CapITulo veinte

CROMnTOGHnFlR DE GnSES

La crornatografia de gases (CG) es una de las tecnicas mas vcrsatilcs y ubicuas en 1m

laboratorios, y sc usa mueho ell la determinacion de compuestos organicos. POI' cjcrnplo,
la separacion de bcnceno y ciclohexano (puntos de ebullici6n 80.1 y 80.S0C) cs extremadamcntc sencilla mediante cromatograffa
de gases, pero casi imposiblc con dcstilacion
convencional. Aunque Martin y Synge inventaron la cromatograffa liquido-lfquido cn 1\)41,
la introduccion de la cromatograffa de particion gas-Ifquido, por James y Martin (una
dccada despucs) iuvo una repercusi6n mayor e inrnediata por dos razoncs: la primcra que,
al contrario de la crornatograffa lfquido-lfquido
en columna que se opcraba manualmcnic.
la cromatografia de gases rcquiri6 instrumentos para su aplicacion; csta sc desarrollo gracias a la colaboracion de qufrnicos, ingenicros y Ifsicos, y los anal isis lucron mucho ma\
rapidos y se hadan en pequeiia escala. La segunda fue que la industria petrolcra. con su
desarrollo, debia mejorar el control analuico, por 10 que la cromatograffa de gases sc aooplO
de inrnediato. En pocos aiios se generalize el uso de este metoda para analizur casi cada
tipo de compuesto organico.
Con esta tecnica sc pucden separar mezclas muy complejas; cuando sc acopla con
la cspcctrornctrta de masas como sistema de delcccion, cs posiblc la identificaci6n virtualmente posiliva de los eluados COil una muy alta sensibilidad, creando un sistema analilic(l
muy poderoso.
Hay dos clases de cromalograffa de gases: cromatograffa
de gas-solido (de adsordon) y cromatografia
de gas-Iiquido (de partidon).
De elias, la mas imporlanle cs la
cl'omatograffa de gas-Ifquido (GLC, gas-liquid chromatography), usada en la forma tic una
columna capilar. En cSle capitulo sc des<.:rihinln los principio!:> de opem<.:i6n dc la cr(lm~tograffa de gases, los tipos de colulllnas y los detectores que se usan con ella. Se dc~cnbinin los principios de la especlrometrfa de masas (MS, Illass spectrometry) y cl a<.:oplamiento del cromat6grafo de gases con el especlromelro de masas (GC-MS).

20.1 Realizacion de separaciones con cromatograffo de gases

EI anal ito en el cst ado de vapor
~c distrihuye entre la rase eslal'ionaria y el gas acarreador. Los
equilihrios 1.'11 rase gaseosa son
rilpidos. pm In que la resoluci6n
puede ser altll. igual que el IlUIllCW de platns.

574

En cromalograffa de gases, la mueslra pasa al estado de vapor (si no es ya gaseosa) inycctandola a un puerto calentado, y el eluyel1le es un gas (el gas acarreador).
En general. 13
a
fase estacionaria es un Ifquido no volatil soportado en una pared capilar con ral'licul '
s61idas inertes, como de tierra de diatomeas (kieselguhr, formado pOI' resins dc eSljuclcloS
de algas unicelulares marinas, microscopicas, constituitlas principalmel1te por sflicc). ,Ul
.
de d'latOl11easse suele cait:lI1ar
.
11'11'a,1 10
tierra
para aUlllental' el taman-'a de parllcu Ia, y ,'.
011,
.
que se llama ladrillo refra<.:tario, que se vende, por ejemplo. con el 11()ll1hredc Chl'(lrll{l~(1rh

s
u
1I

P
h
5t

20.1

REALIZACION

DE SEPARACIONES

.,
Seccion

CON CROMATOGRAFiA

Medidor
de flujo

Secci6n de
la muestra

d, la """"")

__

575

DE GASES

\rr====l

--;;-.

Oescarga

~_oe_tec_to~r~i'

~~
----i

Lectura

I
I
I
I
I

myeccioru
Deposito:
de gas
acarreador

~
:

'----------------'
Calentadores

Columna

(empacada

0 capilar)

terrnostaticos

p () W. Hay una gran cuntidad de fases lfquidas disponibles,

no la rase

y carnbiando

m6vil es como se logran las diferentes separaciones.

la cromatograffa

la fase Ifquida

EI factor mas importante

de gases es la selecci6n de la columna adecuada (rase estacionaria)

,eparw.:i6n particular
,(')Iida dcterrninara

de intercambio

con los componcntes

Esquema

de gases.

de un

y
en

para la

sobre la que se desea experirnentar, La naturaJeza de la fuse Ifquida

el equilibrio

Figurtl 20.1
cromaiograto

de la rnuestra, que a

su vez dcpendera de la solubilidad 0 adsorbabilidad de la muestra, de la polaridad de la fase

cstacionaria y de las moleculas de la rnuestra, del grado de enlaces de hidr6geno y de las
inrcracciones qufmicas especfficas. La mayor parte de las separaciones utiles se han determinado de manera empfrica, aunque hoy se dispone de informacion
mas cuantitativa.
En la figura 20.1 se presenta un esquema de un cromatografo de gases, y en la Iigura
20.2 sc aprecia la fotografla de un sistema moderno de cromatograffa de gases. La muestra
sc inyccta rapidamente con una microjeringa hipoderrnica (vease la figura 2.11) a traves de
un taplin septum de goma de silicona y pasa a la columna.

EI puerto de inyeccion

Ira. la columna

a las que la muestra tenga una

y el detector se calientan

a temperaturas

de mues-

presion de vapor minima de 10 torr, usual mente a unos 50C par arriba del punto en el que
hicrvc cl solute con mayor alto punto de ebullici6n.

