Manual

de
Prctica
s
RBH
Realizar Biometra Hemtica

INTRODUCCIN
Durante este semestre hemos aprendido muchas cosas dentro del rea de la
biometra hemtica, as como algunos de los exmenes que se realizan dentro de
esta rea.
La Hematologa es la especialidad mdica que se dedica al tratamiento de los
pacientes con enfermedades hematolgicas, para ello se encarga del estudio e
investigacin de la sangre y los rganos hematopoyticos (mdula sea, ganglios
linfticos, bazo, etc.) tanto sanos como enfermos.
La hematologa es la rama de la ciencia mdica que se encarga del estudio de
los elementos formes de la sangre y sus precursores, as como de los trastornos
estructurales y bioqumicos de estos elementos, que puedan conducir a una
enfermedad.
La hematologa es una ciencia que comprende el estudio de la etiologa,
diagnstico, tratamiento, pronstico y prevencin de las enfermedades de la
sangre y rganos hemolinfoproductores. Los especialistas en este dominio son
llamados hematlogos.

Las enfermedades hematolgicas afectan la produccin de sangre y sus

componentes, como los glbulos rojos, glbulos blancos, la hemoglobina, las
protenas plasmticas, el mecanismo de coagulacin (hemostasia), etc.

NDICE
PRACTICAS
1. Preparacin de anticoagulantes
2. Obtencin de muestras
3. Determinacin de hematocrito
4. Cuantificacin de hemoglobina
5. Elaboracin de frotis sanguneo
6. Recuento de leucocitos
7. Recuento de glbulos rojos
8. Recuento de plaquetas
9. Recuento de reticulocitos
10.
Grupo sanguneo
11.
Clasificacin de anemias
12.
Velocidad de sedimentacin globular
Anexo: Lista de reactivos

Practica no 1
CONOCIMIENTO DEL MATERIAL DE LABORATORIO PARA LA MATERIA DE
BIOMETRA HEMTICA

1) Fundamento:
2) Objetivo:
Al terminar la prctica el alumno ser capaz de:
El alumno conocer el material de laboratorio que se utiliza frecuentemente
en el rea de biometra hemtica.
3) Generalidades:
El laboratorio cuenta con las instalaciones y el material necesario para facilitar
y mejorar la calidad de las observaciones. Generalmente cuenta con un anexo
donde se guardan las sustancias y aparatos.
Tiene instalacin elctrica, hidrulica y de gas adaptada a la mesa de trabajo;
adems de contar con buena ventilacin e iluminacin.
El Laboratorio clnico es el lugar donde los profesionales de laboratorio de
diagnstico clnico (Tecnlogo Mdico, Tcnicos Superiores de Laboratorio Clnico,
Bioqumicos, Qumicos Farmacobilogos (QFB), Bioanlistas y Mdicos) realizan
anlisis clnicos que contribuyen al estudio, prevencin, diagnstico y tratamiento
de los problemas de salud de los pacientes. Tambin se le conoce como
Laboratorio de Patologa clnica.
El material se puede clasificar en material de cristalera, aparatos y reactivos.

Se debe procurar conocer las caractersticas generales de los materiales de un

laboratorio en el rea de biometra hemtica, as como los cuidados necesarios
para mantenerlos en buen estado.
La Hematologa es la especialidad mdica que se dedica al tratamiento de los
pacientes con enfermedades hematolgicas, para ello se encarga del estudio e
investigacin de la sangre y los rganos hematopoyticos (mdula sea, ganglios
linfticos, bazo, etc) tanto sanos como enfermos.
La hematologa es la rama de la ciencia mdica que se encarga del estudio de
los elementos formes de la sangre y sus precursores, as como de los trastornos
estructurales y bioqumicos de estos elementos, que puedan conducir a una
enfermedad.
La hematologa es una ciencia que comprende el estudio de la etiologa,
diagnstico, tratamiento, pronstico y prevencin de las enfermedades de la
sangre y rganos hemolinfoproductores. Los especialistas en este dominio son
llamados hematlogos.
Las enfermedades hematolgicas afectan la produccin de sangre y sus
componentes, como los glbulos rojos, glbulos blancos, la hemoglobina, las
protenas plasmticas, el mecanismo de coagulacin (hemostasia), etc.

4) Material:

Aguja
Gradilla

Dedal

Tubo con EDTA

Placa de vidrio

Suero Anti A

Suero Anti D

Tubos de ensaye

Aplicador de madera

Suero Anti B

suero Anti AB

Solucin salina

Pipetas graduadas

Pipeta Pasteur

Centrifuga

Lector de hematocrito

Microcentrifuga

Tubo capilar

Espectrofotmetro

Sahli

Bao Mara

Tubo de Wintrobe

Pipeta de

Celdas para espectrofotmetro

Cubreobjetos

Colorante May Greenwald

Portaobjetos

Colorante Giemsa

Colorante de Wright

Aceite de inmersin
Thoma

Agua destilada

Cmara de Neubauer

Pipetas de

Microscopio

Azul de metileno

Azul de cresil

brillante

Diluyente de turk
5) Bibliografa:

Prctica no. 2
PREPARACIN DE ANTICOAGULANTES
1) Fundamento:
2) Objetivo:
Al terminar la prctica, el alumno ser capaz de:
Preparar correctamente los principales anticoagulantes de importancia en
hematologa.

 Seleccionar el anticoagulante ms adecuado para cada determinacin.

