Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
Facultad de Qumica
Licenciatura en Ingeniera Qumica
Cuarto semestre
2015
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
NDICE
I- Introduccin General
Practica
Practica 3
Practica
Practica
Practica
Practica
Examen de laboratorio
Practica
Practica
Practica
10
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Potenciometra
Espectrofotometra de UV
Espectrometra de Absorcin Atmica
Espectrofotometra infrarroja
Cromatografa de Lquidos
Cromatografa de Gases
Anlisis Trmicos
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
3 - MATERIAL Y EQUIPOS
- El material que se utilizar durante la sesin de laboratorio est a cargo de los alumnos.
- Cada grupo de alumnos deber preparar el material en la maana.
- De no ser as, no se podr realizar la prctica y se considerar como falta.
4 - REPORTE DE LABORATORIO
- Se entregara a los alumnos el manual de laboratorio con el descriptivo de las diferentes
prcticas.
- En caso de modificar una prctica se avisar con una semana de anticipacin a los alumnos y
se les entregar el nuevo temario.
- Cada grupo de alumnos deber llegar a la prctica con el protocolo redactado:
a) Titulo de la prctica
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
b) Objetivos de la prctica
c) Introduccin breve de la tcnica empleada y justificacin
d) Lista de reactivos, material y equipo
e) Preparacin de la muestra
f) Metodologa y descripcin del anlisis
Al iniciar la prctica, se verificar el protocolo y se calificar (50% de la
calificacin global de la prctica).
-A la siguiente prctica, se entregara el reporte final de la prctica:
g) Resultados y discusin
h) Conclusiones
Se calificar a ese momento la segunda parte (50% de la calificacin global de la
prctica).
La calificacin general correspondiente a la parte de laboratorio ser el promedio de las
calificaciones de los reportes y participar en un 20% de la calificacin general de la asignatura
de Qumica analtica.
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
REACTIVOS
EQUIPO
HCl Conc.
NaOH
Ftalato de potasio
Carbonato de sodio
Indicador Naranja de Metilo
Indicador Fenolftalena
Potencimetro
.
MATERIAL
1 Matraz aforado de 100 mL
1 Matraz aforado de 250 mL
Micropipetas de volumen variable
Un soporte universal
Una parrilla con agitacin
Una pinzas de tres dedos
Una bureta de 50 mL
Un agitador magntico (Tamao arroz)
3 vasos de precipitados de 250 mL
3 vasos de precipitados de 50 mL
Una perilla
Una pizeta
Esptula
Papel para limpiar los electrodos
EXPERIMENTAL
1. Prepar 100 mL de HCl aproximadamente 0.1N y valore con Carbonato de sodio,
para determinar su concentracin real.
2. Prepar 250 mL de NaOH aproximadamente 0.1N y valore con Ftalato de potasio,
para determinar su concentracin real.
3. Realice la titulacin con 25 mL de HCL con el NaOH preparado,
4. Coloque los datos de la titulacin en una hoja de Excel y sobreponga la curva
Experimental con la obtenida de forma terica.
Cuestionario
1.- Numere los requisitos que deben cumplir la solucion patrn ideal.
2.- Discuta que parmetros influyen en la determinacin del punto final.
9
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
10
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
MTODO
En un matraz erlenmeyer de 250 mL se vierten 50 mL de cido fosfrico y se valora con hidrxido
de sodio hasta tener un volumen considerable despus del ltimo punto de equivalencia.
REPORTE
Los resultados se tabulan de la siguiente manera:
VOLUMEN DE
PH
HIDRXIDO DE SODIO
EN ML
D(PH)/DV
pH
d(pH)/dv
NaOH en mL
NaOH en mL
(b)
(a)
Los puntos de inflexin que se observan en la primera curva corresponden a los picos que aparecen
en la segunda grfica.
11
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
INTRODUCCIN
Los colorantes utilizados por la industria como son el rojo 40, amarillo 5, etc. son
factibles de ser analizados por espectrometra de absorcin, de una manera rpida y con
alta exactitud.
PROPSITO
El alumno aprender a utilizar el equipo de ultravioleta-visible para analizar la
pureza de los colorantes organosintticos por medio del modo de barrido.
Aprender a dar lectura a un espectro de ultravioleta, a identificar los parmetros de
medicin en el espectro y a sacar conclusiones a travs de la lectura de esos parmetros.
APLICACIN
Aplicable a colorantes artificiales alimenticios.