EI puerto de inyecci6n

y el detector se

suclcn mantener LIn poco mas caJientes que la columna para evaporar rapidamente

la mues-

Figur 0 20 2

Sistema automatico moderno para crornatograna de gases. (Cortcsfu LIe

Shimadzu

Nortcamcrica.j

576

CAPiTULO

20

DE GASES

CROMATOGRAFIA

Ira lfquida y evitar que csta sc condense en el detector, Para colurnnas crnpacadas sc in\cc.

tan rnuestras liquidus de 0.1 a I () ILL, en tanto que para rnucstras gascosas son necc~;rill\
I a 10 mL. Los gases sc pueden inycctar con una jcringa hcrrnctica de los gases o a Irm'l'\
de una camara especial para adrnision de gases de volumcn constantc (valvula de l1luc\trclI
de gases). Para columnas

capilarcs

solo se dcbcn inycctar

vohimcnes

de aproximadamclllr

1/ I 00 de los anteriorcs dcbido a la mellor capacidud (aunquc mayor rcsolucion) de e,U\

colurnnas. En los cromatogralos discfiados para usar columnas capilares se incluycn sera.
radorcs de mucstra que dcsvfan una rraccion de esta Iija, pcquciia, a la columna y el I\~\l\)
se dcsecha. Por 10 regular tarnbicn pcrrnitcn llevar a cabo la inyecci6n sin dcxviacion <.k
rnuestra cuando se usan colurnnas cmpacadas (inycctorcs divisorcs/sin dcrivacion).
La scparacion sc elcctua a rncdidu que los componentes del vapor sc cquilibrun con
el gas acarrcador y la lase estacionaria. EI gas acarrcador cs un gas quirnicamcntc
incno
que debe cncontrarse

en forma pura, como argon. hclin

ticnc mejor ericicncia

porqlle

mayorcs vclocidades.

EI gas que se eseoja dcpendeni

SlI

di fusividad

La mueslra se dClccla uUlolmilicamcntc

La deteccion aUl\llmltica de los
analitos en el mOlllento en qlle
sakn de 1:1 coluillna haec quc
las Illcdicioncs scan nipida~ y
cOllvelliclltes. Los tiell1pos de
n:tcilcillil se lIsan para idelltilieaciones ellal italivas. Para las
medicioncs clialltit.ativ<ls sc lisa"
las areas de los maxilllos.

nitrogcno.

Un gas rnuy den'lI

es menor, pero un gas de baja densidau permill'

con frccuencia

del tipo de deleclor.

cuando sale de la columna

(a un llujo

C()I1~

tan Ie) mediante diversos detectorcs cuya respuesla depende de la compnsicion L1el vapm
(vcase mas adelanlc). En gcneral, cl deteclor Liene una seccioo de referencia y Lilla seccion

de muestreo.

EI gas acarrcador

lumna y sale de la columna

pasa por la secci()n de rclcrencia

poria

sccci6n

de Illucslrco_

muestrco en relaci6n con la scnal en In secci6n de rcfercncia

dondc se gralican

de retencion
se rcgistra

los maximos cromatognificos

cromatogralico)

sc alimenta

y comparar

la mucstra y el

csla vez

COil

a un rcgislradnr

Al mediI' cl ticmpo

en fUllcion dclliempo.

(los millLllos entrc el l11oll1cnlo de inyeclar

cl maximo

antes de el1lrar a la co-

La rcspuesla de la sccci(ln d~

mOIllClllO

ell que

el dc un cSI.lndar de Iii

r;asolinJ sin plomo

Columna:

DB-Petro 100

Num. parte J&W:

Acaneador:
Homo.

"

I
II

Inyector.
Detector:

1 2

3 4

1. Metano
2.II-Butano
3. Isopenlano
4. IIPenlano
5 II-Hexano
6. Metllelelopentano
7. Benceno
8. C,clohexano
9. Isooclano
10. ,,Heplano

100 m x 0.25 0.1. min., 0.51lm

122-10A6
Helio a 25.6 cmls
O'C durante 15 min
o a 50 C a I Imin
50 a 130"C a 2"lmin
130 a 180 C a 4 Imln
180 C duranle 20 mIn
Divisor I :300.200C
I ILL de muestra neta
FlO. 250'C
Nitrogeno gaseoso de relleno
a 30 mUmin
5

10

'11. Tolueno
12.2.3.3- Tromelilpentano
13 2-Melllheplano
14 4Metilheptano
15. ,,Octano
16 Etllbenceno
"17 IIIXcleno
18 p-X,leno
19. {/Xileno
20~,,Nonano

17
161819

11.12

21 Isopropilbenceno
22 Propilbenceno
23. 1.2.4Trimelilbenceno
24.lsobut,lbenceno
25 1I,Bulilbenceno
26 ,,-Decano
27 1.2.3-Trimelilbenceno
28. Butilbenceno
29. ,,-Undecano
30. 1,2,4.5-Tetrametilbenceno
31. Naftaleno
32 Dodecano
33. Tridecano
~
23

'Punto de valle con t2 78',

"Punto de valle con tS. 87',

27

8
22

29

31

13
15

J
flgUfo 20.3.

]~

33

~Lu
130 min

Ejemplo de un cromalograma de gascs para una I11czelacomplcja. usando una.

(;oluillna capilar. (Corlesfa de Agilclll Technologies.)

