INSTITUTO TECNOLOGICO DE SONORA

DIRECCIN ACDEMICA DE RECURSOS NATURALES

TESIS:

EFECTO TOXICOLGICO DEL COLORANTE ANARANJADO

REACTIVO 14 SOBRE DIFERENTES GRUPOS TRFICOS
EN UN CONSORCIO ANAEROBIO
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE
MAESTRA EN CIENCIAS EN RECURSOS NATURALES

PRESENTA:

MARA ISABEL LPEZ VIZCARRA

CD. OBREGN SONORA, AGOSTO DE 2005

RESUMEN

La presente investigacin tiene como objetivo determinar el efecto txico del colorante
azo anaranjado reactivo 14 sobre diferentes grupos trficos en un consorcio
anaerobio. El efecto se determin utilizando la dosis letal media (DL50) relacionada con
la actividad metanognica de los microorganismos en presencia y ausencia de un
mediador redox (riboflavina).

Se utilizaron sustratos selectivos para cada grupo trfico estudiado: cido actico para
acetoclsticos, metanol para metilotrficos, cido frmico para formicotrficos, y
glucosa para microorganismos fermentadores de este sustrato; empleando una
concentracin inicial de 2 g de demanda qumica de oxgeno (DQO)/l en todos los
casos. El inculo utilizado fue un lodo granular activado con glucosa en un reactor
UASB a escala laboratorio. El colorante usado fue el anaranjado reactivo 14 (AR14),
donde las concentraciones valoradas fueron: 0.3,0.6,1.2,2.4 y 4.8 mM. El tiempo de
exposicin fue de 36 horas, monitoreando la produccin de metano en un
cromatgrafo de gases en intervalos de 12 horas.

A los tratamientos con glucosa, se les adicion cido bromo etano sulfnico (BES)
como inhibidor selectivo para la metanognesis, con la intencin de observar el efecto
txico del colorante sobre la ruta fermentativa, relacionndolo con la produccin de
cidos grasos voltiles (AGVs), cuantificados en un cromatgrafo lquido de alta
resolucin (HPLC). En este caso, no se observ diferencia en la produccin de cidos
grasos voltiles, especficamente el actico, al incrementarse la concentracin del
colorante. Respecto a los tratamientos con riboflavina, se observ un incremento en la
produccin de AGVs .

En el resto de los tratamientos, el efecto txico se relacion directamente con la

concentracin del colorante y de manera inversa con la capacidad metanognica del
grupo trfico. En todos los casos, se observ una reduccin del efecto txico del
colorante en presencia de la riboflavina. Los microorganismos metilotrficos resultaron
ser los ms susceptibles al efecto del colorante; por su parte, los formicotrficos fueron
los ms resistentes.

Eliminado:

De acuerdo a lo obtenido en esta investigacin, se puede concluir que el cido frmico

es el sustrato ms factible para implementarse en la fase anaerobia de un sistema de
tratamiento para aguas residuales industriales de origen textil.

NDICE
PG

RESUMEN......................................................................................................... I
NDICE.............................................................................................................. Iii
LISTA DE TABLAS Y FIGURAS.......................................................................
Iv
LISTA DE GRFICAS....................................................................................... V
I. INTRODUCCIN............................................................................................... 1
1.1. Antecedentes.............................................................................................. 1
1.2. Planteamiento del problema....................................................................... 2
1.3. Justificacin................................................................................................ 3
1.4. Hiptesis....................................................................................................
4
1.5. Objetivos..................................................................................................... 4
II. REVISIN BIBLIOGRFICA............................................................................. 5
2.1. Colorantes: Generalidades........................................................................
5
2.1.1. Clasificacin...................................................................................
5
2.1.2. Efectos en el medio ambiente........................................................
8
2.1.3. Toxicidad........................................................................................
8
2.2. Mtodos de eliminacin de colorantes....................................................... 9
2.2.1. Mtodos fisicoqumicos................................................................... 9
2.2.1.1. Filtracin por membrana..................................................... 10

ii

2.2.1.2. Coagulacin........................................................................
2.2.1.3. Adsorcin e intercambio inico...........................................
2.2.1.4. Electrlisis..........................................................................
2.2.1.5. Proceso de oxidacin avanzada (POA)..............................
2.2.2. Mtodos Biolgicos.........................................................................
2.2.2.1. Fundamentos microbiolgicos de la digestin anaerobia...
2.2.2.2. Archaea productoras de metano: metangenos................
2.2.2.3. Reduccin anaerobia de colorantes azo............................
2.2.2.4. Oxidacin aerobia de aminas aromticas..........................
III. METODOLOGA................................................................................................
3.1. Inculo........................................................................................................
3.2. Medio de cultivo.........................................................................................
3.3. Colorante anaranjado reactivo 14..............................................................
3.4. Fuentes de energa....................................................................................
3.5. Experimento...............................................................................................
3.5.1. Estudios de toxicidad........................................................................
3.5.1.1. Produccin de metano..........................................................
3.5.1.2. Dosis letal media (DL50)........................................................
3.5.1.3. Produccin de cidos grasos voltiles ................................
3.5.2. Medicin del color.............................................................................
3.6. Interpretacin de resultados....................................................................
IV. RESULTADOS Y DISCUSIN..........................................................................
4.1. Produccin de metano................................................................................
4.2. Determinacin de la DL50...........................................................................
4.3. Produccin de AGV`s................................................................................
4.4. Medicin del color.......................................................................................
V. CONCLUSIONES..............................................................................................
BIBLIOGRAFA..................................................................................................

11
11
12
12
13
14
16
17
19
22
22
23
23
23
24
26
27
28
28
28
28
30
31
35
37
38
41
43

LISTA DE TABLAS Y FIGURAS

TABLA
1
2
3
4

Descripcin de los tratamientos...............................................................

Actividad metanognica de los diferentes grupos trficos estudiados en
ausencia de AR 14...................................................................................
Decoloracin porcentual del AR 14 en ausencia de riboflavina...............
Decoloracin porcentual del AR 14 en presencia de riboflavina..............

PG.
25
31
40
40

FIGURA
PG
1
Estructura qumica del colorante azo anaranjado reactivo 14
(AR14).......................................................................................................
6
2
Proceso global durante la digestin anaerobia.........................................
15
3
Rompimiento del enlace azo con la formacin de aminas en
condiciones anaerobias............................................................................
18
4
Esquema de la reduccin enzimtica directa de colorantes azo a

iii

5
6
7
8
9
10
11

aminas aromticas....................................................................................
Esquema de la reduccin enzimtica indirecta de colorantes azo a
aminas aromticas....................................................................................
Adicin del medio basal a las botellas serolgicas...................................
Adicin del inculo....................................................................................
Botella serolgica sellada hermticamente..............................................
rea de flujado para botellas serolgicas.................................................
Incubacin de botellas..............................................................................
Metodologa general del experimento......................................................

19
20
24
24
24
24
25
26

LISTA DE GRFICAS

GRFICA
PG.
1
Relacin entre el metano (ppm) y rea cromatogrfica a los 3.5 min de
tiempo de retencin.................................................................................. 27
2
Actividad metanognica de microorganismos acetoclsticos a las 36
horas de exposicin al colorante AR 14................................................... 31
3
Actividad metanognica de microorganismos metilotrficos a las 36
horas de exposicin al colorante AR 14................................................... 32
4
Actividad metanognica de microorganismos formicotrficos a las 36
horas de exposicin al colorante AR 14................................................... 33
5
Actividad metanognica de microorganismos en el metabolismo
endgeno a las 36 horas de exposicin al colorante AR 14....................
34
6
Produccin de metano en el metabolismo metilotrfico en presencia del
colorante AR 14 (4.8mM)...................................................................
35
7
Dosis letal media (DL50) del AR 14 para microorganismos
metanognicos.......................................................................................... 38

iv

Produccin de cidos grasos voltiles en presencia de riboflavina..........

Decoloracin porcentual del colorante anaranjado reactivo 14 durante

el metabolismo formicotrfico despus de 36 horas de
incubacin................................................................................................

38

41

I. INTRODUCCIN
1.1 Antecedentes
Las aguas residuales procedentes de la industria textil contienen una diversidad de
colorantes (Easton,1995), siendo en su mayora del tipo azo (Carliell, et.al. 1995) que son
generalmente recalcitrantes.

La presencia de colorantes en las aguas residuales lleva a una serie de problemas

ambientales, de los cuales resaltan: a) la coloracin que dan al cuerpo de agua impide la
penetracin de los rayos solares, y con ello, el proceso fotosinttico; b) pueden
convertirse qumicamente a compuestos txicos (aminas), de los cuales algunos de ellos
son carcinognicos (Talarposhti, et.al. 2001); c) son recalcitrantes, difcilmente
biodegradables de forma natural (van der Zee, 2002).

En el municipio de Cajeme se encuentran asentadas nueve industrias textiles (INEGI,

1999). Actualmente el agua residual generada por estas empresas es tratada usando un
mtodo fisicoqumico (floculacin). El mtodo consiste en precipitar a los colorantes,
usando para ello altas concentraciones de productos qumicos. La desventaja del mtodo

es que adems de ser costoso, genera residuos slidos (Robinson, et.al., 2001) que son
desechados en el depsito de basura municipal, generando con esto, un foco de toxicidad
importante para la poblacin vecina del lugar.