FUNDAMENTO TEORICO
La absorcin molecular en la regin ultravioleta y visible del espectro depende de la
estructura electrnica de la molcula. La absorcin de energa se cuantifica y da por
resultado la elevacin de los electrones desde orbitales en el estado bsico a orbitales de
mayor energa en un estado excitado. Para muchas estructuras electrnicas, la absorcin no
ocurre en una porcin fcilmente accesible de la regin ultravioleta. En la prctica, la
espectrometra ultravioleta est limitada en gran parte a los sistemas conjugados.
12
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Intensidad
A
nm
Figura 1. Representacin de una grfica de un espectro de ultravioleta.
Los datos frecuentemente se muestran en forma de grfica o presentacin tabular de
la longitud de onda en funcin de la absorptividad molar o el logaritmo de la absorptividad
molar max o log mx
El uso de la absorptividad molar como unidad de la intensidad de absorcin tiene la
ventaja de que todos los valores de intensidad se refieren al mismo nmero de especies
absorbentes.
Las longitudes de onda en la regin ultravioleta generalmente se indican en
nanmetros (lnm=10-7 cm) o amstroms, (1A= 10-8 cm). Ocasionalmente, la absorcin se
indica en nmeros de onda; nosotros estamos principalmente interesados en la regin de
ultravioleta que se extiende desde 200 hasta 300 nm. La atmsfera es transparente en est
regin que resulta ser fcilmente accesible con la ptica del cuarzo.
La energa total de la molcula es la suma de su energa electrnica de unin, su
energa vibracional y su energa rotacional. La magnitud de estas energas disminuye en el
orden siguiente:
Eelec, Evib, y Erot. La energa absorbente en la regin ultravioleta produce cambios en la
energa electrnica de la molcula que resulta de las transiciones de electrones de valencia
en la molcula.
Estas transiciones consisten en la excitacin de un electrn desde un
orbital molecular lleno al siguiente orbital de energa mayor. El orbital anti-enlace se
designa por un asterisco se indica de la siguiente forma: *
La relacin entre la energa absorbida en una transicin electrnica y la frecuencia
(v), longitud de onda y nmero de ondas de la radiacin que produce la transicin es:
E=hv=hc/=hvc
13
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
* de anti-enlace
* de anti-enlace
E
de enlace
de enlace
An cuando los cambios de energa no se muestran a escala, se puede observar fcilmente,
por ejemplo que la transicin n * requiere de menor energa que la transicin .
Las transiciones n * tambin denominadas bandas R de los grupos cromforos
simples tal como el grupo carbonilo es prohibido y las bandas correspondientes se
caracterizan por bajas absorptividades molares, tambin estn caracterizadas por el
desplazamiento hipsocrmico.
Cuando las bandas adicionales hacen su aparicin, la transicin n * se desplaza a una
mayor longitud de onda pero puede quedar hundida en bandas de mayor intensidad.
Las bandas atribuidas a las transiciones * ( bandas K) aparecen en el espectro de las
molculas que tienen estructuras .
Estas transiciones * estn caracterizadas por una alta absorptividad molar,mx
10000.
Las transiciones * ( bandas K) de los sistemas di o polieno conjugados pueden
distinguirse de las correspondientes a los sistemas de enona al observar el efecto de
cambiar la polaridad del solvente. Las transiciones * de los sistemas dieno o polieno
no son esencialmente sensibles a la polaridad del solvente, los dobles enlaces de
hidrocarburo no son polares. Sin embargo, las absorciones correspondientes de las enonas
quedan sometidas al desplazamiento batocrmico, el cual frecuentemente va acompaado
del aumento en la intensidad conforme se incrementa la polaridad del solvente.
16
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
PROCEDIMIENTO
A) Uso del equipo, lectura del espectro, modos de operacin.
Pesar el estndar con el fin de obtener una concentracin de 0.01 g/l y aforar en
matraz volumtrico. Colocar la muestra dentro de una celda de cuarzo y efectuar un barrido
espectofotomtrico de 380 a 750 nm. Determinar la absorbancia a la mxima longitud de
17
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
onda. Repetir la operacin para otras concentraciones con el fin de que se obtenga una
absorbancia que caiga dentro de la linearidad que marca la ley de Beer.
Reportar:
Procedimiento de anlisis de la muestra
Longitud de onda de l pico o picos mximos
Explicar los modos de operacin del equipo.
