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MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
PRESENTADO POR:
MAURICIO SUSUNAGA Cdigo: 1.110.516.372
DIANA PALACINO RAYO Cdigo: 1.106.776.008
CLAUDIA DEL PILAR GAMEZ BARRERA Cdigo: 1.120.373.773
LAURA MILLAN Cdigo: 1.110.475.656
JUAN PABLO ZAMBRANO Cdigo: 1.110.177.875
PRESENTADO A:
Ing. Anglica Prez
1. OBJETIVOS
1.1 OBJETIVO GENERAL
Identificar diferentes especies de microorganismos como hongos y bacterias mediante toma de
muestras en laboratorio de agua de charco y evaluacin microbiolgica en alimentos.
Realizando procedimientos de siembra, coloracin, tincin e identificacin macroscpica y
microscpica de estos.
1.2 OBJETIVOS ESPECFICOS
Identificar diferentes especies de microorganismos mediante
mtodos
microbiana.
Realizar mtodos de tincin mediante coloracin simple y compuesta.
Clasificacin de hongos mediante la observacin microscpica.
Identificar medios de cultivo diferencial y selectivo.
Controlar el crecimiento bacteriano de Gram- positivo y Gram -negativos.
Identificar mediante el mtodo microscpico cianobacterias.
Identificar unidades formadoras de colonias.
Establecer normas y principios bsicos de comportamiento en el laboratorio.
de siembra
2. MARCO TEORICO
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
Los laboratorios de microbiologa estn regidos por normas de seguridad e higiene que deben
cumplirse a cabalidad para garantizar la proteccin contra infecciones de los estudiantes u otro
personal que labora en estas instalaciones, as como garantizar la calidad de las tcnicas y la
confiabilidad de los resultados.
METODOS DE SIEMBRA
Siembra en Estra Compuesta: Con ste procedimiento se puede conseguir una buena
separacin de las colonias y aislarlas fcilmente. Par ello Se flamea el asa redonda, se toma
la muestra del material a estudiar (agua residual), se coge parte de la muestra para colocarla en
el tubo de ensayo que contiene el agua peptonada Homogenizar, luego se Colca el inoculo en
uno de los extremos de la caja de Petri con el medio de cultivo indicado. Extienda el cultivo
haciendo 4 estras paralelas, sin romper el agar y Terminado la siembra, marcar las cajas en el
borde de la base de la caja y envolverla en papel vinipel para llevarlas a incubar a 37 C.
TCNICAS DE TINCIN
La tincin es una tcnica en la que se utilizan diferentes colorantes, que son captados por las
estructuras de las muestras biolgicas que se observan al microscopio, siendo cada estructura
a fin a un tipo determinado de colorante, por lo que se pigmentan de diferente color y se pueden
diferenciar e identificar.
Tincin simple: Un solo colorante. Se basan en el hecho de que las clulas tienen una
composicin qumica diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de forma
diferente frente a un colorante.
Tincin de Gram: Fue desarrollada empricamente por Christian Gram en 1884, a pesar del
tiempo transcurrido la tincin apenas se ha modificado y es unos de los primeros pasos que se
realiza para cualquier identificacin bacteriana. Ayuda a determinar rpidamente las
caractersticas morfolgicas, por lo que es til en la indicacin de los antibiticos. Esta tincin
tambin permite establecer si el material enviado al laboratorio para su cultivo posee la calidad
adecuada.
Es la tincin usada ms comnmente en los laboratorios de microbiologa. Constituyen el
criterio bsico para separar los grandes grupos de bacterias (Gram positivas y Gram negativas),
Ahora se sabe que la discrepancia en las propiedades de tincin de estos dos grupos refleja
una diferencia fundamental en la naturaleza qumica de sus paredes celulares y en la
naturaleza de estas. Despus de la fijacin de la muestra en un portaobjetos de cristal (por
calentamiento o tratamiento con alcohol), esta se expone a cristal violeta y despus se agrega
Lugol para formar un complejo con el pigmento principal. Durante la decoloracin con alcohol o
acetona, las bacterias Gram positivas teniendo una gruesa capa de peptidoglicano es capaz de
retener el complejo, mientras que los microorganismos gramnegativos teniendo una capa
delgada de peptidoglicano lo pierden; se aade saponina como contra colorante, que es
retenido por los microorganismos gramnegativos (de ah su color rosado).
MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de
los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado
(es decir, se le aaden organismos) y a continuacin incubado en condiciones que favorezcan
el crecimiento microbiano. El crecimiento de los microorganismos es el cultivo. Un cultivo
axnico o puro contiene un nico tipo de microorganismos. Los medios de cultivo deben
contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y deben estar exentos de cualquier
microorganismo contaminante. Los medios de cultivo contienen como mnimo: carbono,
nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas
vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Tambin se aaden colorantes que
actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores
del crecimiento de unas bacterias y no de o tras.
