Practicas de Inmunologa

E.P Medicina Humana

PRACTICA N 7
INMUNOAGLUTINACION

DETERMINACION DEL FACTOR REUMATOIDEO (FR)

1.

OBJ
ETIVO

ocer el fundamento de la tcnica de Inmunoaglutinacion

diagnostico medico.

Con
y sus aplicaciones en el

Dete

rminar el Factor Reumatoideo en suero, utilizando la tcnica de Inmunoaglutinacin.

INTRODUCCION
La artritis reumatoidea es un sndrome crnico de etiologa desconocida, caracterizado por una
inflamacin inespecfica y generalmente simtrica de las articulaciones, que a veces evoluciona
hacia la destruccin de las estructuras articulares y periarticulares.
En la articulacin enferma se observa un engrosamiento de la membrana sinovial con formacin de
pliegues y proliferacin de linfocitos. Estas clulas, que forman folculos linfoides, son las
responsables de la sntesis de factores reumatoideos (FR) y otras inmunoglobulinas.
Los FR son generalmente de tipo IgM anti-IgG, es decir que reaccionan con las fracciones Fc de las
IgG. Tambin se han encontrado FR de tipo IgG, aunque en menor proporcin de casos.
Los FR de tipo IgM estn presentes en el 85-90% de los adultos con artritis reumatoidea aunque no
es especfico de la enfermedad puesto que tambin se han encontrado en individuos sanos (en un 3
a 5% de los casos).
Por tal motivo, cuando se sospecha la existencia de una enfermedad distinta de la artritis
reumatoidea, frente a una reaccin de aglutinacin positiva es aconsejable realizar la precipitacin
de las globulinas con sulfato de amonio. De tal forma, se asegura la precipitacin completa de los
FR y se mantiene en solucin cualquier aglutinina responsable de una falsa reaccin positiva, como
as tambin algn posible inhibidor.

2.

FU
NDAMENTO DEL METODO
La prueba rpida de latex esta basada en una reaccin inmunolgica entre el Factor Reumatoideo
(FR) presente en el suero problema y la correspondiente IgG humana ligada a partculas de
poliestireno. Cuando se mezcla el suero problema conteniendo el Factor reumatoideo con el
reactivo RF latex, se puede visualizar una aglutinacin.

3.

REA
CTIVOS Y MATERIALES

UCSM

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3.1.

RE
ACTIVOS

LAT
EX RF : Suspensin de partculas de latex sensibilizadas con IgG humano en buffer salino
de glicina.
BUF

FER SALINO: Solucin salina fisiolgica (NaClO, 9%). Listo para usar.

CO
NTROL POSITIVO: Suero Humano prediluido y estabilizado conteniendo RF que aglutina
con el reactivo latex.

CO
NTROL NEGATIVO: Suero Humano prediluido y estabilizado, no reactivo en el test de
aglutinacin.
Solu

cion fisiolgica.

1.1.

MAT
ERIALES

Mue

stra de Sangre

Tub

os Vacutainer Seco (Tapa roja)

Alg

odn

Etan

ol al 70%

Liga

dura

Jeri

ngas de 3 cc

Des

cartador de punzocortantes

Tim

er

Fue

nte de luz

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Micr

opipetas Automticas de 20ul, 200ul a 1000ul.

Tips

para micropipetas de 20ul, 200ul a 1000ul

01

placa de fondo oscuro con 3 o 6 reas de reaccin.

Varill

as mezcladoras

METODOLOGIA

3.2.

Rec
oleccin de la Muestra

Ext
raer la muestra de sangre por Venopuncin del antebrazo, tomndose todas las medidas de
Bioseguridad en la obtencin de la muestra.

Re
colectar 3ml de Sangre con la ayuda de una jeringa.

De
positar la muestra dentro del tubo seco (tapa roja), centrifugar y separar la sangre del suero.

DESARROLLO

3.3.

Mt
odo Cualitativo en Placa

1.

Deja
r que los reactivos y muestras alcancen la temperatura ambiente.

2.

Pon
er 20ul del suero en las reas marcadas en la lmina.

3.

Colo
car 20ul del suero control positivo (+) y negativo (-) en las reas marcadas de la lamina.

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4.

Mez
clar el reactivo de latex FR hasta obtener una suspensin homognea y aadir 20ul de
reactivo de latex a cada uno de los sueros controles y muestras.

5.

Mez
clar con aplicadores diferentes por cada rea.

6.

Mov
er en un ngulo de 45 la laminilla por 3 minutos.

7.

