Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
Indicaes gerais
Protocolos experimentais
T1 - Determinao de alguns parmetros caractersticos de um procedimento
analtico
T2 - Determinao espetrofotomtrica do teor de ferro em comprimidos
7
12
15
22
29
31
19
24
26
INDICAES GERAIS
O trabalho laboratorial exige da parte do aluno uma atitude especial. Para que os objetivos do trabalho sejam
atingidos, e a segurana no laboratrio mantida, as instrues quanto execuo do protocolo experimental devem
Data
Sntese programtica
19/23 setembro
ser previamente estudadas. S assim ser possvel compreender o procedimento, planear o trabalho, gerir
adequadamente o seu tempo de execuo e saber como atuar caso se seja confrontado com alguma contrariedade.
Deve-se trabalhar sem pressa, com mtodo e cuidado, evitando deste modo acidentes e eventuais danos no
material do laboratrio.
3/7 outubro
10/14 outubro
17/21 outubro
24/28 outubro
31 out / 4 nov
7/11 novembro
10
adequados para cada situao e nunca verter na canalizao restos de solues sem previamente perguntar ao
11
12
28 nov / 2 dez
13
5/9 dezembro
RESDUOS LABORATORIAIS:
A atividade laboratorial forosamente produtora de resduos lquidos e slidos sendo alguns deles de perigosidade
considervel. Como resduos definem-se quaisquer substncias ou objetos de que o detentor se desfaz ou tem
inteno ou obrigao de se desfazer, nomeadamente os previstos na Portaria n 818/97, de 5 de setembro, que
aprova a lista harmonizada, que abrange todos os resduos, designada por Catlogo Europeu de Resduos (CER). Esta
portaria adota a Deciso comunitria n 94/3/CE, de 20 de dezembro de 1993.
A primeira etapa no processo de tratamento dos resduos consiste na minimizao da sua produo. Num
laboratrio de Qumica a preveno de resduos urbanos conseguida atravs da preferncia por mtodos de
anlise geradores de menor quantidade de resduos ou que sejam mais fceis de tratar e ainda pela utilizao de
menor quantidade e volume de materiais e optando sempre por materiais menos poluentes e de mais fcil
Aula terico-prtica
reciclagem. No final de cada trabalho laboratorial os alunos devem procurar os frascos coletores de resduos
14
2/6 janeiro
15
Aula laboratorial n
Grupo
T1
T2
T3
T4
T5
T6
T7
T8
T9
T1
T2
T3
T4
T5
T6
T7
T8
T9
T1
T2
T3
T5
T6
T4
T8
T9
T7
T1
T3
T2
T5
T6
T4
T8
T9
T7
T1
T3
T2
T6
T4
T5
T9
T7
T8
T1
T3
T2
T6
T4
T5
T9
T7
T8
Data
Sntese programtica
15 setembro
22 setembro
29 setembro
6 outubro
A assiduidade s aulas laboratoriais obrigatria para todos os alunos, incluindo os que esto ao abrigo de estatutos
especiais. Conforme consta do artigo 12 da normativa acadmica do funcionamento das licenciaturas e dos
mestrados integrados da Universidade Fernando Pessoa (NA-UFP) (Dirio da Repblica, 2. srie, N. 167 de 27 de
agosto de 2015), a percentagem mnima de frequncia das prticas para os cursos da rea da sade 80%. O aluno
que no complete a frequncia mnima obrigatria considerado reprovado componente prtica da unidade
Aula terico-prtica
curricular. A eventual justificao de faltas no dispensa o aluno do cumprimento efectivo da percentagem das
1 srie de trabalhos prticos (continuao)
6
7
13 outubro
20 outubro
27 outubro
3 novembro
10 novembro
Justificao de faltas
cinco dias depois da data da ocorrncia ou cinco dias aps o fim do perodo de ausncia legalmente definido) sendo
aceite apenas se efetuda pelos meios e motivos legalmente previstos (nmero 5. do artigo 12).
Aula terico-prtica
Teste de avaliao prtico
10
11
17 novembro
24 novembro
12
1 dezembro
Feriado
13
8 dezembro
Feriado
O desempenho do aluno nas aulas prtico-laboratoriais avaliado, entre outros elementos, pela quantidade e pela
qualidade de execuo autnoma dos protocolos e trabalhos nelas desenvolvidos, com vista aquisio de
efectivas competncias na rea cientfica em questo (nmero 4 do artigo 13 da NA-UFP).
15 dezembro
15
5 janeiro
Para aprovao componente laboratorial necessrio que a classificao prtica final seja igual ou superior a dez
(10) valores. A avaliao comprender dois parmetros distintos:
Execuo correta dos protocolos experimentais propostos, capacidade de trabalhar em grupo, postura,
interesse, participao em sala de aula e domnio dos fundamentos tericos inerentes adequada
compreenso do trabalho executado.
No final de cada aula obrigatrio a entrega de uma ficha de registo com os resultados experimentais
obtidos no trabalho executado (devidamente identificada e assinada por todos os elementos do grupo que
estiveram presentes na aula). Os alunos dispem ento de um prazo mximo de uma semana para a
entrega dos respetivos clculos (tratamento de dados experimentais). Findo o prazo para a entrega, as
fichas no sero corrigidas nem consideradas para avaliao, sendo por isso contabilizadas como
zero no clculo da nota laboratorial.
-
As fichas sero classificadas como positivas ou negativas sendo consideradas para avaliao as oito
melhores.
(ponderao de 50% na nota final da componente laboratorial)
Os testes sero constitudos por perguntas de ndole prtica (clculos e tratamento de dados, metodologia
experimental, princpios de funcionamento, etc.) dos trabalhos realizados nas aulas prticas. Caso seja necessrio
sero utilizados os dados adquiridos pelos alunos nos referidos trabalhos.
Dispem ento de um prazo mximo de 1 semana para a entrega dos respetivos clculos que finaliza a
ficha. Findo o prazo para a entrega, as fichas no sero corrigidas nem consideradas para avaliao,
sendo por isso contabilizadas como zero no clculo da nota laboratorial.