I
I

20.2

COLUMNAS

PARA CROMATOGRAFIA

-.usLancia pura sc pucde ideruilicur

dc dos compuestos

577

DE GASES

cl maximo

(la coincidcncia

no gararuiza que cstos sean identicos).

en los ticmpos tie rctcncion

EI area bajo el maximo

es proa la conccnrracion,
por 10 que sc puede dctcrrninar en forma cuantitativa
la
canlidad de sustancia. Con lrccuencia los maxirnos son IllUY agudos, y en esc case sc pucde
cOlllparar la altura del maximo con una curva de calibracion prcparada de la misma mancra.
porcional

En general. los sistemas de dcieccion

y tarnbien

.lrca del maximo

en crornatograffa

poseen una leetura autornatica

La capacidad de sepuracion de csta tccnica se ilustra en el crorruuograma

20.3. Ya que los rnaximos

se rcgistran

cs hreve en forma sorprendcntc

tuar con orros

en forma autornatica,

la popularidad

llUlolllal icamcnle

de csta tecnica, 10 que no excluye la razon

son complejas

no se pucden elec-

no es raci I la tarea tie idemi licar los numerosos

eomen:iales

en los que el elluente

de gases-espectrometria

l11asas).EI espec.:troilletro

ESla importante

de masas (GC-MS,

de masas es un detector

es capaz de identilicar

dc (razas de sLlstancias. Por ejernplo,

car cientos de compuestos,

tcenica analftic.:a se llama

lie manera cOloquial, gases-

en los cflucntes

y se pueden determinar

y cuando se usa

vease la secci()n 20.2), esta tcc.:nica

y cuantilicar

la mimi 0 en la sangre, 0 tic contaillinantes

sensible y selectivo,

capilar lie GC (de rnuy alta resoluci6n,

capilar)

gaseoso alilllenta

a un espcclr61l1etro dc lllaS<lS, donde se identi tlean de acuerdo con su

Inasa (pcso formula y patron de fragmcntacion).

(GC-MS

global de analisis

mctodos.

Cuundo las rnczclas

una columna

de la tigura

Eso, aunado a la muestra tan

que muchos de los anal isis que so haccn sirnplcrnente

l1l"ixiIllO~. Se dispone tie inslrumenlos

cromatografia

el tiempo

para las rnuestras cornplcjas.

pcquena que se rcquicre, explica

Inas importantc:

del

del tiempo de rctcncion.

Illczdas

increfblcmcnlc

de akanlarillado

complejas

se PUCtlCIl identili-

trazas de medicalllentos

complejos

en

en el agua. No obstante, para una sensibilidad

(')ptillla, algunos lie los lIetcctores cspedlicos

rnclH.:ionanln despucs orrcecil extraordinarios

de elementos 0 tipos de compuesto

Ifmites tie tletecciOn.

que se

lOue compuestos se pueden determinar con cromatograffa de gases?

Con cromatograffa
hay limitaeiones.

de gases se pueden determinar

Illuchfsimos

compuestos,

Estos debcn ser volatiles y eslables a las tcmperaturas

por 10 regular, de 50 a 3()()OC. La cromatograffa

aunque

que se usan,

de gases es util para:

~ Todos los gases

, La mayor

parte de la" moleculas

que contengan

organicas

no ionizadas,

s61idas

Ifquitlas,

hasta unos 25 carbonos

o Muchos compuestos

organometalicos

(se puetlcn prcparar

dcrivados

volatiles

se puetlcn

preparar

de iones metalicos)
Si los compuestos
derivados

no son volatiles

0 estables,

adecuatlos para su anal isis por

sales ni para macromoleculas;

Oc.

con frecueneia
Esle mctodo

no se puede USaf para

en esos casos, 10 mas generalizado

es usaf HPLC.

~n~ Columnos pafa cromdtogrona de gases

Los dos lipos dc colulllnas
pacadas y las columnas

que se lIsan en cl"Omatograffa

capilares.

Las columnas

lIsaron durante muehos anos. En la actualidad,

las columnas
luciones.

tic gases son las columnas

empaeadas fucron el primer

se usan mas las c.:olumnas capilarcs.

elllpaeadas se siguen usando en aplicaciones

cuando es neccsaria mayor capaeidad.

em-

tipo, y se
aun<..juc

que no re<..juieren grandes reso-

Veanse mayores Lklalles de

GC-MS mas adclaillc.

;~

..

578

CAPiTULO 20

CROMATOGRAFiA

DE GASES

COLUMNAS EMPACADAS
l.as columnas
pucden usar

mucsira
usarlus.

erupucudus

con

grundes.

tumafios

SI:

de

Y convicnc

&

Estas columnas pucdcn icncr cualquicr forma para Ilenar cI homo de calcntamicnn-. ":Illrl'
cstas sc hallan los scrpentincs,
los tubes en forma de U y cn lonna de W, pcro las 4uC -c
usan nuts son las primcras, Las colurnnas cmpacadas rnidcn en general I a 10 m de IUIl"i.
IUd Y 0.2 a 0.6 em de diamctro. Las columnas bien ernpacadas pueden toner I OO{)rlalo~/~l.
por 10 que una columna normal de 3 m tcndrfa 3 000 plates. Las colurnnas coria!'. pucdl'1l
ScI' de vidrio, pero las mas largas sc hacen de accro inoxidablc, por 10 que sc lcs pucd\.'
enderczar para llcnarlas y crnpacarlas: tarnbien se haccn de teflon. Para que scan incnc-; \l'
sigue pretiriendo el vidrio en las colurnnas mas largas. La rcsolucion en las colurnnus ernpacadas s610 aumcnta en proporcion de la rafz cuadrada de la longitud de la columna. Ell
las colurnnas largas se requicrc mayor presion y mayorcs tiempos de analisis y s610 sc usan
cuando no hay otra operon (pur ejcmplo, para solutos que tardan en eluirse cuanc.lo sc u-a
una alta capacidad). En general se irucnta Ilevar a caoo las scparaciones seleccionanJo b
columnas con longiludes en l1lultiplos de 3, como de I 0 3 m. Si una separaci(\n no 1:\
eompleta cn la columna mas corla se intenla entonces con la siguiente mas larga.
La columna se empaca con pequenas partfculas que en sf pueden servir como fa~L'
estacionaria (cromatograf'fa de adsorci6n) 0, con mas rrccucncia, sc recubren COil ulla fi.l~c
!fquida no volalil de polaridad variable (cromalograf'fa de parlicion). La cromalograria
gas-solido es adccuada para separar especies gaseosas pequenas, como H2, N2, CO~. CO.
01, NH, Y CH4, asf como hidrocarburos volatiles usando empaques inorganicos uc grail
superlicic, como alumina (AI10,) 0 polfmeros porosos (como Chromosorb, una r..:sina
poliaromatica con enlaccs cruzados. can cslructura rfgida y lin tamano delinido c.lcporn).
Los gases se separan de al:uerdo con su tumano dcbido a la relcnci6n pOI' adsol'(;ion ~obl'l':
las partfculas. La cromatograffa gas-solido se prcfiere para mueslras acuosas.
EI soporte solido de una lasc Ifquida deoe tencr una gran superficie quflllicamcilic
inertc, pero que se humedezca con la fase Ifquida. Debe ser tcrmicamente estable y cstilr
c.lisponiole en tamanos uni formes. Los soporles que se usan con mayor rrecucncia !-.crr..:paran con tierra de dialomcus, que es un material si !fceo esponjoso que sc vendc hajll
diversas marcas rcgistradas. EI Chromosorb W es una lierra de diatomeas que sc ha calclltado con un fundentc alcalino para disminuir su acidez; su color es claro. EI Chrnmosorh
P es ladriHo refractario molido, mucho mas acido que Chromosorb W, y tiendc a rcaccinnar con los solulos polares, en espccial con los que tiencn grupos funcionales bc1sicllS.
La polaridad del Chromosorb P se puedc disminuir mucho silanizando* la supcrticic
con hexametildisilazano
[(CH,),SihNH. OLLenstein (vcase rererencia 7) Hev6 a caho Ulla
revisi6n sobre la seleccion dc los soporles solidos, tanto de las licrras de dialoll1ea!-. COIlHI
de los tipos de poifmeros porosos .
EI material de empaque de la columna se recuore mezclandolo con la canlioac.l Cllrrecla dc fase Ifquida disuelta en un disolvente de bajo punlo de ebullicio~no
i1celOlla
o penlano. Haciendo uso dc 5 a 101lio del recuorimiento (peso/peso) se ohtendra una cap"
dclgada. Despues de recuorir, eI disolvellle sc evapora calentandolo y agitandoln: Ius ullimas huellas sc pucden climinar al vacfo. Una columna recien preparada debe acondicionar~c
a lcmperatura elcvada hacicndole pasar gas acarreador durante varias horas. Mas adelulll~
se comenla la selecci6n de rases IIquidas.
Las partfculas deben tener tamano uni forme para que se cmpaquen oien, y sus c.liametros deben estar entre una malla de 60 y una de 80 (0.25 a 0.18 mm), una de ~() y Ull"
c.le 100 (0.18 a 0.15 mm) 0 una dc 100 y una de 120 (0.15 a 0.12 111m).Las parlfcL~~
mcnores no son pnlclicas dcoiQo a la alta cafda de presi6~ que c~san.

COLUMNAS CAPILARES: LAS MAs UTILIZADAS

Las l'OIUI1l11a~l'apilarcs

I
1

puedcn

producir resolucioncs lllUY alias

ell comparaci<lll con las (;olul11llas cmpacada~.

Marcel Golay public6, en 1957, el trabajo litulado "Vapor Phase Chromatography anc.llhc
Telegrapher's Equalion" (Cromatograffa en fase vapor y la ecuaci6n del lelegralista) IAII(/I.
Chelll., 29 (1957) 928J. Con su ccuaci6n se predecfa un mayor numer<> c.leplalos en una
"N. del I? .,: EI verno si/(/lIi:(/I'.
l(l~ tfufl11icn~ organic(ls.

Il\uy 1I1ilizado pOl' los qllfltlicM

analf(icos.

l!S d l!tfllivah.:nll' a .I'i/i/III'.

Itlanl'jado

I'llI'

