ELABORACIN DEL PATRN DE MCFARLAND Y

MEDICIN DE CONCENTRACIN BACTERIANA

POR TURBIDIMETRA
Gutirrez Paula Andrea, Londoo Maria Alejandra, Merchn Angie Maryuri, Neifi Geritza Parra Jaimes
Fundacin Universitaria de San Gil Unisangil
Yopal-Casanare
2016

INFORME N4 DE MICROBIOLOGA.
I.

OBJETIVO

Establecer la cantidad de microorganismos de una

muestra mediante el mtodo turbidimtrico.
II.

En cuanto a los resultados de Abs experimental, se

puede apreciar que fueron los esperados en cuanto a
que el espectrofotmetro arroj valores en orden
ascendente, lo que significa que, hubo precisin en la
medida de los mL correspondientes a cada tubo de
cada disolucin.

CONCEPTOS

EL PATRN DE MCFARLAND
El patrn de McFarland es una escala de turbidez elaborada con una mezcla,
utiliza un serie de disoluciones de Cloruro de Bario (BaCl 2) y cido Sulfrico
(H2SO4) que reaccionan generando un precipitado de Sulfato de Bario (BaSO 4)
que produce turbidez. La cual equivale a una concentracin determinada de
bacterias en suspensin, las equivalencias entre la turbidez de las soluciones de
BaCl2/ H2SO4 y la turbidez de los microorganismos en suspensin son
indicadas en la conocida escala de McFarland.

III.

RESULTADOS Y ANLISIS

Tabla Nmero 1: se indican los volmenes en mililitros

(mL) de BaCl2 y H2SO4 que se agrega a cada tuvo, las
equivalentes unidades formadoras de colonia (U.F.C),
la absorbancia terica y la absorbancia experimental.
ABS
ABS Terico Experimental
1,0
1
0,1
9,9
3,00E+08
0,096
2,0
2
0,2
9,8
6,00E+08
0,255
3,0
3
0,3
9,7
9,00E+08
0,313
4,0
4
0,4
9,6
1,20E+09
0,53
5,0
5
0,5
9,5
1,50E+09
0,56
6,0
6
0,6
9,4
1,80E+09
0,612
7,0
7
0,7
9,3
2,10E+09
0,794
8,0
8
0,8
9,2
2,40E+09
0,799
9,0
9
0,9
9,1
2,70E+09
0,955
10,0
10
1
9
3,00E+09
0,966
Tabla N1. Resultados experimentales de Abs y datos tericos de Abs.

TUBO

Cl2Ba
1%

H2SO4
1%

U.F.C/ml

Grafica N1. Curva patrn experimental de Abs tericas frente a las UFC
respectivas.

En la grfica nmero 1, donde est representada la

curva patrn experimental de valores de absorbancia
frente a U.F.C/mL, se ha utilizado una tendencia lineal,
lo que significa que cuando aumenta una variable, la
otra tambin lo hace con una proporcin constante. La
curva patrn sirve para medir la concentracin de una
sustancia problema a travs de la comparacin de una
serie de elementos con concentracin y volumen
conocido. La curva de tendencia describe una
aproximacin con relacin a los cambios de las
variables, con esa tendencia es posible obtener una
funcin que muestra la relacin de las variables.
Se observa la lnea de tendencia central donde se
acercan los valores de la curva, con un coeficiente de
determinacin (coeficiente de correlacin de Pearson:

R2), el cual nos dice qu tan cerca estn esos puntos a

la lnea de la pendiente. Esos puntos entre ms
cercanos sean o entre ms se alineen, quiere decir que
hay una correlacin ms exacta y precisa de los valores
de absorbancia relacionados con los valores de U.F.C y
por lo tanto esta curva patrn es una buena curva
patrn para interpolar y tambin determinar
concentraciones y, entre ms se alineen, ms cercanos
sern a 1 (la unidad). En nuestro caso el valor es de
0.9728, el cual se acerca bastante a la unidad y por lo
tanto es una buena curva patrn para interpolar el valor
de la muestra problema.

x=

0.6680.0545
0.0323

x= 18,99380805
Este valor que se obtuvo a travs de la ecuacin,
representa un alto grado de relacin cercana con
respecto al anterior. Indica que se hizo una acertada
distribucin de los mL en los tubos y re realizo un buen
manejo del espectrofotmetro para la determinacin de
valores de Abs.
U.F.C/mL (10 -8)

Abs terico
3

1,0

2,0

3,0

12

4,0

15

5,0

18

6,0

21

7,0

24

8,0

27

9,0

30

10,0

Tabla N2. Datos tericos y U.F.C/mL.

