo tapa rosca con 9 mL de agua destilada (10 -1), repetir el
procedimiento hasta la dilucin 10-2.
Transferir 0,5 mL de la dilucin 10-2 a otro tubo tapa rosca.
Adicionar 0,5 mL de DNS.
Agitar vigorosamente y llevar a ebullicin en bao mara por 5 minutos.
Dejar enfriar en bao de hielo y adicionar 5 mL de agua destilada.
Dejar reposar por 15 minutos y leer absorbancia a 540 nm.
La concentracin de azcares se determina con la ecuacin de la curva patrn y
teniendo en cuenta la dilucin de la muestra.

6.4.3. Determinacin de producto por titulacin (Acidez titulable)

Depositar 5 mL de muestra en un beaker de 50 mL

Aadir aproximadamente 3 gotas de solucin alcohlica de fenolftalena.
Titular con NaOH 0.1 N hasta el primer viraje a color rosado plido o hasta alcanzar
un pH de 8,2.
Anotar el volumen de NaOH utilizado hasta alcanzar este punto
Encontrar el porcentaje de cido lctico desde la siguiente ecuacin.

% de cido lctico: (Normalidad)* (mL de NaOH 0.1N gastados) *(0.090) * (100)

mL de muestra
Expresar % de cido lctico en (g de ac lctico/l de sln).
6.4.4. Determinacin de pH

Tomar 5 mL de muestra en un beaker

Medir pH con ayuda de un pH-metro.

6.5. Con la informacin obtenida calcule los rendimientos biomasa/sustrato (Yx/s),

producto/sustrato (Yp/s).
6.6. Elabore grficas biomasa vs tiempo; concentracin de sustrato (g/L) vs tiempo;
formacin de producto vs tiempo y cambio de pH vs tiempo.
6.7. Determine tiempo de duplicacin, velocidad especfica de crecimiento.
7. BIBLIOGRAFA
CAMACHO, A., M.GILES, A.ORTEGN, M.PALAO, B.SERRANO Y
O.VELZQUEZ. Tcnicas para el Anlisis Microbiolgico de Alimentos. 2 ed.
Facultad de Qumica, UNAM. Mxico 2009.

O. P. WARD. Biotecnologa de la Fermentacin. Acribia. Espaa. 1990

SCRAGG. Biotecnologa para Ingenieros. Sistemas Biolgicos en Procesos
Tecnolgicos. Limusa. Noriega Editores. Mxico 2004.
M. MADIGAN, J. M. MARTINKO, J. PARKER. Biologa de los Microorganismos.
Editorial Prentice Hall. Espaa. 2004.

UNIVERSIDAD DEL CAUCA

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
PROGRAMA DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGA2
VI SEMESTRE
GUA No 7
FERMENTACIN ALCOHLICA
1.

INTRODUCCIN

La fermentacin implica el empleo de microorganismos para llevar a cabo

transformaciones de materia orgnica catalizadas por enzimas, este proceso ha sido
realizada como un arte durante muchos siglos; por ejemplo, en la elaboracin de vino se
cree que se practicaba ya al menos 10.000 aos a.C. Algunos historiadores creen que los
egipcios producan cerveza en los aos 5.000 a 6.000 a. C., dejando germinar la cebada
en vasijas de barro y despus estrujndola, amasndola y finalmente remojndola con
agua para obtener la bebida. Hacia el ao 4.000 a. C., los egipcios utilizaron las
levaduras de la cerveza para la produccin de dixido de carbono para el hinchamiento
de la masa del pan. Actualmente se sabe que muchos alimentos y productos estn
basados en procesos de fermentacin, produccin de enzimas e hidrlisis enzimtica
mediante mtodos de cultivo de superficie.
La mayor parte de los zumos de fruta sufren una fermentacin natural ocasionada por
las levaduras silvestres que estn presentes en la fruta. A partir de estas
fermentaciones naturales, se han seleccionado algunas levaduras para conseguir una
produccin ms controlada hasta el punto que, en la actualidad, la produccin de
bebidas alcohlicas se ha convertido en una industria muy importante en todo el mundo.
Las bebidas alcohlicas ms importantes son: el vino, producido con la fermentacin
del zumo de fruta; la cerveza, producida por la fermentacin de cereales malteados, y
las bebidas destiladas, producidas por concentracin, mediante destilacin de alcohol
procedente de una fermentacin.
2. OBJETIVOS
2.1 General
Evaluar parmetros cinticos en una fermentacin alcohlica.
2.2 Especficos
2.2.1
2.2.2
2.2.3
2.2.4

