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ESPECTROFOTOMETRIA EM FASE SLIDA

Resumo
A espectrofotometria em fase slida (EFS) consiste na medida de absoro de radiao em
um suporte slido no qual a espcie de interesse foi retida previa ou simultaneamente,
permitindo aumento de sensibilidade e melhoria dos limites de deteco e da seletividade
das medidas. Neste artigo, so destacadas as principais caractersticas da EFS, exemplificadas por aplicaes em batelada e em sistemas de anlise em fluxo. So tambm apresentados e discutidos importantes critrios para a implementao desta tcnica, incluindo
a geometria da cela de medida e a seleo do suporte slido e do eluente.
Palavras-chave: Espectrofotometria, espectrofotometria em fase slida, anlise em fluxo

Leonardo S. G. Teixeira1
Fbio R. P. Rocha2,*
Universidade Salvador
Departamento de Engenharia
e Arquitetura
1

Universidade de So Paulo
Instituto de Qumica
2

Autor para correspondncia

Caixa Postal 26077
05513-970. So Paulo. SP
E-mail: frprocha@iq.usp.br
Fax: (11) 3091-3837 r.243
2*

Summary
The solid-phase spectrophotometry (SPS) involves the measurement of radiation absorption by a solid support in which the analyte was previous or simultaneously retained,
allowing increasing sensitivity and improving the detection limits and selectivity. In this
article, the main characteristics of SPS are presented and exemplified by applications in
batch and flow systems. Important criteria to proper implementation of this technique,
including the cell geometry and selection of the solid support and the eluent are presented and discussed.
Keywords: Spectrophotometry, solid-phase spectrophotometry, flow analysis

Introduo
Procedimentos baseados em medidas espectrofotomtricas nas regies ultravioleta e visvel do espectro eletromagntico (280-800nm) so usuais em Qumica analtica.
Muitos deles consistem em mtodos de referncia em laboratrios destinados ao controle de qualidade ou anlises clnicas,
ambientais, agronmicas, etc. Os procedimentos envolvem
medidas diretas de espcies que absorvem radiao, medidas
aps derivao qumica e acoplamento a diversas tcnicas ou
processos, como cromatografia, eletroforese capilar e anlise
em fluxo. Em todos os casos, predominam as medidas em soluo, sendo a quantidade de radiao absorvida relacionada
com a concentrao da espcie de interesse atravs da lei de
Lambert-Beer. Entretanto, medidas de absoro podem ser
efetuadas diretamente em materiais slidos, apresentando
uma srie de vantagens em relao s medidas em soluo.
Na espectrofotometria em fase slida (EFS), uma matriz
slida que pode conter um reagente imobilizado utilizada
para a reteno da espcie de interesse, sendo a absorvncia
medida diretamente no suporte slido (1). A tcnica permi-

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te a concentrao do analito, explorando a acumulao da

espcie de interesse em um pequeno volume da fase slida,
resultando em aumento de sensibilidade e melhoria dos limites de deteco. A seletividade das medidas geralmente
melhor que a observada em medidas em soluo.
A primeira proposta de medidas espectrofotomtricas
em um suporte slido foi feita por Yoshimura e colaboradores
em 1976 (2) empregando difenilcarbazida, 1,10-fenantrolina,
tiocianato de amnio ou Zincon imobilizados em resina de
troca inica, para determinao de cromo, ferro, cobalto e
cobre, respectivamente. Com essa estratgia, a sensibilidade
foi aumentada em 10 vezes em relao aos procedimentos
anlogos em soluo.
A espectrofotometria em fase slida pode ser implementada em procedimentos em batelada ou em fluxo. Os
procedimentos em batelada envolvem o contato direto do
analito com a fase slida em um recipiente sob agitao por
um certo perodo de tempo para posterior transferncia para
uma cubeta. As medidas em geral so efetuadas em mais de
Revista Analytica Junho/Julho 2003 N 05