Tabla1
Colorante
Amarillo 5
Amarillo 6
rojo 40
Azul 1
de Onda (nm)
428
484
502
630-625
Con. (g / l)
0. 01
0. 01
0. 01
18
absortividad (l / g cm)
53
55
55.6
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Difenilcarbazida
HNO3 concentrado
K2Cr2O7
H2SO4
REACTIVOS
EXPERIMENTAL
Preparar las siguientes disoluciones:
19
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
4 6 8
10
20 30 40 50
12
60
14
70
16
80
18
20 (solucin STD de Cr VI)
90 100
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Procedimiento de operacin
1. Tratamiento de la muestra
Pesar exactamente alrededor de 0.5 g de muestra, previamente tamizada y desecada
durante 2 h. a 110 C, y transferirla a un vaso de precipitado de 100 mL. Aadir 5 mL
de HNO3 y calentar en una parrilla hasta casi sequedad. Aadir 10 mL de HNO 3 0.01
M, calentar unos minutos para disolver las sales y filtrar. Transferir el lquido filtrado a
un matraz de 50 mL y aforarar con HNO3 0.01 M.
2. Determinacin de plomo en la disolucin de la muestra
-
[Pb]Final
(ppm)
2
6
10
20
40
60
80
22
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Resultados
Peso de la muestra es de:
[Pb](ppm)
Absorbancia
10
20
40
60
80
Problema
Clculos
Realizar una grfica con las absorbancias obtenidas frente a la concentracin de Pb.
Ajustar una recta a los puntos experimentales, y a partir de la misma calcular el
contenido en plomo de la disolucin problema y posteriormente el que hay en la
muestra.
[Pb]muestra es de:
23
(g/g)
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
slido suspendido sea menor que la longitud de onda del haz infrarrojo; si no se cumple
esta condicin, se pierde una parte de la radiacin por dispersin.
Uno de los mtodos utilizados para preparar la mezcla a analizar consiste en triturar de 2 a
5 mg de una muestra finamente pulverizada (tamao de partcula 2 m) en presencia de
una o dos gotas de un aceite pesado de un hidrocarburo (Nujol). Si es probable que
interfieran las bandas del hidrocarburo, se puede utilizar Fluorolube, un polmero
halogenado. En cualquier caso, la mezcla resultante se examina luego como una delgada
pelcula entre planas de sal.
En una segunda tcnica, se parte de un miligramo o menos de una muestra finamente
triturada que se mezcla ntimamente con unos 100 mg de polvo de bromuro de potasio
desecado. La mezcla se puede efectuar con un mortero, y mejor an en un pequeo molino
de bolas. La mezcla se comprime luego en un troquel especial a una presin de 700 a 1000
kg/cm2, para obtener un disco transparente. Se obtienen mejores resultados si se forma el
disco en el vaco para eliminar l aire ocluido. A continuacin, el disco se coloca en el haz
del instrumento para su anlisis espectroscpico. Los espectros resultantes a menudo
presentan bandas a 345 y 1640 cm-1 (2,9 y 6,1 m) debidas a la humedad absorbida.
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
La tabla 2 muestra de forma abreviada las frecuencias de grupo para algunos de los grupos
orgnicos funcionales ms comunes.
Enlace
Tipo de compuesto
CH
Alcanos
CH
Alqueno
C C
H
CH
CH
Alquinos (CCH)
Anillos aromticos
OH
Alcoholes, fenoles
Alcoholes con puente de
hidrgeno, fenoles.
cidos carboxlicos
cidos Carboxlicos con
puente de hidrgeno
Aminas, amidas
Alquenos
Anillos aromticos
Alquinos
Aminas, amidas
Nitrilos
Alcoholes, teres, cidos
carboxlicos, steres
Aldehdos, cetonas, cidos
carboxlicos, steres
NH
CC
CC
CC
CN
CN
CO
CO
Intensidad
2850 2970
1340 1470
3010 3095
675 995
Fuerte
Fuerte
Media
Fuerte
3300
3010 3100
690 900
3590 3650
3200 3600
Fuerte
Media
Fuerte
Variable
Variable, a veces ancha
3500 3650
2500 2700
3300 3500
1610 1680
1500 1600
2100 2260
1180 1360
2210 2280
1050 1300
1690 1760
28
Media
Ancha
Media
Variable
Variable
Variable
Fuerte
Fuerte
Fuerte
Fuerte
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
NO2
Nitrocompuestos
1500 1570
1300 1370
Fuerte
Fuerte
Material
CLORURO DE
SODIO (NaCL)
BROMURO DE
POTASIO (KBR)
CLORURO DE
POTASIO (KCl)
IODURO DE
CESIO (CsI)
SILICA FUNDIDA
(SiO)
FLORURO DE
CALCIO(CaF)
FLORURO DE
BARIO (BaF)
BROMOIODUYR
O DE TALIO(Krs5)
BROMURO DE
PLATA (AgBr)
SULFITO DE
ZINC
POLICRSITALINO
(IRTRAN-2)
ZnS
SELENURO DE
ZINC
POLICRISTALINO
(IRTRAN-4)
ZnSe
TELURIO DE
CADMIO (CdTe)
POLIETILENO
(ALTA
DENSIDAD)
Solubilidad en
agua(g/g de agua)
0.25-16
40 000-625
1.49
36 (a 20C)
0.25-26
40 000-385
1.52
65.2 (a 20 C)
0.25-20
40 000-500
1.46
34.7
0.30-50
33 000-200
1.74
160
0.20-4
50 000-2 500
Insoluble
0.20-9
50 000-1 100
1.51 X 10 -3
0.2-13
50 000-770
1.42
(a 3333 cm-1)
1.39
(a 2000 cm-1)
1.42
0.6-40
16 600-250
2.37
4.76 x 10 -2
0.5-35
20 000-285
12 s 10-6
1-14
10 000-715
2.2
(aproximado)
2-20
Insoluble
1-19.5
10 000-515
2.41
Insoluble
2-2.28
5 000-360
2.67
Insoluble
16-333
625-30
1.54
(a 5 000cm-1)
Insoluble
0.12
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
se produce una fuerte interaccin entre los enlaces vecinos. Las bandas de absorcin son
pues el resultado combinado de estas distintas interacciones y dependen de la estructura
bsica general de la molcula.
