UNIVERSIDAD NACIONAL

FEDERICO VILLARREAL
AO DE LA INTERGRACION NACIONAL

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y

MATEMATICA

ESCUELA DE: QUIMICA

CURSO: ANALISIS INSTRUMENTAL I

ALUMNOS:
Garcia Argote Williams Mesias
Munayco Flores Jess A.

DOCENTE:
Alexseyer

TEMA: ESPECTROFOTOMETRIA METODO

DE CURVA ESTANDAR
AO:

2016

I.- OBJETIVOS

Determinacin espectrofotomtrica
empleando el mtodo curva estndar.

de

hierro

con

1,10-fenantrolina,

II.- INTRODUCCION
Para realizar el Mtodo de la Curva de Calibracin se procede a realizar una serie de
soluciones de concentracin conocida de analito, los cuales se introducen en el
instrumento y se registra la seal instrumental. Normalmente esta seal se corrige por
medio de la seal de un Blanco Analtico en el que se establece el cero de absorbancia,
este blanco contiene todos los componentes de la matriz del anlisis (Ejemplo: agua
destilada, agua/etanol) a excepcin del analito que se desea medir. El blanco es preparado
en el instante en que se preparan las dems muestras a determinarse ya debe imitar las
condiciones de anlisis a las que se cometen stas ltimas.
La absorcin de la luz por una solucin diluida, viene dada por la ley de Beer, que
relaciona la concentracin de la fase absorbente con la radiacin. La relacin entre la
absorcin de la luz y el camino recorrido por sta; o sea, el espesor de la cubeta, viene
dado por las leyes de Lambert. La fusin de estas leyes empricas nos da la
absorbancia total por un cuerpo, cuando interacciona con un haz monocromado.
Mediante un mtodo que obedezca la ley de BeerLambert se puede realizar un anlisis
cualitativo de cualquier especie en solucin, conociendo por supuesto la longitud de onda
de mxima absorbancia del analito, esto por medio de la determinacin de la
absorbancia en funcin de soluciones de concentracin conocida a travs de la
elaboracin de una curva de calibracin que las relacione de manera proporcional y
linealmente, para lo que se requiere de un mtodo estadstico. El mtodo estadstico
clsico y que se adecua a las caractersticas para la realizacin de dicha actividad es el de
los Mnimos Cuadrados en los que se grafica la ordenada (la variable independiente) con
los datos de la respuesta del aparato y la abscisa (variable dependiente) en donde
se coloca la concentracin o el tanto por ciento del analito, lo ms habitual (y
deseable) es que la grfica se aproxime a una lnea recta. La ecuacin cannica de la recta
se expresa matemticamente como:
Y = mx + by

en el mtodo de mnimos cuadrados estos valores se obtienen realizando las

siguientes operaciones manuales:

La viabilidad del mtodo de curva de calibracin queda establecida por el valor del
cuadrado del Coeficiente de Correlacin Lineal (R2), que debe ser superior a 0.998, para
realizar un estudio cualitativo adecuado.
En esta prctica se utilizar este mtodo para determinar espectrofotomtricamente el
hierro con 1,10-fenantrolina.

III. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

3.1

MATERIALES Y REACTIVOS

3.1.1. MATERIALES

01 Espectrofotmetro Spectronic 20D con celdas de absorcin

01 gradilla para tubos de prueba
01 desecador
04 lunas de reloj
03 vaso de 250 mL
08 fiola de 25 mL
01 fiola de 50, 100 y 250 mL
04 vaso de 100 mL
01 pipeta volumtrica de 1, 2, 3, 5 y 10 mL
01 pipeta graduada de 5 y 10 mL
01 probeta de 50 mL

3.1.2. REACTIVOS
1. Solucin amortiguadora de pH 3,70,1.- Medir 6 mL de cido actico glacial
(99,5%), agregarlo a una fiola de 100 mL y diluirlo con agua destilada hasta unos 20
mL aproximadamente. Pesar 0,8 g de acetato de sodio anhdro y agregar sobre
la solucin de cido actico, completando el volumen a 100 mL con agua
destilada.
2. Solucin de 1,10 fenantrolina.- Pesar 0,0625 g de cristales de 1,10fenantrolina en un vaso de 50 mL, disolverlo con 20 mL de agua destilada y
2 gotas de cido clorhdrico concentrado. Transferir la solucin a una fiola de

3.

4.

5.
6.
7.
8.

