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5, 807-812, 2004
Fbio R. P. Rocha*
Instituto de Qumica, Universidade de So Paulo, CP 26077, 05513-970 So Paulo - SP
Leonardo S. G. Teixeira
Departamento de Engenharia e Arquitetura, Universidade Salvador, Av. Cardeal da Silva, 132, 40220-141 Salvador - BA
Recebido em 6/5/03;aceito em 19/2/04; publicado na web em 17/6/04
Divulgao
INTRODUO
Espectrofotometria na regio UV-VIS do espectro eletromagntico uma das tcnicas analticas mais empregadas, em funo de
robustez, custo relativamente baixo e grande nmero de aplicaes
desenvolvidas1. Consultando-se o banco de dados do Analytical
Abstracts, verifica-se ca. 40000 ocorrncias relacionadas
espectrofotometria2. Os procedimentos envolvem medidas diretas de
espcies que absorvem radiao, medidas aps derivao qumica e
acoplamento a diversas tcnicas ou processos, como cromatografia,
eletroforese e anlises em fluxo. Alm disso, constitui-se em uma importante ferramenta para determinao de parmetros fisico-qumicos, tais como constantes de equilbrio e de velocidade de reaes.
Apesar da extensa utilizao, vrias inovaes recentes relacionadas s medidas espectrofotomtricas ainda so pouco conhecidas. Com
respeito ao aspecto instrumental, notvel a evoluo desde os procedimentos baseados em comparaes visuais e dos fotmetros empregando filtros para a seleo de comprimentos de onda at os equipamentos
mais recentes, que empregam arranjos de fotodetectores. Esses permitem a aquisio de espectros de absoro em intervalos de tempo da
ordem de milsimos de segundos e so disponveis, inclusive, em verses miniaturizadas acopladas a computadores do tipo palm-top3.
A espectrofotometria fundamentada na lei de Lambert-Beer,
que a base matemtica para medidas de absoro de radiao por
amostras no estado slido, lquido ou gasoso, nas regies ultravioleta,
visvel e infravermelho do espectro eletromagntico. Para medidas
de absoro de radiao em determinado comprimento de onda, temse: A= log(Io/I) = bc, onde A a absorvncia, Io a intensidade da
radiao monocromtica que incide na amostra e I a intensidade da
radiao que emerge da amostra. A absortividade molar () uma
grandeza caracterstica da espcie absorvente, cuja magnitude depende do comprimento de onda da radiao incidente. O termo c a
concentrao da espcie absorvente e b, a distncia percorrida pelo
feixe atravs da amostra4.
Muitas das inovaes referentes espectrofotometria consistem
em estratgias para aumento de sensibilidade, visando ampliao da
*e-mail: frprocha@iq.usp.br
faixa de aplicao da tcnica e permitindo, em alguns casos, que medidas em concentraes da ordem de nmol L-1 sejam efetuadas. Considerando-se a lei de Lambert-Beer, possvel reunir as alternativas para
aumento de sensibilidade em trs grupos. O primeiro refere-se ao
emprego de estratgias para a formao de produtos com maiores
absortividades molares, incluindo a sntese de novos reagentes e a formao de agregados micelares5. Em um segundo grupo, encontram-se
estratgias para aumento do caminho ptico, permitindo que medidas
sejam efetuadas com celas de at 5 m de caminho ptico6. O terceiro
grupo refere-se a procedimentos que exploram a concentrao da espcie a ser detectada previa ou simultaneamente deteco7. Algumas
das alternativas para aumento de sensibilidade em medidas
espectrofotomtricas so discutidas neste artigo.