Debido a su complejidad, raramente es posible la interpretacin exacta de los
espectros en esta regin; por otra parte, esta complejidad es la que conduce a la
singularidad y por consiguiente a la utilidad de la regin para fines de identificacin.
PROPOSITO
Que el estudiante aprenda a hacer un anlisis cualitativo de algunos empaques usados
en la industria.
1. Que el estudiante conozca las diferentes partes de un Espectrofotmetro de Luz
Infrarroja.
2. Que el estudiante aprenda a manejar una muestra para ser tratada en IR
3. Qu el estudiante compare los resultados obtenidos entre los mtodos de manejo de
muestra para IR.
FUNDAMENTO TERICO
Dependiendo de la forma de manejar una muestra para ser leda por IR ser el
resultado del espectro o interferograma obtenido, ya que una muestra puede ser disuelta,
pulverizada o leda de manera directa; de la forma como sea tratada depender la cantidad
de interferencias o picos de fondo que deban tomarse en cuenta, para interpretar un espectro
de IR.
ASPECTOS DE HIGIENE Y SEGURIDAD
Todo el material debe estar perfectamente seco y limpio al igual que las manos de quien manipule
las muestras.
MATERIALES Y METODOS
1.-Espectrofotmetro de Luz Infrarroja Nicolet
2.-Esptula
3.- Mortero de gata con pistilo de gata
4.- Ventanas par IR de NaCl
5.- Prensa
6.- Dado para pastillas de IR
7.- Soporte para pastillas
REACTIVOS:
Las sustancias que a continuacin se mencionan deben ser grado espectro, a menos que se
indique lo contrario.
KBr
30
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Cloroformo
Progesterona
Argn HUP
PROCEDIMIENTO
a) Pastilla
1. Coloque una pequea cantidad de KBr (20mg aprox.) en el mortero de gata y
mulalo un poco.
2. Arme el dado para hacer pastillas como le indique el profesor (a) y coloque el KBr
dentro del dado.
3. Elabore una pastilla con ayuda de la prensa y retrela con las pinzas, no la toque con las
manos.
4. Coloque la pastilla en el soporte para pastillas.
5. Lala como background en el equipo de FT-IR.
6. Retire el soporte y la pastilla del equipo, retire la pastilla del soporte y regrsela al
mortero completa, adicione la punta de la esptula de progesterona y muela todo junto
un poco.
7. Elabore nuevamente una pastilla con esta mezcla.
8. Colquela en el soporte para pastillas y lala como sample
en el equipo FT-IR.
9. Imprima el espectro resultante.
b) Lquida
10. Coloque en un vial una pequea cantidad de progesterona y adicione lo menos posible
de cloroformo para disolverla.
11. Coloque dentro de la celda para lquidos de NaCl, cloroformo. Tape perfectamente y lea
como background en el equipo de FT-IR
12. Limpie la celda con flujo de argn.
13. Adicione la progesterona disuelta en cloroformo a la celda de lquidos.
14. Colquela en el porta celdas y lala como sample en el equipo de FT-IR.
15. Imprima el espectro resultante
c) Film o pelcula
16. Coloque una gota de cloroformo entre dos ventanas de NaCl.
17. Coloque las ventanas en el porta ventanas y lea como background.
18. Retire las ventanas y coloque un poco de progesterona disuelta en cloroformo entre dos
celdas de NaCl.