um comprimento de onda, visando compensar diferenas no

empacotamento da fase slida. Esses inconvenientes podem
ser evitados empregando sistemas de anlise em fluxo, nos
quais a deteco feita simultaneamente s etapas de reteno e concentrao do analito, dispensando medidas em
diferentes comprimentos de onda e permitindo o emprego
de um espectrofotmetro monocanal.
Alguns requisitos so desejveis para aplicao de um sistema
para medidas por espectrofotometria em fase slida (3,4):
a) Reversibilidade: aps reteno/medida, a regenerao da fase slida pela eluio do analito deve ser
eficaz. Essa condio torna-se ainda mais importante
em sistemas em fluxo. Nas metodologias que no
atendem esse requisito, necessria a troca da fase
slida a cada anlise, o que pode inviabilizar a aplicao prtica do procedimento. Quando no possvel
a regenerao da fase slida, uma alternativa trabalhar com suportes com alta capacidade de reteno e
se fazer a troca aps uma srie de medidas.
b) Estabilidade da fase slida frente ao meio de trabalho: a fase slida no deve sofrer alteraes significativas
quando submetida ao contato com a amostra ou eluente. Esse requisito torna-se ainda mais relevante quando
se trata de sistema que utiliza um reagente imobilizado,
devido possibilidade de lixiviao do reagente.
c) Cintica rpida: os sistemas devem preferencialmente possibilitar a rpida reteno do analito na fase slida. Em sistemas em batelada, a reteno rpida permite reduzir o tempo de contato entre a amostra e o
suporte slido. Em sistemas em fluxo, que usualmente trabalham com tempos de residncia curtos, uma
reteno rpida permite alcanar maiores fatores de
extrao e conseqentemente maior sensibilidade,
sem comprometer a freqncia de amostragem. A rpida reteno do analito tambm pode ser explorada
para aumento da seletividade.
d) Compatibilidade entre o suporte slido e o sistema
de medida: materiais que promovem alta atenuao
do feixe de radiao dificilmente podero ser utilizados
para medidas de absoro, embora possam ser adequados para medidas por reflectncia.

etapa de eluio (e inerentemente de diluio) previamente

medida. Outras caractersticas importantes da EFS so descritas e exemplificadas a seguir.
Aumento de sensibilidade
O aumento de sensibilidade quando se usa a EFS depende
do caminho tico ocupado pela fase slida e do volume de
amostra utilizado na determinao, tendo sido relatado aumento de sensibilidade de at 280 vezes, em relao ao procedimento anlogo em soluo (5). Em um estudo realizado por
Frenzel e Krekler (6), foram comparados trs procedimentos
para a determinao espectrofotomtrica de fenis empregando a reao com 4-aminoantipirina: (i) pr-concentrao
por extrao do produto com CCl4; (ii) pr-concentrao do
produto em C18, com posterior eluio com metanol e (iii) medida direta do produto retido em C18. Os limites de deteco
foram estimados em 8g l-1, 11g l-1 e 0,4g l-1, respectivamente, refletindo a maior sensibilidade obtida por EFS. O aumento
de sensibilidade em relao s medidas em soluo pode ser
visualizado comparando-se os sinais transientes obtidos em
sistemas de anlise em fluxo mostrados na Figura 1. Limites de
deteco alcanados em alguns procedimentos em batelada e
fluxo so apresentados nas Tabelas 1 e 2.

0,4

0,2

0
0.0

50

100

t/s

Figura 1. Sinais transientes obtidos em sistemas de anlise em

fluxo para a determinao de Co(II) com TAN: (a) medida em
soluo, com caminho ptico de 1mm; (B) medida em soluo,
com caminho ptico de 10mm; (c) medida por EFS, com
caminho ptico de 1mm.

Caractersticas da EFS
A EFS permite integrar as etapas de reao, reteno e
deteco do analito, requerendo, em geral, pequenas quantidades de amostras e reagentes e podendo ser implementada
com espectrofotmetros simples. Como a medida de absorvncia feita diretamente na fase slida, maior sensibilidade
pode ser alcanada quando comparada com pr-concentraes convencionais em fase slida, nas quais necessria uma

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Melhoria de seletividade
Procedimentos baseados em EFS so usualmente mais
seletivos que os procedimentos anlogos em soluo. A reatividade de um reagente cromognico geralmente diminui com
a imobilizao em um suporte slido, pois alguns dos seus
stios reativos esto ocupados em interaes com a fase slida,
diminuindo a atividade qumica do reagente e aumentando a
seletividade do mesmo (7). Por outro lado, devem ser consi-

37

ARTIGO

Tabela 1. Algumas aplicaes da EFS em procedimentos em batelada

Limite de
deteco (g L-1)