Field, et.al., (1995) sugieren una combinacin de tratamiento biolgico anaerobio-aerobio

para el tratamiento de efluentes textiles, ya que los costos de operacin son menores y no
genera altas cantidades de subproductos como en el mtodo fisicoqumico. El
inconveniente que se presenta en los tratamientos biolgicos, es que los microorganismos
tambin son susceptibles a la accin txica de los colorantes (van der Zee, 2002).
Adems, muchos de los colorantes presentes en este tipo de efluentes son reducidos muy
lentamente por consorcios anaerobios (Cervantes, et.al. 2001; van der Zee et al., 2001a),
por lo que este sector industrial demanda estrategias que permitan acelerar los procesos
de eliminacin de colorantes de las aguas residuales.

El presente trabajo permitir predecir el efecto toxicolgico que imparte el colorante

anaranjado

reactivo

14

(AR14)

sobre

diferentes grupos

trficos,

mediante

la

determinacin de la dosis letal media (DL50), utilizando diferentes sustratos en un

ambiente anaerobio. Adems, se analizar el efecto de un mediador redox (riboflavina) en
la toxicidad del colorante y en la velocidad de decoloracin del mismo.

1.2 Planteamiento del problema

Las aguas residuales generadas de la industria textil contienen altas concentraciones de
colorantes, los cuales presentan distintos efectos ambientales sobre los cuerpos de agua
receptores: deterioran el biopaisaje, impiden procesos fotosintticos, afectan a los
organismos presentes,

producen compuestos txicos al reducirse. Es por esto que

resulta importante contar con sistemas de depuracin efectivos para tratar los efluentes
de la industria textil.

En Cajeme, Sonora, Mxico, se cuenta con industrias del ramo textil que generan
desechos coloreados. Los residuos generados son tratados por mtodos fisicoqumicos
para eliminar el color. Este mecanismo elimina el color del agua, sin embargo genera

importantes cantidades de desechos slidos altamente txicos que son depositados en el

basurero municipal.

El tratamiento biolgico anaerobio-aerobio resulta ser una alternativa atractiva, adems de

ser ms econmico, no genera altas cantidades de desechos slidos. La limitante es la
toxicidad que imparten los colorantes sobre los grupos trficos de los sistemas biolgicos
de tratamiento y la lentitud con la que se da el proceso. De aqu surge la necesidad de
conocer el efecto txico de un colorante difcil de reducir (anaranjado reactivo 14), sobre
los diferentes grupos trficos que pueden estar presentes en un ambiente anaerobio
productor de metano.

1.3 Justificacin
La presencia de contaminantes en los efluentes industriales representa un problema
ambiental sobre los cuerpos de agua receptores. Los colorantes eliminados de procesos
textiles imparten coloracin al agua, generando con ello alteraciones al biopaisaje,
interferencia en el proceso fotosinttico por la obstruccin de los rayos solares, as como
la generacin de compuestos txicos (aminas).

El municipio de Cajeme cuenta con industrias textiles que generan aguas residuales
coloreadas. Actualmente estos efluentes se someten a un proceso fisicoqumico de
floculacin para eliminar el colorante del agua que posteriormente termina en el circuito
residual industrial. Este pretratamiento elimina el color del agua, pero genera un problema
colateral por los slidos generados de la floculacin. Adems, el proceso demanda la
adicin de altas cantidades de compuestos qumicos, lo cual implica altos costos en el
tratamiento.

El tratamiento biolgico anaerobio-aerobio ha demostrado ser ms eficiente y barato

respecto al fisicoqumico, los inconvenientes que presenta son la vulnerabilidad de los
microorganismos al efecto txico del colorante y la lentitud con la que es llevado el
proceso de decoloracin biolgico.

Este trabajo ayudar a predecir el efecto toxicolgico del colorante anaranjado reactivo 14
(AR14) sobre diferentes grupos trficos (acetoclsticos, metilotrficos, hidrogenotrficos,
fermentadores del propionato y fermentadores de la glucosa) en un consorcio anaerobio,
as como la influencia de un mediador redox en el proceso de decoloracin (Cervantes,
et.al. 2001; Razo-Flores, 1997). Al identificar los grupos trficos ms susceptibles al
efecto txico del colorante azo, se podrn disear estrategias para mejorar la eficiencia de
los procesos biolgicos. El colorante AR14 fue elegido como modelo porque en estudios
anteriores se mostr que presenta una tasa de decoloracin muy baja comparado con
otros colorantes tipo azo (van der Zee et al., 2001a); adems, los colorantes reactivos han
sido reportados como uno de los ms txicos para los consorcios anaerobios (van der Zee
et al., 2001b).

1.4 Hiptesis
Las arqueobacterias metanognicas son ms susceptibles al efecto txico del colorante
azo anaranjado reactivo 14 (AR14) que las bacterias fermentativas.

La presencia de un mediador redox (riboflavina), aumenta la velocidad de decoloracin en

el sistema anaerobio.

La riboflavina reduce el efecto txico que imprime el colorante azo sobre el metabolismo
metanognico y fermentativo de los grupos trficos.

1.5 Objetivo
Determinar el efecto toxicolgico del colorante anaranjado reactivo 14 (AR14) sobre
diferentes grupos trficos en un consorcio anaerobio mediante la obtencin de la dosis
letal media (DL50) utilizando diferentes sustratos.

Objetivos especficos

Identificar el grupo trfico ms susceptible al efecto txico del colorante.

Medir el impacto de la toxicidad del colorante en presencia de riboflavina.

II. REVISIN BIBLIOGRFICA

2.1 Colorantes: Generalidades

Los colorantes son compuestos qumicos capaces de absorber la luz en el espectro
visible (Tan, 2001), en la industria textil se emplean para teir las telas. La mayora (70 %)
de los colorantes aplicados en la industria textil son compuestos del tipo azo (Carliell
et.al., 1995) los cuales se caracterizan por tener en su estructura uno o ms enlaces azo
(N=N) mediante los cuales se unen aminas aromticas.

2.1.1 Clasificacin

De acuerdo a sus propiedades de teido, los colorantes se clasifican en:

a) Colorantes cidos: Compuestos aninicos que contienen nitrgeno utilizados
parcialmente para teir fibras como la lana, poliamida, seda y acrlico modificado. El
colorante se une a los iones NH4+ de estas fibras. La mayora de los colorantes cidos
son del tipo azo, antraquinonas o triarilmetano (van der Zee, 2002).

b) Colorantes bsicos: Compuestos catinicos utilizados para teir grupos cidos

presentes en las fibras. La mayora de estos colorantes son compuestos azo,
diarilmetano, triarilmetano o antraquinona (van der Zee, 2002).

c) Colorantes reactivos: Son colorantes con grupos reactivos que forman enlaces
covalentes con grupos OH, -NH o SH en las fibras (algodn, lana, seda, nylon).
Este tipo de colorante cobra importancia ecolgica debido a que presenta la menor
fijacin en telas (50-90 %), es decir, del 10 al 50 % del colorante es eliminado en el
agua residual (Easton, 1995). Adems, la decoloracin de este tipo de colorantes es
llevada a cabo de forma lenta (Van der Zee et al., 2001a). En la figura 1 se muestra la
estructura qumica del colorante anaranjado reactivo 14 (van der Zee, 2002).

Figura 1. Estructura qumica del colorante azo anaranjado

reactivo 14 (AR 14). Fuente: van der Zee, 2002.

d) Colorantes directos: Tienen molculas grandes con una alta afinidad por las fibras de
celulosa, a la cual se une por fuerzas de van der Waals (van der Zee, 2002). Estas
fibras de celulosa son absorbentes debido al gran contenido de grupos oxhidrilo. Con
los colorantes directos, las partculas de color se mueven hacia las reas amorfas de
las fibras y forman agregados grandes para salir de la fibra (Hollen, 1999), y en su
mayora son compuestos azo (van der Zee, 2002).

e) Colorantes dispersos: Consisten en dispersiones acuosas de colorantes finamente

divididos o suspensiones coloidales que al aplicarse a una fibra forman soluciones
slidas del colorante dentro de la misma (Wingrove, 1984). Son muy poco solubles en
agua y penetran en las fibras sintticas como el acetato de celulosa, polister,
poliamida, acrlico, etc. Su difusin requiere de un aumento del tamao de la fibra, lo
cual se hace utilizando altas temperaturas (>120 C) o con la ayuda de suavizadores
qumicos (van der Zee, 2002), ya que la humedad y el calor expanden las fibras,

haciendo que las cadenas moleculares se separen de manera que haya ms grupos
reactivos expuestos para reaccionar con el colorante (Hollen, 1999). Usualmente son
compuestos azo o nitrocompuestos (amarillo a rojo) o antraquinonas (azul y verde)
(van der Zee, 2002).

f)

Colorantes azoicos: Son compuestos azo insolubles de la reaccin de un

acoplamiento

entre

un

compuesto

(generalmente

naftoles,

fenoles

acetoacetilaminas) y una amina aromtica diazotizada.

g) Colorantes complejo-metlicos: Estos son compuestos formados por un colorante y un

metal (usualmente Cr, Co, Ni o Cu) y una o dos molculas del colorante, los cuales
son llamados colorantes complejo-metlicos 1:1 y 1:2, respectivamente; usualmente
son del tipo azo.

h) Colorantes al azufre: Son polmeros aromticos complejos, insolubles en agua, con

anillos heterocclicos que contienen azufre y, aunque representan cerca del 15 % de la
produccin global de colorantes, no son muy usados. El teido con colorantes al
azufre involucra reacciones de oxidacin y reduccin, similar a las reacciones de los
colorantes a la tina (van der Zee, 2002).

i)

Pigmentos: Partculas de color insolubles que se sostienen sobre la superficie de una

tela por medio de un agente espesante y cualquier color puede usarse en cualquier
fibra, ya que los pigmentos se sostienen en forma mecnica (Hollen, 1999). Estos
representan una pequea fraccin del nmero de colorantes aplicados, pero son
ampliamente utilizados y en su mayora son compuestos azo (amarillo, naranja y rojo)
o ftalocianinas (azul y verde).

j)

Colorantes a la tina: Insolubles en agua, ampliamente utilizados para teir fibras de

celulosa. El mtodo de teido se basa en la solubilidad de estos colorantes en su
forma reducida. El colorante a la tina es reducido con ditionita de sodio, despus se
aplica una oxidacin, la cual regresa el colorante a su forma insoluble. Casi todos son
antraquinonas o indigoides. El trmino a la tina se refiere a las tinas que son usadas

para la reduccin de las plantas de ndigo al terminar la fermentacin (van der Zee,
2002).