19. Lea como sample en el equipo de FT-IR.
20. Imprima el espectro resultante.
REPORTE
1. Interprete cada uno de los espectros basndose en las tablas de la introduccin.
2. Compare los espectros resultantes
31
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
CUESTIONARIO.
1. Cul es la principal diferencia entre los espectros de IR obtenidos?
2. A qu crees que se deban estas diferencias?
3. Para que es necesario correr un background antes de cada corrida de IR?
4. Investiga de que materiales pueden ser las celdas de IR y por qu se usan ms
comnmente, las elaboradas con NaCl?
EVALUACIN:
50% Cuestionario
50% Reporte de la prctica
32
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
PROPOSITO
Que el estudiante tenga el criterio de seleccionar una tcnica de Anlisis Instrumental para
identificar y cuantificar una muestra problema proporcionada por el profesor.
MATERIALES Y REACTIVOS
Sern prestados por el encargado de Laboratorio de acuerdo a la Necesidad de la muestra
problema.
33
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
PROPOSITO
Que el estudiante aprenda a hacer un anlisis cualitativo y cuantitativo de mezclas de sustancias
orgnicas.
1. Que el estudiante conozca las diferentes partes de un Cromatgrafo de Gases.
2. Que el estudiante aprenda a hacer un anlisis cualitativo de una mezcla de sustancias
orgnicas.
3. Que el estudiante aprenda a hacer un anlisis cuantitativo de una muestra problema, a partir
de una curva de calibracin, mediante el mtodo del estndar externo y del estndar interno.
4. Qu el estudiante compare los resultados obtenidos entre los mtodos de cuantificacin
empleados.
34
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
FUNDAMENTO TERICO
La cromatografa de gases se utiliza para separar, identificar y cuantificar
cualquier material que contenga una presin de vapor apreciable (1 a 1000 mm Hg) a una
temperatura de operacin de la columna (medio de separacin) desde 70 C a 400 C.
Anlisis cualitativo
Se basa en la diferencia de velocidades de migracin de los componentes de una
mezcla entre dos fases; una estacionaria y una mvil (gas), de tal manera que cada
componente es selectivamente retenido por la fase estacionaria y eluye a un cierto tiempo
(tiempo de retencin), dependiendo del programa empleado para su anlisis.
Anlisis cuantitativo
El auge creciente de la cromatografa durante las ltimas cuatro dcadas se debe en
parte a su rapidez, simplicidad, relativamente bajo costo, y a su gran aplicabilidad como
herramienta de separacin. Su uso se ha extendido tanto porque puede tambin
proporcionar informacin cuantitativa acerca de las especies separadas. Por lo tanto
debemos tener en cuenta los aspectos cuantitativos aplicados a todos los tipos de
cromatografa.
La cromatografa en columna cuantitativa se basa en la comparacin de la altura, o
del rea, del pico del analito con la de uno o ms estndares. En cromatografa plana, el
rea cubierta por las especies separadas sirve como parmetro analtico. Si se controlan las
condiciones adecuadamente, esos parmetros varan linealmente con la concentracin.
Mtodo del % de rea
- Todos los componentes deben ser registrados.
- El factor respuesta para todos es el mismo.
- % de rea.
Ai
100
Se obtiene mediante la frmula % A
Ai
*PICO No.
1
2
3
4
TOTAL
*Datos de la muestra
Tr (min.)
2.71
3.48
4.23
5.78
AREA
85,000
72,000
43,200
25,305
225,505
% DE AREA
37.6931
31.9283
19.1570
11.2215
100
35
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
*PICO No.
1
2
3
4
TOTAL
*Datos de la muestra
Tr (min.)
2.71
3.48
4.23
5.78
AREA
85,000
72,000
43,200
25,305
225,505
% DE AREA
37.6931
31.9283
19.1570
11.2215
100
tr (min.)
2.71
3.48
4.23
5.78
AREA
50.000
70.000
80.000
65.000
CONC (mg)
15
15
15
15
A ref
C ref
FR 1= __15
x
50.000
70.000 = 1.4
15
FR1= 1.4
FR 2= __15
x
70.000
70.000 = 1.0
15
FR2= 1.0
FR 3= __15
x
80.000
70.000 =0.875
15
FR3= 0.875
FR 4= __15
x
65.000
70.000 = 1.076
15
FR4= 1.076
Porciento de normalizacin %N
%N =
Ai x
FR i
ni=1 Ai x FR i
100
% N 1 = _______________(85.000) (1.4)_____________
(85.000) (1.4) + (72.000) (1) + (43.200) (0.875) + (23.305) (1.076)
% N 1 = _________119.000_______
119,000+72,000+37,800+ 25,076.18
% N1 = 46.8732
% N2 = (72.000) (1)
253,876.18
%N2 = 28.3602
x 100
% N 3= 14.8891
x 100
36
%N4 = 9.8773
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
X 100
%N T = 99.9998
tr (min.)