(ponderao de 50% na nota final da componente laboratorial - 1 teste (30%) e 2 teste (20%))
Quando uma unidade curricular for avaliada autonomamente na componente terica e na componente prtica, a
nota final dessa unidade curricular s ser atribuda, quando ambas as componentes estiverem aprovadas. (artigo
15 da NA-UFP).
Assim a classificao de aprovao apenas numa das componentes (prtica ou terica) s ser vlida nos trs anos
letivos subsequentes, durante os quais o aluno ter de aprovar a outra componente, sob pena de ver anulada a
componente j aprovada. A nota final da unidade curricular (80% nota da componente terica e 20% da
classificao prtica) s ser atribuda, quando ambas as componentes estiverem aprovadas (artigo 15 da NA-UFP).
O uso de bata (modelo UFP), e, se for o caso, culos e outros elementos de proteo obrigatrio nas
aulas prtico-laboratoriais. (nmero 4 do artigo 13, NA-UFP). A sua falta impeditiva da participao
nas sesses de formao e conduz marcao de falta aula, falta essa que injustificvel e conta
para o clculo da assiduidade obrigatria (nmero 4 do artigo 13, NA-UFP).
Para cada aula prtica, ser necessrio a preparao prvia do trabalho a executar, o que poder
implicar a execuo de clculos preliminares e/ou a pesquisa de informao nas fontes bibliogrficas.
-
As fichas para registo de resultados, observaes e clculos so fornecidas pelo docente, no sendo
aceites nem consideradas para avaliao outros formatos.
Nestas fichas necessria a identificao dos elementos do grupo que estiveram presentes na aula,
sendo suficiente a entrega de uma ficha por grupo. As fichas sero obrigatoriamente originais e todos os
elementos do grupo devem participar ativamente na sua elaborao.
As fichas sero classificadas como positivas ou negativas sendo consideradas para avaliao as oito
melhores.
Fichas contendo partes copiadas de outros colegas sero fortemente penalizados e as integralmente
copiadas no sero corrigidas nem considerados para avaliao.
estatstico dos parmetros da reta (y = a + bx) sendo frequentemente testada analisando o coeficiente de
Protocolos experimentais
reta do tipo:
SinalAbs =m [A] + b (r 1)
2
Quando se pretende efetuar uma determinao quantitativa de uma determinada espcie qumica
(vulgarmente designada por analito) existem geralmente vrias metodologias analticas disponveis. A escolha de
Sempre que possvel uma medida analtica deve ser efetuada nesta gama de concentraes, que se pretende
uma metodologia, em detrimento das outras, baseia-se numa srie de critrios bem estabelecidos e que tm em
seja suficientemente extensa para evitar diluies das amostras. Ou seja, o mtodo escolhido para uma
determinada anlise deve ter um intervalo de trabalho (gama linear dinmica) o mais amplo possvel. O uso de
Neste trabalho prtico pretende-se estudar alguns dos parmetros analticos mais vulgarmente avaliados para
extrapolao (para alm dos extremos da reta de calibrao) no est recomendado, quer acima do padro de
concentrao mais elevado (limite de linearidade), quer abaixo do padro de concentrao mais baixa, ou seja,
determinados:
-
A sensibilidade de um mtodo de anlise relaciona-se com a sua capacidade de distinguir duas concentraes
a linearidade fotomtrica,
de analito muito prximas estando por isso relacionada com o declive/inclinao da equao de regresso linear.
a sensibilidade do mtodo,
Um mtodo ser considerado sensvel se pequenas variaes na concentrao (x) originarem grandes alteraes na
resposta medida (y), neste caso a absorvncia. Os fatores que limitam a sensibilidade de um mtodo so o
Em soluo aquosa, este sal apresenta um espetro de absoro na regio 400 a 700 nm, correspondente
coeficiente angular da reta de calibrao (declive) e a preciso fotomtrica. Para medidas efetuadas no mesmo
espetrofotmetro, com igual preciso fotomtrica, um maior declive da reta de calibrao corresponder ao
absoro do io permanganato.
De forma a determinar o melhor comprimento de onda () para efetuar determinaes quantitativas (isto ,
comprimento de onda a que corresponde o mximo de absorvncia da espcie) inicia-se o trabalho efetuando a
medio da absorvncia de uma soluo de permanganato de potssio a diversos comprimentos de onda de
radiao incidente (entre 400 e 700 nm). A esse comprimento de onda (mx) determina-se, depois, a preciso
fotomtrica, intervalo de trabalho, sensibilidade e os limites de deteo e determinao (ou quantificao da
metodologia.
mtodo de maior sensibilidade. Embora relacionados entre si, a sensibilidade no deve ser confundida com o limite
de deteo (LD), nem com o limite de quantificao (LQ), que esto relacionados com a capacidade do mtodo
detetar concentraes baixas.
Qualquer medio instrumental tem um erro aleatrio inerente pelo que h sempre um sinal/reposta (rudo de
fundo) do instrumento ao longo do tempo para uma soluo sem analito (branco). O sinal do branco tem de ser
avaliado de modo a ser depois possvel estimar qual o sinal instrumental mnimo que se consegue distinguir desse
A concentrao analtica de uma substncia pode ser correlacionada com as absorvncias medidas atravs da lei
de Lambert-Beer:
rudo de fundo.
O limite de deteo (LD) de um mtodo a menor quantidade (concentrao, massa,...) de analito numa
A=bc
amostra que se pode detetar com uma dada confiana estatstica (normalmente 95%). Uma das definies mais
-1
-1
comuns de LD, aceite internacionalmente, assume que o sinal correspondente ao LD o valor mais pequeno que
possvel distinguir do sinal do branco relacionando-se, por isso, com este e com o seu desvio-padro. Isto significa
que, a menos que o sinal do analito seja 3 vezes superior s variaes aleatrias do sinal do branco (Sbranco), uma
valor de absorvncia registado e a concentrao do analito que se traduz matematicamente por uma regresso
deteo correta do sinal do analito no possvel. Assim, o sinal mnimo detetvel (SinalLD) pode ser calculado do
linear (equao de 1 grau ou equao de uma reta) desde que se verifiquem experimentalmente as condies de
seguinte modo:
onde Sinal mdiobranco o sinal mdio do branco para um dado nmero de medidas (mnimo de 20 vezes), e ssinal do
branco
que o mtodo apresenta um grau aceitvel de linearidade, exatido e preciso para as concentraes
compreendidas entre os valores especificados. A linearidade do mtodo pode ser demonstrada atravs do estudo
A quantidade correspondente ao limite de deteo (LD), depois calculada recorrendo curva de analtica
2. Procedimento experimental
estipulada para a metodologia nas mesmas condies experimentais, que se assume constante para baixas
concentraes.