3)
4)

5)
a)
b)

Generalidades:
Equipo:
Balanza analtica
Material:
Biolgico: ninguno
De laboratorio:

1. Oxalato de amonio
2. Oxalato de potasio
3. Citrato disdico
4. Dextrosa
5. cido etilen diamino tetraactico (E.D.T.A.)
6. Heparina
7. Agua destilada
8. Tubos de ensaye de 13 x 100 mm con tapn
9. Matraces aforados de 100 ml
10.
Tubos de centrifuga graduados de 5 ml
11.
Pipetas serolgicas de 5 ml
6) Procedimiento:
6.1 Oxalatos
6. 2 Citratos

6.3 E.D.T.A.
6.4 Heparina:
7) Comentarios:
8) Resultados:
9)
10)
Bibliografa:
www.biol.unlp.edu.ar/hematologia/guia1.doc

Practica no. 3
OBTENCIN DE MUESTRAS
1) Fundamento:
2) Objetivos
Al terminar la prctica, el alumno ser capaz de:
Justificar la indicacin de los mtodos de obtencin de muestras.
Obtener correctamente muestras capilares y venosas de calidad analtica.

3) Generalidades:
SE DEBEN MENCIONAR INFORMACIN RELACIONADA CON:
Puncin venosa
Puncin capilar
Puncin arterial

4) Equipo:
Ninguno
5) Material:
a) Biolgico: ninguno
b) De laboratorio:
1. Torundas de algodn
2. Lancetas estriles
3. Tubos capilares con heparina
4. Tubos capilares sin heparina
5. Alcohol etlico
6. Jeringas de 10 ml. Desechables con aguja de 20 x 32 mm.
7. Tubos con anticoagulante
8. Tubo de ltex con ligadura.
9. Maneral y agujas vacutainer desechables calibre 20 x 32 mm.
10. Tubos vacutainer tapn lavanda (E.D.T.A)
11. Tubos vacutainer tapn azul claro (citrato de sodio).
12. Gradilla
6) Procedimiento:
6.1 Puncin capilar
6.2 Puncin venosa
7) Comentarios

8) Resultados

9) Bibliografa:

http://www.zubizarreta.org.ar/docs/MUESTRAS2.pdf
http://www.eccpn.aibarra.org/temario/seccion2/capitulo33/capitulo33.htm

Practica no. 4
DETERMINACIN DE HEMATOCRITO
1) Fundamento:
2) Objetivos:
Al terminar la prctica el alumno ser capaz de:
Identificar la importancia y utilidad clnica de la determinacin de
hematocrito.
Ejecutar correctamente la determinacin de hematocrito usando macro y
micromtodo.
Justificar las ventajas y desventajas de ambos mtodos.

3) Generalidades:
4) Equipo:
a) Lector de hematocrito.
b) Centrifuga.
c) Microcentrfuga.

5) Material:
a) Biolgico
1. Sangre obtenida con E.D.T.A
b) De laboratorio:
1. Tubos de Wintrobe.
2. Jeringas de 5 ml con cnula larga de metal.
3. Pipetas Pasteur de punta larga, con bulbo.
4. Mechero de Bunsen.
5. Gradilla.
6. Gradilla de Wintrobe.
7. Regla de plstico.
8. Tubos capilares sin heparina.
9. Barra de plastilina.
6) Procedimiento:
6.1. Macrometodo de wintrobe:
1. Mezclar la sangre por inversin por lo menos durante cinco minutos. NO
AGITARLA.
2. Llenar un tubo de Wintrobe hasta la marca 0-10 usando una jeringa con
cnula larga o una pipeta Pasteur. Es importante vigilar que no se formen
burbujas en la columna de sangre o en el fondo del tubo al llenarlo. Esto se
logra haciendo resbalar la sangre por las paredes del tubo, iniciando en el
fondo y sacando la cancula a medida que se va llenando.
3. Centrifugar el tubo a 3000 rpm durante 30 minutos (para un radio de
centrifuga de 22 cm, que da una fuerza centrfuga relativa de 2200 G). La
velocidad de centrifugacin se deber ajustar al radio de la centrifuga,
considerando que siempre se deber tener una fuerza centrfuga, relativa
mayor a 2000 G.
4. Leer el lmite superior de la columna de eritrocitos, inmediatamente por
debajo de la capa gris de leucocitos, en la columna de la derecha (escala
ascendente de 0 a 10 cm.)
5. El resultado se informa en milmetros por ciento.
Ventajas:
Es un mtodo estandarizado.
Sencillo de realizar y de fcil lectura.

Desventajas:
El plasma atrapado entre clulas es de alrededor del 3% del volumen.
Puede dar resultados inconstantes debido a que cuando existen
alteraciones morfolgicas, el plasma que queda atrapado entre las clulas
se incrementa.
6.2 Micrometodo:
1. Mezclar la sangre por inversin por lo menos durante cinco minutos. NO
AGITARLA
2. Llenar los dos terceras partes de un tubo capilar por el lado no marcado.
3. Sellar el extremo opuesto (marcado con una banda azul) con la flama del
mechero. Esto se hace girando el tubo capilar para lograr que el sellado
uniforme y el fondo quede redondeado y no en punta. Una alternativa ms
prctica para el sellado es obturar el extremo distal con plastilina.
4. Centrifugar en la microcentrifuga a 12,000 rpm durante 5 a 8 minutos.
5. Se lee, usando una regla o el lector para microhematocrito, las alturas del
volumen de eritrocitos y el volumen total de la muestra. Calcular el
microhematocrito de la siguiente manera:

HEMATOCRITO:

ALTURA DE ERITROCITOS (mm)

X 100

ALTURA DEL VOLUMEN TOTAL (mm)

Ventajas:
El plasma atrapado entre las clulas es mnimo (1%).
Resultados muy reproducibles.
Desventajas:
Relativamente ms difcil de realizar, sobre todo el sellado y dominar la
lectura.
7) Valores de referencia:
Al igual que la hemoglobina y eritrocitos; se modifican con la edad, sexo y
altura sobre el nivel del mar. En la Cd. De Xalapa, Ver. A 1400 m sobre el nivel del
mar son los que se observan en la tabla:

TABLA
HEMATOCRITO
VALORES DE REFERENCIA

EDAD

SEXO

RECIEN NACIDO
1 MES A DOS AOS
3 A 10 AOS
11 A 60 AOS
11 A 60 AOS
MAS DE 60 AOS

F/M
F/M
F/M
FEM
MASC.
F/M

VALORES
(porcentaje)
44 A 62
33 A 37
37 A 45
36 A 48
42 A 54
37 A 45

En la siguiente tabla se muestran los valores promedio de hematocrito

diferentes alturas sobre el nivel del mar:

ALTURA EN METROS

TABLA
HEMATOCRITO
VALORES A DIFERENTES ALTITUDES.
MUJERES

HOMBRES

(Porcentaje)
MEDIA
NIVEL DEL MAR
1000
1860
2270
2670

43.9
42.4
45.0
44.6
46.9

RANGO
37.5
37.4
39.1
32.2
40.7

A
A
A
A
A

50.2
47.4
50.9
50.0
53.1

(Porcentaje)
MEDIA
49.3
48.1
51.3
51.5
53.0

RANGO
45.4
43.0
45.1
46.3
46.5

A
A
A
A
A

56.2
53.2
57.6
56.7
59.5

8) Comentarios:
Por su estandarizacin y reproducibilidad de resultados, el hematocrito ha sido
considerado el mejor parmetro para evaluar la anemia cuando se hace por
mtodos manuales.

TUBO DE WINTROBE
TUBO
DE

WINTROBE

Equi
po de Wintrobe

MICROHEMATOCRITO

9) Resultados:
10)

Bibliografa:

http://www.mailxmail.com/curso-analisis-clinicos-rutina/valor-hematocrito

http://es.wikipedia.org/wiki/Hematocrito

Practica no. 5
CUANTIFICACIN DE HEMOGLOBINA
1) Fundamento:
2) Objetivos:
Al terminar la prctica, el alumno ser capaz de:

 Identificar la importancia y utilidad clnica de la cuantificacin de

hemoglobina.
Cuantificar con precisin y exactitud la hemoglobina en muestras
sanguneas.
3) Generalidades:
4) Equipo:
A) Espectrofotmetro
B) Reloj de laboratorio

5) Material:
A) Biolgico:
1. Sangre obtenida con E.D.T.A.
B) De laboratorio:
1. Pipetas de Sahli con boquilla
2. Pipetas volumtricas de 5 ml.
3. Tubos de ensayo de 13 x 100 mm
4. Celdas para espectrofotmetro
5. Gradilla
6. Papel milimtrico
7. Diluyente de Drabkin (Solucin de cianometa).
8. Solucin patrn de hemoglobina de 60 mg/dl.
9. Pipetas serolgicas de 1 ml.
10.
Pipetas serolgicas de 5ml.
Debido a la cuantificacin se realizara comparando lecturas fotomtricas con
las obtenidas de una solucin patrn, primero debemos realizar una curva de
calibracin:
6.1 Curva de calibracin:
1. preparar una serie de tubos de la siguiente manera:
Tubo

1
2
3
4
5
6

Estndar de
Hemoglobina
5.0
4.0
3.0
2.0
1.0
0.0

ml.
ml.
ml.
ml.
ml.
ml.

Solucin de
Drabkin
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0

ml.
ml.
ml.
ml.
ml.
ml.

Concentracin
de
HB (Gr/ dl.)
15.0
12.0
9.0
6.0
3.0
0.0

2. Mezclar cada tubo por inversin y dejar reposar durante 10 minutos.

3. Leer transmitancia a una longitud de onda de 450 nm ajustando a 100% con

el tubo # 6 (blanco de cianometa).
4. Hacer la curva en papel milimtrico graficando concentracin contra
transmitancia. Una curva de calibracin correcta debe ser una lnea recta
uniendo todos los puntos.
5. Clculos:
Se utiliza la formula siguiente:

X
1000

D = gr. DE HEMOGLOBINA/dl.

Donde:
S= CONCENTRACIN DEL ESTNDAR (60 mg/dl)
D= FACTOR DE DILUCIN DE LA MUESTRA (251)
La concentracin del estndar puede variar de lote, por lo que es
indispensable verificarla y en su caso, substituirla en la formula

En cuanto al factor de dilucin se obtiene de la siguiente manera:

SOL. DE CIANOMETA5.00 ML
MUESTRA DE SANGRE 0.02 ML

Al dividir 5.02=

251
VOLUMEN TOTAL..5.02 ML

0.02

La divisin entre 100 transforma los miligramos del estndar en gramos.

Substituyendo en la formula, tenemos:
TUBO # 1.- 60 x 251

= 15.0 gr. De HB/dl

1000
TUBO # 2.- (60/1.25) X 251 = 12.0 gr. De Hb/dl
1000
TUBO # 3.- (60/1.66) X 251 = 9.0 gr. De Hb/dl
1000

TUBO # 4.- (60/2.50) x 251= 6.0 gr. de Hb/dl

1000
TUBO # 5.- (60/5.00) x 251= 3.0 gr. de Hb/dl
1000
TUBO # 6.- (60/0.00) x 251= 0.0 gr. De Hb/dl
1000
6.2

CUANTIFICACIN DE HEMOGLOBINA:

Una vez obtenida la curva de calibracin, podemos proceder a medir la

hemoglobina en muestras de sangre de la siguiente manera:
1. Usando pipeta volumtrica, pipetear 5.0 ml de la solucin de Drabkin en un
tubo de ensayo de 13 x 100 mm.
2. Agregar 0.02 ml. De sangre con la pipeta de Sahli.
3. Mezclar por inversin y dejar reposar durante 10 min.
4. Leer transmitancia a 540 nm. Ajustando al 100% con blanco de cianometa.
5. Convertir el porcentaje de transmitancia en gramos de hemoglobina por
decilitro usando la curva de calibracin.
6. Un mtodo alterno para la cuantificacin sin usar la curva de calibracin,
puede ser el uso de una solucin patrn para obtener un FACTOR DE
CALIBRACIN.
OBTENCIN DE UN FACTOR DE CALIBRACIN:
Se obtiene de la siguiente manera:
FACTOR = CONCENTRACIN DEL ESTNDAR
ABSORBANCIA
Una vez obtenido este, la concentracin de hemoglobina en una muestra se
obtiene de la manera siguiente:
[ ] HEMOGLOBINA = ABSORBANCIA X FACTOR
7) Valores de referencia:
Se modifican con la edad, sexo y altura sobre el nivel del mar. En la tabla, se
muestran los valores para la ciudad de Xalapa, Ver, que tiene una altura media de
1400 m sobre el nivel del mar.

EDAD

TABLA
HEMOGLOBINA
VALORES DE REFERENCIA
SEXO

VALORES

Recin nacido

F/M

12.8 a 18.0 gr/dl.

1 mes a 2 aos

F/M

11.0 a 13.0 gr/dl.

3 a 10 aos

F/M

12.0 a 14.5 gr/dl.

11 a 60 aos

FEM.

12.0 a 16.0 gr/dl.

11 a 60 aos

MASC.

14.0 a 18.0 gr/dl.

Mas de 60 aos

F/M

12.5 a 14.5 gr/dl.

En la siguiente tabla, se muestran los valores promedio de la hemoglobina a

diferentes alturas sobre el nivel del mar.
TABLA
HEMOGLOBINA
VALORES A DIFERENTES ALTITUDES
ALTURA EN METROS
MUJERES
HOMBRES
Gr/dl
Gr/dl
MEDIA
RANGO MEDIA
NIVEL DEL MAR

14.1

11.86

16.0

A 16.34
1000

13.8

11.90

14.5

15.8

12.74

14.6

16.8

12.64

15.30

17.4

8) Comentarios:
9) Resultados:

15.56
A 19.24

13.10 A
17.50

14.64 A
18.96

A 16.56
2670

13.96 A
17.64

A 16.26
2220

13.64
A 18.36

A 15.70
1860

RANGO

17.6

15.24
A 19.

a) Muestras sanguneas
10)

Bibliografa:

http://es.wikipedia.org/wiki/Hemoglobina

Prctica no. 6
ELABORACIN DE FROTIS SANGUNEO
1) Fundamento:

2) Objetivos:
Al terminar la prctica el alumno ser capaz de:
Realizar correctamente los extendidos sanguneos usando diferentes
tcnicas.
Seleccionar la tcnica adecuada identificando sus ventajas y desventajas.
3) Generalidades:
El extendido de sangre perifrica

4) Equipo:
Ninguno
5) Material:
a) Biolgico:
1. Sangre venosa obtenida con EDTA
b) De laboratorio
1. Portaobjetos
2. Cubreobjetos
6) Procedimiento:
6.1
Frotis en cubreobjetos:
6.2

Frotis en portaobjetos:

6.2.1 Frotis longitudinal:

6.2.2 Frotis transversal:

1) Comentarios:
2) Resultados: Frotis en portaobjetos (longitudinal)

10)

Bibliografa:

http://www.encolombia.com/medicina/alergia/alergia12203-alteraciones1.htm
http://190.67.86.83/projects/PBacteriologia/pdf/ESP.pdf

TINCIONES
1) Fundamento:
2) Objetivos:
Al terminar la prctica, el alumno ser capaz de:

 Realizar correctamente las tinciones de Wright y May Greenwald-Giemsa.

Identificar sus caractersticas tintoriales.
3) Generalidades:
4) Equipo:
a) Reloj de laboratorio.
5) Material:
a) Biolgico:
1. Extensiones sanguneas
b) De laboratorio:
1. Puentes de vidrio para tincin.
2. Pipetas Pasteur.
3. Amortiguador de fosfatos de PH 6.8 A 7.0.
4. Solucin colorante de May Greenwald.
5. Solucin colorante de Giemsa.
6. Solucin colorante de Wright.
7. Amortiguador para colorante de Wright.
8. Pipetas serolgicas de 5 ml.
6) Procedimiento:
6.1 Mtodo panptico de Pappenheim (May Greenwald- Giemsa):
1. cubrir el frotis con la solucin de May Greenwald durante dos minutos para
producir la fijacin.
2. Sin volcar, agregar igual cantidad de agua destilada, dejndola 30
segundos. Los colorantes neutros como este, cuando estn disueltos en
alcohol metlico carecen de propiedades tintoriales. Al agregar el agua
precipitan y entonces actan, inactivndose cuando han precipitado por
completo.
3. Volcar y lavar al chorro de agua.
4. Se prepara una solucin acuosa de colorante de Giemsa a razn de 6 gotas
de colorante por 2 ml del amortiguador de fosfatos o de agua corriente
para cada laminilla a teir. Se cubre la preparacin y se deja 10 min.
5. Volcar. Lavar con agua corriente y dejar secar.
Ventajas:
Fcil de estandarizar tiempos.
No se afecta mucho por el PH del agua o amortiguador.
Desventajas:
Ninguna.
6.2 Mtodo de Wright:

1. Cubrir el frotis con colorante de Wright durante 4 a 8 minutos.

2. Sin volcar, agregar una cantidad igual del amortiguador de Wright soplando
ligeramente para mezclar ambos lquidos. Dejar actuar de 6 a 10 min. Se
formara una superficie de brillo metlico.
3. Volcar. Lavar con agua corriente y dejar secar.
Ventajas:
Por ser la tincin ms usada, es relativamente ms fcil estandarizar la
interpretacin de los colores observados.
Desventajas:
Es fcilmente afectada por el PH del agua y amortiguador.
Se modifica la tincin al envejecer el colorante.
Relativamente ms difcil estandarizar tiempos.
7) Comentarios:
Los tiempos mencionados anteriormente, dependern del grueso de la
tincin, el PH del agua, la calidad de los colorantes, su tiempo de maduracin y la
frecuencia de su preparacin, por lo que deben ajustarse en cada laboratorio.
Con la tincin de Pappenheim, las clulas se tien de la siguiente manera:
Ncleo: violeta rojizo.
Linfocitos: citoplasma de azul luminoso. Los grnulos azurofilos en rojo
purpureo.
Grnulos neutrofilos: en rosa pardusco.
Grnulos eosinofilos: en naranja pardusco o rojo ladriilo.
Grnulos basofilos: en azul obscuro con tonalidad violcea.
Eritrocitos: rosado.
Plaquetas: azul con cuerpo rojizo.
Monocitos: citoplasma azul grisceo.
Con la de Wright, la coloracin observada ser:

Ncleo: violeta purpura.

Linfocitos: citoplasma en azul palido. Grnulos azurofilos en rojo purpura.
Grnulos neutrofilos: en color purpura.
Grnulos eosinofilos: en naranja brillante.
Grnulos basofilos: en azul obscuro, intensamente teidos.
Eritrocitos: rojo plido o rosado
Plaquetas: en azul con cuerpo rojo o purpura.
Monocitos: citoplasma gris.

Para el buen estudio morfolgico, es necesario contar con un buen frotis y

con una buena tincin, de otra manera, se pueden escapar muchos detalles de la
morfologa que podran ser importantes para el diagnostico. Es importante probar
las tinciones con diferentes tiempos hasta obtener el resultado esperado. En

algunas ocasiones, se obtienen tonos muy azules en los eritrocitos y en los

citoplasmas celulares, en este caso, hay que revisar el PH del agua de lavado, que
puede ser la responsabilidad de eso.
8) Resultados:

9) Bibliografa:
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n
http://190.67.86.83/projects/PBacteriologia/pdf/ESP.pdf

MORFOLOGA ERITROCITARIA
OBSERVACIN DE EXTENDIDOS
1) Fundamento:
2) Objetivos:
Al terminar la prctica, el alumno ser capaz de:

 Describir las principales caractersticas morfolgicas normales de los

eritrocitos
Identificar en los extendidos, las alteraciones morfolgicas de los eritrocitos
Correlacin la presencia de alteraciones con las patologas en las que se
presentan.
3) Generalidades:
4)
a)
b)
c)
5)
a)
1.
2.
b)
1.
2.

Equipo:
Microscopio
Proyector de diapositivas
Video microscopio
Material:
Biolgico:
Extensiones de sangre perifrica con morfologa eritrocitaria normal
(teidas)
Extensiones de sangre perifrica con morfologa eritrocitaria anormal
(teidas)
De laboratorio:
Aceite de inmersin
Diapositivas de sangre perifrica de eritrocitos normales y patolgicos

6) Procedimiento:
Se revisar primero la morfologa normal usando diapositivas y video
microscpico; posteriormente se estudiar la morfologa anormal con los mismos
mtodos y finamente se revisarn al microscopio extensiones con morfologa
normal y anormal, en las que se identificarn las caractersticas, tanto normales
como anormales. Desde luego, se deber consultar cualquier duda con el
maestro.
6.1 Caractersticas Morfolgicas del Eritrocito Normal:
6.2 Alteraciones Morfolgicas de los Eritrocitos:
6.2.1 Alteraciones en la Forma:

6.2.2 Alteraciones en el Tamao

6.2.3 Alteraciones en la Coloracin:
6.3 Inclusiones:
6.3

Comentarios:

7. Resultados:

8. Bibliografa:
http://es.wikipedia.org/wiki/Frotis
http://html.rincondelvago.com/biometria-hematica.html
http://es.scribd.com/doc/37697369/Estudio-de-las-alteraciones-en-la-morfologiaeritrocitaria
http://www.accionmedica.com/documentos/libros/manual_citologia.pdf
http://espanol.answers.yahoo.com/question/index?qid=20090301103711AAeHxfL
http://www.fac.org.ar/tcvc/llave/tl337/tl337.PDF
http://www.metabase.net/docs/unan-leon/07430.html
http://www.tesisenxarxa.net/TDX/TDX_URV/TESIS/AVAILABLE/TDX-0226108095651//TPHG1de2.pdf

HEMATOPOYESIS
OBSERVACIN DE EXTENDIDOS
1) Fundamento:
2) Objetivos:
Al terminar la prctica, el alumno ser capaz de:

 Describir las principales caractersticas morfolgicas de las clulas

sanguneas en sus diferentes etapas de maduracin.
Describir las etapas de la hematopoyesis.
Identificar en los extendidos, las clulas hemticas en sus diferentes etapas
de maduracin.
3) Generalidades:
4) EQUIPO:
Microscopio.
Proyector de diapositivas.
Video microscopio.
5) MATERIAL:
a) Biolgico:
1. Extensiones de sangre perifrica normal (teidas)
2. Extensiones de mdula sea normal (teidas)
b) De laboratorio:
1. Aceite de inmersin.
2. Diapositivas de sangre perifrica y mdula sea normales.
6) PROCEDIMIENTO:
Inicialmente, el maestro mostrar en diapositivas y en el video microscopio
las diferentes etapas de maduracin de las clulas hemticas para que
posteriormente se observen al microscopio las extensiones, usando los objetivos
seco fuerte e inmersin e identificndolas de acuerdo a las caractersticas
citolgicas que adelante se describen y consultando con el maestro las dudas que
surjan al respecto.
6.1 Caractersticas citolgicas de las clulas hemticas:
Procesos de reproduccin:
Proceso de maduracin

10) BIBLIOGRAFA:
http://es.wikipedia.org/wiki/Hematopoyesis

Prctica no 7
RECUENTO DE LEUCOCITOS
1) Fundamento:
2) Objetivos:
Al terminar la prctica el alumno ser capaz de:

3)

Ejecutar correctamente el recuento de leucocitos.