_j

20.2

COLUMNAS

PARA CROMATOGRAFiA

579

DE GASES

(l)IUlnna tubular abicrta, del gada, con la fuse cstacionaria

soportada en la pared interna. Se

~Iiminarfa cl cnsancharniento de las band as dcbido a trayectorias

multiples (difusion por
arrcllwlinamicnLo);
Y en las columnas angostas aumcntarfa la rapidez de transfcrcncia de
iIla~a porque las molcculas deben recorrer distancias pequefias para difundirse. Adcrnas, sc
pucdc LIsaI'mayor rapidcz de Ilujo gracias a la menor caida de presion, con 10 cual se ahatiria la dil'usi6n molecular. EI trabajo dc Golay condujo al desarrollo de diversas columnas
lubulares abiertas que hoy proporcionan resoluciones extrcrnadarnerue
altas y se han vuelto
pilarc~ de los analisis por cromatograna de gases. Estas columnas se Iahrican con sflicc
ru~ionatlo dclgado (Si02) recubierto en el exterior con un polfrnero de poliirnida para soporte
y prolccci6n de la Iragil capilaridad del sflicc, 10 que perrnite que pucdan enrollarse. La
~apa de poliirnida es la que imparte un color pardo a las columnas, y con frecuencia sc
\l~(urece con el U50. La superficie intcrna del capilar es tratada qufrnicamentc
para minirni/ur lu intcraccion de la muestra con los grupos silanol (Si -OH) sobre la supcrficic dcl tubo.
ha(i~ndolos reaccionar con un reactivo tipo silane (por cjernplo, dimetil diclorosilano).
Tarnbien se labrican capilares de acero inoxidahle, material que inleraclua con Il1LlI'hl)S compueslos, por 10 que se desacliva lralandolo con dimelil tliclorosilano
(DMCS)
proJucicndo LIn delgado recuhrimienlo
de ~f1ice rusionado al que puedcn adherirse rases
~'Iaci()narias. Las columnas de aecro inoxidable son mas robustas que las de sflice rundido
\ 'C L1sanpara aplicaciones
que requieren lemperaluras mLly altas.
.
Los capilares lienen 0.10 a 0.53 mm de diamelro interior con longitudes de 15 a 100
Ill. Y puedcn lener varios cicnlos de miles de plalos, inc!uso un mill6n de ellos. Se vendcn
~n forma de 5erpenlines de unos 0.2 m de diamelro (vease tigura 20.4). Las columnas
l'apilarcs Lienen las vcntajas de una alla resoluci6n con maximos ll1uy delgados, liempos
oc anulisis corlos y gran sensibilidad (con los deteelores modernos), pero se sohrecargan
(un 1~lcilidad cLlando la mueslra es demasiada. Con inyeclorcs con derivaci6n (para hacer
cin:ular s610 parte de la mueslra) se resuelve en gran parle el problema de sobrecarga.
La figura 20.5 ilustra las mejoras en la capacidad de separaci6n al pasar de una
colulIlna cmpacada (6.4 X 1.8 m) a L1nacolumna capilar de acero inoxidahle muy larga,
Y cllnsitlerablemente
gruesa (0.76 mm X 150 m), y a una columna capilar del gada de
I'idrio pem mas carla (0.25 mm X 50 m). N6lese que la resoluei6n aumenta a Illcdida quc
la columna se adelgaz.a, aun wando la columna capi lar sea mas corla.
Hay Ires tipos de columna lubular abierta. Las eolumnas tubulares
abiertas con
pared recubierta
(WCOT, wall-coaled open-lubular)
tienen una del gada capa Ifquida que

Figura 204

Columnas capilarcs
para cromatogrnffa de gases. (Cortcsin de Quadrex Corp .. Woodbridge.
CT.)

AI aumenlar t:I espesor de In pcIkula aumenta la c.:apacidad.

pem tamhien la altura de plato y
el tiempo de relenc.:i<lll.

580

CAPiTULO 20

CROMATOGRAFiA

DE GASES

\
\~

I
I

I'n'-lflfll
L

Tres gcncracioncs en la cromatogralfa

de gases. Scparacion de accitc de
menta en columna crnpacada
de 1 pulg X 6 pies (arriba):

j I
I!: II1

I:;

';J.

. 'II

il!
1;1

J\.), 'v

'I

II

.,\... \..,. ------

""1.

--.--_'

..

capilar de accro
iuoxidablc de 0.03 pulg X
50() pies (centro): columna
capi lar lie vidrio de 0.25 mrn
X 50 111 (uhajo), [Scgun w.
Jennings, J. Chromatogt: Sci ..
17 ( 1971)) 36.1. Rcproducido
lid Journal (~f' CltromatograI,liie Science, COil autorizacion
columna

de

Preston Publications. Divi-

~i(lI1 de

Preston Industrics.

lnc.]

i
I

I
I

I
f+

La

re~olllci()n

de la~ collllllna~

LUhularesahierta~ l'~

SCOT>

weOT >

PLOT. La~ capacida-

des de las c()llIll1lla~ SCOT

sClllcjantcs
n<lS

SOil

a las ele las colulll-

empacadas.

rccuhrc a las parcdcs del capilar y las soporta. EI rccubrimicnto sc cfccuia hacicndo pasar
lcntamcntc unu solucion diluida de la lase liquida a travcs de las columnas. EI disoh'cntl'
sc evapora hacicndo pasur gas acarrcador por elias. Dcspucs del rccubrirnicnto In rasc Ii
quida sc cntrccruza
con lu pared. La rase Hquida esiacionaria
rcsultanrc posec un cspe~(lr
de 0.1 a 5 p.m. Las columnas tubularcs abicrtas con pared rccubicrta suelen tcncr :'i (lO()
platos/ru, por 10 que una de 50 III tcndra 250 (JOO platos.
En las colurnnas tubulares abiertas recubiertas con soportc (SCOT. support coaled
open-lubular),
micropartlculas
s61idas recubicrlas con la rase estacionaria
(de mallera si
milar a 10 que OCUITCcon las columnas empacadas) se adhieren a las paredes del capilar:
con clio se consigue mayor area y mayor capacidad que las de pared recuhierta. EI di;!'
mctro dcl tubo de e!'las wlumnas es de 0.) a 1.5 111111, mayor que las LOlumlla.~ de pared
rccubierla. Las vcmajas de menor cafda de presion y columnas larga!'l sigucn vigCIlICS. pen)
la capacidad de eslas se aproxima a la de las columnas clllpacadas. La rapidcz de IlUJlI
suelc SCI' mayor y las conexiones en el volul11en muerlo a la entrada y ell el detector ~(l11
IllCIlOScrfticas. En rnuchos casos no se rcquiere dividir lu I11UeSlra, siempre que cI volulllcil
de estu sea 0.5 p.L 0 menor. Si en una separaci6n se requieren nUls de 10000 platos. ~.:
debe considerar una columna de pared rccubierla y no una columna el11pacada.
EI tercer tipo e~ el de las columnas
tubulares abiertas de capa poros3 (PLOT.
porous layer open-lubular),
que lienen partlculas de rase s61ida adheridas a la pared
I,a
columna para cfOmatograi'fa de adsorci6n. Se sueicn usaI' panfculas de alumina () de pollmeros porosos (rnallas molcclilares).
Esas colulllnas, como las columnas elllpacadas pari!