O limite de quantificao (LQ) ou limite de determinao define-se como a quantidade mais baixa de analito
numa amostra que pode ser quantificada com preciso e exatido aceitveis. Pode ser obtido considerando que
este deve ser igual a 10 vezes o desvio padro da medida quando a concentrao zero (ou seja, para o branco).
Deste modo, para estimar o seu valor, procede-se como anteriormente descrito para o LD , mas considerando um
fator multiplicativo de 10 para calcular o seu valor:
SinalLQ = Sinal mdiobranco + 10 ssinal do branco
10 bales volumtricos de 50 ml
1 pipeta volumtrica de 25 ml
1 pipeta volumtrica de 20 ml
1 pipeta volumtrica de 10 ml
2 cuvetes plstico
1 gobel de 250 ml para desperdcio
espetrofotmetro
soluo padro aquosa de permanganato de potssio (KMnO4)
A concentrao mnima determinvel (limite de quantificao) depois calculada por interpolao na curva de
analtica que se assume constante para baixas concentraes. Uma vez estabelecido o LQ, este deve ser usado
como limite operacional, ou seja, valor a partir do qual possvel efetuar uma anlise quantitativa. Deste modo, na
prtica deve usar-se o LQ como incio da zona em que se reportam valores numricos. A gama entre o LD e LQ deve
ser entendida como uma zona de deteo qualitativa, e no quantitativa, pelo que no se devem reportar valores
1
-2
Soluo padro n
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
[KMnO4] (M)
-2
1.00x10
-3
5.00x10
-3
1.00x10
-4
5.00x10
-4
2.00x10
-4
1.00x10
-5
5.00x10
-5
2.00x10
-5
1.00x10
-6
5.00x10
Na preparao destas solues deve ter em conta que as diluies tm de ser feitas de modo rigoroso (dever
utilizar as pipetas volumtricas disponveis na sua banca de trabalho) e que tem sempre de aferir
convenientemente os bales com gua desionizada antes de preparar a soluo seguinte.
A preciso fotomtrica relaciona-se diretamente com a estabilidade das medidas efetuadas num
espetrofotmetro . Est diretamente relacionada com o rudo de fundo, e depende da zona espetral (ou seja, do
comprimento de onda) e da concentrao do analito. Numa situao ideal o espetrofotmetro no devia ter
variaes superiores a 1% para qualquer medida efetuada.
-4
Com a soluo de permanganato de concentrao 1.00x10 M que preparou (soluo padro n 6), efetue o
Um modo de estimar este parmetro ser atravs dos desvios padro das leituras efetuadas (sA) para uma
mesma concentrao, atravs da seguinte equao:
sA =
traado do espetro (entre 400 e 700 nm) seguindo as instrues fornecidas pelo docente a fim de escolher o
melhor comprimenbto de onda para a anlise.
(Sinal
Abs , i
Sinal Abs
Nota:
n 1
As clulas que vo ser utilizadas nas medies espetrofotometrias para este trabalho so de plstico, sendo
necessrios alguns cuidados especiais na sua utilizao:
- ao manusear a clula nunca deve colocar dedadas nas paredes transparentes da clula;
onde SinalAbs,i sinal do analito para as diferentes medidas e SinalAbs o seu valor mdio.
- a clula deve ser cheia at cerca de , depois de a lavar duas a trs vezes, com uma pequena quantidade de
soluo a analisar;
O desvio padro relativo (DPR) para cada conjunto de dados que se define como:
- antes das medies deve limpar as paredes com um papel macio para retirar soluo que esteja na zona
DPR %
- a clula deve ser colocada dentro do espetrofotmetro de modo a que a radiao atravesse as paredes
100
Sinal Abs
transparentes; no caso do espetrofotmetro de feixe duplo deve ser colocada no respectivo porta-amostras
uma clula equivalente contendo apenas o branco, ou seja o solvente.
onde
1. Introduo
(determinado anteriormente quando traou o espetro), ter agora que efetuar a leitura dos valores de
absorvncias das seguintes solues:
O ferro um elemento facilmente encontrado na superfcie da Terra, sendo essencial para o bom
absorvncias das 10 solues padro que preparou; efetue as leituras da soluo mais diluda para a mais
funcionamento do nosso organismo. Existem muitas protenas que apresentam ferro na sua constituio, tais como
concentrada;
-
aparecimento de problemas de sade. Assim, a carncia de ferro no organismo humano traduz-se em anemia,
dez (10) leituras do sinal analtico das solues de permanganato com as seguintes concentraes:
-4
-5
-6
5.00x10 M (soluo padro n 4), 5.00x10 M (soluo padro n 7) e 5.00x10 M (soluo padro n 10).
A carncia de ferro bastante comum, afetando cerca de 500 milhes de pessoas em todo o mundo, e pode ser
explicada pelo facto do ser humano ter uma capacidade limitada de absoro deste metal. Por outro lado so vrios
os fatores que podem contribuir para a perda de ferro (lceras, diverticulite, neoplasias, fluxos menstruais
abundantes) ou para a existncia de necessidades acrescidas do mesmo (gravidez, crescimento). Os nveis de ferro
podem ser repostos, com relativa facilidade, recorrendo a suplementos.
2+
Neste procedimento, o ferro existente no comprimido dissolvido em cido, reduzido a Fe com hidroquinona,
e complexado com 1,10-fenantrolina para formar um complexo fortemente corado cuja absorvncia lida a 508
nm.