PRODUTOS COM MAIOR ABSORTIVIDADE MOLAR
A constante de proporcionalidade que relaciona a absorvncia com
o caminho ptico e a concentrao das espcies absorventes, denominada absortividade molar (), empiricamente assume valores mximos da ordem de 105 L mol-1 cm-1, para absoro de radiao na regio
UV-VIS. A magnitude de depende da seo transversal de captura
(S) da espcie e da probabilidade de ocorrncia da transio eletrnica
(P), relacionada absoro de radiao, da maneira descrita pela Equao 18. Considerando-se esta equao, pode-se planejar modificaes
estruturais nos reagentes, de modo a maximizar a seo transversal de
captura e/ou a probabilidade de ocorrncia de transies eletrnicas,
visando o aumento da absortividade molar da espcie.
= 8,7x1019 PxS
(1)
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Rocha e Teixeira
(I)
AB + C ' ABC
(II)
Quim. Nova
Tabela 1. Efeito de alteraes estruturais em ligantes sobre as absortividades molares de complexos de ferro e cobre5
Ligante (L)
MAX/nm
CuL2+
/(L mol-1 cm-1)
MAX/nm
FeL32+
/(L mol-1 cm-1)
435
4500
522
8650
435
7000
510
11100
454
7950
457
12140
533
22350
434
480000
395
140000
2,2-bipiridina
1,10-fenantrolina
neocupronaa
batofenantrolina
sulfonato de ,,,-tetrafenilporfirinab
a. solvente: lcool isoamlico; b. complexos com estequiometria 1:1
(2)
(3)
(4)
Os mtodos de derivao espectral envolvem diferenciao eletrnica ou por software e so disponveis em muitos espectrofotmetros
UV-VIS27. Em geral, a derivao espectral visa determinaes simultneas, bem como aumento de seletividade. Entretanto, freqentemente
observa-se aumento de sensibilidade e melhoria do limite de
deteco28,29. Um exemplo a determinao de nquel com azul de
hidroxinaftol (HNB)30. Nquel(II) reage com HNB em pH 5,7 formando um complexo vermelho estvel, com mximo de absoro em 563
nm. O limite de deteco foi estimado em 23 g L-1, quando se utilizou a espectrofotometria ordinria e 6 g L-1 aplicando a primeira
derivada. Aumento de sensibilidade foi tambm observado na determinao de nquel usando Br-PADAP como reagente cromognico31.
Limites de deteco de 1,8 g L-1 e 0,2 g L-1 foram estimados utilizando espectrofotometria ordinria e derivativa, respectivamente.
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O aumento de sensibilidade observado na espectrometria derivativa baseado na observao de que a amplitude da derivada n da absorvncia em relao ao comprimento de onda (Dn= dnA/d) inversamente proporcional largura de banda do espectro ordinrio (W)28,32:
Dn 1/Wn
(5)
(6)
O caminho ptico de medida pode ser aumentado empregandose celas que se comportem como guias de onda, de maneira similar
ao que ocorre com os cabos de fibra ptica. Para tanto, o material do
qual a cela construda deve apresentar ndice de refrao inferior
ao do lquido no qual a absorvncia ser medida35. Entretanto, os
Reagente
Surfactante
Ni
Fenilfluorona
CPa
b
MAX / nm
/ (L mol-1 cm-1)
Ref
540
100000
Al
Cromoazurol S
HCP
640
125000
23
Co
5-Br-PADAP
Triton X-100
586
92400
24
Fe
Cromoazurol S
CTAc
645
135000
25
Eriocromocianina R
CTAc
575
79000
26
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Rocha e Teixeira
Quim. Nova
Figura 1. Arranjo experimental empregado para medidas espectrofotomtricas com longo caminho ptico: a- cabos de fibra ptica; b- adaptadores na forma de T com volume interno reduzido empregados para
alinhamento do feixe de radiao e para entrada e sada de solues;
c- guia de onda (tubo de Teflon AF-2400); d- vista ampliada de parte do
adaptador para entrada de soluo: o cabo de fibra ptica (1) inserido no