2.71
3.48
4.23
5.78
AREA
85,000
72,000
43,200
25,305
225,505
37
% DE AREA
37.6931
31.9283
19.1570
11.2215
100
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
*PICO No.
1
2 (ref)
3
4
tr (min.)
2.71
3.48
4.23
5.78
AREA
50.000
70.000
80.000
65.000
CONC (mg)
15
15
15
15
FC1 = 3.000x 10 -4
FC2 = 2.142 x10 -4
FC3 = 1.875 x 10-4
FC4 = 2.307 x 10-4
C1= 25.5 mg
C2= 15.4 mg
C3= 8.1 mg
C4= 5.8 mg
FVi
El mtodo del estndar interno.
En cromatografa cuantitativa la mayor precisin se consigue por el uso de patrones internos debido
a que se evitan las incertidumbres que se introducen en la inyeccin de la muestra. En este
procedimiento, el estndar interno elegido debe reunir las siguientes caractersticas:
- Proporcionar un pico bien resuelto
- Aparecer en el cromatograma en la mitad del mismo.
- No debe encontrarse en la muestra
38
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
1-. Se realiza un cromatograma patrn con todas las sustancias y el estndar interno con cantidades
conocidas. *
2-. Realizar el cromatograma problema con una cantidad de estndar interno conocida. *
(hacer 3 inyecciones y promediar)
3.- Conociendo el rea del analito (Ai), l rea del estndar interno (Aref), y el factor de repuesta de
ambos (FRref =1), as como la concentracin del estndar interno realizar el siguiente clculo para
conocer la concentracin de i.
Ci = (Cref x Ai x Fri) / Aref
MATERIALES Y MTODOS.
Agua Destilada
Problema (bebida alcohlica)
Acetona R.A.
Matraces volumtricos de 10mL
Pipetas volumtricas de 5 y 1 mL
Cromatgrafo de Gases Varian 3300
Columna megaboro de polaridad media.
Integrador Varian 4290
Papel para integrador
PROCEDIMIENTO.
Preparar una curva de calibracin de Etanol con las concentraciones al 10, 20, 30, 40% de Etanol en
agua agregando a cada matraz una cantidad de acetona que ser el std interno (preparar 10mL de
cada std; agregar 1 mL de acetona para cada std).
Tomar 5mL de muestra y colocarla en un matrz volumtrico de 10mL en agregar 1 mL de acetona
y aforar con agua destilada.
Leer las muestras en el Cromatgrafo de Gases, ajustando la sensibilidad y rango.
Columna:
Programa de columna: 40C /5 min. a 150C/min, 10/min.
Temperatura del inyector: 200C
Temperatura del detector: 250C
Flujo de gas acarreador: 5mL/min.
Los datos obtenidos para la curva de calibracin graficarlos concentracin en % contra el rea.
39
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
Leer la muestra problema y el rea obtenida interpolarla en la grfica elaborada para conocer su
concentracin.
Realizar las operaciones matemticas correspondientes al estndar interno.
Reportar la cantidad de Etanol presente en la muestra.
Nota: Si la bebida escogida es edulcorada hacerla pasar previamente por una cama de carbn para
retener los azucares y colorantes que pudiese contener.
CUESTIONARIO
1.- Cul es el fundamento de la Tcnica de Cromatografa de Gases?
2.- Qu caractersticas debe tener una muestra para poder ser analizada por Cromatografa de
Gases?
3.- Si la muestra que voy a analizar es polar, Qu tipo de columna debo emplear para el anlisis?
4.- Cuales son las partes de un Cromatgrafo de Gases?
5.-Qu caractersticas deben tener los gases que se emplean para el detector FID?
6.- Qu es el tiempo de retencin relativo?
7.- Dibuja un diagrama de un Cromatgrafo de Gases y menciona cul es el trayecto de un analito
dentro del equipo?
EVALUACIN:
Valor del cuestionario 50%
Valor del reporte
50%
40
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
INTRODUCCIN
PRINCIPIOS BSICOS DE LA CROMATOGRAFA.
La cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC), fue introducida como tcnica
analtica en los aos 60. La cromatografa es un mtodo de anlisis inmediato que permite
la separacin de uno o varios componentes de una mezcla para lograr su identificacin o
cuantificacin utilizando las diferencias entre sus constantes de equilibrio, con la
participacin de la fase mvil en la que los componentes de la mezcla son solubles y la
fase estacionaria o fija que va a ejercer sobre ellos un efecto retardador. A este sistema que
permite efectuar la separacin se denomina sistema de fases.
Despus de la inyeccin, la mezcla disuelta en la fase mvil es transportada a travs de la
columna y las molculas entran en contacto con la fase estacionaria provocando los
fenmenos de intercambio que darn origen a la separacin.
El proceso de separacin
La separacin de sustancias presentes en una mezcla depende del hecho de que un
compuesto sea retenido mas tiempo en la fase estacionaria que otro. En la superficie de la
fase estacionaria, se ejercen fuerzas de atraccin que retienen o adsorben durante un corto
instante los compuestos a separar.
Despus de un cierto tiempo, dichos compuestos regresan a la fase mvil (eluyente) y son
transportados a otro sitio de la columna, volviendo a iniciarse el proceso de separacin un
repetido nmero de veces.
La retencin de un compuesto depende mucho del eluyente. As una sustancia puede ser
ms o menos retenida segn la fase mvil utilizada.
El tiempo que tarda una sustancia desde que es inyectada en l aparato hasta que sale de la
columna se denomina tiempo de retencin (tr).
La retencin de una sustancia depende tanto de la naturaleza de la fase estacionaria como
de la fase mvil con que se trabaje.
41
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
En fase gaseosa
En fase supercrtica
En fase Lquida
Columna
Adsorcin
Particin
(slice)
Intercambio
inico
Pares de
iones
Intercambio
de ligantes
placa
(CCF)
Transferencia
de carga
Afinidad
Exclusin
PROPSITO
Demostrar cuantitativamente el contenido de cafena y cido acetilsaliclico en un
analgsico mediante cromatografa lquida de alta eficiencia. Demostrar las ventajas de la
tcnica para control de calidad.
FUNDAMENTO TERICO
Observar el avance diferencial que se produce a lo largo de una columna de las distintas
fracciones de solutos inyectados.
As como apreciar que los distintos compuestos de una mezcla compleja, y demostrar que
cuanto ms avancen por la columna mejor separados quedan.
42
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
MATERIAL Y EQUIPO.
-
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
N = 16
tr
= 5.54
CUESTIONARIO
1.- Cul es el principio de la Cromatografa?
2.- Diferencia entre Cromatografa de Gases y Lquidos?
3.- Cules son los criterios para la eleccin de la fase mvil?
4.- Cuantos tipos de detectores existen?
5.- Qu funcin lleva a cabo la bomba?
7.- Qu es el tiempo de retencin?
EVALUACIN
El alumno reportar la concentracin final de las soluciones inyectadas, contrastadas a la
curva de calibracin.
FORMA DE REPORTE
El alumno entregar anexado a su reporte una copia de la informacin proporcionada por
el equipo con respecto a las soluciones que inyect.
44
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
PRACTICA 10
COMPARACION DE AZUCAR Y ASPARTAME POR
CALORIMETRIA DIFERENCIAL DE BARRIDO (DSC)
INTRODUCCIN
El procesado de los azcares amorfos no cristalinos es la base de la tecnologa
utilizada en la produccin de muchos alimentos, por ejemplo el empleo de la lactosa amorfa
en los productos lcteos en polvo. Existen procesos industriales de fabricacin de productos
con azucares en su composicin en los que se persigue la formacin de estructuras amorfas,
por ejemplo la concentracin de disoluciones a altas temperaturas y el posterior
enfriamiento rpido, la liofilizacin, el enfriamiento rpido de diluciones o la fusin de
cristales y su enfriamiento rpido. El criterio seguido para la estabilidad de los productos
amorfos es almacenarlos a temperaturas por debajo de la Tg. En este caso, el principal
inters radica pues en el estudio de transicin vtrea.
PROPOSITO
Que el estudiante aprenda a hacer un anlisis trmico de compuestos de inters.
1. Que el estudiante conozca las diferentes partes de un Calormetro Diferencial de
Barrido.
2. Que el estudiante aprenda interpretar un termograma.
3. Qu el estudiante compare los resultados obtenidos entre los 2 termogramas y los
discuta.
FUNDAMENTO TERICO.
El estudio de compuestos orgnicos, inorgnicos y matrices complejas como los
alimentos y compositos, se ha realizado en los ltimos aos por medio de la calorimetra
diferencial de barrido, ya que esta tcnica resulta de gran utilidad al ser empleada para
monitorear las condiciones de pureza, estabilidad, transicin vtrea, Tg de polmeros,
capacidad calorfica, etc..