Hidroquinona
Quinona
A quantificao requer a preparao de um conjunto de solues padro de ferro, com concentraes includas
no intervalo de linearidade da metodologia, ou seja, na zona onde se verifica uma relao linear entre a
concentrao de ferro e o sinal analtico (absorvncia). Estabelece-se a melhor relao linear para os valores
experimentais encontrados com as solues padro (regresso linear ou mtodo dos mnimos quadrados), o que
pressupe determinar a equao da reta y = mx + b (em que a concentrao em ferro a varivel independente, x,
2
11
2. Procedimento experimental
2.1. Material, reagentes e equipamento
-
Transfira 5.00 ml da soluo de suplemento vitamnico para trs bales volumtricos de 100 ml e adicione a
cada um deles 3 ml de soluo de citrato. Junte 2 ml de soluo de hidroquinona, 3 ml de soluo de 1,10
fenantrolina, dilua at marca e agite convenientemente.
Aps a preparao da ltima soluo, espere pelo menos 15 minutos e depois mea absorvncia de todas as
solues (padro e replicas da amostra) a 508 nm na mesma altura.
Nota: Depois de formado, o complexo Tris (1,10-fenantrolina) ferro (II) formado estvel por um alargado perodo
de tempo. Assim, dever preparar todas as solues - quer de padres quer da amostra e, em seguida,
aguardar pelo menos os 15 minutos (tempo necessrio para que a reao se d, lendo no final as
absorvncias de cada uma das solues na mesma altura.
Adicione 25 ml de HCl 6 M, tape com um vidro de relgio, e aquea quase ebulio, sem deixar ferver (na
hotte), durante 15 min.
Filtre, diretamente para um balo volumtrico de 100 ml, transferindo quantitativamente o contedo do
gobel para o balo por lavagem sucessivas com pequenas pores de gua.
12
13
comuns so os metais alcalinos (K, Na, Rb e Cs) que se ionizam facilmente criando uma atmosfera redutora que
desfavorece a formao de ies de outros caties.
Introduo
solvente (viscosidade, velocidade de queima, tenso superficial) podem afetar consideravelmente o sinal analtico
O objetivo deste trabalho o estudo do modo de funcionamento da tcnica de espetrofotometria de absoro
atmica (EAA) com atomizao em chama. uma tcnica analtica bem sucedida e estabelecida e largamente
utilizada nos laboratrios de pesquisa, aplicaes e controle de qualidade para a determinao de elementos em
baixas concentraes, presentes em diversos tipos de amostras, sejam estas lquidas, slidas, em suspenso, e at
mesmo gasosas. O princpio bsico que tomos livres no estado gasoso (vapor atmico) gerados num atomizador
so capazes de absorver radiao de frequncia especfica (comprimento de onda caracterstico), emitida por uma
fonte apropriada, atenuando a intensidade desse feixe de luz. A quantidade de radiao absorvida usada para
2.
Procedimento experimental
2.1.
Material e reagentes
gotculas (nebulizao) de modo a assegurar o seu rpido aquecimento para que o processo de formao de tomos
seja rpido e eficiente. Neste processo apenas as gotculas menores so encaminhadas para a chama (cerca de 95%
- 20 bales volumtricos de 50 ml
- 1 pipeta volumtrica de 25 ml
da amostra inicial desprezada atravs do dreno). O aerossol, constitudo por pequenas gotculas, chega depois ao
- 1 pipeta volumtrica de 5 ml
queimador arrastado pelos gases combustvel e oxidante, onde ocorrem uma srie de eventos fsico-qumicos, que
- 1 pipeta graduada de 1 ml
implicam a mudana de estado fsico, at que finalmente so produzidos tomos livres na chama. Nesta fase, o
- 1 pipeta graduada de 2 ml
elemento no estado fundamental est apto a absorver radiao de determinado comprimento de onda
- 1 pipeta graduada de 5 ml
- 1 pipeta graduada de 10 ml
- 1 pipeta graduada de 20 ml
Neste trabalho prtico, aps a escolha da chama (neste caso ar-acetileno, que permite atingir uma temperatura
- 1 pipeta graduada de 50 ml
de ~2100-2400 c), alguns parmetros tm de ser otimizados de modo a estabelecer as melhores condies para as
medies analticas. Neste trabalho procede-se, otimizao de razo/proporo entre o combustvel e o oxidante
(estequiometria da chama), altura tima e alinhamento do queimador para a anlise de clcio por EAA com
atomizao em chama. Em seguida estudam-se alguns dos interferentes mais importantes nesta determinao e
- etanol absoluto
A qualidade dos resultados condicionada pela composio qumica das amostras dado que a existncia de
interferentes qumicos na matriz pode afetar o sinal analtico. Na chama, a formao de compostos refratrios do
2.2.
Execuo prtica
analito (ou seja, formao de sais pouco volteis) com outros componentes existentes na amostra dificulta a
atomizao do metal, o que diminui a sensibilidade da anlise. Assim, a presena de fosfato ou sulfato na amostra
afeta a determinao de clcio (Ca) por levar formao de sais pouco volteis. Uma soluo possvel para
minimizar o problema a adio de um agente libertador - catio que reage seletivamente com os anies
2+
3+
interferentes formando compostos estveis. Assim, a adio de estrncio (Sr ) ou lantnio (La ) na anlise de Ca
2+
em amostras que contm fosfato, liberta o clcio para o estado atmico e permite que ele seja detetado com boa
sensibilidade.
Outro problema na EAA em chama a possvel ionizao do analito, levando a uma reduo da populao de
tomos neutros que podem absorver radiao, resultando numa diminuio acentuada dos valores de absorvncia.
Geralmente a soluo para esta limitao passa por adicionar amostra um supressor de ionizao. Os mais
14
15
5.00 ppm de Ca, 10 ppm de fosfato e 1% de cloreto de estrncio (a soluo me de cloreto de estrncio
tem uma concentrao de 5%)
3) Efeito do sdio
Prepare 5 solues (bales volumtricos de 50 ml) contendo todas elas 5.00 ppm de Ca e diferentes
concentraes em sdio: 20, 50, 100, 200 e 400 ppm de Na (a partir de uma soluo padro de sdio 500 ppm).
4) Efeito do etanol
sensibilidade do clcio.