Referncia

preparaes
farmacuticas

-ciclodextrina

cabelo

20

12

Cromo Azurol S

Sephadex QAE A-25

guas

0,2

16

Molibdato de
amnio/cido ascrbico

Poliuretano

guas

20

22

Fe(III)/ferrozina

Sephadex QAE-A25

sucos de frutas,
frmacos e urina

0,91

52

Espcie

Reagente

Suporte

Amostra

Thiamina

Reteno direta

Sephadex CMC-25

Nquel

PAN

Be(II)
Fosfato
cido
ascrbico

Tabela 2. Algumas aplicaes da EFS em procedimentos em fluxo

Limite de
deteco (g L-1)

Eluente

Referncia

preparaes
farmacuticas

10c

HNO3

10

resina catinica
(AG 50W-X2)

guas

0,03

HNO3

15

Violeta de Pirocatecol

Sephadex QAE A-25)

Sucos de frutas

0,4

HCl

17

Mo(VI)

Tiron

Sephadex QAE-A25

guas e rochas

15 ng

NaNO3

18

Fe(III)

NH4SCN

resina aninica
(Dowex 1-X2)

guas/vinho

NaF/NaOH/Na2EDTA

21

sulfeto

N,N-dimetil-pfenilenediamina/Fe3+

slica funcionalizada
C18

guas

1,7

CH3OH/HCl

54

Espcie

Reagente

Suporte

Amostra

Zn(II)

1-(2-tiazolylazo)
-2-naftol

slica funcionalizada
C18

Cr(VI)

1,5-difenilcarbazida

Sn(IV)

derados os fatores cinticos, especialmente em procedimentos

em fluxo, nos quais o tempo limitado de contato entre a amostra e a fase slida permite apenas a reteno das espcies que
interagem mais rapidamente com a fase slida. Um exemplo
da explorao de fatores cinticos a determinao de nquel
e zinco utilizando 1-(2-tiazolilazo)-2-naftol (TAN) imobilizado
em C18 (8). Neste trabalho, as diferentes razes de soro dos
dois elementos no suporte slido foram exploradas para a determinao seqencial em ligas de cobre.
Um terceiro fator a ser considerado a possibilidade
de reteno direta e seletiva da espcie a ser analisada. Por
exemplo, a vitamina B1 (tiamina) pode ser determinada seletivamente em produtos farmacuticos por EFS na regio do UV
aps a reteno da mesma em Sephadex (9), uma vez que as
vitaminas B2, B6 e B12 no so retidas na resina. Na determinao por espectrofotometria em soluo, as outras vitaminas
interferem, pois tambm absorvem radiao na regio do UV.

38

Minimizao do consumo de reagentes

Uma vantagem adicional observada quando se utiliza a
EFS a diminuio do consumo de reagentes, especialmente
quando esses so irreversivelmente imobilizados na fase slida, permitindo a reteno reversvel da espcie de interesse.
Conseqentemente, o custo das anlises e a gerao de resduos so consideravelmente reduzidos. Comparando-se a
determinao de zinco com TAN por espectrofotometria convencional com o procedimento anlogo empregando EFS, no
qual TAN foi imobilizado em C18, verifica-se uma diminuio
de mais de 1000 vezes no consumo do reagente por determinao (10). Neste caso, empregando-se solues cidas como
eluente, possvel remover o on metlico da fase slida, sem
afetar a interao desta com o reagente, permitindo que mais
de 200 medidas sejam feitas sem a necessidade de re-imobilizar o reagente. Na Figura 2, mostrado um esquema da
imobilizao de reagentes orgnicos em C18.
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SO 3

NH2

Base de slica

Grupo funcional C18

Foras de Van der Waals

Figura 2. Esquema de interao de reagentes com uma fase

slida no polar (slica funcionalizada C18).