25 mL y completar el volumen con agua destilada. Esta solucin debe ser incolora y
para conservarla por algunos das es necesario guardarla en una refrigeradora.
Solucin estndar de hierro.- Se prepara disolviendo 0,176 g de sulfato
amnico ferroso, grado reactivo, en 100 mL de agua destilada, al que se le agrega
15 gotas de cido sulfrico concentrado y se diluye en una fiola de 250 mL con
agua destilada. Esta solucin contiene 100 ug de hierro(II)/mL.
Solucin diluida de hierro.- Medir 10 mL de la solucin estndar de hierro y
colocarla en una fiola de 50 mL. Completar el volumen con agua destilada. Esta
solucin contiene 20 ug de Fe(II)/mL.
Solucin de cloruro de Hidroxilamina al 10%.- Preparar 25 mL en agua destilada.
Solucin HCl 1:2 (V/V).- Diluir 5 mL del cido concentrado hasta 15 mL con agua
destilada.
Solucin NH3 1:2 (V/V).- Diluir 5 mL de la base concentrada hasta 15 mL con agua
destilada.
Solucin p-nitrofenol.- Pesar 0,10 g de p-nitrofenol y disolverlo a 25 mL en una
fiola con agua.

3.2 PROCEDIMIENTO
Preparacin de la curva de calibracin.
1. Tomar con la pipeta volumtrica apropiada: 1, 2, 3 y 5 mL de la solucin
diluida de hierro y colocarlos en sus respectivas fiolas de 25 mL marcadas con los
nmeros: 1, 2, 3 y 4. Llevar el volumen, aproximadamente a 5 mL con agua
destilada. En otra fiola de 25 mL, marcada
como
blanco,
colocar
aproximadamente 5 mL de agua destilada. Aadir a cada una de las cinco fiolas
2,0 mL de solucin de Hidroxilamina al 10%.
2. Agregar a cada fiola 3 gotas de indicador p-nitrofenol y algunas gotas de amoniaco
1:2 hasta que aparezca un color amarillo y luego aadir cuidadosamente solucin
de HCl 1:2, justo hasta la desaparicin del color amarillo.
3. Adicionar a cada fiola 10 mL de solucin amortiguadora y 1 mL de solucin 1,10fenantrolina. Completar el volumen a 25 mL con agua destilada y dejar en reposo
durante 10 minutos.

Figura N 1

4. Leer las absorbancias contra el blanco de reactivos a 508 nm.

a) Instalacin y encendido del espectrofotmetro de absorcin:
Breve descripcin del equipo: durante la presente prctica se trabaj con un
espectrofotmetro de absorcin (UV/Visible), el cual presenta compartimientos para 4
celdas (las cuales contienen el analito), un estabilizador de voltaje, entre otras
caractersticas. Dicho equipo nos permite determinar la absorbancia y la concentracin
del analito a distintas longitudes de onda, entre otras funciones.
Al momento de encender el equipo se debe tomar las siguientes consideraciones:

Enchufar el equipo y luego prender el estabilizador,

esperar unos minutos
Encender el espectrofotmetro y esperar a q el
sistema elctrico y de lmparas se caliente.

Trabajo con el espectrofotmetro: determinacin de la

Absorbancia.
Al momento de trabajar con el espectrofotmetro,
se debe tener precaucin y precisin, debido a que
el deterioro de algunas de las partes del equipo
conlleva al error en la lectura de las muestras, y en
el peor de los casos inutilizacin del mismo.
Figura N 2

5. Construir la grfica absorbancia versus concentracin (curva de calibracin)

Fiola de 25ml
Absorbancia (Y)
Concentracin
en ppm (X)

0.4

Absorbancia

0.8
1.6
0.35
2.4
0.3 4

1mL
0.071
0.8

2mL
0.135
1.6

3mL
0.213
2.4

5mL
0.357
4

0.071
0.135
0.213
0.357
y = 0.0901x - 0.0043
R = 0.9992

0.25
0.2

Series1

0.15

Lineal (Series1)

0.1

0.05
0
0

Concentracin de Fe (mg/L)

Grfica N 1

6. Determinar la ecuacin de recta (curva de calibracin) por el mtodo de mnimos

cuadrados.
Clculos y Resultados:
1) Para graficar la curva estndar aplicaremos el ajuste por mnimos cuadrados
con el objetivo de encontrar una ecuacin emprica ( = + ) que se ajuste a
los datos obtenidos en el experimento.
Tendremos como variable independiente (Y) a la absorbancia y a la variable
dependiente (X) a la concentracin.

De acuerdo a la ecuacin calcularemos los parmetros m y b:

XY

0.8

0.071

0.0568

0.64

0.005041

1.6

0.135

0.216

2.56

0.018225

2.4

0.213

0.5112

5.76

0.045369

0.357

1.428

16

0.357

8.8

0.776

2.212

24.96

0.425635

Determinamos las siguientes cantidades:

Clculo el intercepto b:
2
24.96(0.776) 8.8(2.212)
=
=
= 0.0043143
4(24.96) 8.82
2 ( )2

Clculo de la pendiente m:

4(2.212) 8.8(0.776)
=
= 0.09014
4(24.96) 8.82
2 ( )2

Parmetro de error lineal:

( )2
0.1013941684
=
= 0.22516
2
2

Clculo el error de la pendiente m:

()2
4(0.22516)2

=
= 0.095147466
2 ( )2
4(24.96) 8.82

Clculo del error del intercepto b:

2
24.96

= (
) = 0.095147466 (
) = 0.2376782939

4
Entonces la mejor lnea recta, tendr por ecuacin:

= (0.0043143 0.2376782939) + (0.09014 0.095147466)

Por cuestin del anlisis de la grfica elegimos esta ecuacin:

= . + .
Calculando el coeficiente de correlacin:

[ 2 1 ( )2 ] [ 2 1 ( )2 ]

2.212

8.8(0.776)
4

[24.96 1 8.82 ] [0.425635 1 0.7762 ]

4
4

= .