2.1.2 Efectos en el medio ambiente

La principal va por la cual los colorantes entran al medio ambiente, son las aguas
residuales, principalmente de origen textil (Easton,1995), siendo en su mayora,
colorantes del tipo azo (van der Zee, 2002). Las aguas residuales de las textileras,
contienen entre 10 y 200 mg/l de colorantes (Talarposhti, et. al., 2001). Debido a que la
mayora de los colorantes son visibles en el agua a concentraciones tan bajas como
1 mg/l) (O` Neill, et. al., 1999) las aguas residuales son altamente coloreadas y la
descarga a los cuerpos receptores representa un problema esttico. Adems, la presencia
del color en el agua residual impide la penetracin de la luz, lo que ocasiona daos en la
calidad del agua de los ros receptores y puede ser txico para los microorganismos
usados en el proceso de tratamiento, para los organismos de la cadena alimenticia y en
general para la vida acutica (Talarposhti, et. al., 2001).

2.1.3 Toxicidad
En la reduccin de los colorantes azo, el rompimiento del enlace (N=N) del colorante
conduce a la formacin de aminas aromticas, algunas de las cuales han sido reportadas
como mutagnicas y carcinognicas (van der Zee, 2002). Algunos ejemplos de estos
productos txicos de degradacin producidos durante la biotransformacin de colorantes
son: 1,4-fenilendiamina, 1-amino-2 naftol; as como, bencidina y bencidinas sustitudas,
como o-toluidina (Tan, 2001).

Estudios reportan que existe una clara relacin entre la estructura qumica del colorante y
el peligro potencial que ste representa (Chung y Cerniglia, 1992). As mismo, la toxicidad
de aminas aromticas depende en gran medida de la estructura espacial de la molcula o
de la localizacin del grupo amino. Mientras que existe una fuerte evidencia que el 2naftilamina es un carcingeno, el 1-naftilamina es mucho menos txico (Cartwright, 1983).
La toxicidad de aminas aromticas depende adems de la naturaleza y localizacin de

otros sustituyentes. Como ejemplo, la sustitucin con grupos metilo, metoxi, nitro o
halgenos pueden aumentar la toxicidad, mientras que la sustitucin con grupos carboxilo
o sulfonato generalmente disminuye la toxicidad (Chung y Cerniglia, 1992).

En mamferos, la actividad metablica de colorantes azo es principalmente debido a la

actividad bacteriana en la parte anaerobia del tracto gastrointestinal. Otros rganos, como
el hgado y el rin, tambin pueden reducir a los colorantes azo. Una vez reducido el
colorante en el intestino, las aminas aromticas liberadas son absorbidas por el intestino y
excretadas por la orina. El riesgo de la toxicidad de aminas aromticas es el de provocar
cncer de vejiga. El mecanismo de carcinogenicidad probablemente incluye la formacin
de aciloxiaminas y una N-acetilacin. Estas aciloxiaminas pueden ser convertidas a iones
carbono y nitronio que se unen al DNA y RNA, lo cual conduce a mutaciones y formacin
de tumores (Brown y De Vito, 1993).

Debido a que los colorantes son diseados para ser qumica y fotolticamente estables,
persisten en el medio ambiente; su bioacumulacin puede afectar al hombre por su
movilidad a travs de la cadena alimenticia (van der Zee, 2002). Algunos colorantes y
productos de su biotransformacin (compuestos aromticos n-sustitudos) son txicos y/o
carcinognicos, es por eso que estos colorantes son considerados como importantes
contaminantes ambientales (Chung y Cerniglia, 1992).

El riesgo de mortalidad en humanos debido a la toxicidad de colorantes es muy baja. Sin

embargo, pueden ocurrir reacciones de sensibilizacin, especialmente algunos colorantes
dispersos que pueden causar reacciones alrgicas, como dermatitis (Specht y Platzek,
1995), y algunos efectos crnicos de los colorantes, entre los cuales estn los del tipo azo
que han sido estudiados por varios aos (Brown y De Vito, 1993).

2.2 Mtodos de eliminacin de colorantes

2.2.1 Mtodos fisicoqumicos

10

Existen varios tratamientos fisicoqumicos, qumicos y biolgicos que pueden ser

empleados para eliminar colorantes en aguas residuales. Las tcnicas fisicoqumicas
incluyen procesos de membrana, coagulacin, precipitacin, flotacin, adsorcin,
intercambio inico, electrlisis y procesos de oxidacin. En general, cada tcnica tiene sus
limitaciones. Los altos costos de operacin, la complejidad de los procesos y la
generacin de contaminantes colaterales son las principales desventajas de los procesos
fisicoqumicos (Robinson, et.al., 2001).

Los factores que determinan la factibilidad econmica de cada tcnica de eliminacin de

colorantes son: tipo de colorante, composicin del agua residual, dosis y costo de
sustancias qumicas requeridas, costos de operacin (materia y energa), costos del
destino ambiental y manejo de los productos residuales (Robinson, et.al., 2001). El uso de
un proceso individual puede no ser suficiente para llevar a cabo una decoloracin
completa. Las estrategias de eliminacin de colorantes consisten en una combinacin de
diferentes tcnicas (van der Zee, 2002). Las principales caractersticas de cada una de
stas tcnicas se describen a continuacin.

2.2.1.1 Filtracin por membrana

Este mtodo tiene la capacidad de clarificar, concentrar y separar colorantes

continuamente de un efluente (Mishra y Tripathy, 1993). Este mtodo de filtracin es
adecuado para aguas recicladas dentro de la misma planta textil, si el efluente contiene
bajas concentraciones de colorantes (Robinson, et.al., 2001).

Los procesos de membrana que se utilizan en el tratamiento de aguas residuales son la

electrodilisis, ultrafiltracin, la smosis inversa y la nanofiltracin (Weber, 1979). Estas
dos ltimas utilizan membranas con un peso molecular por debajo de 10 000 Dalton, por
lo que pueden ser aplicadas como proceso principal o postratamiento para la separacin
de sales y molculas grandes incluyendo colorantes y productos de las aguas residuales
del proceso textil. Los procesos de membrana que se utilizan son mtodos rpidos. Otra
ventaja es que algunos de los colorantes no reactivos obtenidos despus de aplicar estos
procesos, pueden ser reutilizados (van der Zee, 2002).

11

Wu y Wang (2001), argumentan que el residuo concentrado que queda despus de la

separacin presenta problemas de eliminacin y altos costos, as como la posibilidad de
obstruccin de las membranas y el tener que reemplazarlas son las principales
desventajas de ste mtodo. Otra dificultad es que las aguas muy concentradas deben
ser procesadas despus con otro mtodo, normalmente por ozonizacin, lo que hace que
los costos de este mtodo sean bastante alto.

2.2.1.2 Coagulacin

En el tratamiento de aguas residuales, la eliminacin de una gran proporcin de

impurezas se lleva a cabo por sedimentacin. Sin embargo, debido a que muchas de las
impurezas son demasiado pequeas para obtener un proceso de eliminacin eficiente por
sedimentacin basado solo en la gravedad, es preciso llevar a cabo la agregacin de
stas partculas en agregados de mayor tamao y ms fcilmente decantables, con el fin
de obtener una separacin satisfactoria por sedimentacin. Este proceso de agregacin
se llama coagulacin (Weber, 1979).

El proceso de coagulacin utiliza coagulantes qumicos (sal de aluminio o fierro) para

promover la agregacin de partculas (Weber, 1979; Kiely, 1999). Los tres coagulantes
ms comunes son: sulfato de aluminio (almina), sulfato ferroso y cloruro frrico. Esta
tcnica es utilizada con frecuencia en el tratamiento de aguas residuales del proceso
textil, tambin disminuye hasta cierto punto la DQO y el color de las aguas residuales
antes de nuevo tratamiento (Altinbas y Baristiran, 1995).

Churchley (1995), menciona el desarrollo de polmeros orgnicos que son altamente

eficientes como coagulantes de colorantes. Sin embargo, muchos de los polmeros
usados para eliminar el color son catinicos y pueden ser muy txicos para la vida
acutica, an en muy bajas concentraciones (menor de 1 mg/l).

2.2.1.3 Adsorcin e intercambio inico

La adsorcin implica la acumulacin de sustancias en una superficie. El intercambio inico

es un proceso de adsorcin mediante el cual los iones de una sustancia se concentran en

12

una superficie como resultado de la atraccin electrosttica en los lugares cargados de la

superficie (Weber, 1979). Las tcnicas de adsorcin producen lodos residuales que
debern ser eliminados (Krupa y Cannon, 1996).

El carbn activado u otros materiales pueden usarse para eliminar colorantes de aguas
residuales, lo cual puede ser por adsorcin (colorantes aninicos) o por combinacin de
adsorcin e intercambio inico (colorantes catinicos) (van der Zee, 2002). El carbn
activado tiene una alta capacidad de adsorcin, pero es un proceso caro (Krupa y
Cannon, 1996).