Obs
ervar inmediatamente la aglutinacin utilizando una fuente de luz directa, comparar las
reacciones del suero y de los controles.

Interpretacin:

La
aglutinacin de las partculas de latex indica una reaccin positiva (+). Si es asi, realizar
la prueba Semicuantitativa.

La
No aglutinacin o una ligera aparicin de granulosidad que no exceda a la observada en
el control negativo (-), indica un resultado (-).

1.1.

Mt
odo Semicuantitativo o Titulacin

Los
sueros positivos pueden titularse efectuando diluciones seriadas, en 6 tubos de ensayo.

1.

Colo
car 100ul de solucin Fisiologica en cada uno de los tubos.

2.

Agre
gar 100ul de suero al tubo N 1 y homogenizar cuidadosamente. Transferir 100ul de esta
dilucin al tubo N 2 y homogenizar, continuando de esta forma las diluciones hasta el ultimo
tubo.
Las diluciones asi obtenidas equivalen a : 1: 2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64.

3.

Tran
sferir 20ul de cada tubo y proceder de acuerdo a la prueba Cualitativa.

Interpretacin de los Resultados

Neg
ativo: Suspensin homognea (sin aglutinacin)

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Posi
tivo: Aglutinacin que aparece dentro de los 2 minutos

Titul
o: Es la inversa de la mxima dilucin a la que se produce aglutinacin visble
macroscpicamente.
La concentracin del Factor Reumatoideo en la muestra puede ser calculada con la
siguiente formula:

FR (IU/ml) = Titulo x Sensibilidad de la reaccin (8 IU/ml)

Nota: La sensibilidad del reactivo es de 8 IU/ml.

1

CUESTIONARIO

1.

Defi
ne que es Factor Reumatoideo.
Es una prueba serolgica inmunolgica. Esta prueba a menudo (70 al 80%) es positiva en
personas con artritis reumatoide, AR. Un resultado de ms de 40 UI PUDIERA considerarse
anormal, los resultados pueden llegar hasta las 2000 UI o ms, o pueden expresarse con un
nmero menor indicando la dilucin de la sangre a la cual se midi el FR.

2.

Por
qu no es aconsejable trabajar con sueros con alto contenido de lpidos, o que el plasma tenga
fibrina?
Debido a que es posible que se alteren los resultados por la presencia de una vasta variedad de
compuestos que afecten la sensibilidad de la reaccin

3.

Por
qu la artritis reumatoide se considera una enfermedad autoinmune?
La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad inflamatoria crnica, de naturaleza autoinmune,
caracterizada por la afectacin simtrica de mltiples articulaciones y la presentacin de
diversos sntomas generales inespecficos y manifestaciones extraarticulares. Librada a su
evolucin natural y en ausencia de tratamiento adecuado, la enfermedad puede causar, en
fases avanzadas, importantes limitaciones fsicas, as como un marcado deterioro de la calidad
de vida.
La AR se manifiesta tpicamente por dolor, tumefaccin y rigidez o dificultad de movimiento en
diversas articulaciones pequeas y grandes. Los sntomas generales, que a veces preceden a
las manifestaciones articulares y tienden a persistir durante toda la evolucin del trastorno,
incluyen bsicamente cansancio, sensacin de malestar, fiebre ligera, inapetencia y prdida de
peso corporal. Las posibles manifestaciones extraarticulares, que suelen presentarse cuando la
enfermedad ya est establecida, afectan principalmente a la piel, los vasos sanguneos, el
corazn, los pulmones, los ojos y la sangre.
La AR es mucho ms frecuente en el sexo femenino que en el masculino y suele aparecer en
personas adultas mayores, pero puede iniciarse en cualquier etapa de la vida y afectar a
cualquier persona, con independencia de la raza, el sexo y la ocupacin.

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Las enfermedades autoinmunes constituyen un numeroso grupo de trastornos en los que, por
razones an no bien esclarecidas, el sistema inmunitario, encargado de la defensa del
organismo, reacciona contra tejidos del propio cuerpo a los que errneamente identifica como
extraos, como si representaran una amenaza.
Aunque el trastorno es de causa desconocida, la autoinmunidad juega un papel primordial en su
origen, en su cronicidad y en la progresin de la enfermedad. La enfermedad se asocia con la
presencia de auto anticuerpos (particularmente el factor reumatoide y los anticuerpos
antipptidos cclicos citrulinados).

4.

Calc
ular la Titulacin de una muestra positiva para FR, teniendo positividad en la dilucin 1:8

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