Anlisis de muestra problema (por duplicado)

1. Colocar una tableta de complemento vitamnico que
contiene hierro en un erlenmeyer de 150 mL y adicionar 25
mL de HCl 6M.
2. Llevar a ebullicin por 15 minutos y filtrar. Enfriar y
transferir cuantitativamente a una fiola de 100 mL hasta
la marca con agua destilada.

Una tableta de 300mg contiene 60mg de Fe, entonces:

60
= 240
0.25

Luego :

5mL

5mL

240ppm

12ppm

240ppm(5mL)= C.(100mL)
C=12ppm

2,4ppm

12ppm(5mL)= C.(25mL)
C=2,4ppm

3. Tomar la alcuota correspondiente de la solucin muestra, agregar 2 mL de

solucin clorhidrato de hidroxilamina al 10%.
4. Preparar un blanco de reactivos.
5. Adicionar a la muestra y al blanco 3 gotas de indicador p-nitrofenol y algunas
gotas de amoniaco 1:2 hasta la aparicin de un color amarillo, luego agregar
gota a gota HCl 1:2 hasta la desaparicin del color amarillo. Adicionar finalmente
10 mL de solucin amortiguadora, agitar la muestra y agregarle 1 mL de solucin
1,10-fenantrolina. Completar el volumen a 25 mL con agua destilada y dejar
en reposo durante 10 minutos.

Figura N 3

6. Leer la transmitancia de la muestra contra el blanco de reactivos preparado a

508 nm.

Figura N 4

Figura N 5

7. Encontrar la concentracin de hierro en la muestra empleando la curva de

calibracin.

0.4

Absorbancia

0.8
1.6
0.35
2.4
0.3 4

0.071
0.135
0.213
0.357
y = 0.0901x - 0.0043
R = 0.9992

0.25
0.2

Series1

0.15

Lineal (Series1)

0.1

0.05
0
0

Concentracin de Fe (mg/L)

Grfica N 2

8. Encontrar la concentracin de hierro en la muestra empleando la ecuacin de

recta.

= . + .
Absorbancia = Y = 0.146
0.146 = 0.0043143 + 0.09014
0.146 + 0.0043143
=
0.09014
= .
9. Determinar el porcentaje de error de la determinacin

% = 100% 100 = 100% 0.40671(100) = . %

DISCUSIONES
En la determinacin de hierro, el complejo rojo-naranja que se forma es un quelato de
tres molculas de fenantrolina por tomo de Fe (ferrona). La solucin coloreada obedece
a la ley de Beer, su intensidad es independiente del pH entre 3 y 9, aunque un pH cido
(2,9 - 3,4) asegura un rpido desarrollo del color por esto es importante la adicin de HCl.
La adicin de un exceso de hidroxilamina elimina los errores causados por exceso de
reactivos oxidantes.
El procedimiento del mtodo de la fenantrolina tiene cierta limitacin en su aplicabilidad,
ha de evitarse un almacenamiento prolongado o la exposicin a la luz.

CONCLUSIONES
Se logr determinar al hierro en la pastilla de sulfato ferroso con 1,10-fenantrolina
mediante el mtodo de curva estndar en las cuales se trabaj con concentracin (ppm)
vs absorbancia.
La preparacin del buffer nos ayuda a controlar el pH de la solucin, es decir, el punto
crtico de hierro, en la cual se requiere medir las diferentes especies en las que se puede
encontrar la forma lbil del Fe (II), al igual que el Fe (III), cuya interconversin depende
fuertemente del pH, contenido de oxgeno disuelto.

BIBLIOGRAFA
Skoog D.A, Holler J.F, Nieman T.A.2001. Principios de anlisis instrumental, quinta edicin,
Mc Graw Hill/ Interamericana.
Skoog D.A, West D.M. 2001. Qumica analtica, sptima edicin, Mc Graw Hill. Mxico.
BOUMANS, H., Van Gaalen, M.C.M., Grivell, L.A. y Berden, A. 1997. Differential Inhibition
of the Yeast bc1 Complex by Phenanthrolines and Ferroin. The Journal of Biological
Chemistry. 272, 2, 19753-19760.(PDF).