Identificar la utilidad clnica del recuento de leucocitos.
Describir el fundamento del mtodo.
Generalidades:

Los leucocitos o glbulos blancos son clulas que estn principalmente en la

sangre y circulan por ella con la funcin de combatir las infecciones o cuerpos
extraos; pero en ocasiones pueden atacar los tejidos normales del propio cuerpo.
Es una parte de las defensas inmunitarias del cuerpo humano.
Se llaman glbulos blancos, ya que ste color es el de su aspecto al
microscopio.
Hay diferentes grupos de glbulos blancos: los llamados polimorfonucleares
(neutrfilos, eosinfilos y los basfilos) y los mononucleares (los linfocitos y los
monocitos).
El origen de todas las formas de leucocitos es a partir de clulas madres de la
mdula sea.
La modificacin de la cantidad de leucocitos puede orientar al diagnstico de
enfermedades infecciosas, inflamatorias, cncer y leucemias, y otros procesos.
Por ello el recuento es muy orientativo en diferentes enfermedades. Adems el
porcentaje de cada grupo de leucocitos nos ofrecer una mayor informacin para
precisar un diagnstico.
Cuando
neutrfilos
porcentaje
desviacin

en la medicin de leucocitos se ven clulas jvenes aparecen los

en forma de ncleo en forma de bastn (cayados), y un aumento del
de los glbulos blancos polimorfonucleares, esto se denomina como
"a la izquierda". Este trmino sugiere infecciones bacterianas agudas.

El estudio de los leucocitos se realiza habitualmente en un estudio de

hematimetra y recuento leucocitario completo.
El conteo de globulos blancos es un examen de sangre para medir el nmero
de estos glbulos.
Los glbulos blancos ayudan a combatir infecciones y tambin se denominan
leucocitos. Existen cinco grandes tipos de estos glbulos:
Basfilos
Eosinfilos

 Linfocitos (clulas T y clulas B)

Monocitos
Neutrfilos
4)
a)
b)
5)
a)
1.
b)

Equipo:
Microscopio
Agotador elctrico de pipetas de Thoma.
Material:
Biolgico
Sangre obtenida con EDTA
De laboratorio

1. Pipetas de Thoma para leucocitos, con boquilla.

2. Cmara de Neubauer
3. Solucin diluyente de Turck
4. Gradilla
5. Tubos de ensaye de 13 x 100 mm
6. Pipetas serolgicas de 5 ml
6) Procedimiento:
1. Mezclar la sangre por lo menos 5 minutos.
2. Con la pipeta de Thoma para leucocitos, aspirar sangre hasta la marca
0.5.
3. Con la misma pipeta y cuidando que no s salga la sangre, aspirar lquido de
Turck hasta la marca 11. Es recomendable rotar la pipeta al aspirar y
hacerlo mantenindola en posicin vertical para evitar la formacin de
burbujas, que afectaran la dilucin, que en este caso es de 1:20.
4. Eliminar el exceso de diluyente secando la punta con papel absorbente.
5. Agitar la pipeta durante 60 segundos en el agitador elctrico para conseguir
una suspensin uniforme.
6. Desechar lasa tres o cuatro primeras gotas de la pipeta, limpiar la punta con
papel absorbente y llenar la cmara de Neubauer.
7. Dejar reposar durante 2 minutos para permitir la sedimentacin de los
leucocitos.
8. Contar los leucocitos encontrados en los cuadros grandes angulares, que
contienen cada uno 16 cuadros medianos. Verificar que la distribucin de
las clulas sea homognea, de lo contrario repetir el procedimiento.
9. Multiplicar el nmero de leucocitos contados por 50 para obtener el total de
glbulos blancos por mm3 de sangre.
10.
La frmula utilizada para realizar los clculos es la siguiente:

N x 20 x 10

= N x 50
4

Donde:
N= nmero de leucocitos contados
20= titulo de dilucin
10= correccin de la profundidad de la cmara para ajustar el volumen a
1 mm3
4= total de cuadros grandes contados.
7) Valores de referencia:
En la tabla se muestran los valores de referencia de acuerdo a la edad.
LEUCOCITOS
VALORES DE REFERENCIA
EDAD

SEXO

VALORES (Leuc/mm3)

RECIEN NACIDO

F/M

9,000 A 30,000

1 MES A 2 AOS

F/M

6,000 A 18,000

3 A 10 AOS

F/M

4,000 A 13,600

11 A 60 AOS

F/M

5,000 A 11,000

MAS DE 60 AOS

F/M

5,000 A 10,000

8) Comentarios:

9) Resultados:
10)

Bibliografa:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003643.htm

http://www.tuotromedico.com/temas/leucocitos.htm

Practica no. 8
RECUENTO DE GLBULOS ROJOS
1) Fundamento:
2) Objetivos:
Al terminar la prctica, el alumno ser capaz de:
Identificar la importancia y utilidad clnica del recuento de eritrocitos.
Ejecutar correctamente el recuento de glbulos rojos en muestras
sanguneas.
Describir el fundamento del mtodo.