interior do guia de onda (2) para facilitar o alinhamento do feixe de
radiao. A soluo introduzida pelo espao entre o guia de onda e o
cabo de fibra ptica em seu interior
Tabela 3. Procedimentos com alta sensibilidade empregando espectrofotometria com longo caminho ptico
Espcie
Caminho ptico
(cm)
Faixa de resposta
(nmol L-1)
Sensibilidade
(L mol-1)
Limite de deteco
(nmol L-1)
Ref
Cr(VI)
Mo(VI)
Fe(II)
Fe(II)
NO2NO3H 2S
Cu(II)
Fenis
Cr(VI)
Al(III)
500
500
447
200
450
450
160
440
100
50
50
1-30
2-30
0,5-10
1-50
< 30
< 30
1-160
100-1000
< 900
< 30000
22,3 0,1
27,0 0,1
10,6 0,2
4,11
20,4 0,3
18,4 0,8
2,40 0,08
6,13 0,02
0,2
0,6
0,2
0,1
0,5
1,5
5
0,4
10
100
180
6
6
39
40
41
41
42
43
44
45
45
811
Tabela 4. Exemplos de procedimentos com alta sensibilidade explorando espectrofotometria em fase slida
Espcie
Reagente/suporte
Zn(II)
S2Cu(II)
Fe(III)
V(IV)
Cr(VI)
PO43sulfatiazol
V(IV)
Vamostra (mL)
Ref
10
1,7a
1
10
0,8b
0,1c
0,2
20
3
0,6
0,6
0,5
0,9
2
5
4,4
4,4
250
250
1000
56
57
63
64
68
69
70
71
72
a. Limite de deteco 30 vezes inferior ao obtido em procedimento em soluo empregando mesmo volume de amostra; b. sensibilidade 280
vezes superior obtida por medidas em soluo e c. sensibilidade 160 vezes superior obtida por medidas em soluo.
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Rocha e Teixeira
Alm da elevada sensibilidade, possvel efetuar medidas com pequenos volumes de amostra e a tcnica apresenta faixa dinmica de
resposta consideravelmente maior que a espectrofotometria convencional1,74. A espectrofotometria fotoacstica (ou optoacstica) explora a expanso trmica da amostra irradiada e pode ser aplicada a
gases, slidos e lquidos. Descries detalhadas dos conceitos,
instrumentao e aplicaes destas tcnicas podem ser encontradas
em artigos de reviso73-75.
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28.
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CONCLUSES E PERSPECTIVAS
As estratgias descritas neste artigo permitem aumentar consideravelmente a sensibilidade de procedimentos espectrofotomtricos
e, conseqentemente, ampliar a aplicao da tcnica a anlise de
traos. Desta forma, os procedimentos espectrofotomtricos podem
ser revisitados e caractersticas favorveis como robustez, baixo custo e simplicidade, podem torn-los competitivos com outras
metodologias dedicadas determinao de espcies qumicas em
baixas concentraes. Algumas das estratgias descritas, como o
aumento do caminho ptico e as medidas diretas em fase slida, so
de aplicao geral e a disseminao de seu uso depende, principalmente, da disponibilidade comercial de instrumentao adequada.
Celas construdas a partir de guias de onda so comercialmente disponveis. Estas celas apresentam caminho ptico de at 500 cm e
volumes relativamente reduzidos (ca. 2,5 L/cm), sendo adequadas
para medidas espectrofotomtricas inclusive em sistemas de anlises em fluxo. As medidas em fase slida, por outro lado, tm sido
implementadas empregando espectrofotmetros dedicados a medidas em soluo, o que resulta em limitaes da quantidade de suporte slido que pode ser empregada. Apesar dessas limitaes poderem ser superadas em laboratrios de pesquisa, por exemplo pela
construo de celas especiais ou pelo emprego de fontes de radiao
com maior potncia, a disponibilidade de equipamentos dedicados
certamente importante para ampliar a sua utilizao.
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem ao CNPq, Finep e FAPESP pelas bolsas e
apoio financeiro.
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