uc

_j

20.2

COLUMNAS

PARA CROMATOGRAFiA

581

DE GASES

crOll1alOgrai'fa de gas-solido, son adccuadus para separar gases pcrmancnres, asf como
hiurocarburos volatiles. La eficicncia de resolucion en las colurnnas tuhularcs abicrtas sigue
en general el ordcn WCOT > SCOT>
PLOT. Las columnus tubularcs abicrtas de calibre
!!ntnde (0.5 111m) se han desarrollado COil rases esiacionarias liquidus mas gruesas, hasta
0.5 J.Lm, y su capacidad se ascmcju a la de Ius colurnnas SCOT y las colurnnas ernpalauas. si bien su rcsolucion cs mellor.
Las colurnnus pucdcn tolcrar una cantidad dctcrrninada de analito antes de sobrccur!!arsc, cuusando distorsion y cnsancharnicruo de los maxirnos, y dcsplazamicntos en los
~i';lllpoS de rctencion. EI intervale de capacidad de la rnucstra va de unos 100 ng para una
columna de 0.25 mm de diamciro interne y una pclfcula de 0.25 J.L11l de espcsor, hasta 5
J.lg para una columna lie 0.53 mill de diamctro irucrno con una rase cstacionaria
lie 5 J.L111
de cspcsor, aproxirnadamcnte.
Las colurnnas tubulares abienas, pilar de la scparacion por crornatograffa de gases,
m [ahricadus por numcrosas Iirrnas. Algunas de las principulcs son Alltcch Associates,
Inc. (www.alltcchwcb.corn). Agi lent Technologies (www.chcm .ugi lcnt.com/Scri pts/PHome.
a~r). Perkin-Elmer
Inslruments
(htlp://inslrumenls.perkinell1ler.eom),
Quadrex
Corp.
(www.quaurexcorp.com),
Reslek Corp. (www.reslekcorp.com).
SGE. Inc. (www.sge.wm)
~ Sigllllllu-Aldrich
(Supelco) (www.sigmaaldrich.com).

:Ic

FASES ESTACIONARIAS:

LA CLAVE PARA DIFERENTES

SEPARACIONES

Se hall propuesto mas uc mil fases cstacionuria~ para In crom<llograITa de gases, y hay
IlUl11erosas fases cOlllerciales uisponihles. Sc han usado cienLos de fases en columnas Clllpacadus buscando oplimizar su baja cliciencia gcneral, y la selecci6n de la fase eslacionaria cs crflica para alcanzar selcctivioad. Se han hccho varios CSi"uCI-1.0Spara preuecir la
sclecci(in allecuada lie la fase Ifquida inm6vil sin recurrir s610 a las Iccnicas ue ensayu y
~rror (vease llllls adelanle).
Las f:'lscs 1i4uitlas cstacionarias
Las fases se scieccionan de aCLIeruo con su polariuau, leniendo en cllenla que "10
sc seiccciollan con h:L~e en la
,clIlejanle d isuel ve a 10 semejantc". Eslo es, una fase eslacionaria polar inleraclua mas con
poluridad. 4ue sc dC(L:rlllina a Sll
1o, compucsloS polares, y viccversa. Se uehe seleccionar una fase en que el soluto tenga
vel. por las polaritladc, rclaliv:l~
cierla solubiliuau. Las fases Ifquiuas no polares en general no son selcctivas, porque hay
pocas fuer/.as enlre el soluto y el disolvenle, y asf las separaciones
lienuen a seguir el de IllS solutos.
orden de los punlos de ebullici6n lie los solUlOS, y primero sc eluycn los de menor punlo
d~ ehullici6n. Las fases Ifquiuas polares presentan diversas inleracciones
con los SOIUIOS,
L"OIllO in!eracciones
enlre dipolos, enlaces ue hidn>geno y I"uerzas lie inducci6n. y no ncccsariamcnle hay la misma correlaci6n entre eluci6n y volatilillad.
Los polisil())(anllS son la~ rasc~
Para colulllnas de sflice fusionaoas, la mayor parle de la~ separaciones pueuen hacerse
cslacionarias
mob Cl)ll1l1nc~ para
<.:onl1lenos de 10 fases cSlacionarias Ifquidas enlazauas de polaridad variable. Esto se debe
la cromalograrfa capilar de gaa Sli poder de resoluci6n Ian allo, y asf la selecliviuad de In fase cslacionaria
es Il1cnos
ses.
<.:rilica.Las rases eSlacionarias son polfmeros de allo peso molecular lcrmicamente eSlables
que son Ifquidos 0 gomas. Las i'ases mas cOl11unes son polisiloxanos
y polietilenglicoles
(Carhnwax): los prirneros son los que mas se usan. Los polisiloxanos liencn el csqueletn:

L()~grllpos funeionales

R delcrminan

la polaridad

e incluyen

melilo (CH1), fcnilo

(0).

rianopropilo (CH~CH~CH) y trilluoropropilo

(CH1CH~F1)' La tahla 20.1 presenta algunas
fases cSlacionarias ue uso comun; las lJLle tienen grupos ciano son sLlseeplibles al ataque
ror aglll\ y pm oxfgeno. Las fases Carbowax deben ser Ifquillas a las tempcralura<; ue

Tabla 20.1
Fases estacionarias en silice capilar fundido
Polaridad
Dimetil

polisiloxano

No polar

IOOlfi

CH,

I .

IO-Si_l

IJ"

,
Y '"-!
t6

5', baja

Ditcnil. dirnctil polisiloxano

35%.65%
intermedia

I .

~H3

lrucnnedia

CN

CH,

Scparacion de pesticides organoclorados

mcncionados en los rnctodos 608
y 8081 de EPA. Susccpiibles a

280

dafios por hurncdad

I .