La tcnica de la Calorimetra Diferencial de Barrido mejor conocida por sus siglas
en ingls DSC (Diferential Scanning Calorimetry), consiste en analizar los cambios de fase,
estudiando los cambios observados, por la medida del flujo calorfico dentro o fuera de la
muestra, (relativo a un material de referencia) como una funcin de la temperatura durante
el propio proceso.
Por ejemplo, el punto de fusin es un proceso endotrmico, durante el cual la
muestra toma en red cantidades de calor (determinadas por el calor de fusin molar de la
muestra), y se determina como un pico en la curva DSC. La posicin del pico en el eje de
temperatura, est determinada por el punto de fusin y la forma del pico est determinado
por la pureza de la muestra (entre otros parmetros).
En DSC la muestra y la referencia se mantienen a la misma temperatura (T= Ts -Tr
= 0) a travs de un programa controlador de la temperatura, cualquier diferencia de energa
en la fuente de la muestra y la referencia ser grabada en el programa de temperatura.
45
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
FUNCIONAMIENTO.
Antes de realizar medida alguna debe de calibrarse el calormetro para obtener en
unidades de mcal la constante de calibracin y la escala de caloras debe determinarse con
exactitud.
El rango de las temperaturas de operacin del DSC-7 Perkin Elmer es de
-68C a 500C.
TECNICAS DE MUESTREO.
Sobre un crisol limpio de Al3 se coloca la muestra, se tapa y se sella, el aspecto
cualitativo del termograma se ver afectado por la disposicin de la muestra aunque el rea
del pico no variar. Para obtener picos estrechos y finos debe asegurarse el contacto total de
la muestra con la superficie del crisol.
Existen crisoles que son capaces de soportar hasta 2 a 3 atm. dependiendo de su
forma y de la forma en que son prensados. Si la muestra se oxidara en el intervalo del
tiempo de trabajo deben usarse este tipo de crisoles mencionados y encapsulados en una
atmsfera inerte. Se ha observado tambin una clula pero su elevada masa da lugar a una
menor precisin en los datos de entalpia obtenidos.
ASPECTOS DE HIGIENE Y SEGURIDAD
Tener mucho cuidado al introducir las muestras a la celda del equipo, ya que no deben
presionarse, pues se corre el riesgo de daar los filamentos que se encuentran debajo de estas.
Asegurarse de que los pans que contengan las muestras estn bien sellados, para evitar fugas y
derrames que pueden daar el equipo.
Todo el material debe estar limpio, los crisoles o pans de aluminio se lavan con acetona y se
secan en la estufa, no se tocan con las manos.
Usar siempre el material adecuado para cada fin por ejemplo, ( usar pinzas, para transportar los
pans, no con la mano)
Los residuos que se generen de la prctica debern deponerse en el envase destinado para ello.
MATERIALES Y MTODOS.
1. Azcar
2. Aspartame
3. Gas Nitrgeno.
4. Paneles de aluminio para lquidos.
5. Esptula
6. Pinzas.
7. Calormetro Diferencial de Barrido DSC7 marca Perkin Elmer
8. Intra-cooler II marca Perkin Elmer.
9. Balanza analtica Mettler
10. Prensa para celdas de lquidos.
PROCEDIMIENTO.
46
Manual de laboratorio
Qumica Analtica Instrumental
1. Pesar 2.5 mg +/- 0.2mg de la muestra de azcar y aspartame por separado en paneles
limpios de aluminio previamente tarado
2. Sellarlo hermticamente con la prensa para lquidos
3. Colocar el panel que contiene el azcar en la celda de DSC con una referencia que
consiste en un panel vaco, exactamente igual al de la muestra.
4. Equilibrar la temperatura de la muestra e iniciar el calentamiento a partir de la
temperatura ambiente, a una velocidad de 20C/min hasta 240C.
5. Retirar el panel usado y colocar el que contiene la muestra de aspartame.
6. Analizar los resultados.
Temperatura inicial
30C
Temperatura final
240C
Velocidad de barrido 20 C/min
Peso de la muestra 2.5 mg (colocar el peso exacto)
Condiciones de encapsulamiento en paneles para lquidos
Atmsfera de trabajo Nitrgeno
7. Comparar los termogramas que se obtuvieron y discutirlos.
8. Opcional. Ingresar una muestra de un polvo para preparar agua y tratar de identificar
si lo que contiene es azcar o aspartame o bien otro edulcorante.
CUESTIONARIO
1.- Cul es el principio de la tcnica de Calorimetra Diferencial de Barrido?
47