2.2.1.4 Electrlisis

Consiste en la aplicacin de corriente elctrica usando electrodos directamente en el agua

a ser tratada. El nodo es un electrodo con un metal, usualmente fierro, que produce una
corriente de electrones del material del electrodo. El ctodo es un electrodo con hidrgeno
que produce H2 en el agua (van der Zee, 2002).
Los mtodos electroqumicos han sido exitosamente aplicados para realizar la
decoloracin de aguas residuales que contienen colorantes azo (Abdo y Al-Ameeri, 1987).
Sin embargo, el proceso es muy caro debido a los grandes requerimientos de energa
(Cooper, 1993) y el tiempo de vida limitado de los electrodos (Vandevivere, et.al., 1998).

2.2.1.5 Procesos de oxidacin avanzada (POA)

La oxidacin avanzada se define como la oxidacin por compuestos con un potencial de

oxidacin ms alto que el del oxgeno, por ejemplo, perxido de hidrgeno (H2O2) y radical
hidroxilo (-OH). Los POA se basan en la generacin de especies radicales altamente
reactivas (especialmente radical OH*) que pueden reaccionar con una amplia variedad de
compuestos, incluso con los que son difciles de degradar como las molculas de
colorante. Las cuatro POA que han sido ms ampliamente estudiados son ozonacin,
UV/H2O2, UV/Ti/O2 y fenton Fe2+ /H2O2 (van der Zee, 2002).

13

La capacidad del ozono de destruir molculas de colorantes ha sido ya demostrado

(Perkowski, et.al., 1996). Aunque la ozonacin lleva a la disminucin de espuma y
decoloracin, las aguas tratadas contienen una alta carga orgnica representada como
alta DQO (Narkis y Schneiderrotel, 1980). Otra de las ventajas del ozono es que puede
ser aplicado en estado gaseoso y por lo tanto, no aumenta el volumen del agua residual
(Robinson, et.al., 2001).

Ghr, et.al., (1994), mencionan que el ozono decolora rpidamente colorantes solubles en
agua, sin embargo, un inconveniente en el uso de ste es que las aguas residuales del
proceso textil contienen adems de los colorantes muchos constituyentes que pueden
reaccionar con el ozono Adems, altas dosis de ozono no convierten completamente la
materia orgnica en CO2 y H2O. Solo un mtodo combinado de tratamiento biolgico y
ozonacin o algn POA que mejore la biodegradacin de constituyentes orgnicos puede
ser recomendado para aguas residuales textiles (Ledakowicz, 1998; Ledakowicz y
Goncia, 1999).

Una de las desventajas es que la ozonizacin o POAs son tecnologas muy costosas, el
capital y los costos de operacin del proceso biolgico son ms bajos que los procesos
qumicos (Scott y Ollis, 1995). Adems, el ozono tiene un tiempo de vida muy corto
(aproximadamente 20 minutos). Este tiempo puede ser ms corto si los colorantes estn
presentes, y su estabilidad se ve afectada por la presencia de sales, pH y temperatura
(Robinson, et. al., 2001).

2.2.2 Mtodos biolgicos

Las tcnicas biolgicas para eliminar colorantes se basan en biotransformaciones
microbianas. Debido a que los colorantes son diseados para ser estables, su
degradacin no es fcil; sin embargo, muchas investigaciones han demostrado una
biodegradacin parcial o completa de colorantes utilizando cultivos puros y mixtos de
bacterias (van der Zee, 2002).

Las investigaciones de biotransformacin bacteriana de colorantes han estado muy

enfocadas a la clase qumica ms abundante, la de los colorantes azo. Estos colorantes

14

generalmente son resistentes a la biodegradacin en condiciones aerobias (Ganesh,

et.al., 1994), solo bacterias con enzimas especializadas en reducir colorantes azo pueden
degradarlos bajo estas condiciones. Por el contrario, la reduccin de enlaces (N=N) en
condiciones anaerobias, implica una decoloracin cuando estos colorantes son
convertidos a aminas aromticas que son incoloras, pero potencialmente dainas, es por
esta razn que la mineralizacin de colorantes azo requiere una secuencia de pasos
anaerobio-aerobio (Field, et.al., 1995). Debido a que la mayor parte de la materia orgnica
es consumida de manera anaerobia, las aminas aromticas generadas en esta primera
etapa sirven como sustrato de los microorganismos en el reactor aerobio (Tan, 2001).
Esta secuencia de degradacin anaerobia-aerobia ha sido estudiada en numerosas
investigaciones (Tan, 2001; O`Neill, et.al., 1999; O`Neill et.al., 2000).

Nigam, et.al., (1996), argumentan que una condicin importante para la reduccin de
colorantes azo es la presencia y disponibilidad de un sustrato, ya que ste acta como un
donador de electrones. Algunos sustratos utilizados pueden ser: glucosa (Carliell, et.al.,
1995), almidn hidrolizado (Willetts, et.al., 2000), extracto de levadura. Se ha observado
que el porcentaje de decoloracin de un colorante azo (negro remazol B) depende del
sustrato usado, por ejemplo, 82% con glucosa, 71% con glicerol y lactosa, y 51% con
almidn (Nigam, et.al., 1996).

2.2.2.1 Fundamentos microbiolgicos de la digestin anaerobia

En ausencia de oxgeno molecular, la materia orgnica es convertida a metano (CH4),

bixido de carbono (CO2), amonio (NH3), cido sulfhdrico (H2S) y agua (H2O). En el
proceso intervienen cinco grupos de microorganismos que pueden ser facultativos o
anaerobios estrictos (McCarty y Smith, 1986). Los grupos trficos que participan en la
digestin

anaerbica

son

microorganismos

acetoclsticos,

metilotrficos,

hidrogenotrficos y fermentadores (aminocidos, azcares, cidos grasos voltiles y

alcoholes) (Lettinga, et.al., 1998). La figura 2 muestra el proceso global de digestin
anaerobia con la intervencin de sus grupos trficos.

La mayora de los microorganismos obtienen su energa de compuestos simples. Los

biopolmeros (protenas, carbohidratos y lpidos) deben ser hidrolizados, por enzimas

15

extracelulares, a compuestos ms simples (azcares, aminocidos y cidos grasos) y por

oxidadores anaerobios (cidos grasos superiores). Los productos de estas reacciones son
acetato, hidrgeno, biomasa y productos como propionato y butirato. Estos ltimos son
degradados hasta acetato e hidrgeno por un grupo de bacterias conocidas como OHPA
(bacterias acetognicas productoras obligadas de hidrgeno), las cuales deben existir en
relacin sintrfica con las metanognicas que utilizan hidrgeno. El acetato e hidrgeno
son los verdaderos sustratos de las archaeabacterias productoras de metano (Lettinga,
et.al., 1998).
Polmeros complejos
Celulosa,
otros polisacridos,
protenas
Hidrlisis

Monmeros
Azcares,
aminocidos
Bacterias
fermentadoras

H2 + CO2
Acetognesis

Fermentacin

Acetato-

Homoacetgenos

Acetato-

Metangenos

Bacterias
oxidadoras de
cidos grasos y
productoras de
H2 (sintrofos)

PropionatoButiratoSuccinato-2
Alcoholes
Fermentacin

H2 + CO2
Metangenos

Acetato-

Metangenos
Metanognesis

CH4 + CO2

16

Figura 2. Proceso global durante la digestin anaerobia. Fuente: Madigan, et.al., 2004.

Los procesos biolgicos que se dan durante la digestin anaerobia son:

a) Hidrlisis: Los polmeros complejos utilizados como sustrato son convertidos en
compuestos monomricos (Talarposhti, et.al., 2001), los cuales son fcilmente disponibles
por las bacterias acidognicas. La hidrlisis es realizada por exo-enzimas producidas por
bacterias acidognicas.

b) Acidognesis: Los compuestos disueltos presentes en las clulas de las bacterias

fermentativas son convertidos en compuestos simples que son excretados. Los
compuestos producidos durante esta fase incluyen cidos grasos voltiles, alcoholes,
cido lctico, CO2, H2, NH3 y H2S, adems de material celular nuevo (Lettinga, et.al.,
1998). La acidognesis es llevada a cabo por una gran diversidad de grupos de bacterias
fermentativas. En lodos anaerobios, forman un cultivo mezclado de bacterias anaerobias.
El lodo utilizado para digerir aguas negras contiene 108 a 109 bacterias fermentativas por
ml (Zeikus, et.al., 1988).

c) Acetognesis: Los productos de digestin son convertidos a acetato, hidrgeno y

bixido de carbono, as como material celular nuevo.

d)

Metanognesis:

Los

organismos

metanognicos

pertenecen

al

gnero

Archaeabacteria, un grupo de organismos diferente a los procariotas en cuanto a

composicin de DNA y composicin celular (Lettinga, et.al., 1998).

2.2.2.2 Archaea productoras de metano: metangenos

Los metangenos son anaerobios estrictos, cuyo metabolismo est ligado a la produccin
de metano. La mayora de ellos son mesfilos, aunque tambin se han descrito
extremfilos para la temperatura o salinidad. Los dos grupos trficos de las
archaeabacterias metanognicas son a) hidrogenoflicas (utilizan el hidrgeno producido
para reducir el CO2 a CH4) y b) acetoclsticas (transforman el acetato en CH4), ambos
grupos pertenecen a los gneros Methanobacterium, Methanococcus y Methanosarcina.