Ligue o espetrofotmetro seguindo as instrues de funcionamento do aparelho. Utilize uma chama ar/acetileno, a
intensidade de corrente recomendada pelo fabricante para a lmpada de ctodo co de clcio e como
Prepare 6 solues (bales volumtricos de 50 ml) contendo todas elas 5.00 ppm de Ca e diferentes
percentagem em etanol: 1, 2, 5, 10, 25 e 50% em etanol.
Prepare tambm um branco para cada uma destas solues, isto , para 6 bales volumtricos de 100 ml,
adicione apenas os volumes de etanol que utilizou na preparao das solues anteriores.
Registe a absorvncia de todas as solues preparadas usando as condies operacionais otimizadas que
estabeleceu aquando do estudo e otimizao de parmetros instrumentais. No caso das solues contendo 5.00
ppm de Ca e etanol dever efetuar previamente o ajuste do branco (com a soluo com a mesma % em etanol).
1) Altura do queimador
Rodando o boto regulador da altura do queimador, suba-o de modo a que o feixe de luz passe junto base da
chama e depois mea novamente a absorvncia da soluo de clcio 5.00 ppm. Baixe, sucessivamente, o
queimador (em pelo menos 6 a 8 passos) e registe a absorvncia a cada altura. Para cada posio no se
esquea de fazer previamente o zero com a soluo do branco.
No final, volte a rodar o boto regulador de altura do queimador de modo a colocar o queimador na posio de
onde registou a mxima absorvncia.
2) Posio do queimador
Com a altura do queimador ajustada (alnea anterior), aspire a soluo de clcio 5.00 ppm e rode o boto de
comando da rotao do queimador selecionando o seu ngulo timo (correspondente mxima absorvncia
registada).
3) Razo combustvel/ar
Mantenha a presso do ar constante e ajuste a presso do combustvel em incrementos, desde uma chama rica
em combustvel at uma chama pobre. Anote a absorvncia de uma soluo 5.00 ppm em cada incremento.
Selecione a presso de combustvel tima e varie a presso do ar de modo semelhante.
16
17
2.
1.
Introduo
Procedimento experimental
Neste trabalho pretende-se dosear o teor em clcio numa amostra de sangue humano. A dosagem de clcio no
- 20 bales volumtricos de 50 ml
soro empregue para avaliar a funo da paratireoide e o metabolismo do clcio, uma vez que o clcio srico
- 1 pipeta volumtrica de 10 ml
mantido dentro dos limites fisiolgicos pela ao combinada do paratormona (PTH) e vitamina D atravs de seus
- 1 micropipeta de 1000 l
efeitos sobre os ossos, intestinos e rins. Cerca de metade do clcio total encontra-se no sangue em sua forma livre
- 1 bureta de 25 ml
- 1 pipeta graduada de 10 ml
A hipercalcemia (> 10.5 mg/dL de sangue) pode ser causada pelo aumento da absoro gastrointestinal ou por
- 2 pipetas graduadas de 5 ml
um aumento da ingesto de clcio. As pessoas que ingerem grandes quantidades de clcio, como por vezes
acontece no caso daquelas que tm lceras ppticas e que tomam leite e anticidos que contm clcio, podem
desenvolver uma hipercalcemia. Uma sobredose de vitamina D tambm pode afetar a concentrao de clcio no
sangue ao aumentar de forma exagerada a absoro de clcio procedente do trato gastrointestinal. Contudo a
-1
causa mais frequente da hipercalcemia o hiperparatireoidismo. Alguns casos de cancro de pulmo, ovrios, rins e
-1
Execuo prtica
2.2.
cirrgico; pseudo hipoparatireoidismo; insuficincia renal; deficincia de vitamina D; doena gastro-intestinal que
interfere com a absoro de vitamina D ou clcio; nefrose ou outras condies com baixos nveis de protenas
sricas; pancreatite aguda; deficincia de magnsio
2.2.1.
Dilua a soluo padro de clcio 500 ppm, num balo volumtrico de 100 ml, de modo a obter uma
A partir da soluo padro de 50.0 ppm (usando a bureta que tem disponvel na sua banca de trabalho),
Neste trabalho prtico efetua-se a determinao de clcio numa amostra de soro por espetrofotometria de
absoro atmica (EAA) com atomizao em chama recorrendo, para isso, a dois mtodos de quantificao
prepare (para bales de 50 ml) uma srie de solues padro de clcio 0, 1.00, 2.00, 3.00, 4.00, 5.00,
distintos: mtodo da curva de analtica (tambm designado por curva de calibrao) e mtodo das adies de
-1
-1
6.00, 8.00 e 10.0 ppm. Cada padro dever conter tambm 1% de SrCl2, 0.16 g l Na e 5.5 mg l K.
padro.
A curva analtica o mtodo mais comum em anlise qumica quantitativa. Consiste em medir o sinal de um
conjunto de solues padres de analito (neste caso, clcio) na regio de concentraes de interesse. Estabelece-se
a relao linear entre concentrao do analito e sinal de resposta do equipamento e aps leitura do sinal da
-
amostra, determina-se por interpolao grfica nesta zona linear, a concentrao de clcio na amostra.
padro leva a resultados errados. Nestas situaes, pode usar-se o mtodo das adies de padro. O procedimento
mais comum colocar iguais volumes da amostra desconhecida/complexa em vrios bales volumtricos e
2.2.2.
Transfira 1.00 ml (use a micropipeta) de amostra de soro para 7 bales volumtricos de 50 ml.
Usando a bureta mea, para 6 desses bales, volumes de 0.50, 1.00, 1.50, 2.00, 2.50 e 3.00 ml,
respetivamente, de uma soluo padro 50.0 ppm em Ca.
Adicione a todos os bales o volume necessrio da soluo de estrncio de modo a obter uma
Prepare, ainda, a soluo branco (uma soluo com concentrao de 1% de cloreto de estrncio).