Determinar la formacin de biomasa durante el proceso de fermentacin

Cuantificar la generacin de producto durante el proceso de fermentacin.
Verificar el consumo de sustrato disponible durante el desarrollo microbiano.
Elaborar clculos de rendimientos en funcin de Y(p/s), Y(x/s) y Y (p/x) durante
el proceso fermentativo.

2 Elaborada por:Ing. Jos Luis Hoyos Concha. Esp. Biotecnologa. C.Mag. Docente.

3. MATERIALES
MATERIAL
Erlenmeyer de 1 L
Varilla de agitacin
Montaje de titulacin
Erlenmeyer de 100 mL
Erlenmeyer 500 Ml
Papel vinipel
Manguera

CANTIDAD
POR GRUPO
1
1
Uso general (planta piloto)
2 (planta piloto)
2 (planta piloto)
Uso general (planta piloto)
1m

4. REACTIVOS
REACTIVO
NaOH 0.1N
Fenolftaleina
Metabisulfito de potasio
Fosfato de amonio
Antrona
Caldo nutritivo

CANTIDAD
POR GRUPO
Uso general (planta piloto)
Uso general (planta piloto)
Uso general (planta piloto)
Uso general (planta piloto)
Uso general
600 mL

5. EQUIPOS
EQUIPO
Balanza analtica
Termmetro
Refractmero de baja
Espectrofotmetro
Microscopio
Autoclave
Incubadora a 30C
7.

PROCEDIMIENTO

7.1.

Preparacin de medio de cultivo

CANTIDAD
POR GRUPO
Uso general (planta piloto)
Uso general (planta piloto)
Uso general (planta piloto)
Uso general
1
Uso general
Uso general

Preparar 300 mL de medio caldo nutritivo de acuerdo a las indicaciones del proveedor y
adicin de glucosa. Esterilizar en autoclave.
7.2.

Preparacin de inculo

7.2.1

Activacin de levaduras.

7.2.2
7.2.3
7.2.4

Tomar una colonia del aislamiento conservado o 1 g de Saccharomyces

cerevisiae e inocular en 10 mL de caldo nutritivo.
Llevar a incubacin por 24h a 35C
Inocular los 3 mL en 27 mL de caldo nutritivo y llevar nuevamente a incubacin.

7.3.

Fermentacin

7.3.1. Inocular al 10% el microorganismo activado en 270 mL de caldo nutritivo

adicionado con glucosa.
7.3.2. Tapar los erlenmeyers con gasa y algodn para intercambio de gases.
7.3.3. Instalar el dispositivo para la salida de CO2 y sellar con vinipel.
7.3.4. Rotular con la informacin adecuada, introducir la manguera a un frasco con
agua y dejar fermentar en un lugar limpio.
7.3.5. Llevar a incubacin por 72 horas a 35C.
7.4.

Seguimiento de la fermentacin

Se debe tomar muestras al momento inicial y cada 24 horas por un periodo de 72 horas
para medicin de biomasa, consumo de sustrato y formacin de producto as:
7.4.1. Medicin de biomasa y consumo de sustrato

Pesar el tubo falcn vaco, rotulado y sin tapa.

Adicionar 15 mL de muestra en los tiempos sealados.
Centrifugar a 8000 rpm durante 15 minutos y retirar sobrenadante (guardar
sobrenadante para determinacin de azcares y etanol).
Llevar los tubos con biomasa a secar por 2 horas a 60C.
Pesar el falcon en las mismas condiciones iniciales.
La biomasa obtenida se calcula por la diferencia entre el peso final del falcon y el
peso inicial.