17

Estos microorganismos se puede encontrar en los sedimentos anxicos, tracto digestivo

de animales, fuentes hidrotermales y digestores de lodos activados (Madigan, et.al.,
2004).
Los sustratos que utilizan las archaeabacterias productoras de metano se clasifican en:
a) Sustratos de tipo CO2: dixido de carbono (con electrones derivados del H2, ciertos
alcoholes o el piruvato; formato (HCOO-), monxido de carbono (CO).
CO2 + 4H2 CH4 + 2H2O

G0= -131kJ

b) Sustratos metlicos: metanol (CH3OH), metilamina (CH3NH3+), dimetilamina

((CH3)2NH2+), trimetilamina ((CH3)3NH+, metilmetilmercaptano (CH3SH), sulfuro de
dimetilo (CH3)2S.
CH3OH + H2 CH4 + H2O

G0= -113kJ

4CH3OH + H2O CH4 + HCO3-

G0= -319kJ

c) Sustratos acetotrficos: acetato (CH3COO-), piruvato (CH3COCOO-)

CH3COO- + H2O CH4 + HCO3-

G0= -31kJ

Solo algunos metanognicos son acetotrficos, pero aproximadamente el 70 % del

metano generado en la metanognesis a partir de lodos activados deriva del acetato, y
solamente lo hace a partir del anhdrido carbnico e hidrgeno, es por esto que este tipo
de acetotrofia tiene un gran significado en la naturaleza (Madigan, et.al., 2004).

2.2.2.3 Reduccin anaerobia de colorantes azo

Brohm y Frowein (1937), reportan por primera vez la decoloracin de compuestos azo por
bacterias cido lcticas en alimentos. La reduccin anaerobia de colorantes azo implica el
rompimiento del enlace (N=N), el cual es muy electroflico. Estos colorantes no pueden
ser biodegradados bajo condiciones aerobias debido a que requieren condiciones
reductivas (Shaul, et.al., 1991; Kudlich et al., 1997); por lo tanto, la primera fase para la
conversin de los compuestos azo consiste en un tratamiento anaerobio que puede ser
con lodos digestores (Carliell, 1995), lodos anaerobios granulados (Razo-Flores, 1996) o
sedimentos (Weber, 1991).

18

Bajo condiciones anaerobias, el sustrato acta como un donador de electrones y el

colorante azo, como aceptor de electrones para oxidar flavin nucletidos, y la reduccin
es mejorada con mediadores redox (Gingell y Walker, 1971). La reduccin del colorante
puede ser altamente influenciada por el sustrato usado (van der Zee, et.al., 2001b).

La ruptura del enlace (N=N) da como resultado la formacin de aminas aromticas las
cuales no absorben luz en el espectro visible (figura 3). La reduccin de los colorantes
azo a sus correspondientes aminas aromticas est asociada a la desaparicin del color
del agua residual (Tan, 2001).

Figura 3. Rompimiento del enlace azo con la

formacin de aminas en condiciones anaerobias.
Fuente: van der Zee, 2002.

La capacidad de reducir colorantes azo puede considerarse como una propiedad

universal de microorganismos incubados en un ambiente anaerobio (van der Zee, 2002).
El proceso de reduccin anaerbica puede realizarse por dos mecanismos, los cuales se
describen a continuacin:

a) Reduccin enzimtica directa

Las enzimas que catalizan esta reduccin pueden ser enzimas especializadas (que
catalizan solo la reduccin de colorantes azo) o enzimas no especializadas (enzimas no
especficas que catalizan la reduccin de una amplia variedad de compuestos, incluyendo

19

a los colorantes azo) (van der Zee, 2002). La figura 4 muestra el esquema de la reduccin
enzimtica directa.

DE

colorante azo

b
DEox

aminas aromticas

Figura 4. Esquema de la reduccin enzimtica directa de

colorantes azo a aminas aromticas.

DE: donador de

electrones (sustrato), b: bacteria (enzimas), DEox:

compuesto oxidado (CH4 + CO2). Fuente. van der Zee,
2002.

La evidencia de enzimas especializadas reductoras de colorantes azo, llamadas

azoreductasas, ha sido basada en estudios con algunas bacterias aerobias y aerobias
facultativas que pudieron desarrollarse con compuestos azo como nica fuente de
carbono y energa. Adems de estas azoreductasa especficas, tambin han sido aisladas
enzimas no especficas de cultivos de Shigella dysenteriae (Ghosh, et.al., 1993),
Escherichia coli y Bacillus sp. (Suzuki, et.al., 2001) desarrolladas en ambientes
anaerobios (Ghosh, et. al., 1993).

b) Reduccin enzimtica indirecta

La reduccin se lleva a cabo enzimticamente con la ayuda de acarreadores de
electrones. Se han reportado algunos cofactores enzimticos reducidos como NADH
(Nam y Renganathan, 2000) y NADPH (Hernndez, et.al., 1967) capaces de lograr la
reduccin indirecta de colorantes azo. Adems de estos cofactores enzimticos, tambin
existen varios mediadores redox artificiales que son importantes estimulantes de la red
biolgica de colorantes azo. Estos son: riboflavina (vitamina B2), flavin adenin dinucletido
(FAD), 2-sulfonato de antraquinona (AQS), y 2,6- disulfonato de antraquinona (AQDS)
(van der Zee, 2002), y recientemente el carbn activado (van der Zee, 2003). La
riboflavina cobra su importancia ya que puede sintetizarse de forma natural por una
variedad de microorganismos (Madigan, et.al., 2004), adems, su potencial redox es
mayor que los otros mediadores mencionados (van der Zee, 2002) llevando con esto, a

20

una decoloracin ms rpida. La figura 5 muestra el esquema de la reduccin enzimtica

indirecta.

DE

MRox

aminas aromticas

MRred

colorante azo

b
DEox

Figura 5. Esquema de la reduccin enzimtica indirecta de

colorantes azo a aminas aromticas. DE: donador de electrones
(sustrato), b: bacteria (enzimas), DEox: compuesto oxidado (CH4 +
CO2), MRox: mediador redox oxidado (p.e. riboflavina), MRred:
mediador redox reducido (p.e. riboflavina reducida). Fuente: van der
Zee, 2002.

Se ha encontrado que la reduccin de algunos colorantes azo ocurre a velocidades muy

lentas (van der Zee, et.al., 2001a; Kudlich et al., 1997). La aplicacin de vitaminas y/o
quinonas a sistemas anaerobios de tratamiento de colorantes azo, permite aumentar la
velocidad de reduccin del enlace N=N (Cervantes, et. al., 2001). La reduccin de varios
colorantes azo a sus aminas aromticas se acelera con la adicin de diferentes quinonas
a cultivos bacterianos de Sphingomonas sp. BN6, usando glucosa como fuente de
electrones (Kudlich et al., 1997). Adems, al usar concentraciones muy bajas de AQDS en
reactores anaerobios de flujo ascendente, se acelera la decoloracin de los colorantes
anaranjado cido 7 (Cervantes, et. al., 2001), azul directo 71 y azul directo 53 (Guzmn,
2003); de hecho, la velocidad de reduccin de este tipo de contaminantes electroflicos
puede incrementarse hasta 500 veces (Dunnivant et al., 1992; Schwarzenbach et al.,
1990), disminuyendo considerablemente el tiempo de residencia hidrulico en el reactor
(Cervantes et al., 2001; van der Zee et al., 2001b; Laszlo, 2000).

2.2.2.4 Oxidacin aerobia de aminas aromticas

Los colorantes azo presentes en efluentes industriales no pueden eliminarse por completo
durante el tratamiento anaerobio. Esta etapa por si sola resulta insuficiente para obtener

21

un efluente que pueda ser vertido sin afectar los ecosistemas receptores. Las aminas
aromticas producidas durante la reduccin del enlace azo son persistentes bajo
condiciones anaerobias por lo que generalmente constituyen el producto final de esta
primera fase del tratamiento (Field, et.al., 1995).

La mayora de las aminas aromticas asociadas a la ruptura de colorantes azo son

txicas o mutagnicas (Chung y Stevens, 1993), lo cual demanda un postratamiento de
este tipo de contaminantes. Varios compuestos con grupos amino-benceno, aminonaftaleno y amino-benzidina, son biodegradables aerbicamente. Se ha encontrado que
los microorganismos del gnero Pseudomona son por lo general los responsables de la
conversin de stos compuestos (Konopka, 1993). Una problemtica que se presenta es
que las aminas aromticas pueden sufrir auto-oxidacin cuando se exponen al oxgeno.
Muchas de ellas pueden oxidarse a oligmeros y eventualmente a polmeros con colores
oscuros que tienen baja solubilidad y son fcilmente eliminados en el agua (van der Zee,
2002).

22

III. METODOLOGA
Los estudios se realizaron en los laboratorios de ecodesarrollo y de anlisis especiales del
Instituto Tecnolgico de Sonora, Unidad Centro, Ciudad Obregn Sonora, durante el
periodo Agosto - Diciembre de 2004.

3.1 Inculo
Se emple como inculo lodo granular proveniente del tratamiento anaerobio del agua
residual generada en la Cervecera Modelo del Noroeste, S. A., Cajeme, Sonora. La
caracterizacin general del lodo fue de 13.16 % de slidos totales (ST), 54.88 % de
slidos fijos (SF) y 45.12 % de slidos voltiles (SV). Los lodos se mantuvieron activos en
un reactor de flujo ascendente (UASB) a escala de laboratorio (volumen de 1.5 litros)
operado con un tiempo de residencia hidrulica de 12 horas y alimentado con glucosa
como fuente de carbono a una concentracin de 1 g de demanda qumica de oxgeno
(DQO)/l.