Ajuste o zero do aparelho com a soluo anterior (i.e. 1% de cloreto de estrncio) e em seguida mea a
volume) de espcie adicionada a cada balo. Este mtodo requer maior quantidade da amostra e, normalmente,
maior tempo de execuo. Por outro lado, todas as amostras preparadas esto submetidas s mesmas condies de
matriz, minimizando ao mximo interferncias na anlise desta natureza.
adicionar volumes crescentes de uma soluo padro de analito a cada balo. O valor da concentrao do analito na
amostra pode ser determinado graficamente registando o valor do sinal das vrias em funo da concentrao (ou
Registe a absorvncia destas solues (a leitura dos padres deve ser feita por ordem crescente de
concentraes).
Entretanto, quando se trabalha com matrizes desconhecidas ou complexas frequentemente ocorre o chamado
efeito de matriz, ou seja, a determinao da concentrao por interpolao do sinal da amostra lida na curva
Para a preparao da amostra, efetue uma diluio de 1:25 (num balo volumtrico de 50 ml) e adicione a
18
19
3.
1.
Introduo
Determine por interpolao grfica na equao de ajuste (para os 3 ensaios) a concentrao em clcio
presente na amostra analisada. Com os valores de concentrao obtidos calcule a mdia (x), desvio
1500 ppm em potssio, no entanto, quando os animais esto doentes o teor em sdio do leite aumenta, podendo ir
at concentraes de 900 ppm.
Neste trabalho experimental efetua-se a determinao destes 2 elementos soro do leite por espetroscopia de
emisso atmica (EEA) em chama. As tcnicas de emisso, em chama e em plasma, so hoje em dia prticas comuns
em laboratrios de anlise. O elemento a medir introduzido na chama na forma de aerossol onde, devido
energia trmica, passa a um estado excitado e emite energia radiante ao retornar a estados energticos menores.
As radiaes emitidas, aps conveniente separao de comprimentos de onda por sistemas ticos, so
correlacionadas s concentraes correspondentes em analito atravs de curvas analticas (curvas de calibrao). A
Compare os resultados obtidos. Saliente as diferenas e eventuais vantagens/desvantagens de cada
amostra pr-tratada com cido tricloroactico (TCA) para coagulao das protenas e gorduras e, em seguida,
metodologia.
2.
Procedimento experimental
1 bureta de 25 ml
1 pipeta volumtrica de 20 ml
1 pipeta volumtrica de 10 ml
1 pipeta volumtrica de 5 ml
1 pipeta volumtrica de 2 ml
1 pipeta graduada de 25 ml
1 pipeta graduada de 10 ml
1 pipeta graduada de 2 ml
leite
20
21
Retire 5.00 ml do soro do leite (lquido aquoso sobrenadante resultante da centrifugao) para um balo de
volumtrico de 100 ml e perfaa o volume com gua desionizada. Prepare a amostra em triplicado.
1.
Introduo
Prepare um branco e padres de sdio do seguinte modo: para 6 bales de 100 ml adicione,
O paracetamol (acetaminofeno; C8H9NO2; MM 151.16 g/mol) um dos analgsicos e
respetivamente, 0, 2.00, 4.00, 6.00, 8.00 e 10.00 ml da soluo 100 ppm em sdio (use a bureta) e 10 ml de
antipirticos mais utilizados na teraputica. Este trabalho descreve as condies para separar e
cido tricloroactico a 5% em cada balo. Acerte os bales at ao trao com gua desionizada.
Retire 2.00 ml do soro do leite para um balo de volumtrico de 250 ml e complete a capacidade com gua
desionizada; prepare a amostra em triplicado.
rea de trabalho laboratorial onde a determinao qualitativa dos componentes de uma amostra ou a
determinao da sua composio quantitativa sejam indispensveis. uma tcnica em que os componentes de uma
Prepare padres e um branco de potssio do seguinte modo: para 6 bales de 100 ml adicione,
mistura se separam de acordo com as velocidades s quais so transportados por uma fase mvel atravs de uma
respetivamente, 0, 1.00, 2.00, 4.00, 6.00 e 8.00 da soluo 100 ppm em potssio e 2 ml de cido
fase estacionria, permitindo assim separar, isolar e identificar os componentes da mistura. No caso da
cromatografia lquida de elevada eficincia a fase mvel um lquido e a fase estacionria (contida numa pequena
coluna empacotada) vulgarmente um lquido viscoso. Atualmente, possvel o estudo de misturas muito difceis
de separar por outras tcnicas, especialmente misturas de biomolculas, por HPLC sendo, sem dvida alguma
Ligue e ajuste o espetrofotmetro de absoro atmica em modo de emisso de acordo com as instrues de
funcionamento do aparelho. Selecione o comprimento de onda adequado a cada doseamento (potssio 766.5
0.2 nm; sdio 589.0 0.2 nm). Mea as intensidades de emisso para os padres e amostras de soro de sdio ou
3.
3.2.A partir dos valores obtidos para a amostra (3 ensaios) e do volume de leite inicial, determine o teor em
devido aos diferentes equilbrios de distribuio a que esto submetidos entre a fase mvel (eluente) e a fase
estacionria (leito da coluna). Em seguida os componentes da amostra so detetados, sendo o tempo de chegada
ao detetor (tempo de reteno) dependente da forma como cada componente interatua com a fase estacionria da
coluna. Um registador, que est ligado ao detetor, permite obter automaticamente o sinal enviado por este, o qual,
em primeira aproximao, proporcional ao componente em soluo que passa nesse instante atravs da clula do
detetor. A representao grfica do sinal enviado pelo detetor em funo do tempo constitui o cromatograma da
mistura.
De acordo com a referida monografia os comprimidos de paracetamol no devem conter menos de 90% e nem
mais de 110% do valor indicado na embalagem.
2.
Procedimento experimental
22
23
- esptula
- almofariz e pilo
- 2 bales volumtricos 100 ml
1.
Introduo
- 1 balo volumtrico 25 ml
- 1 balo volumtrico de 50 ml
- 1 pipeta volumtrica de 5 ml
eltrodo de referncia e um eltrodo indicador (seletivo) - mergulhados numa amostra para fornecer informao
- 1 micropipeta de 1000 l
analtica.
- fase mvel para HPLC: Mistura de gua e de metanol (3:1); esta soluo filtrada sob vcuo por uma
membrana de nylon 0.45 m, e desgaseificada.