3) Generalidades:
4)

Equipo:
Agitador elctrico para pipetas Thoma
Reloj de laboratorio
Microscopio

5) Material:
a) Biolgico:
1. Sangre obtenida con E.D.T.A.
b) De laboratorio
1. Pipetas de Thoma para glbulos rojos con boquilla
2. Cmara de Neubauer
3. Liquido diluyente de Hayen
4. Gradilla
5. Tubos de ensayo de 13 x 100 mm
6. Pipetas serolgicas de 5 ml.
6) Procedimiento:
1. Mezclar la sangre por lo menos durante 5 minutos.
2. Llenar la pipeta de Thoma con sangre hasta la marca 0.5.

3. Diluir con liquido de Hayen, llenando hasta la marca 101; se debe evitar la
formacin de burbujas, que alteraran la dilucin. Para ello, se recomienda
rotar la pipeta al aspirar y mantenerla en posicin vertical. El exceso en la
punta se elimina con papel secante. Con esto, obtenemos una dilucin de 1
a 200.
4. Agitar durante un minuto en el agitador elctrico.
5. Inmediatamente eliminar las primeras cuatro gotas y cargar la Cmara de
Neubauer en sus dos cuadriculas. Dejar reposar un minuto a temperatura
ambiente para permitir la sedimentacin de las clulas.
6. Contar al microscopio con objetivo seco dbil o fuerte, verificando primero
que la distribucin de las clulas sea homognea; en caso contrario, se
deber repetir la prueba. La cuenta se realiza en 80 cuadros pequeos del
rea central de la cmara, seleccionando para ello un cuadro mediano
central y cuatro angulares.
7. Multiplicar el nmero de eritrocitos contados por 10,000 para obtener el
total de glbulos rojos por mm3 de sangre.
8. La frmula utilizada para realizar los clculos es la siguiente:
N X 200 X 10 X 400 = N X 10,000
80
Donde:
N= NUMERO DE ERITROCITOS CONTADOS
200= TITULO DE DILUCIN
10= CORRECCIN DE LA PROFUNDIDAD DE LA CMARA PARA AJUSTAR EL
VOLUMEN A 1 mm3.
400= TOTAL DE CUADROS PEQUEOS DEL CUADRO CENTRAL DE LA
CMARA
80= TOTAL DE CUADROS PEQUEOS CONTADOS

7) Valores de referencia:
Al igual que con la hemoglobina, se modifican con la edad, sexo y altura sobre el
nivel del mar. En la CD. De Xalapa, Ver a 1400 m sobre el nivel de mar son los
mostrados en la tabla.

EDAD

TABLA
ERITROCITOS
VALORES DE REFERENCIA
SEXO

RECIN NACIDO

F/M

VALORES
(x 106/mm3)
4.5 a 6.5

1 MES A 2 AOS

F/M

3.5 a 4.0

3 A 10 AOS

F/M

4.1 a 5.0

11 A 60 AOS

FEM

4.6 a 5.8

MAS DE 60 AOS

F/M

4.1 a 5.0

En la siguiente tabla, se muestran los valores promedio de eritrocitos a diferentes

alturas sobre el nivel del mar:
TABLA
ERITROCITOS
VALORES A DIFERENTES ALTITUDES
ALTURA EN METROS
MUJERES
HOMBRES
6
3
Erit. X 10 /mm
Erit. X 106/mm3
MEDIA
RANGO
MEDIA
RANGO
NIVEL DEL MAR

4.65

3.88 a 5.42

5.15

4.39 a 5.91

1000

4.069

4.17 a 5.21

5.28

4.63 a 5.93

1860

4.092

4.32 a 5.51

5.76

4.94 a 6.58

2220

4.99

4.27 a 5.71

5.69

5.10 a 6.28

2670

4.95

4.34 a 5.59

5.63

4.95 a 6.31

8) Comentarios:
9) RESULTADOS:
10)

Bibliografa:

Practica no 9
RECUENTO DE PLAQUETAS
1) Fundamento:
2) Objetivos:
Al terminar la prctica, el alumno ser capaz de:
Justificar la utilidad clnica del recuento de plaquetas.
Realizar el recuento de plaquetas.
3) Generalidades:
4) Equipo:
a) microscopio
b) contador de clulas
c) agitador elctrico para pipetas de Thoma.
5) Material:
a) Biolgico:
1. Sangre obtenida con E.D.T.A.
b) De laboratorio:
1. Pipetas de Thoma para leucocitos, con boquilla.
2. Cmara de Neubauer.
3. Caja de Petri.

4. Papel filtro.
5. Tubos de ensaye de 13 x 100 mm.
6. Solucin de oxalato de amonio al 1%
7. Pipetas serolgicas de 5 ml.
6) Procedimiento:
1. Con la pipeta de Thoma, aspirar el diluyente recientemente filtrado, hasta la
marca 0.5.
2. Ahora, cuidando que no se salga el diluyente, aspirar sangre bien mezclada
hasta la marca 1.
3. Cuidando igualmente que no se salga la sangre, aspirar nuevamente liquido
de dilucin hasta la marca 11. Con esto obtenemos una disolucin de
1:20.
4. Mezclar inmediatamente la pipeta en el agitador elctrico durante un
minuto.
5. En una caja de Petri, poner un disco de papel filtro hmedo. Esto nos servir
como cmara de humedad.
6. Llenar la Cmara de Neubauer en sus dos cuadriculas y colocarla en la
cmara de humedad. Dejarla en reposo durante 10 minutos para permitir la
sedimentacin de las plaquetas.
7. Contar al microscopio en las mismas superficies usadas para el recuento de
glbulos rojos. Sacar el promedio de ambas cuadriculas.
8. Hacer los clculos con la siguiente frmula:
N X 20 X 10 X 400 = N X 1000
80
Donde:
N= Numero de eritrocitos contados.
20= Titulo de dilucin
10= Correccin de la profundidad de la cmara para ajustar el volumen
a 1mm3.

400= Total de cuadros pequeos del cuadro central de la cmara.