Desenvolvimento de procedimentos em EFS

Celas de medida
As medidas por espectrofotometria em fase slida podem
ser realizadas posicionando o suporte slido contendo o analito
diretamente no caminho tico de um espectrofotmetro. Um
mtodo bastante simples consiste no enriquecimento por filtrao, empregado em EFS para pr-concentrao de traos de
espcies qumicas. Quando a espcie de interesse quantitativa e
seletivamente retida em uma membrana filtrante, sob uma forma
que absorva radiao adequadamente, possvel determinar a
espcie diretamente na membrana por EFS. Como exemplo,
pode ser citada a determinao de nquel em vinhos usando o
reagente quinoxalina-2,3-ditiol imobilizado em resina de troca
inica previamente coletada em uma membrana circular (11).
Em geral, as celas utilizadas na EFS possuem caminhos ticos
pequenos, uma vez que os suportes utilizados provocam considervel atenuao do feixe de radiao. Em procedimentos em
batelada, as celas mais usadas so as de quartzo com 1mm de
caminho tico. Em casos raros, utiliza-se celas com caminhos
ticos maiores, como por exemplo na determinao de nquel
atravs da reteno no polmero -ciclodextrina contendo 1-(2piridilazo)-2-naftol (PAN) imobilizado. Uma cela de quartzo com
5mm de caminho tico foi utilizada, uma vez que o suporte slido apresenta baixa absoro na regio visvel (12). Considerando
os inconvenientes anteriormente descritos, foi proposta uma cela
de fluxo em acrlico para medidas em fluxo por EFS. A geometria
da cela permite o emprego de maiores quantidades de suporte
slido sem ocasionar excessiva atenuao do feixe de radiao,
devido ao caminho ptico pequeno (1mm), alm de minimizar
problemas com o aumento da impedncia hidrodinmica (13).
Suportes slidos
Muitos suportes slidos tm sido usados em EFS: resinas trocadoras catinicas (14) e aninicas (15), Sephadex (16-20), vidro
poroso sinterizado (21), espuma de poliuretano (22), celulose (23)
e polmeros diversos (12,24,25). Entretanto, na maior parte dos
trabalhos envolvendo EFS em sistemas de fluxo, a cela preenchiRevista Analytica Junho/Julho 2003 N 05

da com resina de troca inica ou um outro material cromatogrfico (26). Esse fato fez com que esses sistemas fossem considerados
como um hbrido entre FIA e sistemas cromatogrficos (27).
A escolha do suporte slido para a aplicao em espectrofotometria em fase slida depender da espcie qumica a
ser analisada. Uma possvel estratgia pode ser exemplificada
pelo desenvolvimento de metodologias para determinao
de urnio, mercrio e chumbo (28). Savvin e colaboradores
definiram inicialmente os reagentes a serem utilizados, considerando a sensibilidade e seletividade para a determinao de
urnio, mercrio e chumbo. Posteriormente, foram testados
uma srie de discos de 10 e 20mm de dimetro de vrios tipos
de material: diferentes poliamidas, membranas de polietileno/
tereftalato e celulose. O suporte slido foi selecionado considerando a habilidade para imobilizao do reagente cromognico e a reatividade do mesmo aps a imobilizao.
Em medidas por EFS, o feixe de radiao incidente sofre
tanto absoro quanto espalhamento de radiao. Esses dois
fatores contribuem para a atenuao da radiao que atinge o
detector, o que diferencia a EFS da espectrofotometria convencional, na qual a atenuao ocorre principalmente por processos de absoro. A atenuao do feixe pela fase slida deve ser
levada em considerao para a escolha do suporte e da maneira
como a medida ser realizada (medidas de absoro ou reflectncia, por exemplo). Outro fator a ser considerado a cintica
de reteno do analito no suporte, que define o tempo mnimo
de contato da amostra com a fase slida em procedimentos em
batelada ou a eficincia de reteno em medidas em fluxo.
Entre os suportes slidos utilizados na EFS, a slica funcionalizada C18, seja na forma de p ou de discos (29), tem
se destacado devido a propriedades como alta razo de
transferncia de massa e resistncia mecnica (6,30-32).
Esse material tem sido usado tanto para reteno direta do
analito na sua superfcie (33), como atravs da imobilizao
de um reagente que promova a reteno do analito (8,10).
Uma outra vantagem que esse material pode ser exposto a
diferentes solventes sem alterao do volume, o que ocorre
com freqncia com resinas de troca inica.
Reteno do analito
A reteno do analito na fase slida pode acontecer devido
interao direta da espcie com a fase slida (30,34), reteno
de um produto de reao entre o analito e um reagente (6,17,35),
ou ainda, reteno do analito por um reagente previamente
imobilizado no suporte slido (4,21). A aplicao de uma dessas
estratgias depender da espcie qumica a ser analisada, da reao envolvida e do suporte slido empregado.
Como exemplo de um procedimento em que a imobilizao prvia de reagente desnecessria, pode ser citada a
determinao simultnea das aminas 2,4-dinitrofenilhidrazina
e 4-nitrofenilhidrazina (30). As aminas foram retidas em uma
cela contendo C18 e espectros de absoro dos analitos foram