CURVA PATRN TERICA

Grafica N2. Curva patrn experimental Abs vs U.F.C, interpolada por el valor de
la Abs de la muestra problema.

15

En la grfica nmero dos, la cual se encuentra

interpolada por el valor que se obtuvo de la muestra
problema de su absorbancia (0.668), se determina por
este primer mtodo que las U.F.C/ml que le
corresponden son ms o menos un valor de 18
aproximndose a 19.
El otro mtodo para determinar el valor de U.F.C/mL
que le corresponden a ese valor de Abs de la muestra
problema, se hallaba por medio de la ecuacin de esa
lnea, despejando x, as:
y=mx+b
y= valor de Abs muestra problema.
m=0.0323 (pendiente de la recta).
x=?
b= 0.0545
x=

ABS

Abs de muestra problema (1mL): 6.668

y = 0.3333x
R = 1

10
5
0
0

10

15

20

25

30

UFC/mL
Grafica N3. Curva patrn terica Abs vs U.FC.

m= 3,3242x
b= 0,8
El estndar de McFarland va de 0,5 a 10, pero
iniciando desde 1,5 U.F.C/mL, en nuestro caso se toma
entonces la escala desde uno porque nuestros datos de
U.F.C/mL inician en 3,00E+08. En la grfica N3
igual que en la grfica de curva patrn experimental, se
presenta una lnea de tendencia central donde se
acercan los valores TERICOS de la curva con un
coeficiente de determinacin (coeficiente de
correlacin de Pearson: R2), el que nos indica si la
relacin entre cada variable es positiva o no, y si la
dependencia de las variables es perfecta o no, en otros

trminos nos indica qu tan cerca estn esos puntos a la

lnea de la pendiente. Para estos datos hay una
correlacin ms exacta y precisa de los valores de
absorbancia relacionados con los valores de U.F.C, y
por lo tanto esta curva patrn es una buena curva
patrn para interpolar y tambin determinar
concentraciones. En este caso el valor es de R2 =1, el
cual es el valor de unidad (1) y por lo tanto es una
excelente y perfecta curva patrn lineal.

Figura N1. Curva patrn experimental vs curva patrn terica.

La relacin que hay entre la curva patrn experimental

y la curva patrn terica, parte de que en las dos
graficas se utiliz una tendencia lineal en la que
cuando aumenta una variable, la otra tambin lo hace
con una proporcin constante. Tambin existe relacin
entre los resultados de coeficiente de correlacin de
Pearson: R2 entre grficas, ya que por un lado, la
experimental es cercana a la unidad y la terica es 1; el
valor de la unidad. Son buenas curvas patrn,
excelentes
para
interpolar
y
determinar
concentraciones.
Las diferencias parten en que los datos experimentales
son menores a los datos tericos y los resultados de R2;
por el lado experimental 0.9728 y por el lado terico 1,
con
una
diferencia
de
0,0271.
IV.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

1). Existen diferencias entre turbidimetra

espectrofotometra, en qu consisten?

La turbidimetra permite cuantificar la cantidad de

microorganismos en suspensin mediante la
construccin de una grfica que consiste en dibujar en
el eje de las ordenadas los valores de densidad ptica.
La espectrofotometra es la medicin de la cantidad de
energa radiante que absorbe o transmite un sistema
qumico en funcin de la longitud de onda.

La turbidimetra y la espectrofotometra son dos

tcnicas complementarias que se utilizan para el
anlisis cuantitativo de disoluciones coloidales,
emulsiones, humos o nieblas. La dispersin no supone
la prdida neta de potencia radiante, solo es afectada la
direccin dela propagacin, porque la intensidad de la
radiacin es la misma en cualquier ngulo
-En la turbidimetra se compara la intensidad del rayo
de luz que emerge con la del que llega a la disolucin.
-En cambio, en la espectrofotometra, la medida de la
intensidad de luz se hace con un ngulo de 90 con
respecto a la radiacin incidente. El instrumento usado
en la espectrofotometra es el espectrmetro se asemeja
al fluormetro. En cambio en turbidimetra se utiliza el
turbidmetro que es un fotmetro de filtro. (Edwar
Camarillo, 2016).
2) En qu consiste la ley de Beer Lambert?
La Ley de Lambert-Beer introduce el concepto de
absorbancia (A) de una muestra como A=logII0.
Donde I0 representa la intensidad de la luz incidente e
I la intensidad de la luz que atraviesa la celda. Tambin
podemos expresar la absorbancia en funcin de la
longitud de la cubeta y de la concentracin de soluto.
A=logI0I=cl (1)
Donde l es la longitud de la cubeta en cm, representa
la concentracin de soluto en mol/l y es la
absortividad molar (coeficiente de extincin molar)
medido en l/mol.cm.
La ley de Lambert-Beer establece que la absorbancia
est directamente relacionada con las propiedades
intrnsecas del analito, con su concentracin y con la
longitud de la trayectoria del haz de radiacin al
atravesar la muestra. La expresin matemtica de la ley
de Lambert-Beer es:
A = C.