Estes mtodos envolvem a utilizao de equipamento simples e pouco dispendioso (alm dos dois eltrodos
apenas necessrio um potencimetro) e apresentam algumas vantagens gerais sobre outros procedimentos como
por exemplo, serem capazes de fornecer limites de deteo excepcionalmente baixos, possuirem intervalos de
da composio da composio da soluo de analito) pelo que as variaes dos valores de diferena de potencial
Sistema cromatogrfico:
registados so devidos s alteraes sentidas pelo eltrodo seletivo (ESI). Este equipamento tem a capacidade de
desenvolver um potencial eltrico proporcional ao logaritmo da concentrao de uma espcie inica, mesmo na
- coluna
- fluxo
presena de outros ies. Possuem uma membrana seletiva ao io que se quer medir e idealmente tm a capacidade
-1
1.5 ml min
de ter uma interao fsico-qumica com a espcie inica de interesse e com nenhuma outra. Assim, O ESI sente
20 l
UV 243 nm
Preparao da soluo padro: Prepare 100 ml de uma soluo padro de paracetamol 0.1 mg por ml, em
fase mvel. Dilua a soluo preparada anteriormente de forma a obter uma soluo padro de paracetamol
0.01 mg por ml (use o balo volumtrico de 50 ml). Filtre cerca 3 ml desta soluo diluda por um filtro de
0.22 m para um frasco.
Nos ltimos anos a potenciometria viu o seu campo de aplicao imensamente alargado com o aparecimento
de uma vasta gama de ESI que so utilizados rotineiramente em laboratrios para aplicaes clnicas e ambientais.
Um dos ESI mais comuns o eltrodo de membrana cristalina sensvel ao anio cloreto. Tal como acontece com
todos os instrumentos analticos, a anlise potenciomtrica quantitativa s possvel num determinado intervalo
de concentraes onde h uma relao linear entre o valor de diferena de potencial medido (E) e o logaritmo da
Preparao da amostra: Num almofariz triture os comprimidos analgsicos at obter um p fino. Pese o
equivalente a 50 mg de paracetamol e coloque num balo volumtrico de 100 ml. Adicione cerca de 50 ml
de fase mvel e coloque no ultrassons por 15 min. Complete o volume com fase mvel at aos 100 ml.
Transfira 500 l desta soluo para um balo de 25 ml e dilua com fase mvel. Filtre cerca 3 ml desta
soluo diluda por um filtro de 0.22 m para um frasco.
concentrao do io cloreto:
E = const + S log [Cl-]
Deste modo, este trabalho prtico envolve a preparao de um srie de solues padro de cloreto numa regio
alargada de concentraes para encontrar essa zona linear (zona nernstiana) e determinar o limite prtico ou
inferior de deteo (LPD ou LID) e o limite inferior de resposta linear (LIRL) deste eltrodo de condutor cristalino.
Procedimento:
O grfico dos valores E do sistema em funo do logaritmo da concentrao (curva analtica) dever conter 3
De acordo com a Unio Internacional de Qumica Pura e Aplicada (IUPAC) o LPD o valor de concentrao do
io na qual a poro horizontal extrapolada do grfico intercepta a poro nernstiana do grfico e corresponde ao
valor de concentrao a partir do qual o eltrodo sensvel ao io em questo. O LIRL o valor de concentrao a
3.
regies: uma poro inicial horizontal, uma poro curva e por fim uma regio reta. Esta ltima regio , ento, a
partir do qual a variao de potencial do eltrodo em funo do logaritmo da concentrao segue a equao de
Nernst modificada sendo por isso o limite mnimo para anlise quantitativa.
O conhecimento do valor declive do eltrodo na regio nernstiana permite ainda tirar concluses quanto ao
24
.
! "!
$ %"&!
mV/dcada de
25
concentrao. Um valor prximo do esperado (neste caso 59.16 mV/dcada) indica um bom estado de
funcionamento da unidade.
Concentrao e volume de soluo padro de cloreto a adicionar
Solues de Cloreto
(em bales de 100 ml)
2.
Procedimento experimental
-2
padro 1 - 5x10 M
-2
padro 2 - 1x10 M
-3
padro 3 - 5x10 M
-3
padro 4 - 1x10 M
-4
padro 5 - 5x10 M
-4
padro 6 - 1x10 M
-5
padro 7 - 5x10 M
-5
padro 8 - 1x10 M
-6
padro 9 - 1x10 M
-7
padro 10 - 1x10 M
decimilivoltmetro
1 pipeta volumtrica de 50 ml
4 pipetas volumtricas de 10 ml
3 pipetas volumtricas de 5 ml
2 pipetas volumtricas de 1 ml
1 gobel de 100 ml
9 bales volumtricos de 50 ml
-1
[Cl ]sol me = 10 M
50.00 ml
10.00 ml
5.00 ml
-2
[Cl ]padro 2 = 10 M
-3
[Cl ]padro 4 = 10 M
-5
[Cl ]padro 8 = 10 M
10.00 ml
5.00 ml
10.00 ml
5.00 ml
1.00 ml
10.00 ml
1.00 ml
No final, perfaa do volume de cada balo com soluo Na2SO4 0.033 M e agite, convenientemente, o seu
contedo.
2.2.2. Para um gobel previamente passado por gua desionizada, introduza cerca de 25 ml da soluo de
-7
padro de cloretos menos concentrada (i.e. 1x10 M). Insira, cuidadosamente os eltrodos e mea a
diferena de potencial entre o eltrodo indicador e o de referncia de acordo com as instrues do
decimilivoltmetro. Repita o procedimento para as outras solues padro (no se esquea que a leitura
2.2.1. Para bales volumtricos de 100 ml, prepare uma srie de solues padro de cloreto, de acordo com
2.2.3. Aps ter terminado estas operaes coloque os eltrodos numa soluo de NaCl 0.1 M.
o indicado na Tabela 1. De modo a ajustar a fora inica ajustada todas as solues devem ser preparadas
em Na2SO4 0.033 M.
3.