39

ARTIGO

obtidos empregando um espectrofotmetro com arranjo linear de diodos. De maneira similar, riboflavina (33) e alcalides
(36) podem ser determinados diretamente aps reteno em
C18 e o frmaco Diclofenac por reteno em Sephadex e medidas de absorvncia na regio ultravioleta (37).
Quando se trata da determinao de metais por EFS,
normalmente torna-se indispensvel o uso de reagentes
cromognicos, podendo ser exploradas duas diferentes
estratgias. Em alguns casos, o reagente pode ser imobilizado previamente no suporte slido, sendo a reteno do
analito devida a uma reao qumica que ocorre na prpria
fase slida. Em algumas situaes possvel a eluio do
on metlico sem a remoo do reagente, permitindo que
uma srie de medidas seja efetuada sem a necessidade de
re-imobilizao do reagente. Outras vantagens so a possibilidade de aumento de seletividade e a simplificao do
procedimento. Entretanto, podem ocorrer problemas de
lixiviao do reagente, dependendo de sua solubilidade
no meio. Na segunda situao, a reao entre o analito e
o reagente cromognico ocorre em soluo previamente
reteno do produto formado. Essas duas estratgias
foram comparadas para a determinao de cobalto com
piridoxal-4-feniltiosemicarbazona usando C18 como suporte slido (31). A reao em soluo seguida da reteno do
produto em C18 foi sugerida no protocolo analito por possibilitar melhor sensibilidade para a determinao.
Eluio
A remoo do analito da fase slida fundamental nas metodologias que empregam EFS, uma vez que a reversibilidade, a
possibilidade de reutilizao da fase slida e a reprodutibilidade
do procedimento dependem desta etapa. Em metodologias em
fluxo, a eficincia de eluio pode ser monitorada pelo acompanhamento da linha de base. Entretanto, em procedimentos
em batelada, o acompanhamento deve ser feito medindo-se
a absorvncia na fase slida em mais de um comprimento de
onda (o mximo de absoro do produto e outro comprimento de onda no qual a absoro desprezvel).
A remoo do analito feita, usualmente, submetendo-se a fase slida ao de uma soluo de um cido, de
um complexante ou um solvente com o qual o produto
tenha maior afinidade que com a fase slida. A eluio
pode ocorrer com remoo do produto da reao entre o
analito e o reagente ou unicamente do analito, mantendo
o reagente imobilizado na fase slida.
Solues cidas tm sido muito utilizadas, especialmente
para a eluio de ons metlicos pela decomposio do complexo devido protonao do reagente. Solues diludas
de cido clordrico foram utilizadas para a remoo dos ons
metlicos aps formao de complexos com 2-(5-bromo-2pyridylazo)-5-diethylaminophenol (Br-PADAP) imobilizado
em XAD-4 (24) e de TAN imobilizado em C18 (8,10,13).