14~[O-fi-!86

Si

-;:/ I

:no
300
370

100-."

14'}C cianopropilfenil-86%
dimeti Isiloxano

('V

Para propositos generales. bucnas

caractcnsticas en aha temperatura,
Pcsticidas

intermedia

O-Si-J+--+tO-Si

t0

:\20

65%.35%

CH,

Fase basica para propositus

generales de usn rutinario.
Hidrocarburos. compuestos
arornaticos polinuclcarcs,
policlorobencenos

CH3

"

Temp. nuix. ("C)

US(}

oxigeno
tA

CH:l

80'}f, Biscianupropil-20%
cianopropilfcnil
polisiloxano

CN

Muy polar

Acidos lihrcs. acidos grasos

polisaturados, alcoholcs. Evitt!
disolventes polarcs como
agua y metanol

Varfa R como antes

para variar la polaridad

Alta temperatura.

hajo sangrado

300-350

Varia R como antes

para variar lu polaridad

Alta temperatura.

bajo sangrado

4:10

Muy polar

Alcoholcs. aldehidos. coronas

y scparacion de isornerox
arornat icos, como xi lenox

CN

[06 -!20'l

tO~~w,
CN

Carboranos

275

Si

rcS-o
I
CH3-Si-CH3

;~~

.,'~,~-~~ol
cfrculos vacfos = boro
circulos llcnos = carbone
Poluctilcnglicol)

CH3

(Carbowax

fO-CH2CH2t,

250

1
20.2

COLUMNAS

nrcraci6n.

PARA CROMATOGRAFiA

Si se incorporan

qudcto del polfrnero

la rase cstacionaria

grupos Ienilo 0 carborano

se fortalccc

se mcncion6

de acucrdo con sus propiedades

indices de Kovats

Los

para agrupar rnateriales

whlliaron las constantes de Rohrschneider

deciJir. casi por inspeccion,
De igual importancia
que ~l)lll diliercn

pOl' su marca comcrcial.

liniendo las fases a partir de sus

difcrentcs.
para

de retcncion,

de

por ejernplo,

constante de Rohrscbneider

Supina y Rose (vcasc referenda

8)

Iascs lfquidas cornunes, 10 cual permitc

lase lfquida.

las rases que sean rnuy sirnilares

McReynolds

constantes

de referencia

lado Guide 10 Stationary

describi6

McReynolds

un mctodo parecido de-

(vease rercrencia

6). M<.:Rey-

las rases estacionarias.

para seleccionar

rases eslaeionarias

Phases for Gas Chrol1latograpllY

de gases). compilado

Indice de retenci6n de Kovats

panir de su tiempo de retenci6n

loga (los que dilieren

y la

ade-

Se han desarrollado

de compuestos estandar para medir los tiempos de retenci6n a 12()OC

Otra pLiblicaci6n

EI

gO

de identificar

~n columnas con 20% de carga para c1asilicar

para cfOlllatograffa

la fase cstacionaria

si vale la pena hacer la prueba con dcterminada

resulta la Iacilidad

l10ltb u~6 un conjunto

ESTACIONARIAS

el dcsalfo que represcnta seleccionar

rases

de

de lase cs-

cuando se acoplan espcctrornc-

PARA FASES LiaUIDAS

de acuerdo con su polaridad.

el es-

ya que debe mini rnizarse el sangrado.

crnpacada entre la mirfada de rases posibles.

Illl5t()JOS<..Jue
agrupan las
-on dos mctodos

y causa menor sangrado (perdida

para la dcteccion,

iNDICES DE RETENCI6N

de siloxano,

10 cual inhibe la degradacion

Estas colurnnas son irnportantes

IroS de masas muy sensiblcs

L'lIaua para la columna

en el csqueleto

y se vuelve mas rfgido,

a mayorcs ternperaturus

lacionaria) de la columna.

..\ntcriormente

583

DE GASES

pOI' Anlabs,
tamhien

es un folleto

titu-

(Gula de fases estacionarias

Inc., North

Haven, CT, 1977.

es util para identilicar

relativo a los de compuestos

un compuesLO a

simi lares en una serie homo-

en la cantidad de ,iLomos de carbo no en L1naestructura similar,

C0l110

~n la!'. cadenus de alcano). EI fndice I se deline como sigue:

1= 100
Jllndc

II,

es la cantidad

11,.

log

log

t~IPn>hl -

log

t~("1i -

log

t~(".I]

(20.1 )

t~I",J

de .1Lomos de carbo no en el akano

de cadena mas corta y

III

se

relicre al alcano de cadena mas larga; I~ es el tiell1po de retencion corregido (vease ecuacit'Jn 19.6). EI Indice de Kovats para un compuesto problema se puede comparar con fndil'C'

catalogados en diversas columnas

para aYlidar a identiticarlo.

de rctcnci6n, log " R, es en general una funci6n

en L1naserie hOlll61oga de compuestos.

EI logaritmo

del tiempo

lineal de la cantidad de atomos de carbono

VOLATILIDAD DEL ANALITO

En la~ dcscripciones anteriores se ha subrayado cl papel de la polaridad de la fase estacionaria (y del analito) para obtener separaciones efectivas; el otro factor imporlante es la
\olatilidad

relaliva de las especies del analito. Las espeeies mas volatiles tendcnin a migrar

mn mayor rapidez

por la columna.

Las especics gaseosas, en especial

411clias. C0l110 las de CO, Illigran nipidamente.

1\).25) ~e relaciona con la volatilidad mediante
In

= tJ..H..IRT -

Jondc ~H, es el calor de vaporizaeion

del analito.

de ehullicion)

causa menor volatilidad

~\ta c()ntrihuci6n
fa,e cstacionaria

a la rctenci6n.
(polaridad.