.L

Donde:
A = Absorbancia de la muestra.
C = Concentracin del cromforo.
L = Longitud del paso ptico que contiene la muestra.

= Absortividad molar. Depende del cromforo en s

mismo, de la y de las condiciones de medida (pH,
T...). Ya que la absorbancia es adimensional las
unidades son concentracin-1 longitud-1. (Vivian Prez,
2010).

concentracin distinta y por ende una absorbancia

distinta. Luego una vez que tienes los puntos, haces la
recta de regresin, que es la recta que mejor aproxima
al conjunto de puntos que estas analizando. Una vez
que tienes la recta, sacas su ecuacin.

3) Qu es un espectrofotmetro y qu utilidades tiene

en el rea ambiental?

Entonces supongamos que tienes una solucin que

contiene el mismo compuesto que el que usaste para
construir la curva, le mides la absorbancia y con la
ecuacin de la recta calculas la concentracin de dicha
muestra problema.

El espectrofotmetro es un instrumento que sirve para

determinar la concentracin de una sustancia en una
solucin, utiliza las propiedades de la luz En general, la
luz de una lmpara de caractersticas especiales es
guiada a travs de un dispositivo que selecciona y
separa luz de una determinada longitud de onda y la
hace pasar por una muestra. La intensidad de la luz que
sale de la muestra es captada y comparada con la
intensidad de la luz que incidi en la muestra y a partir
de esto se calcula la transmitancia de la muestra, que
depende de factores como la concentracin de la
sustancia. (N, A p.p7).
Un ejemplo de la utilizacin del espectrofotmetro en
el rea ambiental se produce en uso en el depsito de
agua, realizado en el estudio de la calidad del agua
utilizada. (Feira Do Livre de Porto, 2011).
4 Qu es una curva patrn? De un ejemplo del empleo
de una curva patrn en el anlisis de una variable
ambiental.
Una curva patrn es un marco de referencia que se
construye de cantidades conocidas de una sustancia por
ejemplo la albumina srica bovina que se utiliza para
medir la cantidad de protenas presentes en una
muestra incgnita igualmente para determinar la
cantidad de cobre presente en una muestra incgnita.
Para realizar la experiencia debemos preparar una
solucin de una sal de cobre y realizar diferentes
diluciones de modo de disponer, por lo menos de 4 o 5
concentraciones, luego realizaremos la reaccin
qumica correspondiente y mediremos la DO de cada
solucin, as vamos a construir una curva dosisrespuesta que en este caso ser nuestra curva patrn de
referencia.
Se construye usando soluciones de concentraciones
conocidas de un compuesto determinado. Por ejemplo
se grafica concentracin Vs absorbancia y se establece
una recta en la que cada punto corresponde a una

En una de las variables ambientales se emplea una

curva patrn para la obtencin de microorganismo en
una muestra de agua y as llegar a un porcentaje de
calidad. (Cecilia Coto, s.f).
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Camarillo, E. (Mayo, 2016). Anlisis qumico instrumental. Blogspot. Recuperado
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Manual de Practicas de Laboratorio Microbiologa Ambiental- UNISANGIL
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Porto, F. (Mayo, 2011). Espectrofotometra aplicada en el rea ambiental. Site do
fecunha. Recuperado de http://fecunha.com.br/espectrofotometria-aplicados-naarea-ambiental/
Wikipedia. (Agosto, 2015). Estndar de McFarland. Wikipedia enciclopedia libre.
Recuperado de https://es.wikipedia.org/wiki/Est%C3%A1ndar_de_McFarland

ANEXOS

Imagen N1. Momento en que se sirve H2SO4.Fuente: los autores.

Imagen N5. 10 tubos que se sella para poder revolver su contenido. Fuente: los
autores.

Imagen N2. 10 tubos que contienen sus respectivas cantidades de las dos
disoluciones. Fuente: los autores.

Imagen N6. Espectrofotometro. Fuente: los autores

Imagen N3. 10 tubos que contienen sus respectivas cantidades de las dos
disoluciones. Fuente: los autores.

Imagen N4. Tubos listos para pasar al espectrofotometro. Fuente: los autores.