El agar es el principal agente solidificante utilizado en medios bacteriolgicos. Se disuelve
completamente a 100C y se solidifica al enfriarse a 40C.
De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse en:
Lquidos: Se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote. Se denominan caldos de
cultivo y no tienen agar en su formulacin.
Semislidos: Contienen 0.5% de agar en su formulacin. Se utilizan para estudiar la
movilidad de las bacterias (presencia o ausencia de flagelo).
Slidos: Contienen de 1.5 a 2% de agar en su formulacin. Estos medios inmovilizan a las
clulas, permitindoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. Las
colonias permiten al microbilogo reconocer la pureza del cultivo; las placas que contengan
del estado microbiolgico de un alimento, agua, suelo entre otros. Tiene un valor limitado como
indicador de la presencia de patgenos o sus toxinas. Altos recuentos microbianos se
consideran poco aconsejables para la mayor parte de los alimentos.
PRUEBAS DE ANTAGONISMO
La composicin de la micro flora y de la micro fauna de un ecosistema est regulada por las
interacciones de los microorganismos de una comunidad entre s y de los mismos con el medio
no bitico de lo cual surge un equilibrio dinmico. Si dos o ms especies que coexisten en un
lugar no se afectan mutuamente la relacin es neutralismo. Cuando algo de esto se modifica,
las especies comienzan a interactuar y las relaciones que se presentan pueden ser:
comensalismo, protocooperacin, simbiosis, amensalismo, predacin, parasitismo. La
evaluacin de estas relaciones in vitro permiten aislar y seleccionar microorganismos con
capacidad de Biocontroladores. En las pruebas de antagonismo se trabaja con la tcnica por
enfriamiento, el Mtodo de Igarashi y tcnica de estras.
En la tcnica por enfriamiento se toma la caja de Petri con el medio de cultivo nutritivo y se
divide en la parte trasera por la mitad con un marcador de vidrio y se seala la mitad de cada
una de las mitades previamente divididas. Se marca cual microorganismo va a inocular en cada
lado y finalmente por puncin sembrar los microorganismos. Incubar a 37C si uso bacterias o a
25C si uso hongos.
En mtodo de Igarashi Se toma una caja de Petri y se divide en 4/4 y sembrar por siembra
masiva con un asa redonda, en un espacio de tres (3) centmetros un microorganismo
seleccionado y finalmente siembre en el centro por puncin.
La tcnica por estras su proceso se hace en caja de Petri en la cual previamente usted
sembr con una estra en el centro una bacteria, sembrar a 0.5 cm, por medio de estras, cuatro
bacterias a evaluar. En el revs de la caja con marcador de vidrio seale que microorganismos
sembr. Incubar a 37C.
3. METODOLOGA
3.1 INSTRUMENTOS
Asa redonda
Cajas de Petri
Mechero
Incubadora
Vinipel
Marcador de vidrio
Portaobjetos
Cubreobjetos
Tubos de ensayo
Asa redonda o curva
Asa recta
Pipetas estriles de 1 y 2 ml
Estufa
Vaso de Precipitado de 500 ml
Contador de colonias
Microscopio
3.2 REACTIVOS
No
7:
OBSERVACIN
MICROSCPICA
DE
Bacilos
Color:
Morado
Tamao:
Forma:
Color:
Morado
Tamao:
Forma:
Tricoderma
Redondeados u ovales, se observa la formacin de
hifas.
Verde suave
Microscpio 10X,
Microscpio 40X.
Microscpio 100X.
9. CONCLUSIONES
Los medios qumicamente definidos se preparan aadiendo al agua destilada cantidades
precisas de compuestos orgnicos o inorgnicos altamente purificados. Los diferentes medios y
tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiologa pues sirven para identificar
las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son
sensibles esas bacterias.
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de
crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. Es decir, es un soporte que proporciona sustancias nutritivas que permitan el
desarrollo y reproduccin de microorganismos.
Los medios slidos en placas Petri, ocupan una superficie lo suficientemente grande como para
poder visualizar perfectamente las colonias microbianas. El sistema en placa es uno de los
medios que permite mejor el aislamiento de microorganismos que puedan crecer en l.
Evidenciamos microscpicamente los microorganismos presentes en placas o en material
alimenticio, reforzamos y aprendimos nuevos conocimientos identificando y diferenciando
hongos y bacterias.
10. BIBLIOGRAFA
Biblioteca Central Luis Demetrio Tinoco. (s.f.). NORMAS DE LA AMERICAN PSYCHOLOGICAL
ASSOCIATION (APA) PARA LA CONFECCIN DE REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.
Recuperado el 07 de Noviembre de 2016, de
http://www.cibem.org/paginas/img/apa6.pdf.
Universidad Nacional Abierta y a Distancia, Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del
Medio Ambiente. (s.f.). Gua de Laboratorio Microbiologa Ambiental. Recuperado el
06 de Noviembre de 2016, de
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/358010/358010A_MICROBIOLOGIA_PRACTICA
S_2014.pdf.