EI ractor de retenci6n

In 'Y

por 10 que un mayor valor (mayor punlO

la temperatura

In 'Y es una fUllci6n

la interaccion

se incrementa,

Tdcsciende

de la interacci6n

ctc.), Y es un tcrmino de aetividad (jue disminuye

Jad para cl estado puro conforme

pe-

mayor k. AI aumentar

EI termino

las moleculas

k (vcase ecuaci6n

hacicndo

con la

desde la lIni-

que k aumcme;

584

CAPiTULO

20

CROMATOGRAFIA

DE GASES

C es una constantc (y R cs la constantc de los gases). Gran parte de la selcclividad de

pun los de cbullicion y de la capacidad de ajustc de las scparacioncs sc debe al h~nl1inu
dcpcndicntc de Ten la ccuacion, y es la causa de que sc dcban haccr programacioncs lk
tempcraturn (vcasc mas adelanto).
Entonccs, la scleccion de las condiciones crornatograficas (columna, temperatLlra.
rapidez de Ilujo del acarrcador) cstanin influidas por la volatilidad del cornpucsto, su [li>,(1
molecular y su polaridad.

20.3 Detectores D~ra cromatogrona de gases

Dcsdc los prirncros cxpcrirncntos con la cromatograffa de gases se han dcsarrollado ll1a~de
Algunos de cllos tucron disetiados para responder a In mayor parte de 10compuestos cn general; otros para scr sclcctivos hacia dctcrrninados tipos de sustunciu;
Se dcscribiran a coruinuacion algunos de los deteclores mas usados. La tabla 20.2 mucstra
y compara algunos dctcctorcs de uso cormin, con rcspccto a su aplicacion, sensihilidad )
lincalidad.
EI detector original para crornatograffa de gases rue el detector de conductividad
terrnica 0 de alambre caliente (TCO, thermal conductivity detector). Conlormc pasaun
gas sobrc un Iilamento calienle, la temperatura y por consiguienle la resistencia del alulllbre variantn de acuerdo con la conductividad lcrmica del gas. EI gas acarreador puro sc
pasa sobre un Iilamento. y el gas erillente que conliene los componentcs de la mucslra Sl'
pas a sobre otro. Eslos Iilamenlos se enClIcntran cn ramas oplleslas de un puenle de Whcahtone, que mide la d(ferel1c;a de sus resislencias. Mienlras no haya gas de la muestra cn cI
e!lllCnte, las rcsislencias de los alambres seran iguales; pem cuando el gas aC<llTeatillrIb'a
un cOlllponente eluidll () eluato de la mueslra habra un pequeno cambio en la resistcncia
de la rama del e!luente. Este cambio, que es proporcional a la concenlracion del comp0lll.:nle
de la mueslra en el gas acarreador, se regislra en la gnilica. EI deteclor de conduclividad
lcrmica cs particularmentc ulil en el amllisis de mezclas gascosas y de gases permanclllcs.
COIllO el CO2,
Con los deleclores de conduclividad termica se preliere us",' hidr6geno y hclio (pm
razones de seguridad, se prelierc el helio) como gases de arraslre, porque tienen una conductividad Icrmica rnuy alta en cornparaci6n con la mayor parte de los demas gases. p(\r
10 que se produce un camhio maxirno de resistencia en presencia de los componentes de
la mezcla. La conduclividad lermica del hidrogeno es 53.4 X 10 5, Y la del helio es 41.6
X 10 5 calf'C-rnol a 100C, en tanto quc las del arg<ln, el nilr6geno, cl di6xido dc carbOll()
y la mayor parte de los vapores organicos sLiclen lener una dccima parle de eslos valorcs.
Las ventajas de los dCleclores de condllclividad termica son su simplicidad y Sll respucst<l
aproximadamcnte igual para la mayor parte de las slislancias. Su respuesla tambicn es Jl1U)
reproducihle. Sin embargo, 110 son lo!>deteetores mas scnsibles.
La mayor parte de los compuestos organicos forman iones en una llama, Cll general
calioncs como CHO I Esta es la hase de un dctector extremadamenle sensihle, el detector
de ionizaci6n de flama (FlO, name ionizalion detector). Los iones se miden (se colcctallJ
mediante un par de eleclrodos de polaridad opuesla. La respuesla (canlidad de iones reClllectados) depende de la cantidad de alomos de carhono en la Illueslra y del estado de
oxidaci6n del cathono. Aquellos atomos que se encuenlrall oxidados por completo no sc
ionizan. y los compueslos que licnen la mayor cantidad de carbonos ell eslado de oxidaci<lll
bajo producen las seiiales mas grandes. Este detector tiene una sensihilidad excelcntc )
permite medir cOll1ponentes en concenLraciones de partes pm mil ll1illoncs. Es unas I ()On
veces mas sensihle que el deleclor de conductividad Icrll1ica. Sill embargo, el inlervulo
dinamico es mas limitado y la cantidad de muestra Ifquida se restringe a I ILL 0 I11cnos.
EI gas acarreador tiene poca importancia relativa. Los que se usan con nuts rrecuencia SOil
el hcJio, el llitr6gello y el argon. EI deteclor de ionizaci6n de nama es insensible u la
mayor parle de los compucstos inorganicos, incluyendo el agua, por 10 que pueden inyCc.:40 dctcctorcs,

Los dcicctorcs por conductividad tcrmica son muy generales.

uunquc no muy scnsiblcs.

!
t.

r
l

d.

...J

l
l

11

i I,

EI dClct:lOr de ionizacion de
nal11a IllUeSlra gencralidad y es
~ensihle al misl1lo licmpo. Es eI
deleclor que sc lisa con Illa~ rrccuencia.

-----_