7.4.2. Determinacin de azucares por DNS

Con el sobrenadante obtenido despus de la centrifugacin anterior tomar 1 mL y

adicionarlo en un tubo con 9 mL de agua destilada (10 -1), repetir el procedimiento
hasta la dilucin 10-2 tapa rosca.
Transferir 0,5 mL de la dilucin 10-2 a otro tubo tapa rosca.
Adicionar 0,5 mL de DNS.
Agitar vigorosamente y llevar a ebullicin en bao mara por 5 minutos.
Dejar enfriar en bao de hielo y adicionar 5 mL de agua destilada.
Dejar reposar por 15 minutos y leer absorbancia a 540 nm.

7.4.3. Determinacin de producto

Realizar una curva estndar del ndice de refraccin de mezclas alcohol-agua

preparando para ello 6 soluciones de alcohol grado analtico al 10, 20, 30, 40,
50, y 60%. Medir con refractmetro el ndice de refraccin de cada una de estas
soluciones.

Por otro lado, tomar 50 mL de muestra al inicio y final de la fermentacin (72

horas).
Realizar el proceso de destilacin y cuantificar la cantidad de mezcla alcoholagua obtenida.
Al destilado obtenido, determinar el ndice de refraccin. Comparar el ndice de
refraccin, con la curva de mezcla de alcohol grado analtico-agua y determinar
la concentracin de alcohol en la muestra

7.5 Con la informacin obtenida calcule los rendimientos biomasa/sustrato (Yx/s),

producto/sustrato (Yp/s).
7.6 Elabore grficas biomasa vs tiempo; concentracin de sustrato (g/L) vs tiempo;
formacin de producto vs tiempo y cambio de pH vs tiempo.
7.7 Determine tiempo de duplicacin, velocidad especfica de crecimiento.
9.

BIBLIOGRAFA

OWEN P, ward. Biotecnologa de la Fermentacin. Acribia, S.A. Zaragoza, Espaa.

1990.
MADIGAN T, MICHAEL. Biologa de los Microorganismos. Pearson Educacin, S.A.
Madrid, Espaa. 2004.

UNIVERSIDAD DEL CAUCA

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
PROGRAMA DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGA3
VI SEMESTRE
GUA No 8
OBTENCIN DE BIOPOLMEROS DE INTERS
INDUSTRIAL
1. INTRODUCCION
Los polihidroxialcanoatos (PHAs) son un grupo de biopolmeros que se acumulan
dentro de la estructura celular de los microorganismos bajo condiciones de estrs,
ocasionado por un desbalance carbono-nitrgeno, la estructura comn del polmero esta
compuestos por quirales (R) cidos - hidroxialcanoicos y unidades monomricas con ( R
) -3-cidos hidroxialcanoicos, se han identificado ms de 150 tipos de monmeros
presentes en los PHAs entre ellos se destaca el poli-3-hidroxibutirato (P3HB) (Chen,
2010).
Entre los factores a tener en cuenta para la produccin de PHAs se destacan la fuente de
carbono, pH, temperatura, relacin Carbono - Nitrgeno (C/N) y principalmente los
costos de produccin (Hisashi, 2016). El alto costo de los sustratos ha impulsado en los
ltimos aos la bsqueda de fuentes de carbono disponibles, renovables y econmicas
para que el biopolmero sea competitivo en el mercado. Entre las materias primas
naturales que se utilizan para la produccin de PHAs incluyen residuos de la industria
de biodiesel, desechos de almidn, suero de leche, aceites vegetales y aguas residuales
industriales. (Canadasa, et al., 2014; Aires Da Silva, et al., 2014; Ciesielski, et al.,
2015).
Debido a que los PHAs se pueden obtener a partir de recursos renovables se consideran
materiales amigables con el medio ambiente y tienen un gran potencial para sustituir a
los plsticos sintticos. No obstante, el principal obstculo para la produccin industrial
y comercial del biopolmero es el costo elevado de los sustratos utilizados en la
fermentacin bacteriana, por consiguiente, los PHAs son 15 veces ms costosos que los
polmeros derivados del petrleo, como el polipropileno (Mamtesh, et al., 2009).
2. OBJETIVOS
2.1. Objetivo general
Evaluar parmetros cinticos en una fermentacin para obtencin de productos no
alimentarios (biopolmeros).
2.3 Especficos
3 Elaborada por:Ing. Jos Luis Hoyos Concha. Esp. Biotecnologa. C.Mag. Docente.Bilogo. Ivn Daro
Otero. (c) M. Sc.