40

Como exemplo do emprego de solues de complexantes

como eluentes, pode ser citada a determinao de ferro explorando a reteno do complexo formado entre Fe(III) e tiocianato em
resina aninica (38). Uma soluo de fluoreto de sdio foi empregada como eluente e a remoo do complexo da fase slida ocorre
tanto pela formao do complexo ferro(III)-fluoreto como pela
substituio inica na resina, devido alta concentrao de fluoreto
no eluente. De maneira similar, uma soluo de cido tiogliclico foi
empregada como eluente na determinao de cobre usando como
fase slida PAN imobilizado em uma resina de troca inica (4).
Metanol um solvente bastante utilizado para eluio em EFS,
o que pode ser exemplificado pelo emprego de uma soluo 70%
(v/v) para remoo dos alcalides retidos em C18 (36). Muitas vezes,
misturas de solventes so utilizadas, como o emprego de uma mistura de cido perclrico e dimetilformamida para regenerao de
C18 aps a reteno dos complexos de cobre e cobalto por reao
com piridoxal-4-feniltiosemicarbazida em procedimento para determinao simultnea dos dois metais por EFS derivativa (3).
Em procedimentos em fluxo, vrias amostras podem ser seqencialmente introduzidas no transportador, gerando um registro com diferentes patamares, sendo a introduo do eluente feita
periodicamente (15,34). Esse procedimento pode causar efeitos de
memria e afetar a faixa resposta linear, dependendo da concentrao do analito na amostra e da quantidade de suporte slido. Por
outro lado, em alguns procedimentos, a prpria soluo eluente
empregada como transportador. A composio dessa soluo cuidadosamente escolhida, de forma a promover a reteno transiente
do analito, por um intervalo suficiente apenas para a concentrao
e medida da espcie (4,30,35). Entretanto, o eluente usualmente
introduzido aps cada alquota de amostra, permitindo evitar os
problemas previamente mencionados (6,17,18).

Aplicaes da EFS
Procedimentos em batelada
Em procedimentos em batelada, trs estratgias podem
ser adotadas, dependendo da natureza do analito, do suporte
slido e do reagente imobilizado (39):
a) O suporte slido adicionado amostra junto com
um reagente cromognico. Este procedimento pode
ser aplicado quando a reao colorimtrica suficientemente seletiva para o analito e o complexo formado
facilmente sorvido pelo suporte slido. Empregando
essa estratgia, berlio foi determinado por EFS atravs
da reteno do complexo formado com Cromo Azurol
S, na presena de EDTA, em Sephadex (16).
b) O reagente cromognico previamente imobilizado no
suporte slido para ento ser adicionado amostra.
Esse procedimento aplicado quando o analito no
pode ser retido diretamente a partir da soluo da
amostra. O reagente pode ser retido irreversivelmente
no suporte slido e, sendo o complexo formado com
Revista Analytica Junho/Julho 2003 N 05

o analito facilmente decomposto, o suporte slido

poder ser reutilizado para outras medidas. Assim,
a determinao de cobre por EFS pode ser realizada
atravs do contato da amostra por 30 min com Zincon imobilizado em resina Dowex 1-X2 (2).
c) O analito retido no suporte slido previamente adio do reagente cromognico; procedimento aplicado quando o reagente possui baixa seletividade. Por
exemplo, complexos de zinco ou cdmio podem ser
concentrados em resina aninica para posterior formao de complexos com Zincon e 4-(2-piridilazo)
resorcinol (PAR), respectivamente.
Alguns exemplos da aplicao de EFS em procedimentos
em batelada so apresentados na Tabela 1.
Procedimentos em Fluxo
A anlise por injeo em fluxo (FIA) foi inicialmente concebida para anlises em soluo, permitindo medidas rpidas e
reprodutivas em sistemas homogneos (40,41). Mais recentemente FIA vem sendo utilizado para a manipulao de amostras
e reagentes slidos. Muitos sistemas heterogneos, incluindo
converso qumica com reagentes slidos (41), separao e prconcentrao em fase slida (42), medidas turbidimtricas (43)
e uso de suspenses (44) tm sido eficientemente implementados em sistemas FIA integrando, inclusive, etapas de reao,
reteno e deteco (41). Alguns exemplos da aplicao de EFS
em procedimentos em fluxo so apresentados na Tabela 2.
No acoplamento da espectrofotometria em fase slida
com sistemas de anlise em fluxo (FI-EFS), uma cela de fluxo
preenchida com o suporte slido e ento posicionada no
caminho tico de um espectrofotmetro. A deteco feita
simultaneamente s etapas de reteno e concentrao do
analito. Vantagens como facilidade de automao, aumento
de seletividade, pequeno consumo de reagentes e menor
gerao de resduos so evidenciadas por esse acoplamento.
Aumento de seletividade tambm pode ser observado devido
s diferenas na cintica de reteno do analito e de outras
espcies concomitantes no suporte slido (8,31,45). Alm disso, a associao com sistemas em fluxo permite que medidas
reprodutveis sejam realizadas sem que necessariamente se
tenham atingido condies de equilbrio entre as fases.
Na Figura 3 mostrado um sinal transiente tpico de FIEFS, obtido em sistemas que exploram a injeo da amostra
seguida pela injeo eluente (8,10). Aps a passagem do
transportador atravs da cela, estabelecendo a linha base,
ocorre a reteno do analito (ou produto da reao entre o
analito e um reagente apropriado), promovendo um aumento de sinal. O eluente atinge a cela aps a passagem da zona
de amostra e remove a espcie concentrada da fase slida,
promovendo o retorno linha de base. Outra alternativa
bastante utilizada o emprego da soluo eluente como
transportador da amostra (45).
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(I)

eluente

(II)