3.2 Medio de cultivo

23

El medio basal de nutrientes se compone de 280 mg/l de NH4Cl, 100 mg/l de

MgSO4.7H2O, 10 mg/l de CaCl2, 250 mg/l de K2HPO4.7H2O y 1 ml/l de una solucin
concentrada de microelementos. La solucin de microelementos est formada por (mg/l):
FeCl2.4H2O, (2000); H3BO3, (50); ZnCl2, (50); CuCl2.2H2O, (38); MnCl2.4H2O (500);
(NH4)6Mo7O4.4H2O, (50); AlCl3.6H2O, (90); CoCl2.6H2O, (2000); NiCl2.6H2O, (92);
Na2SeO.5H2O, (162); EDTA, (1000); y 1 ml/l de HCl (36 %). El pH del medio de cultivo se
mantuvo a 7.3 0.2, amortiguado con NaHCO3 (5 g/l) para mantener el equilibrio con la
fase gaseosa, la cual fue una mezcla de N2/CO2 (80/20).

3.3 Colorante anaranjado reactivo 14 (AR14)

Se adicion colorante AR14 a las botellas, utilizando diferentes concentraciones para
observar el efecto txico que imparte sobre los diferentes grupos trficos anaerobios
productores de metano. Las concentraciones evaluadas fueron: 0.3, 0.6, 1.2, 2.4 y 4.8
mM. En todos los estudios se incluy un control sin colorante. Este control sirve como
referencia para determinar el grado de toxicidad que imparte el colorante.

3.4 Fuentes de energa

Para diferenciar cual es el grupo ms vulnerable al efecto txico del colorante, se
adicionaron distintos donadores de electrones selectivos a los grupos trficos. Los
sustratos utilizados fueron: cido actico (acetoclsticos), metanol (metilotrficos), cido
frmico (formicotrficos) y glucosa (fermentadores de la glucosa). Los sustratos se
adicionaron a una concentracin de 1 g demanda qumica de oxgeno (DQO)/l a pH 7.3
0.2. Para el caso de la glucosa, se adicion cido bromo etano sulfnico (BES) 30 mM
para inhibir la metanognesis.

3.5 Experimento

24

Const de 60 tratamientos realizados por triplicado. Los tratamientos se realizaron en

botellas serolgicas de 160 ml, a las cuales se les agreg 50 ml de medio basal y se
inocul con 1 g de slidos suspendidos voltiles (SSV)/l del lodo granular, como se
muestra en las figuras 6 y 7.

Figura 6. Adicin de medio basal a

las botellas serolgicas

Figura 7. Adicin del inculo

Las botellas fueron selladas hermticamente (ver figura 8). Posteriormente se sustituy la
fase gaseosa de aire por una mezcla de N2/CO2 (80/20) para crear condiciones
anaerobias. El cambio de la fase gaseosa de las botellas en una campana de extraccin
marca LABCONCO como lo muestra la figura 9.

Figura 8. Botella serolgica sellada

hermticamente

Figura 9. rea de flujado para las

botellas serolgicas

Se realiz una preincubacin con sustrato (1g DQO/l) por 12 horas (figura 10). El tiempo
de inicio se consider al momento de aadir nuevamente sustrato (1 g DQO/l), riboflavina

25

(solamente a 30 de los 60 tratamientos) y el colorante; este ltimo se agreg a las

concentraciones previamente estipuladas. Las botellas se incubaron en bao de agua por
36 horas a una temperatura de 30 C.

Figura 10. Incubacin de botellas

Los componentes de cada tratamiento (ver tabla 1) se agregaron por medio de inyeccin
con jeringas de plstico de 1 ml.
Tabla 1. Descripcin de los tratamientos
Sustrato/
Sin sustrato
Acetato
Metanol
Frmico
Glucosa
Colorante(mM) T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11 T12 T13 T14 T15 T16 T17 T18 T19 T20 T21 T22 T23 T24 T25 T26 T27 T28 T29 T30
0
0,3
0,6
1,2
2,4
4,8
Donde:
T:

Tratamiento
Elementos presentes en el tratamiento
Elementos ausentes en el tratamiento

Se realizaron 30 tratamientos usando riboflavina (0.0125 mM) aplicando una matriz de

experimento igual. El procedimiento general se observa en la figura 11.

26

Adicin de medio basal

Adicin de inculo

Flujar botellas

Glucosa +
BES

Adicin del sustrato

(preincubacin)

Actico, frmico,
Metanol o endgeno.

Incubacin a 30 C por 12 hras

Adicin de sustrato

Adicin de colorante

Muestreo cada 12 horas (metano y AGVs)

Adicin de riboflavina

Muestreo cada 12 horas (metano)

Incubacin a 30 C por 36 hras

Medicin del color

Figura 11. Metodologa general del experimento

3.5.1 Estudios de toxicidad

Se realizaron ensayos para conocer el efecto txico del colorante sobre los
microorganismos que llevan a cabo su reduccin. Se efectuaron mediciones de la
produccin de metano a todos los tratamientos y de cidos grasos voltiles solo a los que
presentaban glucosa como sustrato. Los muestreos se efectuaron para todos los casos a
las 12, 24 y 36 horas de incubacin.

27

3.5.1.1 Produccin de metano

La produccin de metano se determin en un cromatgrafo de gases modelo VARIAN

3800, inyectando 100 l. de la muestra en la fase gaseosa, segn la tcnica descrita por
Cervantes (2002). El cromatgrafo de gases esta equipado con una columna de acero de
2 m x 2 mm, empacado con Porapak Q (80/100 mesh, Millipore Corp., Bedford, Mass.) y
un detector de ionizacin de flama (FID). Las temperaturas de la columna, el puerto de
inyeccin y el detector fueron de 60, 200 y 220 C, respectivamente. Se emple nitrgeno
como gas acarreador a una velocidad de flujo de 20 ml por minuto.

Los valores de metano que se presentan en los resultados son el rea registrada por el
cromatgrafo a un tiempo de retencin de 3.5 minutos. La curva relacionada entre la
concentracin (ppm) del gas metano y el rea del cromatograma correspondiente al
metano, muestra una tendencia lineal (ver grfica 1), con lo cual sta relacin se
considera directamente proporcional.

70000

R2 = 0,9967

60000

rea

50000
40000
30000
20000
10000
0
0

50
100
Metano (ppm)

150

Grfica 1. Relacin entre el metano (ppm) y

rea cromatogrfica a los 3.5 minutos de
tiempo de retencin

3.5.1.2 Dosis letal media DL50

Se determin la DL50 en relacin a la actividad metanognica de los microorganismos
involucrados en el estudio, considerndose como el 100 % de actividad en ausencia del

28

colorante. Para esto se usaron los valores promedios de las reas registradas en el
cromatograma.

3.5.1.3 Produccin de cidos grasos voltiles

En los tratamientos con el sustrato glucosa, se analizaron muestras del lquido de cultivo
para detectar los cidos grasos voltiles formados (frmico, lctico, actico y propinico),
La determinacin se realiz por cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) en un
equipo marca Waters, usndose una columna Inertsil 5 C8-3, detector UV 210 nm. con
eluente de fosfato de potasio 20 mM a un pH de 3.0. La tcnica empleada fue la descrita
en el manual de usuario del equipo. La inyeccin de flujo fue de 1.0 ml/min, temperatura
de 40 C, siendo el volumen de inyeccin de 5 l. Este procedimiento se realiz con la
finalidad de conocer si la ruta fermentativa (especficamente la de la formacin de AGVs)
se ve afectada por el efecto txico del colorante AR14.

3.5.2 Medicin de color

Se tom la cantidad de lquido necesaria para hacer una dilucin que estuviera dentro del
rango de la curva de calibracin del colorante. Las lecturas se hicieron a las 36 horas en
un espectrofotmetro marca Gnesis 20 Thermospectronics, a una longitud de onda de
433 nm de acuerdo a la tcnica descrita por van der Zee et al., (2001a). Debido a que las
aminas formadas en la reduccin del colorante no imparten color al medio, se pretende
relacionar el efecto de decoloracin con la actividad metablica de cada grupo trfico.

3.6. Interpretacin de resultados

Los resultados presentados de produccin de metano, produccin de AGVs y medicin
de color, son los valores medios de cada tratamiento, considerando que cada tratamiento
se realiz por triplicado. La dosis letal media se calcul en base a los datos arrojados en
la produccin de metano, como se menciona anteriormente.

29

El anlisis de varianza se realiz en el paquete estadstico de cmputo MINITAB versin

13.20. Los resultados presentan las medias con su desviacin estndar.

30

IV. RESULTADOS Y DISCUSIN

Para la reduccin de colorantes azo es necesaria la presencia y disponibilidad de un
sustrato que acte como donador de electrones (Nigam, et.al., 1996). Para este estudio
se utilizaron glucosa (Carliell, et.al., 1995; Willetts, et.al., 2000), cido frmico, cido
actico y metanol (dos Santos et al. 2004); observndose diferencias en la velocidad de
reduccin del colorante en funcin del sustrato usado, tal como lo citan van der Zee, et.al.,
(2001b).

Debido a que la reduccin de algunos colorantes azo ocurre a velocidades muy lentas
(van der Zee, et.al., 2001a; Kudlich et al., 1997), se opt por adicionar un mediador redox
para aumentar la velocidad de reduccin del enlace N=N (Cervantes, et. al., 2001; Gingell
y Walker, 1971), siendo la riboflavina efectiva para el colorante anaranjado reactivo 14 en
presencia de glucosa, cido actico, cido frmico, metanol y en el metabolismo
endgeno del lodo utilizado (Encinas, 2004).

Los valores reportados grficamente en sta investigacin, corresponden a las medias y

desviacin estndar de cada tratamiento ejecutado por triplicado. Las repeticiones de los
tratamientos

no

presentaron

diferencia

estadstica

significativa.

Las

diferencias

31

significativas entre los tratamientos que se describirn a continuacin, fueron

corroborados mediante un anlisis de varianza (ANOVA) realizado en MINITAB
versin13.20.