2.3.1
2.3.2
2.3.3
2.3.4

Determinar la formacin de biomasa durante el proceso de fermentacin

Cuantificar la generacin de producto durante el proceso de fermentacin.
Verificar el consumo de sustrato disponible durante el desarrollo microbiano.
Elaborar clculos de rendimientos en funcin de Y(p/s), Y(x/s) y Y (p/x) durante
el proceso fermentativo.

3. MATERIALES
Los estudiantes debern traer, tapabocas, guantes, bata de laboratorio, papel vinipel y
cinta de enmascarar.
MATERIAL
Erlenmeyer de 500 mL
Tubos falcon 15 mL
Propipetas
Puntas de 1 mL
Puntas de 5 mL
Micropipeta 100 L 1000 L, 1000 L 5000 L

CANTIDAD
POR GRUPO
1
8
1
10
10
1

4. REACTIVOS
REACTIVOS
Caldo Luria Bertani Modificado
Hipoclorito de Sodio
Acetona
Metanol
DNS
5. EQUIPOS
EQUIPO
Estufa de secado por conveccin de aire a 50C
Incubadora a 30C
Microscopio
Balanza analtica
Bao termostatado
Plancha de agitacin
Autoclave
Vortex
Centrifuga
6. PROCEDIMIENTO
6.1. Preparacin de medio de cultivo

CANTIDAD
POR GRUPO
Uso general
Uso general
Uso general
Uso general
Uso general
Uso general
Uso general
Uso general
Uso general

Preparar 300 mL de medio caldo Luria Bertani modificado (extracto de levadura 5 g/L,
NaCl 10 g/L, glucosa 27,75 g/L) y esterilizar en autoclave.
6.2. Preparacin de inculo
6.2.1. Activacin de bacterias productoras de PHAs.

Tomar una colonia del aislamiento conservado e inocular en 10 mL de caldo

nutritivo.
Llevar a incubacin por 24h a 30C
Inocular los 3 mL en 27 mL de caldo LBM y llevar nuevamente a incubacin.

6.3. Fermentacin
6.3.1. Inocular al 10% el microorganismo activado en 270 mL de caldo LBM.
6.3.2. Tapar los erlenmeyers con algodn y aluminio
6.3.3. Llevar a incubacin por 72 horas a 30C.
6.4. Seguimiento de la fermentacin
Se debe tomar muestras al momento inicial y cada 24 horas por un periodo de 72 horas
para medicin de biomasa, consumo de sustrato y formacin de producto as:
6.4.1. Medicin de biomasa

Pesar el tubo falcn vaco, rotulado y sin tapa.

Adicionar 15 mL de muestra en los tiempos sealados.
Centrifugar a 8000 rpm durante 15 minutos y retirar el sobrenadante (guardar
sobrenadante para determinacin de azcares)
Llevar a secar por 2 horas a 60C.
Pesar el falcon en las mismas condiciones iniciales.
La biomasa obtenida se calcula por la diferencia entre el peso final del falcon y el
peso inicial.

6.4.2. Determinacin de azucares por DNS

6.4.3.