80= Total de cuadros pequeos contados.
7) Valores de referencia:
De 200,000 a 500,000/ mm3 de sangre.
8) Comentarios:

9) Resultados:

10)

Bibliografa:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003647.htm

Practica no. 10
RECUENTO DE RETICULOCITOS
1) Fundamento:
.
2) Objetivos:
Al terminar la prctica, el alumno ser capaz de:
Identificar la importancia y utilidad clnica del recuento de reticulocitos.
Realizar correctamente el recuento porcentual de reticulocitos en muestras
de sangre.
Calcular a partir del recuento porcentual, las cifras absolutas de reticulocitos
por mm3 de sangre.
3) Generalidades:
4) Equipo:
a) Bao Mara a 37C.
b) Microscopio

5) Material:
a) Biolgico:
1. Sangre obtenida con E.D.T.A.
b)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

De laboratorio:
Tubos de ensayo de 10 x 75 mm.
Pipetas Pasteur
Portaobjetos
Puentes de vidrio para tincin
Solucin colorante de nuevo azul de metileno
Solucin de azul de cresil brillante
Gradilla
Aceite de inmersin

6) Procedimiento:
Con ambos colorantes, se sigue la misma tcnica:
1. Usando pipeta Pasteur, colocar dos gotas de sangre perfectamente
mezclada en un tubo de ensaye de 10 x 75 mm.
2. Agregar 2 gotas del colorante (azul de cresil brillante o nuevo azul de
metileno).
3. Mezclar suavemente e incubar a 37C durante 15 a 20 minutos.
4. Resuspender los eritrocitos mediante mezclado suave y hacer extensiones
delgadas.
5. Cuando el frotis est seco, leer al microscopio. Contar 500 eritrocitos,
anotando el nmero de reticulocitos encontrados durante esa cuenta.
6. Obtener el porcentaje de reticulocitos mediante la siguiente formula.

% DE RETICULOCITOS= # DE RETICULOCITOS X 100

500 ERITROCITOS
7. Para obtener la cantidad de reticulocitos por mm 3 de sangre, se requiere
realizar una cuenta de eritrocitos, como se describi en la practica anterior
y posteriormente se calculan usando la siguiente formula:
RETICULOCITOS/mm3= % DE RETICULOCITOS X ERITROCITOS/mm3
100
7) Valores de referencia:
Porcentual: 0.5 a 2%
Absolutos: 20000 a 120000/mm3
8) Comentarios:

9) Resultados :
10)

Bibliografa:

http://kidshealth.org/parent/en_espanol/medicos/reticulocyte_esp.html#

Practica no 11
CLASIFICACIN DE ANEMIAS
1) Fundamento:
2) Objetivos:
Al terminar la prctica el alumno ser capaz de:
Definir, describir y calcular los ndices eritrocticos.
Clasificar morfolgicamente las anemias
3) Generalidades:
4) Equipo:
a) Ninguno
5) Material:
a) Biolgico, ninguno.
b) De laboratorio, ninguno.

6) Procedimiento:
7) Resultados:
8) Bibliografa:
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000560.htm
http://www.entornomedico.org/enfermedadesdelaalaz/index.php?
option=com_content&view=article&id=95:anemia&catid=35:enfermedades&Item
id=56

Practica no 12
VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR
1) Introduccin:

2) Fundamento:

3) Objetivos:
Efectuar la tcnica de la velocidad de sedimentacin de los eritrocitos.
Adquirir habilidad en el manejo de esta tcnica.
4) Generalidades:

5) Material:

Tubos de ensayo de 13 x 100mm.

Tubos de Wintrobe de 11.5cm de largo por 3mm de dimetro.
Pipetas Pasteur con bulbo
Gradilla de sedimentacin

5.2 Material biolgico

Sangre capilar o venosa con anticoagulante.
5.3 Equipo
Centrifuga clnica

6) Tcnica:
1. Seguir todos los pasos de la tcnica del macrohematocrito para llenar un
tubo de Wintrobe.
2. Despus de que el tubo de Wintrobe est lleno de sangre, colocarlo en
posicin vertical en una gradilla de sedimentacin por un lapso de 60
minutos.
3. Leer en la escala descendente de la izquierda el nivel en que se encuentra
la zona de separacin entre el plasma y los eritrocitos sedimentados.
4. Informar el resultado en milmetros en una hora.
7) Clculos:
Correccin por hematocrito.
La velocidad de sedimentacin se corregir cuando el valor de HTO de la
muestra se encuentre por debajo de los valores de referencia.
Utilizar la tabla de correccin
8) Valores de referencia:
Nios

0 20 mm/h

Mujeres

0 20 mm/h

Hombres

0 9 mm/h

9) Resultado:

10)

Bibliografa:

http://www.tuotromedico.com/temas/velocidad_sedimentacion.htm

Lista de reactivos
1.
2.
3.
4.
5.

Anti A,
Lectina antiA1,
Anti B,
Anti AB
Anti Rh
6. Albumina bovina al 22%
7. Antigamaglobulina humana o suero de Coombs
8. Solucin salina isotnica
9. Solucin patrn de hemoglobina de 60 mg/dl.
10.
Amortiguador de fosfatos de PH 6.8 A 7.0
11.
Solucin colorante de May Greenwald
12.
Solucin colorante de Giemsa
13.
Solucin colorante de Wright
14.
Amortiguador para colorante de Wright
15.
Aceite de inmersin
16.
Liquido diluyente de Hayen

17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.

Solucin colorante de nuevo azul de metileno

Solucin de azul de cresil brillante
Alcohol etlico
Oxalato de amonio
Oxalato de potasio
Citrato disdico
Dextrosa
cido etilen diamino tetraactico (E.D.T.A.)
Heparina
Agua destilada