(III)

amostra

Figura 3. Sinal transiente obtido em FI-EFS com injeo de uma

alquota de amostra seguida pela injeo do eluente: (I) linha
base; (II) concentrao do analito e (III) eluio

O primeiro uso de deteco em fase slida acoplada a

FIA foi em um procedimento para medidas de pH (27,46), no
qual um indicador cido-base foi imobilizado em celulose e
medidas de reflectncia foram realizadas usando uma fibra
tica. Vrias metodologias so apresentadas na literatura
usando FIA e deteco direta em suportes slidos (5). Yoshimura props o uso de um sistema de anlises em fluxo para
a determinao de traos de cromo(VI) em guas naturais retendo o produto da reao entre o Cr(VI) e a difenilcarbazida
em uma resina catinica (15). A EFS foi tambm acoplada a
FIA para determinao de traos de molibdnio(VI) em guas
naturais e rochas por reteno do complexo Mo(VI)-Tiron
em resina aninica (18) e para a determinao de estanho em
sucos de frutas, concentrando o complexo formado entre o
metal e violeta de pirocatecol em uma cela de fluxos contendo Sephadex (17). Outros exemplos so os mtodos desenvolvidos para a determinao de zinco, explorando a reao
com PAN (47) ou Zincon (48) previamente imobilizados em
resina de troca inica e com TAN imobilizado em C18 (10).
Outras aplicaes
Procedimentos utilizando EFS tambm foram propostos
para especiao de metais. O reagente cromognico Eriocromo Cianina R foi imobilizado em Sephadex para especiao
redox de vandio (20). No procedimento proposto, V(IV)
retido no suporte slido atravs de formao de complexo
com o reagente imobilizado. Posteriormente, a amostra
posta em contato com a fase slida aps tratamento com
cido ascrbico. Um outro exemplo a determinao de
ferro(II) e ferro(III) baseada na reteno do complexo formado entre Fe(III) e tiocianato em resina aninica (38). Em
um sistema de anlise em fluxo, uma alquota da amostra
passa pela cela contendo a fase slida e o complexo formado
retido. Uma outra alquota da amostra processada aps
atravessar uma coluna oxidante para converso do Fe(II) a
Fe(III), viando a determinao de ferro total.

41

ARTIGO

Alguns procedimentos usando EFS so propostos para

determinaes simultneas. Slica funcionalizada C16 foi modificada com 1-nitroso-2-naftol para determinao simultnea de cobalto(II) e nquel(II) usando um sistema de anlise
em fluxo (49). Em outra aplicao, cobre(II) e cobalto(II)
foram determinados simultaneamente atravs de reao
com o reagente piridoxal-4-fenil-3-tiosemicarbazona imobilizado em C18 (3). Os espectros de absoro dos complexos
formados so sobrepostos, mas a determinao simultnea
pode ser feita utilizando-se a primeira derivada. Alumnio
e berlio tambm foram determinados simultaneamente
por espectrofotometria derivativa em fase slida atravs da
reteno dos complexos com Eriocromo cianina R em uma
resina aninica (50).
A associao de mtodos de calibrao multivariada EFS
permite agregar as vantagens das determinaes simultneas
s previamente mencionadas para as medidas em fase slida.
Neste sentido, ferro, nquel e zinco foram determinados simultaneamente utilizando TAN imobilizado em C18, explorando
caractersticas espectrais e diferenas nas taxas de soro na
fase slida. Regresso parcial por mnimos quadrados (PLS) foi
empregada como ferramenta quimiomtrica (51).
A determinao de zinco e nquel em ligas a base de cobre
foi efetuada explorando diferenas nas velocidades de reao/
reteno dos ons metlicos com um suporte slido consistindo
de TAN imobilizado em C18 (8). Nessa aplicao, um sistema de
anlises em fluxo foi projetado para permitir medidas seqenciais em diferentes vazes (0,85 e 1,9 ml min-1). Enquanto a
reteno de zinco praticamente independente da vazo, a
reteno de nquel consideravelmente afetada em vazes
maiores. As equaes de calibrao obtidas para solues
contendo ambas as espcies nas diferentes vazes permitiram a quantificao dos analitos.
Mtodos para determinaes indiretas usando EFS tambm so possveis (52). Uma estratgia a reteno de um
determinado complexo em fase slida e a medida do decrscimo de absorvncia quando a fase slida entra em contato
com o analito e o complexo decomposto. Por outro lado,
um dos reagentes que participam da formao do produto
adsorvido na fase slida pode ser determinado indiretamente, como na determinao de cido ascrbico explorando a
reduo de ferro(III) em soluo e a reteno do complexo
com ferrozina em Sephadex (52).
A determinao de nions atravs de espectrofotometria
em fase slida tambm tem encontrado espao. Reaes de
diazo-acoplamento foram usadas para determinao de nitrito,
com medida direta da absorvncia do composto colorido retido
em resina aninica (53). Um outro exemplo a determinao
de sulfeto atravs da reao com N,N-dimetil-p-fenilenodiamina (DMPD), em meio cido na presena de Fe(III), formando o
azul de metileno. O produto da reao ento retido em C18 e
as medidas de absorvncia so efetuadas em 666nm (54).