Con el sobrenadante obtenido despus de la centrifugacin anterior tomar 1 mL y

adicionarlo en un tubo con 9 mL de agua destilada (10 -1), repetir el procedimiento
hasta la dilucin 10-2 tapa rosca.
Transferir 0,5 mL de la dilucin 10-2 a otro tubo tapa rosca.
Adicionar 0,5 mL de DNS.
Agitar vigorosamente y llevar a ebullicin en bao maria por 5 minutos.
Dejar enfriar en bao de hielo y adicionar 5 mL de agua destilada.
Dejar reposar por 15 minutos y leer absorbancia a 540 nm.
Determinacin de producto

Para la extraccin de PHAs se tomarn de cada reactor 15 mL y se centrifugar a

8000rpm por 15min (pesar previamente el tubo de centrifugacin, vaco, seco,
rotulado y sin tapa).
Descartar el sobrenandante y tratar el pellet con 5 mL de hipoclorito de sodio al
5% ms cido etilendiaminotetraactico 10 mM.
Llevar a bao mara por hora y media a 60 C.
Transcurrido este tiempo centrifugar a 8000rpm por 10min y eliminar el
sobrenadante.
Lavar el pellet obtenido con 5 mL de agua destilada, acetona y etanol realizando
centrifugaciones de 8000rpm por 10min entre cada solucin agregada.
Finalmente, llevar el precipitado obtenido a 55 C hasta peso constante.
Pesar el tubo con el extracto obtenido y cuantificar la produccin de PHAs por
diferencia de pesos.

6.5 Con la informacin obtenida calcule los rendimientos biomasa/sustrato (Yx/s),

producto/sustrato (Yp/s).
6.6 Elabore grficas biomasa vs tiempo; concentracin de sustrato (g/L) vs tiempo;
formacin de producto vs tiempo y cambio de pH vs tiempo.
6.7 Determine tiempo de duplicacin, velocidad especfica de crecimiento.
7. BIBLIOGRAFA
CHEN, G. Introduction of bacterial plastics PHA, PLA, PBS, PE, PTT and PPP [en
lnea]. Plastics from Bacteria: Natural Functions and Applications. China: 2010, vol. 14.
[citado
15,
abril,2016],
p.
450.
Disponible
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http://link.springer.com/chapter/10.1007/978-3-642-03287-5_1>.
HISASHI, A. et al. A Study on the Relation between Poly(3-hydroxybutyrate)
Depolymerases
or
Oligomer
Hydrolases
and
Molecular
Weight
of
Polyhydroxyalkanoates Accumulating in Cupriavidus necator H16 [en lnea]. Journal of
Biotechnology. Japon: Junio, 2016, vol. 227. [citado 16, abril,2016]. pp.94-102.
Disponible
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CANADASA, R. et al. Polyhydroxyalkanoates: Waste glycerol upgrade into
electrospun fibrous scaffolds for stem cells culture [en lnea]. International Journal of
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Disponible
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http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S014181301400292X>.
CIESIELSKI, S., MOEJKO, J. and PISUTPAISAL. Plant oils as promising substrates
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AIRES DA SILVA, D. et al. Production of medium-chain-length by Pseudomonas
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lnea]. Food science and technology.Campinas, Brasil: Noviembre,2014, vol. 34.

[citado 17, abril,2016], pp..738-745. Disponible en:< http://www.scielo.br/scielo.php?
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MAMTESH, Singh, SANJAY, Atel and VIPIN, Kalia. Bacillus subtilis as potential
producer for polyhydroxyalkanoates [en lnea]. Microbial cell factories, India, 2009,
vol. 8. no.1. [citado 15 abril, 2016]. p.1. Disponible en: <
http://microbialcellfactories.biomedcentral.com/articles/10.1186/1475-2859-8-38>.
OTERO, I. y FERNANDEZ, P. Bioprospeccin de bacterias productoras de
polihidroxialcanoatos (phas) en el departamento de Nario [en lnea]. Rev.Bio.Agro.
Popayn, Colombia: 2013, Edicin Especial No. 2., [citado 15, abril,2016], pp.12-19.
Disponible en: <http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S169235612013000300002&lng=en&nrm=iso>. ISSN 1692-3561.