4.1 Produccin de metano

La produccin de metano se relacion con la actividad metanognica que present cada
grupo trfico durante las primeras 36 horas de exposicin al colorante siguiendo el
protocolo reportado por Razo-Flores et.al. 1997. Se tom como el 100 % de la actividad
metanognica a los tratamientos sin el colorante. Los valores cuantitativos de estos
tratamientos se observan en la tabla 2.

Actividad metanognica
(g DQO CH4/ g SSV*d)
Sin riboflavina
Con riboflavina (0.0125mM)
0.26 0.07
0.28 0.08
0.11 0.11
0.10 0.05
0.78 0.15
0.82 0.21
0.29 0.12
0.31 0.11

Sustrato
(1 g DQO/l)
Acetato
Metanol
Frmico
Glucosa

Tabla 2. Actividad metanognica de los diferentes grupos trficos

Actividad metanognica (%)

estudiados en ausencia del colorante AR 14

110
100
90
80
70
60
50
40
30
0

0.3

0.6

1.2

2.4

4.8

AR 14 (mM)
Sin riboflavina

Grfica

2.

Actividad

Con riboflavina

metanognica

de

microorganismos acetoclsticos a las 36 horas

de exposicin al colorante AR 14

32

En el metabolismo acetoclstico se observa que a medida que se incrementa la

concentracin del colorante, disminuye la actividad metanognica (Talarposhti, et.al.,
2001), siendo ms marcado el efecto en ausencia de riboflavina. A concentraciones de
colorante inferiores a 2.4 mM no existe diferencia significativa entre el tratamiento que no
tiene riboflavina con el que s se le adicion el catalizador. Cuando se tiene una alta
concentracin del colorante (4.8 mM), se observa que la actividad metanognica se
reduce de 100 a 73 % ( 2.89) en presencia de riboflavina, mientras que en su ausencia,
va de 100 a 65 % ( 4.96), encontrndose aqu diferencia significativa (ver grfica 2).

Respecto al metabolismo metilotrfico, se observa una diferencia significativa para todas

las concentraciones de colorante utilizadas (excepto para 1.2 mM) entre tener o no
riboflavina en el sistema. En este caso, la actividad metanognica se reduce
considerablemente a la concentracin de 4.8 mM, llegando a 42 % ( 0.8) en ausencia de
riboflavina y de 51 % ( 0.92) en presencia de la misma, respecto a la actividad observada
en ausencia de colorante. Cabe destacar que, de los grupos trficos estudiados, los
microorganismos metilotrficos resultan ser los ms afectados por el efecto txico del
colorante AR14. Tambin se observa una tendencia de reduccin de la actividad

Actividad metanognica (%)

metanognica al incrementar la concentracin del colorante en el medio (ver grfica 3).

120
110
100
90
80
70
60
50
40
30
0

0.3

0.6

1.2

2.4

4.8

AR 14 (mM)

Sin riboflavina

Grfica

3.

Con riboflavina

Actividad

metanognica

de

microorganismos metilotrficos a las 36 horas de

exposicin al colorante AR 14

33

En el caso del metabolismo formicotrfico, la actividad metanognica se reduce en menor

proporcin en relacin al resto de los grupos trficos estudiados. Cuando la concentracin
del colorante es igual o menor a 1.2 mM no existe diferencia significativa entre los
tratamientos con o sin riboflavina. La diferencia se aprecia a concentraciones mayores a
2.4 mM, donde el mediador redox reduce el efecto txico del colorante sobre el
metabolismo en cuestin. En la concentracin ms elevada de los tratamientos (4.8 mM),
la actividad metanognica sin el mediador redox es de 71 % ( 1.2) y con mediador redox
es de 79 % ( 4.96) respecto al control sin colorante. Se destaca adems el
comportamiento de reduccin en la actividad metanognica conforme se incrementa la
concentracin del colorante, tal como lo citan Talarposhti, et.al., (2001) (ver grfica 4).

En el metabolismo endgeno (sin sustrato externo aplicado) se observa una marcada

diferencia entre los tratamientos, con y sin riboflavina, a concentraciones superiores a 1.2
mM. Se aprecia que la actividad metanognica sin riboflavina llega a 38 % ( 7.89),
mientras que con riboflavina es de 57 % ( 3.52) respecto al control sin colorante (ver

Actividad metanognica (%)

grfica 5).

110
100
90
80
70
60
50
40
30
0

0.3

0.6

1.2

2.4

4.8

AR 14 (mM)
Sin riboflavina

Grfica

4.

Actividad

Con riboflavina

metanognica

de

microorganismos formicotrficos a las 36 horas

de exposicin al colorante AR 14

Para todos los tratamientos se observa una tendencia similar, a medida que aumenta la
concentracin del colorante, disminuye la actividad metanognica, indicando con esto la

34

toxicidad que imprime el colorante sobre el metabolismo microbiano. Estudios previos

tambin evidenciaron que los colorantes tipo azo pueden ser txicos para los consorcios
anaerobios (Razo-Flores et al. 1996; 1997; van der Zee et al., 2001b). Durante las
primeras 12 horas de exposicin al colorante, hubo una menor produccin de metano en
aquellos tratamientos que tenan riboflavina comparados con los cultivos que no
contenan el catalizador. Sin embargo, despus de 36 horas de incubacin, se observa lo
contrario, la presencia del mediador redox favorece una produccin mayor de metano (ver
grfica 6). Lo anterior podra ser explicado por los siguientes puntos: la presencia del
mediador redox (riboflavina) favorece la canalizacin de los electrones hacia el colorante
durante las primeras horas. Esto se sustenta en estudios previos que indican que la
riboflavina acelera la transferencia de electrones hacia los colorantes azo (Field y Brady
2003). Al ocurrir una decoloracin ms acelerada en los cultivos con catalizador, el lodo
permanece menos tiempo en contacto con el colorante, disminuyendo de esta forma el
efecto txico del compuesto azo. Investigaciones realizadas por Razo-Flores et al. (1996),
sugieren que los consorcios anaerobios de tratamiento de aguas residuales son ms
susceptibles al efecto txico de los colorantes azo que a las aminas aromticas
generadas durante su reduccin. Por lo tanto, an cuando durante las primeras horas de
incubacin, la riboflavina compite con la sntesis de metano por los electrones disponibles,
la aceleracin del proceso decolorante permite recuperar ms rpidamente la actividad

Actividad metanognica (%)

metanognica del consorcio.

120
110
100
90
80
70
60
50
40
30
0

0.3

0.6

1.2

2.4

4.8

AR 14 (mM)
Sin riboflavina

Grfica

5.

Actividad

Con riboflavina

metanognica

del

metabolismo endgeno a las 36 horas de

exposicin al colorante AR 14

35

0,8

0,7

0,6

0,5

0,4

12 horas

24 horas

36 horas

Sin riboflavina

Grfica

6.

metabolismo

Produccin
metilotrfico

Con ribof lavina

de
en

metano

en

presencia

el
de

colorante AR 14 (4.8 mM)

4.2. Determinacin de la DL50

La dosis letal media para los microorganismos involucrados en este estudio, se determin
con base en la actividad metanognica que stos presentan a diferentes dosis de
colorante. Se consider el 100 % de la actividad metanognica en los controles que se
incubaron en la ausencia del colorante. Razo-Flores et.al. (1997), trabajaron con distintos
colorantes azo y observaron que la DL50 sobre arqueobacterias acetoclsticas fue: naranja
mordante 1= 0.04 mM, amarillo mordante 1= 0.063 mM y amarillo mordante 12= 0.25
mM. Al utilizar colorante AR14 en esta investigacin, se obtiene una dosis letal media de
7.25 mM sin catalizador y 9.05 mM en presencia de riboflavina para la actividad
acetoclstica. Estos resultados contrastan con los valores de DL50 obtenidos por RazoFlores et al. (1997) quienes reportaron valores muy por debajo de los observados con el

Con formato
Con formato

AR 14. Lo anterior, pudiera ser explicado por una mayor toxicidad de los colorantes
anaranjado mordiente 1 y amarillo mordiente 1 (respecto al AR14) los cuales presentan en
su estructura grupos NO2, los cuales han sido reportados como altamente txicos (Chung
y Cerniglia 1992). Estos resultados, sin embargo, concuerdan con los experimentos
desarrollados por van der Zee et al. (2001b) quienes estudiaron la reduccin de un
colorante reactivo con estructura similar al AR 14 (rojo reactivo 2, RR2). En efecto, el RR2

36

Con formato

tiene tambin un grupo triazina en su estructura y ocasion el colapso de la actividad

metanognica de un reactor anaerobio durante su tratamiento. van der Zee et al. (2001b)
tambin reportaron que la adicin de disulfonato de antraquinona (AQDS) como mediador
redox permiti recuperar la actividad metanognica en el reactor y adems obtener una
Eliminado:

eficiente decoloracin en el reactor.

La grfica 7 presenta los valores correspondientes a las DL50 de los diferentes grupos
trficos estudiados, en presencia y ausencia del mediador redox. Se observa que al tener
presente la riboflavina, se reduce significativamente el efecto txico del colorante sobre el
grupo trfico. El grupo trfico ms susceptible al efecto txico del colorante azo AR14 es
el metilotrfico, con una DL50=3.99 mM (sin riboflavina) y DL50=4.39 mM (con riboflavina).
Por su parte, los microorganismos formicotrficos resultaron ser los ms resistentes a tal
efecto, teniendo una DL50=8.42 mM (sin riboflavina) y DL50=12.82 mM (con riboflavina).
Los resultados obtenidos en este estudio, sugieren que la adicin de riboflavina como
mediador redox, ayuda a disminuir an ms el impacto txico de los colorantes debido a
que propicia una decoloracin ms acelerada y por lo tanto, menor tiempo de contacto
entre los colorantes y los consorcios.