Apresentao do resultado
3.1. Trace o grfico E = f (log [Cl ]) e estime os valores dos limite prtico de deteco (LPD) e do limite
-
26
27
1. Introduo
KNO3 0.4 M
O flor reconhecido como principal agente de preveno da crie dental pois proporciona o fortalecimento do
esmalte dos dentes. O flor interfere com os microrganismos produtores da crie e altera os cristais do esmalte
2.00
3.00
4.00
Neste contexto, surge a adio de flor em todos os cremes dentais de uso geral que esto no mercado. Apesar
de ser benfico, deve ser ingerido na dosagem correta, para que a preveno no resulte em efeitos nocivos
sade j que a ingesto excessiva de flor (acima de 0.07 mg/kg de peso da pessoa, diariamente) pode ocasionar a
fluorose dental. Da, a necessidade de se estabelecer limites, mximo e mnimo, para a concentrao de flor nas
pastas dentais.
Neste trabalho pretende-se determinar o teor de fluoretos numa pasta dentfrica por potenciometria direta
5.00
10.0
5.0
6.00
8.00
10.00
20.00
No final, perfaa do volume de cada balo com gua desionizada e agite, convenientemente, o seu contedo.
(curva analtica). Para isso, recorre-se ao uso de um eltrodo seletivo ao anio fluoreto e de um eltrodo de
2.2.3.
referncia de prata-cloreto de prata de dupla juno. As no conformidades neste ensaio indicam que a pasta
Prepare a amostra em triplicado. Pese rigorosamente para dentro de um matrs de 250 ml, cerca de
250 mg da pasta a analisar (Nota: aconselha-se a que sejam utilizados pedaos de pasta de diferentes
zonas da bisnaga, de modo a que o valor de fluoreto determinado seja representativo). Adicione 10.0
2. Procedimento experimental
ml de KNO3 0.4 M, 5.0 ml de citrato de sdio 0.8 M, 40 ml de gua desionizada e ferva durante pelo
2.1.Material e reagentes
menos 2 minutos utilizando, para isso, uma placa eltrica de aquecimento com agitao magntica. A
soluo final pode apresentar-se turva, devido ao excipiente da pasta dentfrica. Aps arrefecimento,
- milivoltmetro
transfira quantitativamente a soluo para um balo volumtrico de 100 ml e dilua at ao trao com
2.2.4.
Para um gobel previamente passado por gua desionizada e seco em papel absorvente, introduza
- 11 gobels de 50 ml
- 3 matrazes de 250 ml
- 1 pipeta graduada de 10 ml
2.2.5.
- 1 pipeta graduada de 5 ml
Efetue esta operao para todos os padres de fluoreto e no final para as 3 solues-amostra.
3.
Apresentao do resultado
3.1. Trace a curva de calibrao E (mV) em funo do log [F ].
-
3.2. Com os resultados obtidos, calcule (para a trs preparaes de amostra) a concentrao em fluoreto
- pasta dentfrica
2.2.2.
Para um balo volumtrico de 100 ml, dilua a soluo padro de fluoreto, de modo a obter uma
Com esta soluo intermdia prepare padres para bales volumtricos de 100 ml de acordo com o
indicado na Tabela a seguir apresentada.
28
29
- 1 pipeta volumtrica de 8 ml
- 3 pipetas volumtricas de 10 ml
1. Introduo
- 1 pipeta volumtrica de 15 ml
- banho de ultrassons
-1
- fase mvel: soluo tampo de fosfatos de trietilamina (1% vol.) e acetonitrilo (15% vol.) pH 4.3
2.2.Execuo prtica
Ajuste o cromatgrafo para as seguintes condies de operao:
- coluna
cafena em excesso pode causar vrios sintomas desagradveis incluindo a irritabilidade, dores de cabea,
cabe insnia,
- fluxo
- quantidade injectada
O teor em cafena em refrigerantes pode ser avaliado por cromatografia lquida de alta resoluo (HPLC),
- detetor
-
-1
1.0 ml min
20 l
UV 214 nm
fase mvel
A partir da soluo padro de cafena (0.500 g l ) prepare rigorosamente, para bales volumtricos de 25 ml, uma
-1
srie de solues com as seguintes concentraes em cafena: 20.0, 40.0, 100, 160 e 200 mg l . Todos estes padres
flutuaes nas condies experimentais, etc. O efeito destas variaes pode ser minimizado pelo uso de um padro
-1
Preparao da amostra
mesma proporo, os sinais de ambos; assim, quando se calcula a razo entre os sinais, o efeito da variao
Para bales volumtricos de 25 ml, efetue a diluio rigorosa de 15.00 ml das amostras de refrigerantes e adicione
atenuado.
um volume de cido benzoico de modo a que a concentrao final desta substncia na soluo seja idntica dos
-1
se cido benzico
benzico como padro interno. O composto obedece s condies necessrias para
Neste trabalho usa-se
que uma substncia possa ser usada com esta finalidade numa anlise cromatogrfica: solvel na amostra, no
est presente na amostra original, tem um tempo de reteno prximo do tempo de reteno do analito, ocasiona
- Injete sucessivamente os padres, do menos para o mais concentrado, aps filtrao e desgaseificao.
um sinal com dimenso semelhante ao correspondente ao analito e no reage quimicamente com os componentes
da amostra.
- Repita esta anlise pelo menos mais duas vezes de modo a obter pelo menos trs cromatogramas da
amostra.
As amostras de vrios refrigerantes so analisadas numa coluna de fase reversa, usando um detetor de UV/Vis a
214 nm aps adio de uma pequena quantidade de cido benzico rigorosamente conhecida.
conhecida Por comparao dos
tempos de reteno e reas obtidas com uma srie de solues padro de cafena contendo
endo cido benzico,
benzico
3. Apresentao do resultado
3.1. Trace os grficos que lhe permitem determinar a concentrao de cafena nas amostras:
'"$ % ( )*$
2. Procedimento experimental
=f(
0( )*$ 1
0 .-*$." !1
- 8 bales volumtricos de 25 ml
= f (02
34
1)
- 1 pipeta volumtrica de 1 ml
3.2. Determine a concentrao em cafena na amostra e associe-lhe os parmetros estatsticos que lhe
- 1 pipeta volumtrica de 2 ml
- 2 pipetas volumtricas de 5 ml
30
31
32