42

Concluses e tendncias futuras

Medidas em fase slida tm se mostrado uma alternativa
bastante til para aumento de sensibilidade em espectrofotometria, permitindo a melhoria dos limites de deteco e
a anlise de traos em diferentes tipos de amostra. Outra
caracterstica importante a melhoria de seletividade em
relao aos procedimentos convencionais. Apesar do nmero
considervel de aplicaes propostas, a tcnica apresenta
ainda grandes potencialidades, incluindo investigaes visando o desenvolvimento de procedimentos limpos; para determinaes in-sito; determinaes simultneas; especiao
qumica e medidas cinticas, como destacado a seguir.
A EFS permite atender necessidade de desenvolvimento
de mtodos analticos mais limpos (Green analytical chemistry), nos quais a gerao de efluentes e o impacto destes sob
o meio ambiente so minimizados. Isto pode ser alcanado
pelo emprego de reagentes irreversivelmente imobilizados,
visando efetuar vrias determinaes sem a necessidade de
re-imobilizar o reagente. Com esse objetivo, necessrio
desenvolver novas estratgias para imobilizao, alm de
explorar melhor as estratgias atualmente disponveis.
A EFS tem sido implementada principalmente empregando espectrofotmetros comerciais, projetados para medidas
em soluo. Em funo disso, surgem algumas limitaes
como a restrio do caminho ptico de medida e da quantidade de suporte slido que pode ser empregada. Esses inconvenientes podem ser contornados atravs da construo
de equipamentos dedicados para medidas em fase slida.
Nesse sentido, uma alternativa simples e de baixo custo seria
o emprego de diodos emissores de luz e fotodetectores para
a medida dos sinais. Como esses dispositivos so compactos
e apresentam baixo consumo de energia, a sua associao
EFS pode resultar em equipamentos teis para medidas em
campo, permitindo a determinao in-sito de espcies instveis, alm de contornar problemas relacionados armazenagem e contaminao das amostras.
Estratgias bem estabelecidas para determinaes espectrofotomtricas simultneas em soluo, incluindo o uso
de ferramentas quimiomtricas, tambm podem ser empregadas em EFS, agregando as vantagens desta tcnica determinao de vrias espcies simultaneamente. Alm disso, caractersticas peculiares da EFS, como diferenas nas taxas de
reteno dos analitos, podem tambm ser exploradas. Estas
estratgias podem ser adotadas para o desenvolvimento de
procedimentos para especiao qumica, um dos principais
anseios da Qumica analtica atual.
Uma das caractersticas mais interessantes do acoplamento
de sistemas de anlise em fluxo EFS a possibilidade de se efetuar medidas simultaneamente reteno do analito, o que pode
ser explorado para a melhoria de seletividade, determinaes
simultneas, determinao de parmetros fisco-qumicos etc.
Revista Analytica Junho/Julho 2003 N 05

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