16,00
14,00

AR 14 (mM)

12,00
10,00
8,00
6,00
4,00
2,00
0,00

Acetoclsticos

Metilotrficos

Formicotrficos

Endgeno

Microorganismos

Sin riboflavina

Con riboflavina

Grfica 7. Dosis letal media (DL50) del colorante

AR 14 para microorganismos metanognicos

Cabe sealar que, en los efluentes textiles, se maneja como mximo concentraciones de
colorante de 4.8 mM (Talarposhti, et.al., 2001), de tal manera que el nico grupo trfico
que se vera afectado en un momento dado, sera el metilotrfico; por lo que el metanol no
se considera buen sustrato para llevar a cabo la decoloracin de compuestos azo. El

37

metanol ha sido reportado anteriormente en estudios de decoloracin que tambin

sealan que no es un sustrato adecuado para sustentar la reduccin de los contaminantes
sealados (dos Santos et al. 2004). Por su parte, el cido frmico resulta ser viable, pues
su actividad metanognica se vio escasamente afectada por el colorante. Estos
resultados concuerdan con los obtenidos por Siqueiros, (2005) quien encontr que la
mayor velocidad de decoloracin del AR14 se lleva a cabo cuando se aplica cido frmico
como sustrato, mientras que la menor velocidad de decoloracin se observ con el
metanol. Es decir, la eficiencia de un sustrato se ver reflejada tanto en una mayor
capacidad metanognica y en una mayor velocidad de decoloracin.

4.3. Produccin de cidos grasos voltiles (AGVs)

Esta parte del experimento se ejecut solamente sobre los tratamientos con el sustrato
glucosa. Inicialmente se bloque la ruta metanognica con la adicin de BES, para
observar la contribucin de las bacterias fermentativas de la glucosa en la decoloracin
del AR14. Se determin la produccin de cidos grasos voltiles (frmico, lctico, actico
y propinico) encontrndose lo siguiente; ausencia total de cido frmico, lo cual hace
suponer que por su naturaleza qumica, se consumi tan rpidamente como fue
producido.

La produccin de cido lctico y cido propinico se ve afectada cuando la concentracin

del AR 14 es de 1.2 mM o mayor. Por su parte, el cido actico no presenta reduccin en
su produccin al incrementarse la concentracin del colorante. Con esto es posible
deducir que las bacterias acetognicas son menos susceptibles al efecto txico del AR 14
que las bacterias lcticas y propinicas (ver grfica 8). Adems, que la presencia de la
riboflavina redujo el efecto txico del colorante, ya que en su ausencia hubo una
produccin despreciable de AGVs.

Comparando los resultados obtenidos en la produccin de AGVs, especficamente la

produccin de cido actico, con los arrojados por las arqueobacterias productoras de
metano, se puede decir que el efecto txico del colorante es mayor en las metanognicas
que en las bacterias acetognicas. Los resultados concuerdan con los estudios de dos

38

Santos et al. (2005) quienes reportaron que los colorantes Azul Reactivo 5 y Azul
Reactivo 19 fueron menos txicos para los microorganismos acetognicos que para los
Con formato

metanognicos de un consorcio anaerobio termoflico.

60,00

AGVs (mM)

50,00
40,00
30,00
20,00
10,00
0,00
0

0,3

0,6

Lctico

1,2
AR 14 (mM)

Actico

2,4

4,8

Propinico

Grfica 8. Produccin de cidos grasos voltiles en

presencia de diferentes concentraciones de AR 14 y
riboflavina

4.4 Medicin del color

Chung y Cerniglia, (1992) reportan que la toxicidad del colorante est ligada a su
estructura qumica. En estudios realizados con el colorante rojo reactivo 2 (RR2), se
observa que el efecto txico sobre las arqueobacterias metanognicas lo imprime el grupo
reactivo triazina (van der Zee, et.al., 2001b). El colorante AR 14 contiene el mismo grupo
triazina, por lo cual puede atribuirse el bajo porcentaje de decoloracin a su efecto txico
sobre los microorganismos metanognicos.

La decoloracin del colorante AR 14 se vio notablemente mejorada con la adicin del

mediador redox, corroborando lo citado por Field y Brady, (2003). Este comportamiento se
repite en todos los tratamientos estudiados. La grfica 9 ilustra la decoloracin porcentual
en el metabolismo formicotrfico, donde se observa que a medida que se incrementa la
concentracin inicial del colorante, disminuye el efecto de la riboflavina en la decoloracin

39

del AR14. Los resultados obtenidos con los otros sustratos estudiados arrojaron
comportamientos similares.

Comparando los tratamientos en funcin del sustrato empleado, se observa que en

presencia del cido frmico la decoloracin se da mejor y ms rpido, tal como lo cita
Siqueiros, (2005). Tambin se observa que en ausencia de sustrato, la decoloracin es
menor. Adems, el metanol es el sustrato donde se presenta el menor porcentaje en la
decoloracin (ver tablas 3 y 4).

Existe una estrecha relacin entre la capacidad metanognica con la decoloracin del
colorante, pues al comparar los resultados entre s, se observa que ambos casos el cido
frmico presenta menor susceptibilidad al efecto txico as como mejor decoloracin. De
igual manera, el metanol fue el sustrato que propici menor decoloracin y el ms
susceptible al efecto del colorante. Estos resultados hacen suponer que existe una
marcada relacin entre la capacidad metanognica del grupo trfico con la decoloracin
del colorante, lo cual puede corroborarse con la tabla 2. Esto se sustenta en el hecho que
al reducirse el grupo azo al grupo amino correspondiente, adems de eliminarse el color
se reduce el efecto txico hacia los microorganismos anaerobios estudiados en esta
investigacin, tal como lo citan Razo-Flores et al. (1996).
Tabla 3. Decoloracin porcentual del AR

Tabla 4. Decoloracin porcentual del AR 14

14 despus de 36 horas de incubacin en

despus de 36 horas de incubacin en

ausencia de riboflavina

presencia de riboflavina

Sustrato
Acetato

Metanol

AR 14 Decoloracin
(mM)
(%)
0
100
0,3
69,70
0,6
72,11
1,2
59,33
2,4
44,79
4,8
39,17
0
100
0,3
70,34
0,6
61,99
1,2
63,57
2,4
47,98

Desv.
Est.
5.22
2.41
0.97
4.18
7.25
4.34
2.21
1.67
5.44
5.78
6.58

Sustrato
Acetato

Metanol

AR 14
(mM)
0
0,3
0,6
1,2
2,4
4,8
0
0,3
0,6
1,2
2,4

Decoloracin
(%)
100
85,56
72,44
67,12
50,77
51,37
100
88,07
70,97
65,98
67,25

Desv.
Est.
0.96
3.47
1.54
3.87
6.11
4.99
5.84
4.17
5.55
8.19
6.27

40

Frmico

Glucosa

Endgeno

4,8
0
0,3
0,6
1,2
2,4
4,8
0
0,3
0,6
1,2
2,4
4,8
0
0,3
0,6
1,2
2,4
4,8

36,05
100
96,87
85,42
58,33
53,33
43,33
100
93,17
73,56
65,86
67,18
52,09
100
72,21
60,08
62,74
41,65
30,56

2.97
0.54
7.35
4.44
2.59
0.36
1.97
3.47
8.57
6.18
6.74
4.55
4.97
6.41
2.15
8.24
2.65
6.18
2.67

4,8
0
0,3
0,6
1,2
2,4
4,8
0
0,3
0,6
1,2
2,4
4,8
0
0,3
0,6
1,2
2,4
4,8

Frmico

Glucosa

Endgeno

48,59
100
99,37
92,08
90,00
78,33
63,33
100
95,11
80,25
82,59
76,67
58,74
100
77,08
74,56
61,40
48,55
39,77

5.74
4.19
4.95
8.06
5.24
3.12
0.99
8.91
5.97
6.13
0.87
6.47
1.22
7.25
3.55
5.67
4.93
6.08
3.17

120
100
80
60
40
20
0
0

0,3

0,6

1,2

2,4

4,8

AR 14 (mM )
Sin riboflavina

Con ribof lavina

Grfica 9. Decoloracin porcentual del colorante

anaranjado reactivo 14 durante el metabolismo
formicotrfico

despus

de

36

horas

de

incubacin

41

V. CONCLUSIONES
De acuerdo a los resultados obtenidos en la presente investigacin, fue posible
comprobar las hiptesis planteadas al inicio de la misma:

* Las arqueobacterias metanognicas fueron ms susceptibles al efecto txico del

colorante azo anaranjado reactivo 14 (AR14) que las bacterias fermentadoras de glucosa;
la ruta fermentativa de cidos grasos voltiles, especficamente la de acetognesis no se
ve afectada en presencia del colorante en cuestin. Las metanognicas ms susceptibles
fueron las metilotrficas, mientras que las ms resistentes fueron las formicotrficas.

* La presencia del mediador redox aument el grado de decoloracin en el sistema

anaerobio, y con ello, la reduccin del grupo azo a amino. Para los microorganismos
metanognicos, el grupo amino es menos txico que el grupo azo, por esto la capacidad
metanognica se ve mejorada durante este proceso reductor. Una vez formado el grupo
amino, este queda disponible para un tratamiento aerobio subsecuente.

42

* La riboflavina redujo el efecto txico del colorante azo sobre el metabolismo

metanognico y fermentativo de los grupos trficos. Esto resulta relevante ya que en
cualquier sistema biolgico se desea tener un buen metabolismo microbiano que
contribuya al objetivo del proceso.

43

VI. BIBLIOGRAFA

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